CN111848831A - 含氟化合物修饰的阳离子聚合物在制备疫苗药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含氟化合物修饰的阳离子聚合物在制备疫苗药物中的应用，其包括透皮疫苗载体(a)，所述透皮疫苗载体(a)为含氟化合物修饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物为氟化壳聚糖，含氟化合物共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000‑5000000，脱乙酰度不小于55％且粘度范围为25‑1000厘泊，所述透皮疫苗载体有胞内渗透、胞间渗透和毛囊渗透三种抗原透过途径。氟化壳聚糖本身是非常好的免疫佐剂，可以非特异性地刺激免疫系统，能有效诱导细胞毒性巨噬细胞、细胞介导的免疫和循环抗体形成，放大免疫应答。生物相容性好，具有巨大的商业价值。

Description

含氟化合物修饰的阳离子聚合物在制备疫苗药物中的应用
技术领域
本发明涉及高分子化学以及医用生物材料技术领域，具体涉及一种含氟化合物修饰 的阳离子聚合物作为各类疫苗接种的载体与佐剂。
背景技术
疫苗是提高针对特定疾病的免疫力的生物制剂，迄今为止已在临床上使用的传统类 型的疫苗是包含死亡或减毒的微生物，灭活毒素(类毒素)，蛋白质亚基和多糖抗原或结合物的疫苗，这些物质类似于引起疾病的微生物，并刺激人体的免疫系统将其识别为 异物，将其破坏并″记住″。疫苗接种是控制与传染病相关的发病率和死亡率的最有效 手段，其益处多年来已在全球范围内被认可。根除天花，脊髓灰质炎和世界卫生组织的 ″扩大免疫规划″等倡议的成功只是疫苗益处的冰山一角，许多新型疫苗至今仍在开发 中。然而目前疫苗的接种通常利用皮下或者肌肉注射，不仅需要训练有素的医护人员， 还会造成孩童疫苗接种困难，后续的针头处理和费用等因素也会导致疫苗接种疫苗成本 增加。另外皮下脂肪和肌肉组织中，呈递抗原的关键——树突状细胞相对较少，而真皮、 表皮以及粘膜由树突状细胞的不同子集密集地分布着。因此，通过皮下注射的抗原递送 将绕过免疫细胞，导致疫苗接种效率降低，将疫苗用合适的方法接种到合适的部位会用 比肌肉注射疫苗低得多的抗原剂量引发强烈的免疫反应。
因此，探寻其他的便利的疫苗递送方法是十分必要的，目前研究较多的递送疫苗的 方法主要有透皮肤、鼻腔、口服。
发明内容
鉴于，皮下注射式疫苗存在上述种种技术问题，本发明的目的是提供一种疫苗载体 作为疫苗制剂，能促进抗原被免疫细胞摄取，提高药物的生物利用度，用更低的抗原剂量引发强烈的免疫反应，减轻接种者的痛苦，且具有可以与多种抗原进行普适性结合， 制成贴片或涂抹疫苗促进抗原吸收，提高疫苗接种效果。
一种透皮疫苗载体，包括透皮疫苗载体(a)，所述透皮疫苗载体(a)为含氟化合 物修饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物为氟化壳聚糖，含氟化合 物共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，脱乙酰度不 小于55％且粘度范围为25-1000厘泊，所述透皮疫苗载体有胞内渗透、胞间渗透和毛 囊渗透三种抗原透过途径。
进一步地，所述透皮疫苗载体中的氟化壳聚糖为含氟化合物共价连接在壳聚糖主链 上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，
所述含氟化合物为如下化学式(I)
Figure BDA0002374785210000021
所示的含氟脂肪链，或式 (II)
Figure BDA0002374785210000022
所示的芳香环功能基团，所述R1为卤素(氟，氯，溴，碘)、卤 素取代的烷烃、环烷烃、醛基、羧基、双键、炔键、羟基、磺酰氯、磺酸键或巯基这些 能够与伯氨基反应的活性基团。
进一步地，所述氟化壳聚糖为全氟庚酸氟化壳聚糖，所述全氟庚酸氟化壳聚糖的氟 化修饰程度范围为5％～50％，或所述全氟庚酸氟化壳聚糖的氟化修饰程度范围为18％～25％。
进一步地，所述透皮疫苗载体的疫苗药物组合物，包括透皮疫苗载体(a)和疫苗组分(b)，所述疫苗药物组合物为涂抹疫苗，
所述疫苗组分(b)包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、 灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；所述疫苗组分(b)根据针对的 疾病分类包括肿瘤疫苗，宫颈癌疫苗，水痘疫苗，白喉疫苗，百日咳疫苗，乙型流感嗜 血杆菌疫苗，甲型肝炎疫苗，乙型肝炎疫苗，流感疫苗，麻疹疫苗，腮腺炎疫苗，风疹 疫苗，脑膜炎球菌疫苗，肺炎球菌疫苗，脊髓灰质炎疫苗，轮状病毒疫苗，人乳头瘤病 毒疫苗，乙型脑膜炎球菌疫苗，霍乱毒素疫苗，旅行者腹泻疫苗，活结核分枝杆菌疫苗， 卡介苗芽孢杆菌疫苗，猪屎豆属类毒素疫苗，白喉类毒素疫苗，破伤风类毒素疫苗，葡 萄球菌类毒素疫苗，霍乱类毒素疫苗，黄热病疫苗，流行性斑疹伤寒疫苗，流感嗜血杆 菌疫苗，基孔肯雅病毒疫苗，病毒样颗粒型流感疫苗，西尼罗河病毒疫苗，活的腺病毒 疫苗，炭疽疫苗。
进一步地，所述透皮疫苗载体的疫苗药物组合物，包括透皮疫苗载体(a)和疫苗药物组分(b)，所述疫苗药物组合物为经鼻给药或经鼻喷雾疫苗，
所述疫苗组分(b)包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、 灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；所述疫苗组分(b)根据针对的 疾病分类包括肿瘤疫苗，流感疫苗，百日咳疫苗，结核病喷雾疫苗，流感喷雾疫苗，麻 疹喷雾疫苗，百日咳伯德杆菌喷雾疫苗，肺炎衣原体喷雾疫苗，肺炎链球菌喷雾疫苗， 炭疽杆菌喷雾疫苗，肺炎球菌表面蛋白-鼻凝胶疫苗，A型肉毒杆菌神经毒素BoHc/A 凝胶疫苗，破伤风类毒素凝胶疫苗。
