CN111718884A - Bvg90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌 - Google Patents
Bvg90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了BVG90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌,属于生物技术领域。本发明提供了一株可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1ΔBVG90_08615,此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1ΔBVG90_08615是通过敲除粘质沙雷氏菌JNB5‑1中编码转录调控因子BVG90_08615的基因获得的,将此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1ΔBVG90_08615接种至LB液体培养基中发酵24h,即可使发酵液中灵菌红素的产量高达58.68mg/L,是野生型粘质沙雷氏菌JNB5‑1的1.15倍。
Description
技术领域
本发明涉及BVG90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌,属于生物技术领域。
背景技术
灵菌红素(Prodigiosin,PG)是一类由微生物产生的次级代谢产物。研究发现,灵菌红素具有多种生物活性,包括:抗细菌、抗痢疾、抗肿瘤和免疫抑制等,因此,灵菌红素在医药开发等领域均具有巨大的应用价值。
目前,生产灵菌红素的方法主要有化学合成法和微生物发酵法。其中,化学合成法主要是通过串联共轭加成及高温脱氢的方法获得灵菌红素。但是,由于途径复杂且困难、产率低下,化学合成法难以实现大规模工业化生产。微生物发酵法则主要是通过微生物发酵获得灵菌红素。与化学合成法相比,微生物发酵法具有工艺相对简单、环境友好、条件温和和成本低等的优势。
然而,现有的生物法也仍存在一定的缺陷,其中,产量不高是阻碍微生物发酵法工业化进程最主要的缺陷。例如,Lee等人通过将Zooshikella ganghwensisKCTC12044T接种至Marine broth 2216培养基中进行发酵以生产灵菌红素,但是,使用此方法发酵24h,仅可使发酵液中灵菌红素的产量达15.40mg/L(具体可见参考文献:Lee,J.S.,Kim,Y.S.,Park,S.,Kim,J.,Kang,S.J.,Lee,M.H.,etal.(2011).Exceptional production of bothprodigiosin and cycloprodigiosinas majormetabolic constituents by a novelmarine bacterium,Zooshikella rubidus S1-1.Appl.Environ.Microbiol.77,4967-4973.);Lee等人通过将HahellachejuensisKCTC2396T接种至Marinebroth2216培养基中进行发酵以生产灵菌红素,但是,使用此方法发酵24h,仅可使发酵液中灵菌红素的产量达28.10mg/L(具体可见参考文献:Lee,J.S.,Kim,Y.S.,Park,S.,Kim,J.,Kang,S.J.,Lee,M.H.,etal.(2011).Exceptional production of both prodigiosin andcycloprodigiosin as major metabolic constituents by a novel marine bacterium,Zooshikella rubidusS1-1.Appl.Environ.Microbiol.77,4967-4973.1)。
因此,急需找到一株可高产灵菌红素的微生物以克服上述缺陷。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一株可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌。
[技术方案]
为解决上述技术问题,本发明提供了一株粘质沙雷氏菌工程菌,所述粘质沙雷氏菌工程菌以粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)为宿主敲除编码转录调控因子BVG90_08615的基因。
在本发明的一种实施方式中,所述转录调控因子BVG90_08615的氨基酸序列如SEQID No.1所示。
在本发明的一种实施方式中,所述编码转录调控因子BVG90_08615的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
在本发明的一种实施方式中,所述粘质沙雷氏菌为粘质沙雷氏菌JNB5-1。
本发明还提供了一种生产灵菌红素的方法,所述方法为将上述粘质沙雷氏菌工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,获得含有灵菌红素的发酵液;将含有灵菌红素的发酵液进行分离,获得灵菌红素。
在本发明的一种实施方式中,所述发酵的温度为28~30℃、转速为150~200rpm。
在本发明的一种实施方式中,所述发酵的温度为30℃、转速为180rpm。
在本发明的一种实施方式中,所述发酵培养基为LB液体培养基。
在本发明的一种实施方式中,所述发酵培养基为LB液体培养基;所述LB液体培养基的成分包含10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母提取物、10g/L氯化钠。
本发明还提供了上述粘质沙雷氏菌工程菌或上述方法在生产灵菌红素中的应用。
[有益效果]
本发明提供了一株可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615,此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615是通过敲除粘质沙雷氏菌JNB5-1中编码转录调控因子BVG90_08615的基因获得的,将此粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615接种至LB液体培养基中发酵24h,即可使发酵液中灵菌红素的产量高达58.68mg/L,是野生型粘质沙雷氏菌JNB5-1的1.15倍。
附图说明
图1:粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615的菌落PCR验证结果;其中,DNAMarker(2000bp),1为以粘质沙雷氏菌JNB5-1基因组为模板的PCR结果,2为以粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615基因组为模板的PCR结果。