一种透皮疫苗载体制剂，所述制剂包括组分(a)，所述组分(a)为含氟化合物修 饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物能作为胞内渗透、胞间渗透和 毛囊渗透三种抗原透过途径进行透皮疫苗给药的制剂。
一种透皮疫苗载体制剂，所述制剂包括组分(a)，所述组分(a)为含氟化合物修 饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物在制备用于口服给药方式的药 物、透皮涂抹给药、鼻腔给药方式的药物中的应用。
进一步地，所述疫苗载体制剂制备的预防癌症的癌症疫苗，包括氟化壳聚糖与鸡卵 清白蛋白，所示氟化壳聚糖与鸡卵清白蛋白形成复合物，所述复合物的粒径范围为小于10微米，或所述复合物的粒径范围为不大于500纳米的复合物，所述氟化壳聚糖与鸡卵 清白蛋白的质量比为1∶0.25-4或1∶0.5-2
进一步地，用于预防肿瘤发生的药物，包括宫颈癌疫苗。
进一步地，所述全氟庚酸氟化壳聚糖的方法，其包括如下步骤：
(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取充分干燥的壳聚糖加入醋酸水溶液中，搅拌使充分溶解，随后缓慢滴加氢氧化钠，搅拌至溶液澄清，pH在6.2-6.8；
(2)全氟庚酸(13氟庚酸)的活化：称取全氟庚酸，将其溶于适量无水二甲基亚砜中，依次加入适量EDC，NHS避光充分搅拌；
(3)13F庚酸壳聚糖的制备：将上述活化好的全氟酸溶液缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶液中，避光搅拌充分反应。
进一步地，所述制备全氟庚酸氟化壳聚糖的方法，其进一步包括如下步骤：
将充分反应的溶液缓慢滴加到氢氧化钾乙醇溶液中充分搅拌，过滤沉淀，用大量无 水乙醇冲洗，至滤液呈中性，沉淀经甲醇、乙醚洗涤脱水，真空干燥，干燥后的沉淀物 溶于盐酸溶液，冻干得全氟庚酸氟化壳聚糖盐酸盐。
一种作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，具有如下结构：含氟化合物 共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，
所述含氟化合物为如下化学式(I)
Figure BDA0002374785210000041
所示的含氟脂肪链，或式(II)
Figure BDA0002374785210000051
所示的芳香环功能基团，所述R1为卤素(氟，氯，溴，碘)、卤素取代 的烷烃、环烷烃、醛基、羧基、双键、炔键、羟基、磺酰氯、磺酸键或巯基这些能够与 伯氨基反应的活性基团。
一种作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，具有如式(IV)所示的含有伯氨基的壳聚糖分子骨架：
Figure BDA0002374785210000052
所述壳聚糖的伯氨基与含氟功能基团之间形成的连接基团为：-NH-、-N＝C-、 -NHCH2CH(OH)-、-NHCH2CH(OH)CH2O-、
Figure BDA0002374785210000053
Figure BDA0002374785210000054
以及衍生基团；
所述含氟功能基团为含氟脂肪链、芳香环功能基团。
进一步地，所述式(I)中x为0-3的整数，y为0-20的整数，z为0-8的整数， R2为CF3、CHF2、CH2F、或CH3(当y不为0)；
所述含氟脂肪链化合物是指含氟烃基及其衍生物，包括三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸、十七氟壬酸、十九氟奎酸、 全氟丁酸酐、全氟庚酸酐、全氟癸酸酐、2，2，3，3，4，4，4-七氟丁基丙烯酸酯、 3-(1H，1H，5H八氟戊氧基)-1，2-环氧丙烯、九氟丁基璜酰胺酐及其衍生物。
进一步地，所述式(II)中R为H，CH3，OH，NO2，O，CF3，F，CH2OH，CN，NCO， 或(CF2)aCF3(a为1-20的整数)等，且至少一个R为F；
所述含氟芳香环化合物包括3-氟苯甲酸、3，5-二氟苯甲酸、2，3，5，6-四氟-4- 甲基苯甲酸、五氟苯甲酸、2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸及其衍生物。
进一步地，所述壳聚糖和含氟化合物共价连接，在所述壳聚糖分子表面进行修饰，构成一种药物载体，其结构如式(V)所示，b、c均为20-500的整数，式(V)如下：
Figure BDA0002374785210000061
其中，B为含氟功能基团与壳聚糖伯氨基形成的连接基团，C为含氟脂肪链、芳香环功 能基团。
本专利所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物，尤其是氟化壳聚糖可以增加疫苗被免 疫细胞摄取的能力。作为一种化学促渗透聚合物，与其他化学促渗剂相比，本专利所述技术方案作为水溶液不具有强挥发性和刺激性，作用速度快，持续时间长，且能够促进 一系抗原透过皮肤，包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、灭 活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原等。本专利技术方案不需要外加电场， 超声等，大幅降低给疫苗接种者带来的创伤、痛苦、不便与安全隐患。因此，本专利实 施例所披露的氟化壳聚糖均可以作为疫苗载体，以及和其他药物联合使用，同时，含氟 化合物修饰的阳离子聚合物由于均经过了含氟化合物的修饰，因此也可以作为疫苗载体 使用，以及与其他药物联合使用。
皮肤由外至内由三层组成：表皮，真皮和皮下组织。将疫苗递送到这些层中分别称为透皮，皮内和皮下接种。对于透皮给药大部分药物通过细胞吸收，少部分通过表皮细 胞间的汗腺、毛囊和皮脂腺吸收，因此透皮给药途径有胞内渗透、胞间渗透和毛囊渗透 三种抗原透过途径。
参与皮肤固有免疫反应的关键免疫细胞是树突状白细胞：表皮中的朗格汉斯细胞和 真皮中的真皮树突状细胞，朗格汉斯细胞识别并捕获抗原，在细胞因子的刺激下逐渐成熟并迁移至淋巴结，将抗原呈递给T细胞，引发免疫应答。为了接种的有效，将疫苗 递送至朗格汉斯细胞至关重要，这意味着使用包括物理或化学的方法破坏或短暂改变角 质层系统能够增强透皮效率。氟化壳聚糖具有生物相容性、无毒、生物可降解，以通过 短暂而可逆地打开上皮细胞之间的紧密连接，使不可吸收的蛋白穿过上皮屏障渗透，递 送至朗格汉斯细胞，并随后将其吸收到全身血液循环中并在淋巴结聚集。
所述构成涂抹疫苗的抗原包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒 抗原、灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；根据针对的疾病分类包括 但不限于：肿瘤疫苗、水痘疫苗，白喉疫苗，百日咳疫苗，乙型流感嗜血杆菌疫苗，甲 型肝炎疫苗，乙型肝炎疫苗，流感疫苗，麻疹疫苗，腮腺炎疫苗，风疹疫苗，脑膜炎球 菌疫苗，肺炎球菌疫苗，脊髓灰质炎疫苗，轮状病毒疫苗，人乳头瘤病毒疫苗，乙型脑 膜炎球菌疫苗，霍乱毒素疫苗，旅行者腹泻疫苗，活结核分枝杆菌疫苗，卡介苗芽孢杆 菌疫苗，猪屎豆属类毒素疫苗，白喉类毒素疫苗，破伤风类毒素疫苗，葡萄球菌类毒素 疫苗，霍乱类毒素疫苗，黄热病疫苗，流行性斑疹伤寒疫苗，流感嗜血杆菌疫苗，基孔 肯雅病毒疫苗，病毒样颗粒型流感疫苗，西尼罗河病毒疫苗，活的腺病毒疫苗，炭疽疫 苗。
本专利的技术方案以氟化壳聚糖为例作为疫苗载体，还可以与多种抗原蛋白混合， 制成经鼻给药或经鼻喷雾疫苗，鼻部抗原摄取主要通过两种机制：旁细胞(水通道)和细 胞外(脂质)过程。最有效的药物吸收区域是鼻腔的血管化侧壁：鼻甲或鼻甲上的粘膜层， 每当鼻粘膜暴露于病原体或抗原性物质时，入侵抗原就会与粘膜免疫系统发生相互作用。 使用氟化壳聚糖短暂而可逆地打开粘膜鼻上皮细胞间隙，能够有效增强抗原穿过的效率， 同时促进携带的免疫原性物质被抗原呈递细胞吸收，并促使抗原呈递细胞成熟，这些成 熟的抗原呈递细胞迁移至淋巴结，将抗原呈递给T细胞，引发免疫应答。同时，还能 通过鼻腔吸入氟化壳聚糖喷雾疫苗进行肺部疫苗递送。经鼻给药的疫苗运输距离小，在 鼻腔中保留约15分钟，并且不会暴露于低pH值和降解酶的环境中最大程度保证了疫 苗的有效性。
构成所述经鼻疫苗的抗原包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒 抗原、灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；根据针对的疾病分类包括 但不限于：肿瘤疫苗，流感疫苗，百日咳疫苗，结核病喷雾疫苗，流感喷雾疫苗，麻疹 喷雾疫苗，百日咳伯德杆菌喷雾疫苗，肺炎衣原体喷雾疫苗，肺炎链球菌喷雾疫苗，炭 疽杆菌喷雾疫苗，肺炎球菌表面蛋白-鼻凝胶疫苗，A型肉毒杆菌神经毒素BoHc/A凝 胶疫苗，破伤风类毒素凝胶疫苗。
本专利的技术方案以氟化壳聚糖为例作为疫苗载体，还可以与多种抗原蛋白混合， 制成口服疫苗，口服递送氟化壳聚糖疫苗可以包被保护外壳递送抗原至肠道与肠道相关 淋巴样组织结合，氟化壳聚糖短暂打开肠粘膜细胞间隙，将抗原运送至肠道抗原呈递细胞，刺激肠道抗原呈递细胞成熟、捕获并识别抗原，然后迁移至派伊尔氏淋巴结，引发 免疫应答，同时也可以氟化壳聚糖递送的疫苗也可以直接含在口中进行口部疫苗递送。 构成所述口服疫苗的抗原包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、 灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；根据针对的疾病分类包括但不限 于：肿瘤疫苗，脊髓灰质减毒活疫苗、轮状病毒疫苗、伤寒疫苗、痢疾活疫苗、肠伤寒 菌疫苗，百日咳疫苗，狂犬病疫苗、白喉类毒素疫苗，破伤风类毒素疫苗、B链的霍乱 毒素疫苗，E.coli肠毒素疫苗，3-脱氧酰化单磷酰基脂质A疫苗、卡介菌多糖核酸疫苗、 细菌细胞壁骨架疫苗。
现如今许多有效的疫苗是靶向病原体的减毒活疫苗。但是有时这类疫苗的接种会导 致轻度感染，这对于一些免疫力较弱的人群非常不友好的，为了针对此类人群进行疫苗接种，使用了无生命的抗原，从完整的，灭活的病毒和微生物到单个重组抗原，然而这 类疫苗有些属于非活性疫苗抗原，尤其是纯化的或重组的亚单位疫苗，通常免疫原性差， 并且需要其他成分来帮助刺激基于抗体和效应T细胞功能的保护性免疫。这些称为佐剂 的其他成分可提供增强疫苗抗原免疫原性所需的帮助。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供一种含氟化合物修饰的壳聚糖在促进疫苗递送中的应用；提供一种含氟 化合物修饰的壳聚糖以及其作为多种抗原疫苗载体的用途。
本专利所述的含氟化合物修饰的壳聚糖，其中所述含氟化合物共价连接在壳聚糖主 链上；所述壳聚糖为分子量范围在1000-5000000，脱乙酰度在55％-100％，粘度在 25-1000厘泊(1％醋酸溶液)的壳聚糖；所述药物为小分子药物、多肽、蛋白药物、 不同药物的组合药物以及药物与其它药用辅料的组合药物，能够适用各种相关病症。
所述含氟化合物包括如下化学式(I)
Figure BDA0002374785210000091
和式(II)
Figure BDA0002374785210000092