图2:粘质沙雷氏菌JNB5-1、粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615、粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_03840和粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_24040发酵生产灵菌红素的产量。
具体实施方式
下述实施例中涉及的大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1购自唯地生物公司;下述实施例中涉及的pUTmini质粒购自BioVector质粒载体菌种细胞基因保藏中心;下述实施例中涉及的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)JNB5-1记载于文献“徐虹,徐美娟,杨套伟,等.温度对粘质沙雷氏菌合成灵菌红素的影响[J].微生物学报,2014,54(5):517-524.”中,并且,申请人保证从申请日起二十年内向公众发放此菌株。
下述实施例中涉及的培养基和试剂如下:
LB液体培养基:蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L。
LB固体培养基:蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15g/L。
牛膏蛋白胨固体培养基:牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl5g/L、琼脂20g/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下:
灵菌红素含量的测定:以酸性乙醇为空白对照,取发酵液溶解到酸性乙醇(pH3.0)中,得到样品;将样品做适度的稀释(50、250、1000倍),得到稀释样品;将稀释样品密封放置8h(充分溶解灵菌红素)后12000r·min-1离心10min,取上清;测定上清的A535的值,根据标准曲线Y=1.1936X-0.001计算得到发酵液中灵菌红素的含量;标准曲线Y=1.1936X-0.001中,Y代表A535值,X代表灵菌红素产量,单位mg/100mL。
实施例1:粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615的构建
具体步骤如下:
以粘质沙雷氏菌JNB5-1的基因组为模板,分别以08615-D-U-F/08615-D-U-R(SEQID NO:3和SEQ ID NO:4)和08615-D-D-F/08615-D-D-R(SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6)为引物,通过PCR扩增获得DNA片段BVG90_08615-U(SEQ ID NO:7)和DNA片段BVG90_08615-D(SEQID NO:8);合成aacC3抗性基因(SEQ ID NO:9);通过重叠延伸PCR将DNA片段BVG90_08615-U、DNA片段BVG90_08615-D与aacC3抗性基因依次相连,得到DNA片段BVG90_08615-AacC3;将DNA片段BVG90_08615-AacC3与经KpnI酶切后的线性化pUTmini质粒经同源重组后进行连接,得到重组质粒pUTmini-BVG90_08615;重组质粒pUTmini-BVG90_08615转化大肠杆菌(Escherichiacoli)S17-1,得到转化产物1;将转化产物1涂布在LB固体培养基(含有50μg·mL-1硫酸铵普霉素)上,于37℃恒温培养箱中倒置培养8~12h,得到转化子1;挑取转化子1接种至LB液体培养基中,于37℃、180rpm的条件下摇瓶培养8~12h后提取质粒进行酶切验证以及测序验证,验证正确即获得大肠杆菌工程菌S17-1/pUTmini-BVG90_08615;将大肠杆菌工程菌S17-1/pUTmini-BVG90_08615和粘质沙雷氏菌JNB5-1分别接种至LB液体培养基中,于37℃、180rpm的条件下培养16h,得到培养液;将培养液离心取菌体;将大肠杆菌工程菌S17-1/pUTmini-BVG90_08615和粘质沙雷氏菌JNB5-1共同接种至牛膏蛋白胨固体培养基上进行共培养,通过接合转移的方式将大肠杆菌工程菌S17-1/pUTmini-BVG90_08615中的重组质粒pUTmini-BVG90_08615转化至粘质沙雷氏菌JNB5-1中,得到转化产物2;将转化产物2涂布在LB固体培养基(含有50μg·mL-1安普霉素和50μg·mL-1克林霉素)上,于37℃恒温培养箱中倒置培养12~24h,得到转化子2;挑取转化子2接种至LB液体培养基中,于37℃、180rpm的条件下摇瓶培养8~12h稳定遗传三代,得到培养液;提取培养液中转化子2的基因组DNA和粘质沙雷氏菌JNB5-1的基因组DNA,以08615-YZ-F/08615-YZ-R(SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11)为引物,通过PCR扩增单菌落中编码转录调控因子BVG90_08615的基因BVG90_08615,扩增成功即获得粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615(PCR验证结果将图1)。
参照与构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_11450同样的方法,构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_03840和JNB5-1ΔBVG90_24040;
其中,构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_03840所用的引物为03840-D-U-F/03840-D-U-R(SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13)和03840-D-D-F/03840-D-D-R(SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15);构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_03840所用的DNA片段为BVG90_03840-U和BVG90_03840-D(SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17);