所 示的含氟脂肪链以及芳香环功能基团，其中R1为卤素(F，Cl，Br，I)、卤素取代的烷 烃、环烷烃、醛基、羧基、双键、炔键、羟基、磺酰氯、磺酸键、巯基等可以与伯氨基 反应的活性基团；
式(I)中x为0-3的整数，y为0-20的整数，z为0-8的整数，R2为CF3、 CHF2、CH2F、或CH3(当y不为0)；所述含氟脂肪链化合物包括三氟乙酸、五氟 丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸、十七氟壬酸、十 九氟奎酸、全氟丁酸酐、全氟庚酸酐、全氟癸酸酐、2，2，3，3，4，4，4-七氟丁基 丙烯酸酯、3-(1H，1H，5H八氟戊氧基)-1，2-环氧丙烯、九氟丁基璜酰胺酐及其 衍生物等。
式(II)中R为H，CH3，OH，NO2，O，CF3，F，CH2OH，CN，NCO，或(CF2)aCF3 (a为1-20的整数)等，且至少一个R为F；所述含氟芳香环化合物包括3-氟苯甲酸、 3，5-二氟苯甲酸、2，3，5，6-四氟-4-甲基苯甲酸、五氟苯甲酸、2-氟-3-(三氟甲 基)苯甲酸及其衍生物。
含氟化合物修饰的壳聚糖结构如式(III)所示。
Figure BDA0002374785210000101
其中，A为含有伯氨基的壳聚糖分子骨架，如式(IV)所示：
Figure BDA0002374785210000102
B为含氟功能基团与壳聚糖伯氨基形成的连接基团，如-NH-、-N＝C-、 -NHCH2CH(OH)-、-NHCH2CH(OH)CH2O-、
Figure BDA0002374785210000112
Figure BDA0002374785210000113
等以及衍生基团。
C为含氟脂肪链、芳香环功能基团。
本发明所述壳聚糖和含氟化合物是共价连接，在所述壳聚糖分子表面进行修饰，构 成一种新型的含氟脂肪链或芳香环化合物修饰的壳聚糖药物载体，例如可以用于促抗原 呈递的疫苗载体，其结构如式(V)所示，b、c均为20-500的整数。
所述壳聚糖是分子量范围在1000-5000000，脱乙酰度在55％-95％，粘度在 25-1000厘泊(1％醋酸溶液)的壳聚糖。其结构如式(IV)所示，n均为20-2000的 整数，该壳聚糖高分子表面具有伯胺基团。
Figure BDA0002374785210000114
本发明中″含氟脂肪链″是指含氟烃基及其衍生物，例如三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸、十七氟壬酸、十九氟奎酸、 全氟丁酸酐、全氟庚酸酐、全氟癸酸酐、2，2，3，3，4，4，4-七氟丁基丙烯酸酯、 3-(1H，1H，5H八氟戊氧基)-1，2-环氧丙烯、九氟丁基璜酰胺酐及其衍生物；所 述含氟脂肪链是带有可以与氨基反应的活性基团的一类含氟化合物。结构举例如式(VI)所示：
Figure BDA0002374785210000121
其中A为-COOH、
Figure BDA0002374785210000122
等能够与伯氨基反应的活性基团，x为0-3的整数，y为 0-8的整数。
本发明中″含氟芳香环化合物″是指3-氟苯甲酸、3，5-二氟苯甲酸、2，3，5， 6-四氟-4-甲基苯甲酸、五氟苯甲酸、2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸及其衍生物等，所述 含氟芳香环化合物是带有可以与氨基反应的活性基团的一类含氟化合物。结构举例如式 (VII)所示：
Figure BDA0002374785210000131
本发明提出一种复合物包括含氟化合物修饰的壳聚糖以及抗原，所述抗原包括蛋白 质、细菌、病毒、细菌外毒素，以及其在促进抗原递送中的用途。
综上，本专利的技术方案以氟化壳聚糖为例作为疫苗载体，作为一种阳离子聚合物 氟化壳聚糖除了通过打开紧密的细胞连接，将抗原更多地暴露给抗原呈递细胞，增强免疫反应外，氟化壳聚糖提供可促进内吞作用的阳离子电荷，刺激树突状细胞摄取运载的 抗原复合物来加强免疫应答。本专利技术方案的疫苗可以透皮肤、鼻腔、口服等方式进 行疫苗给药。更重要的是，氟化壳聚糖本身是非常好的免疫佐剂，可以非特异性地刺激 免疫系统，能有效诱导细胞毒性巨噬细胞、细胞介导的免疫和循环抗体形成，放大免疫 应答。生物相容性好，具有巨大的商业价值。并且本发明提出的含氟化合物修饰的壳聚 糖合成工艺成熟、操作简易，合成效率高，周期短，无需繁琐的纯化步骤即可获得高产 率的药物载体，其简易的合成方法为其提供了商业化的良好基础。
附图说明
图1-1为实施例2中全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA)复合物体 外刺激后，成熟的树突状细胞占总树突状细胞的百分比的流式细胞仪处理图与统计图， 成熟的树突状细胞能有效地呈递抗原，激活T细胞，启动免疫应答，空白为没有处理的 自然成熟阴性对照组，脂多糖为加了脂多糖的阳性对照组，全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡 卵清白蛋白为实验组。
图1-2为实施例2中全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物体外刺激后，树突状细胞表达呈递抗原的关键蛋白——第二类组织相容性复合体(MHC II)与分化集 群40蛋白(CD40)的变化。别藻青蛋白染料的强度越强，表明CD40蛋白在树突状细胞 表面表达越多，藻红蛋白染料的强度越强表明MHC II在树突状细胞表面表达越多。
图1-3为实施例2中带荧光的全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物与软膏混合敷在小鼠背部，淋巴结内全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物在淋巴结的 聚集随时间变化的活体成像。白色箭头所示为小鼠其中一个淋巴结。