构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_24040所用的引物为24040-D-U-F/24040-D-U-R(SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19)和24040-D-D-F/24040-D-D-R(SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21);构建粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_24040所用的DNA片段为BVG90_24040-U和BVG90_24040-D(SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23)。
实施例2:灵菌红素的生产
具体步骤如下:
以粘质沙雷氏菌JNB5-1为对照,分别挑取实施例1获得的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615、JNB5-1ΔBVG90_03840和JNB5-1ΔBVG90_24040的单菌落接种至LB液体培养基(含有50μg·mL-1安普霉素和50μg·mL-1克林霉素)中,于37℃、180rpm的条件下振荡培养至对数生长期初期(OD600=0.6),得到种子液;将种子液以4%(v/v)接种量接种至LB液体培养基中,于30℃、180rpm的条件下发酵24h,获得发酵液。
发酵过程中,间隔2h检测发酵液中灵菌红素的含量(检测结果见图2),结果表明:发酵24h时,粘质沙雷氏菌JNB5-1发酵获得的发酵液中灵菌红素的产量为51.01mg/L,粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_08615发酵获得的发酵液中灵菌红素的产量为58.68mg/L,是野生型粘质沙雷氏菌JNB5-1的1.15倍,而粘质沙雷氏菌工程菌JNB5-1ΔBVG90_03840和JNB5-1ΔBVG90_24040发酵获得的发酵液中灵菌红素的产量分别仅有49.45mg/L和50.16mg/L,分别为野生型粘质沙雷氏菌JNB5-1的0.97倍和0.98倍。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 江南大学
<120> BVG90_08615基因缺失的粘质沙雷氏菌工程菌
<160> 23
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 64
<212> PRT
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 1
Met Glu Lys Lys Thr Ala Arg Leu Thr Val Leu Ile Asp Pro Asp Lys
1 5 10 15
Lys Lys Ala Leu Glu Glu Leu Cys Leu Gln Gln Asp Val Thr Pro Ser
20 25 30
Gln Val Val Arg Gln Leu Ile Arg Asp Tyr Leu His Lys His Gln Val
35 40 45
Asp Tyr Pro Ser Gln Pro Thr His Ala Asn Pro Arg Val Glu Ser Asn
50 55 60
<210> 2
<211> 195
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 2
tcaattgctc tcgactcgcg gattggcgtg ggtcggctgg ctgggataat ccacctgatg 60
tttgtgcaga taatcgcgga tcagctgacg caccacctgg gaaggggtga cgtcctgctg 120
caggcacagc tcttccaggg ctttcttctt gtccgggtca atcagcaccg ttagccgcgc 180
cgttttcttt tccat 195
<210> 3
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
taggccgaat tcgagctcgg taccgcaggt aagcgccgaa atagc 45
<210> 4
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cgagagcaat tgaacggcgg 60
<210> 5
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
cgaagaatgc gatgccgctc gccagtcgat tggctgacca tcaggatcct ccagagaatg 60
<210> 6
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
attacagccg gatccccggg taccgccacc gacaccatca gcc 43
<210> 7
<211> 572
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 7
taggccgaat tcgagctcgg taccgcaggt aagcgccgaa atagcctttg ccgtagtgcg 60
cgcgctcgcc gggttcgcct tcactgctgc cgcccgccag cagaccggcg gcgtaggcgc 120
gtttaaccgc cagctcgtcg gcggcgagaa aggccagcat gctgccgttg ccggcgctgg 180
cgggctgtct gtcgaagggt tggtaggcgt aaaaacgcgg cagcgtttgg cctggcatca 240
cccagcagcg ggcggcgggg ccgccgtccg gcgtcacttc ccgccgttgt aaacccaatg 300
gcaacagaat ggcgtcgtag aacgcggcgg cggcatccag atcgctgacg ccgacggtaa 360
tatggctgaa catggcgcgt ttcctttccc aagagagaat aatgaacgcc taaaacagta 420
gcagcgatat cgcaggatgg acagaccgcc gtggaggatt cggattaggg acgcgcgcag 480
ggggaagcgc gcttcacggt ttgcggggca ggccgccgtt caattgctct cgcgcggaac 540
ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aa 572
<210> 8
<211> 565
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 8
cgaagaatgc gatgccgctc gccagtcgat tggctgacca tcaggatcct ccagagaatg 60
atgactgaat gataatacca tgtggacgaa gcggccagcc agaccgcgtc gccgctcgtt 120
cttagcggaa atgcagccgt tctatcttgc gtgacaggta gccgagttcg cagttgaaca 180
gctcgccgct gccggcggcc agcgtgcgaa gcgtgctgag cggcaacgtc acctgggccg 240
gcgtggcgta aatgatcacg ttgccgctgg gggcgacgca aaacaatacg gtgccgaata 300
tccggtgcag gctgtggtac agcaggctgt tctcatcggg cagatcgtgg taattgagca 360
ccagccagcc cccgtcgttc agccgcgcgg cgcagttttc caggaatgtc tgggtgcctt 420
gctgcggatc catggcgaac gccgaataga gatcggagaa aatcagatcg taacgcgtct 480
cggcgggcgg gcgcacaaag tccatggcgt cggcggtacg caggctgatg gtgtcggtgg 540
cggtacccgg ggatccggct gtaat 565
<210> 9
<211> 909
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga 60
caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgtc atcagcggtg 120
gagtgcaatg tcgtgcaata cgaatggcga aaagccgagc tcatcggtca gcttctcaac 180
cttggggtta cccccggcgg tgtgctgctg gtccacagct ccttccgtag cgtccggccc 240
ctcgaagatg ggccacttgg actgatcgag gccctgcgtg ctgcgctggg tccgggaggg 300
acgctcgtca tgccctcgtg gtcaggtctg gacgacgagc cgttcgatcc tgccacgtcg 360
cccgttacac cggaccttgg agttgtctct gacacattct ggcgcctgcc aaatgtaaag 420
cgcagcgccc atccatttgc ctttgcggca gcggggccac aggcagagca gatcatctct 480
gatccattgc ccctgccacc tcactcgcct gcaagcccgg tcgcccgtgt ccatgaactc 540
gatgggcagg tacttctcct cggcgtggga cacgatgcca acacgacgct gcatcttgcc 600
gagttgatgg caaaggttcc ctatggggtg ccgagacact gcaccattct tcaggatggc 660
aagttggtac gcgtcgatta tctcgagaat gaccactgct gtgagcgctt tgccttggcg 720
gacaggtggc tcaaggagaa gagccttcag aaggaaggtc cagtcggtca tgcctttgct 780
cggttgatcc gctcccgcga cattgtggcg acagccctgg gtcaactggg ccgagatccg 840
ttgatcttcc tgcatccgcc agaggcggga tgcgaagaat gcgatgccgc tcgccagtcg 900
attggctga 909
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
atcagtccaa gtggcccatc ttc 23
<210> 11
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gcttcaaaac tcaacccatt gagcag 26
<210> 12
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
taggccgaat tcgagctcgg taccgcaact gctgttgctg accg 44
<210> 13
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg aacctcaggt cggcagtctc 60
<210> 14
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
atgcgaagaa tgcgatgccg ctcgccagtc gattggctga gttttccggc tgtcggccg 59
<210> 15
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
attacagccg gatccccggg tacccggtgg ccaacatgca gaaa 44
<210> 16
<211> 1064
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 16
taggccgaat tcgagctcgg taccgcaact gctgttgctg accgtggcgg tgctggtggt 60
gtccgccggc agcctggcgc acagcgcctg gatcaacctg gcgggcatcg cgctttcgct 120
ggtgctgatg gcctggctga tgaagcgtga agcgcacgcg cgcgcccgcc tgttgccgca 180
tggcgcattg cggcgcggct catcgctggc ggcgttgtac atcacgaccg cgttgctggt 240
gatcggcatg accagcgaaa tcttcgtgcc ctatttcctg cagctgctgc acggtcagtc 300
gccgctgatc tccggctata tcgccgccgc catggccgcc ggctggacgc tgtccgagat 360
cctcagctcc ggctggcgtg gggcgggcat tcgccgggcg atcgtcagcg ggccgctgtt 420