图1-4为实施例2中使用透皮敷贴种植全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白疫苗复合物的小鼠与使用透皮敷贴种植鸡卵清白蛋白疫苗的小鼠，在接种疫苗后，在小鼠背 部种植细胞表面表达鸡卵清白蛋白的黑色素瘤(B16-OVA)后，肿瘤随时间的生长的 情况。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图，对本发明做进一步的详细说明，本发明的保护内容不 局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
实施例1：制备全氟庚酸不同修饰程度的壳聚糖(脱乙酰度≥95％，粘度100-200mpa.s)，其中全氟庚酸与N氨基葡萄糖单元的投料摩尔比例分别为1∶2.2、1∶4.2、1∶8.4、 1∶16.8。
合成方法：(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取200mg充分干燥的壳聚糖加入10ml1％的醋酸水溶液中，搅拌30min使充分溶解，随后缓慢滴加1.6ml 0.5M的氢氧化钠，搅 拌至溶液澄清，pH在6.5左右。如此方法制备4份壳聚糖醋酸水溶液。(2)全氟庚酸(13 氟庚酸)的活化：分别称取206mg、103mg、51.5mg、26mg全氟庚酸，将其溶于适量 无水二甲基亚砜中，依次加入适量EDC，NHS避光搅拌1h。(3)13F庚酸壳聚糖的制 备：将上述活化好的全氟酸溶液分别缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶液中，避光搅拌反 应20h。反应结束，依次将反应缓慢滴加到100ml 0.5M氢氧化钾乙醇溶液中搅拌8h， 过滤沉淀，用大量无水乙醇冲洗，至滤液呈中性，沉淀经甲醇、乙醚洗涤脱水，真空干 燥30min。干燥后的沉淀物溶于10ml 0.1M盐酸溶液，冻干得外观白色粉末的不同氟 化修饰程度全氟庚酸氟化壳聚糖盐酸盐分子(产物命名为13FCS-1，13FCS-2，13FCS-3， 13FCS-4)。
茚三酮反应法计算以上制备FCS的氟化修饰程度依次为：13FCS-1，5.2％；13FCS-2， 11.3％；13FCS-3，21.4％；13FCS-4，42.5％。13FCS-1～13FCS-4 13氟庚羰基基团的连接效率随着全氟庚酸投料的增加为5.2％～42.5％，即平均每个壳聚糖分子中有5.2％～42.5％ 的葡萄糖结构单元中完成了氟化修饰，产物命名为13FCS-1，13FCS-2，13FCS-3，13FCS-4。
实施例2：一、以全氟庚酸修饰的壳聚糖为载体制备氟化壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合 物，与骨髓来源树突状细胞孵育，考察复合物刺激树突状细胞成熟的能力。
具体方法：
制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物：称取0.9mg全氟庚酸修饰的壳聚糖用900μL超纯水搅拌溶解，在不断搅拌的情况下滴入100μL(20mg/mL)的鸡卵清 白蛋白，并持续搅拌一小时，得到全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA)复合物。
将10μL上述制备复合物加入24孔板中，加入含有100万个树突状的细胞悬液1mL。在37℃培养箱中孵育24h，用FITC-CD11c、PE-CD86、APC-CD80对树突状细胞进行 染色，用流式细胞技术分析FITC的荧光信号，选定树突状细胞再分析树突状细胞PE 与APC的荧光信号，确定其成熟度结果如图1-1所示。
实验结果：如图1-1所示，全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA)复 合物相比于不作处理组，能够刺激树突状细胞的成熟。
以全氟庚酸修饰的壳聚糖为载体制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物， 与骨髓来源树突状细胞孵育，考察复合物刺激树突状细胞表达第二类组织相容性复合体 (MHC II)与CD40蛋白的情况。
具体方法：
1.制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物：称取0.9mg全氟庚酸修 饰的壳聚糖用900μL超纯水搅拌溶解，在不断搅拌的情况下滴入100μL (20mg/mL)的鸡卵清白蛋白，并持续搅拌一小时，得到全氟庚酸修饰的壳 聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA)复合物。
2.将10μL上述制备复合物加入24孔板中，加入含有100万个树突状的细胞悬 液1mL。在37℃培养箱中孵育24h，用FITC-CD11c、PE-MHC II、APC-CD40 对树突状细胞进行染色，用流式细胞技术分析FITC的荧光信号，选定树突状 细胞再分析树突状细胞PE与APC的荧光信号，确定第二类组织相容性复合 体(MHC II)与CD40蛋白的变化。结果如图1-2所示。
实验结果：如图1-2所示，在全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA)复合物的刺激下，树突状细胞中第二类组织相容性复合体(MHC II)与CD40蛋白的 表达量明显增加，说明该复合物能有效地刺激树突状细胞呈递抗原。
三、以全氟庚酸修饰的壳聚糖为载体制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复 合物，用敷贴敷与小鼠背部考察复合物在淋巴结聚集的情况。
具体方法：
1.制备cy5.5标记的鸡卵清白蛋白：称取10mg的鸡卵清白蛋白中，用1mL PBS 溶解，加入20μL(20mg/mL)的cy5.5，4℃放置过夜。通过G25-分子筛凝 胶除去游离cy5.5。通过BSA定量，再用超滤将OVA浓缩20mg/mL。
2.备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物：称取1mg全氟庚酸修饰的壳聚糖用450μLPBS搅拌溶解，在不断搅拌的情况下滴入50μL(20mg/mL)PBS 溶解被cy5.5标记的鸡卵清白蛋白，并持续搅拌一小时，得到全氟庚酸修饰的壳 聚糖-鸡卵清白蛋白(FCS-OVA-cy5.5)复合物。
3.取12.5μL上述FCS-OVA-cy5.5复合物溶液混入12.5μg软膏中，制备成 FCS-OVA-cy5.5疫苗软膏，将上述软膏涂抹于C57小鼠背部。利用小动物成像 在0h、3h、7h、11h、24h拍摄小鼠正面荧光分布情况，观察FCS-OVA-cy5.5 在淋巴结的聚集情况。结果如图1-3所示。
实验结果：如图1-3所示，在11小时、24小时，小鼠淋巴结部位出现荧光，意味 着利用敷贴固定在小鼠背上的全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物能够透过皮 肤进入小鼠淋巴结。
四、以全氟庚酸修饰的壳聚糖为载体制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复 合物，并用贴片敷于皮肤上作为疫苗种植，三周后，种植B16-OVA肿瘤，观察肿瘤生 长情况。
具体方法：
1.制备全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物：称取1mg全氟庚酸修饰的壳聚 糖用450μLPBS搅拌溶解，在不断搅拌的情况下滴入50μL(20mg/mL)PBS溶 解的鸡卵清白蛋白，并持续搅拌一小时，得到全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋 白(FCS-OVA)复合物。
2.取12.5μL上述FCS-OVA复合物溶液混入12.5μg软膏中，制备成FCS-OVA疫苗 软膏，12.5μLOVA(2mg/mL)溶液混入12.5μg软膏中，制备成OVA疫苗软膏。 将上述软膏分别涂抹于C57小鼠背部，用敷贴固定12h。每周重复该操作两次， 持续三周。
3.每只小鼠种植1x105个B16-OVA细胞，观察其肿瘤生长情况。结果如图1-4所示。
实验结果：如图1-4所示，以全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物作为贴片疫苗种植的小鼠相比于单纯以鸡卵清白蛋白种植的小鼠，肿瘤生长速度更缓慢，表明 了全氟庚酸修饰的壳聚糖-鸡卵清白蛋白复合物作为贴片具有作为疫苗的效果。
实施例3：制备3-氟苯甲酸不同修饰程度的壳聚糖(脱乙酰度≥95％，粘度100-200mpa.s)，其中3-氟苯甲酸与N氨基葡萄糖单元的投料摩尔比例分别为1∶2.1、1∶4.2、 1∶8.4、1∶16.8。
合成方法：(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取200mg充分干燥的壳聚糖加入10ml1％的醋酸水溶液中，当然也可以采用盐酸水溶液，搅拌30min使充分溶解，随后 缓慢滴加1.6ml 0.5M的氢氧化钠，搅拌至溶液澄清，pH在6.5左右。单纯考虑碱化 溶液的角度氢氧化钠可以被氨水，三乙胺等碱替换，但是从产品工艺角度使用氢氧化钠 的副产物是氯化钠，更适合工业化。如此方法制备4份壳聚糖醋酸水溶液。(2)3-氟 苯甲酸的活化：分别称取82mg、41mg、20mg、10mg的3-氟苯甲酸，将其溶于 适量无水二甲基亚砜中，依次加入反应量EDC，NHS避光搅拌1h。(3)3-氟苯甲酰 壳聚糖的制备：将上述活化好的3-氟苯甲酸溶液分别缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶 液中，避光搅拌反应20h。反应结束，依次将前述反应后的溶液缓慢滴加到100ml 0.5 M氢氧化钾乙醇溶液中搅拌8h，过滤沉淀，用大量无水乙醇冲洗，至滤液呈中性， 沉淀经甲醇、乙醚洗涤脱水，真空干燥30min。干燥后的沉淀物溶于10ml0.1M盐 酸溶液，冻干得外观白色粉末的不同氟化修饰程度3-氟苯甲酸氟化壳聚糖盐酸盐分子 (产物命名为1FCS-1，1FCS-2，1FCS-3，1FCS-4)。
以上反应所得材料以茚三酮反应法检测氟化修饰的壳聚糖(FCS)高分子表面修饰氟化脂肪链的修饰度。茚三酮反应法是一种简单、快速、准确、可靠的方法，可以准确 检测水溶液中FCS高分子表面伯氨基团的数量，近而计算出FCS表面氟化基团的数量。
实施例4：制备七氟丁酸不同修饰程度的壳聚糖(脱乙酰度≥95％，粘度100-200mpa.s)，其中全氟庚酸与N氨基葡萄糖单元的投料摩尔比例分别为1∶2.1、1∶4.2、1∶8.4、 1∶16.8。
合成方法：(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取200mg充分干燥的壳聚糖加入10ml1％的醋酸水溶液中，搅拌30min使充分溶解，随后缓慢滴加1.6ml 0.5M的氢氧 化钠，搅拌至溶液澄清，pH在6.5左右。如此方法制备4份壳聚糖醋酸水溶液。(2)七氟丁酸的活化：分别称取125.3mg、62.67mg、31.3mg、15.7mg七氟丁酸，将 其溶于适量无水二甲基亚砜中，依次加入反应量EDC，NHS避光搅拌1h。(3)七氟 丁酸壳聚糖的制备：将上述活化好的七氟丁酸溶液分别缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶 液中，避光搅拌反应20h。反应结束，依次将反应缓慢滴加到100ml 0.5M氢氧化 钾乙醇溶液中搅拌8h，过滤沉淀，用大量无水乙醇冲洗，至滤液呈中性，沉淀经甲醇、 乙醚洗涤脱水，真空干燥30min。干燥后的沉淀物溶于10ml 0.1M盐酸溶液，冻干 得外观白色粉末的不同氟化修饰程度全氟庚酸氟化壳聚糖盐酸盐分子(产物命名为 7FCS-1，7FCS-2，7FCS-3，7FCS-4)。