tgtgctggta ggcctgctgg cactggcgat cctgatgccg acgccgtccg gcggccactg 480
gcaggcgctg gcgccgatcg tcattgcgct attgctggtg ggattcggca tcggcttcgg 540
ttggccgcac ctgctgacgc gcattttgca ggtggcgcct gaagcggaca aagatatcgc 600
cggcgcttca attaccacgg tgcagctgtt cgccaccgca ttcggcgcgg cgctggccgg 660
gatgatcgtc aatctggcgg ggctgaacga tccgggcggc gcgacgggcg cggcatcggc 720
ggcgcgttgg ctgttcctgg cgttcgcgct ggcgccgctg ctggcggtat tcagcgcctg 780
gcgctgcgcg gcgatcgcgc cgccgggggc cgaaacggga aattttgtac aaaccccgcc 840
ctcgcgcgag agctagaacg cttctcctca cctggtgatg ttcgcggtga tccaggcgtt 900
attcctgcgc gacattttaa aatccgcttg ctatatctct aatttgagat tatttctctt 960
atatgggatt tttaagcgga gtatgaacga tggataacgg tttggagact gccgacctga 1020
ggttcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaa 1064
<210> 17
<211> 1064
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 17
atgcgaagaa tgcgatgccg ctcgccagtc gattggctga gttttccggc tgtcggccgg 60
cgactgcctg cgctaccgcc tgttcggcgc ctcccgtttc catgtccccg gcgatgagcc 120
ggcccattac accctcgtta tctgcaggcc atagccatga ttgaattgca acagtgggac 180
gccgacgcgg cgcaaagcgc cattgccgac ttggccgaga tgctgcacgc cagcgtggcg 240
cacggcgcca gcatcggttt tgtcatgccc tttacgcagg aacaggcgca ggcattttgg 300
caggggttgc tgccggccat cgcgcgggga gagcgtgcga tgctggtggc gctcgcgaac 360
ggccggccgg tcggcaccgt gcaactgtta ctggcgatgc cggacaacgg ccgccaccgc 420
gcggaagtgg tcaagctgat ggtgcacccg caggcgcggc ggcagggcgt cgcccggttg 480
ttgatgcaag aagtgcaggc gctggcggcg cgtcattgcc gcagcctgtt ggtgctggat 540
actctgagcg gcagcgcggc gcaggggctg taccgtcaat tggggttcga ggcggcgggc 600
gacatcccgc aatacgcccg cgccagcgac ggcggggcgt tggaggccac ctgctatatg 660
tacaaactgc tgtgaggctt agcgcccgcg ccaggccttg atcgcctgtt ggcgcacctg 720
cagcttctgt tgcggcgtca gcttgttgta gtcgcgagcc aggccgcttt cccaatcgcc 780
gtacagcggg ttgggcagca cgatgaattc ggtgccgaac ttgccctgat tctcgctgac 840
gaacgcccgg cgctgcgcat tgtcctggtg gtaagtcgcg gcgccgaagt cgttcaggtt 900
gtcgcctgcg tacaccacga tgtcatagcc ggcttgtttg atggcgtcga agcgcgcctg 960
cttattggag gtatcggtgc tgagcagcac ggttttttcc gacatgccgg tgaatccgag 1020
tttctgcatg ttggccaccg ggtacccggg gatccggctg taat 1064
<210> 18
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
taggccgaat tcgagctcgg tacccgggca ttataacgaa gacggca 47
<210> 19
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg gacggtggcg ctggatct 58
<210> 20
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
atgcgaagaa tgcgatgccg ctcgccagtc gattggctga atatccagac agtggcgggg 60
<210> 21
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
attacagccg gatccccggg taccccagtt gccccagggt aaaact 46
<210> 22
<211> 1064
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 22
taggccgaat tcgagctcgg tacccgggca ttataacgaa gacggcaagc gcgactatca 60
gcgccaactg tacgccggtt tcaaggacga tcgttacggc accctgacct atggccatca 120
atacggcatc tattattcgg tggtcggcat taaaagcgac gtctgggata acgatggcca 180
tgcgggcggc accggcatcg gcatttccgg cgactatgac ggtggcaata aaccgaaaaa 240
cagcatcaaa tacaccaatg atttcgggcc ggtcacgctg tacgccaact atttattgcc 300