以上反应所得材料以茚三酮反应法检测FCS(氟化修饰的壳聚糖)高分子表面修饰氟化脂肪链的修饰度。茚三酮反应法是一种简单、快速、准确、可靠的方法，可以准确 检测水溶液中FCS高分子表面伯氨基团的数量，近而计算出FCS表面氟化基团的数量。 茚三酮反应法计算以上制备FCS的氟化修饰程度依次为：7FCS-1，6.9％； 7FCS-2，10.4％；7FCS-3，23.5％；7FCS-4，42.3％。
实施例5：制备19F癸酸不同修饰程度的壳聚糖(脱乙酰度≥95％，粘度100-200mpa.s)，其中19F癸酸与N氨基葡萄糖单元的投料摩尔比例分别为1∶4.2，1∶8.4。
合成方法：(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取200mg充分干燥的壳聚糖加入10ml1％的醋酸水溶液中，搅拌30min使充分溶解，随后缓慢滴加1.6ml 0.5M的氢氧 化钠，搅拌至溶液澄清，pH在6.5左右。如此方法制备2份壳聚糖醋酸水溶液。(2) 19F癸酸的活化：分别称取146.8mg、73.4mg 19F癸酸，将其溶于适量无水二甲基 亚砜中，依次加入适量EDC，NHS避光搅拌1h。(3)19F癸酸壳聚糖的制备：将上 述活化好的19F癸酸溶液分别缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶液中，避光搅拌反应20h。 反应结束，依次将反应缓慢滴加到100ml0.5M氢氧化钾乙醇溶液中搅拌8h，过滤 沉淀，用大量无水乙醇冲洗，至滤液呈中性，沉淀经甲醇、乙醚洗涤脱水，真空干燥 30min。干燥后的沉淀物溶于10ml 0.1M盐酸溶液，冻干得外观白色粉末的不同氟 化修饰程度19F癸酸氟化壳聚糖盐酸盐分子(产物命名为19FCS-1，19FCS-2)。
19FCS-2的水溶性比较差，无法进行后续的表征及应用评价，故用茚三酮反应法计算以上制备19FCS-1的氟化修饰程度依次为：19FCS-1，5.2％。
本专利所使用的全氟庚酸修饰的壳聚糖均为实施例1中全氟庚酸与N氨基葡萄糖单元的投料摩尔比例分为1∶4.2的氟化壳聚糖。
如下为实施例1中氟化壳聚糖结构示意。
Figure BDA0002374785210000211
其中，A为含有伯氨基的壳聚糖分子骨架如下所示：
Figure BDA0002374785210000212
其中，B为含氟功能基团与壳聚糖伯氨基形成的连接基团，此处为酰胺键即
Figure BDA0002374785210000221
其中，C为含氟脂肪链、芳香环功能基团；此专利中采用全氟庚酸，结构式如下：
Figure BDA0002374785210000222
本专利各个实施例中的氟化壳聚糖，均可以用作疫苗制剂，用于作为各类疫苗接种 制剂。
对所公开的实施例的上述说明，使得本技术领域专业技术人员能够实现或使用本发 明。对这些实施例的多种修改对于本领域技术人员而言将是显而易见的。本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理与特点相一致的最宽的范围。

Claims (16)

1.一种透皮疫苗载体，包括透皮疫苗载体(a)，所述透皮疫苗载体(a)为含氟化合物修饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物为氟化壳聚糖，含氟化合物共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，脱乙酰度不小于55％且粘度范围为25-1000厘泊，所述透皮疫苗载体有胞内渗透、胞间渗透和毛囊渗透三种抗原透过途径。
2.根据权利要求1所述透皮疫苗载体，其特征在于：所述透皮疫苗载体中的氟化壳聚糖为含氟化合物共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，
所述含氟化合物为如下化学式(I)
Figure FDA0002374785200000011
所示的含氟脂肪链，或式(II)
Figure FDA0002374785200000012
所示的芳香环功能基团，所述R1为卤素(氟，氯，溴，碘)、卤素取代的烷烃、环烷烃、醛基、羧基、双键、炔键、羟基、磺酰氯、磺酸键或巯基这些能够与伯氨基反应的活性基团。
3.根据权利要求1所述透皮疫苗载体，其特征在于：所述氟化壳聚糖为全氟庚酸氟化壳聚糖，所述全氟庚酸氟化壳聚糖的氟化修饰程度范围为5％～50％，或所述全氟庚酸氟化壳聚糖的氟化修饰程度范围为18％～25％。
4.一种采用权利要求1所述透皮疫苗载体的疫苗药物组合物，包括透皮疫苗载体(a)和疫苗组分(b)，所述疫苗药物组合物为涂抹疫苗，
所述疫苗组分(b)包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；所述疫苗组分(b)根据针对的疾病分类包括肿瘤疫苗，宫颈癌疫苗，水痘疫苗，白喉疫苗，百日咳疫苗，乙型流感嗜血杆菌疫苗，甲型肝炎疫苗，乙型肝炎疫苗，流感疫苗，麻疹疫苗，腮腺炎疫苗，风疹疫苗，脑膜炎球菌疫苗，肺炎球菌疫苗，脊髓灰质炎疫苗，轮状病毒疫苗，人乳头瘤病毒疫苗，乙型脑膜炎球菌疫苗，霍乱毒素疫苗，旅行者腹泻疫苗，活结核分枝杆菌疫苗，卡介苗芽孢杆菌疫苗，猪屎豆属类毒素疫苗，白喉类毒素疫苗，破伤风类毒素疫苗，葡萄球菌类毒素疫苗，霍乱类毒素疫苗，黄热病疫苗，流行性斑疹伤寒疫苗，流感嗜血杆菌疫苗，基孔肯雅病毒疫苗，病毒样颗粒型流感疫苗，西尼罗河病毒疫苗，活的腺病毒疫苗，炭疽疫苗。
5.一种采用权利要求1所述透皮疫苗载体的疫苗药物组合物，包括透皮疫苗载体(a)和疫苗药物组分(b)，所述疫苗药物组合物为经鼻给药或经鼻喷雾疫苗，
所述疫苗组分(b)包括多肽类抗原、蛋白类抗原、RNA类抗原、灭活病毒抗原、灭活细菌抗原、灭活肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物抗原；所述疫苗组分(b)根据针对的疾病分类包括肿瘤疫苗，流感疫苗，百日咳疫苗，结核病喷雾疫苗，流感喷雾疫苗，麻疹喷雾疫苗，百日咳伯德杆菌喷雾疫苗，肺炎衣原体喷雾疫苗，肺炎链球菌喷雾疫苗，炭疽杆菌喷雾疫苗，肺炎球菌表面蛋白-鼻凝胶疫苗，A型肉毒杆菌神经毒素BoHc/A凝胶疫苗，破伤风类毒素凝胶疫苗。
6.一种透皮疫苗载体制剂，所述制剂包括组分(a)，所述组分(a)为含氟化合物修饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物能作为胞内渗透、胞间渗透和毛囊渗透三种抗原透过途径进行透皮疫苗给药的制剂。
7.一种透皮疫苗载体制剂，所述制剂包括组分(a)，所述组分(a)为含氟化合物修饰的阳离子聚合物，所述含氟化合物修饰的阳离子聚合物在制备用于口服给药方式的药物、透皮涂抹给药、鼻腔给药方式的药物中的应用。
8.一种采用权利要求1所述疫苗载体制剂制备的预防癌症的癌症疫苗，其特征在于：包括氟化壳聚糖与鸡卵清白蛋白，所示氟化壳聚糖与鸡卵清白蛋白形成复合物，所述复合物的粒径范围为小于10微米，或所述复合物的粒径范围为不大于500纳米的复合物，所述氟化壳聚糖与鸡卵清白蛋白的质量比为1∶0.25-4或1∶0.5-2。
9.根据权力要求8所述的肿瘤疫苗，其特征在于：用于预防肿瘤发生的药物，包括宫颈癌疫苗。
10.一种制备权利要求3所述全氟庚酸氟化壳聚糖的方法，其包括如下步骤：
(1)制备壳聚糖醋酸水溶液：称取充分干燥的壳聚糖加入醋酸水溶液中，搅拌使充分溶解，随后缓慢滴加氢氧化钠，搅拌至溶液澄清，pH在6.2-6.8；
(2)全氟庚酸(13氟庚酸)的活化：称取全氟庚酸，将其溶于适量无水二甲基亚砜中，依次加入适量EDC，NHS避光充分搅拌；
(3)13F庚酸壳聚糖的制备：将上述活化好的全氟酸溶液缓慢滴加到快速搅拌的壳聚糖溶液中，避光搅拌充分反应。
11.根据权利要求10所述制备全氟庚酸氟化壳聚糖的方法，其进一步包括如下步骤：
将充分反应的溶液缓慢滴加到氢氧化钾乙醇溶液中充分搅拌，过滤沉淀，用大量无水乙醇冲洗，至滤液呈中性，沉淀经甲醇、乙醚洗涤脱水，真空干燥，干燥后的沉淀物溶于盐酸溶液，冻干得全氟庚酸氟化壳聚糖盐酸盐。
12.一种作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，具有如下结构：含氟化合物共价连接在壳聚糖主链上，所述壳聚糖的分子量范围在1000-5000000，
所述含氟化合物为如下化学式(I)
Figure FDA0002374785200000031
所示的含氟脂肪链，或式(II)
Figure FDA0002374785200000041
所示的芳香环功能基团，所述R1为卤素(氟，氯，溴，碘)、卤素取代的烷烃、环烷烃、醛基、羧基、双键、炔键、羟基、磺酰氯、磺酸键或巯基这些能够与伯氨基反应的活性基团。
13.一种作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，具有如式(IV)所示的含有伯氨基的壳聚糖分子骨架：
Figure FDA0002374785200000042
所述壳聚糖的伯氨基与含氟功能基团之间形成的连接基团为：-NH-、-N＝C-、-NHCH2CH(OH)-、-NHCH2CH(OH)CH2O-、
Figure FDA0002374785200000043
Figure FDA0002374785200000044
以及衍生基团；
所述含氟功能基团为含氟脂肪链、芳香环功能基团。
14.根据权利要求12所述的作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，其特征在于：所述式(I)中x为0-3的整数，y为0-20的整数，z为0-8的整数，R2为CF3、CHF2、CH2F、或CH3(当y不为0)；
所述含氟脂肪链化合物是指含氟烃基及其衍生物，包括三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸、十七氟壬酸、十九氟奎酸、全氟丁酸酐、全氟庚酸酐、全氟癸酸酐、2，2，3，3，4，4，4-七氟丁基丙烯酸酯、3-(1H，1H，5H八氟戊氧基)-1，2-环氧丙烯、九氟丁基璜酰胺酐及其衍生物。
15.根据权利要求12所述的作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，其特征在于：所述式(II)中R为H，CH3，OH，NO2，O，CF3，F，CH2OH，CN，NCO，或(CF2)aCF3(a为1-20的整数)等，且至少一个R为F；
所述含氟芳香环化合物包括3-氟苯甲酸、3，5-二氟苯甲酸、2，3，5，6-四氟-4-甲基苯甲酸、五氟苯甲酸、2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酸及其衍生物。
16.根据权利要求3所述的作为透皮疫苗载体用的氟化修饰的壳聚糖衍生物，其特征在于：所述壳聚糖和含氟化合物共价连接，在所述壳聚糖分子表面进行修饰，构成一种药物载体，其结构如式(V)所示，b、c均为20-500的整数，式(V)如下：
Figure FDA0002374785200000051
其中，B为含氟功能基团与壳聚糖伯氨基形成的连接基团，C为含氟脂肪链、芳香环功能基团。
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