ggaagacgat ctgcacaccg cggataacct gatttaccgc cgcaagggcg gtggcgggct 360
gggcttcgat tataaggtga cgaaggattt caccttcagc gcggcctaca gttataccga 420
cgcgaagatc aaagacaatc tgtaccacga acaggattat caccagcagc tgtccggcac 480
cgcgttaacc tggcagccga acaactggta catcgtcggc accgccagct attacaaaga 540
ttatgtgccg agcacccgcc agcgcacgct gtcgcacttc ttcgccggtg acggctacgg 600
gctggaaggc ttcgtcggtt atacctttaa tatcgacaag ccgttcctca aatccgtcca 660
gccttatgtg gcggcggact cgctgcggct gaagggagac gaggcgtatc acgccaacca 720
cgtctatctt ggcgcgggca ccaccatcgg ttacggtctg tcggtgtatg tggagcgcac 780
gctggccaac agcagcgaca atgagccgga ttccacctgg ataacggtgt tctacgattt 840
ctgattttca cctgctccaa gccggcgctt gcgccggctt tttcacatgg tgatcgcgcc 900
gcccagggtt tctccagagg cgttgcgctc cgccaggtag cgcgccggcg gtttgcccac 960
cgcctttctg aacatggtga cgaagccgct ggcgctctcg tagcccagat ccagcgccac 1020
cgtccgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaa 1064
<210> 23
<211> 1064
<212> DNA
<213> 粘质沙雷氏菌
<400> 23
atgcgaagaa tgcgatgccg ctcgccagtc gattggctga atatccagac agtggcgggg 60
gatctgtact ttcatgagaa tagttctcaa tttggcggaa ttgaaaagta ttatgtcctg 120
attgcgcaat gcggtctagc accggtgccg ataaagtaag cgccagtcct aaaccctttc 180
gcgaggaaac tgattatgtc attggatacc gccgattttc cgctggtgtg gatgcgccga 240
aacgggcgcg atacccaggc cgagctggcc gaattcagcg cgctgctggc gcgcgccgaa 300
ccttttgttc tgatcaccga ccgcagcgtc ggcgatgaag aagaagaaca tgaccgcgat 360
gctcgcaccc aggtggcgct gtggaaacgc gataaccgcg aggcgctgaa gcggtgggtg 420
aaaggcatga tcatgctgga gccggacgac gccaaacgcg cggcggcgga agaattcgcc 480
gaatacggcg ccaaattctg gggctatccg gtgctggtgg ccgccaatga agccgcaggc 540
cgggtattgg cgcagacgtt attgatcaaa taaggggaac accatgcacc agcaacaggt 600
gattgaacag ctgctggcct ggatcgagca gagcctggat cagccgctga cgctggacga 660
catcgccgcc aagtccggct actccaaatg gcatttgcag cggatgttca agcagcatac 720
cggccatatt ctcggcacct acgcgcgccg cagaaggctg accgccgccg cgcgtgaact 780
gcgcctgacc ggcaccagcg tggcctgcat cgccgatact taccagttcg attcgcagca 840
gaccttcacc cgttgcttcc gcaagcagtt cggtctgccg ccggccagct atcgtcgcag 900
ccaggattgg tcgagctatg gcctgcagcc gccgctgcgc ctgaccgaag cgccattgcc 960
gcaggccgat atcgtgacgc tgcccgccat gcagttggtg ggccataccc agcgccgcag 1020
ttttaccctg gggcaactgg ggtacccggg gatccggctg taat 1064
Claims (10)
1.一株粘质沙雷氏菌工程菌,其特征在于,所述粘质沙雷氏菌工程菌以粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)为宿主敲除编码转录调控因子BVG90_08615的基因。
2.如权利要求1所述的一株粘质沙雷氏菌工程菌,其特征在于,所述转录调控因子BVG90_08615的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.如权利要求1或2所述的一株粘质沙雷氏菌工程菌,其特征在于,所述编码转录调控因子BVG90_08615的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.如权利要求1-3任一所述的一株粘质沙雷氏菌工程菌,其特征在于,所述粘质沙雷氏菌为粘质沙雷氏菌JNB5-1。
5.一种生产灵菌红素的方法,其特征在于,所述方法为将权利要求1-4任一所述的粘质沙雷氏菌工程菌接种至发酵培养基中进行发酵,获得含有灵菌红素的发酵液;将含有灵菌红素的发酵液进行分离,获得灵菌红素。
6.如权利要求5所述的一种生产灵菌红素的方法,其特征在于,所述发酵的温度为28~30℃、转速为150~200rpm。
7.如权利要求5或6所述的一种生产灵菌红素的方法,其特征在于,所述发酵的温度为30℃、转速为180rpm。
8.如权利要求5-7任一所述的一种生产灵菌红素的方法,其特征在于,所述发酵培养基为LB液体培养基。
9.如权利要求8所述的一种生产灵菌红素的方法,其特征在于,所述发酵培养基为LB液体培养基;所述LB液体培养基的成分包含10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母提取物、10g/L氯化钠。
10.权利要求1-4任一所述的粘质沙雷氏菌工程菌或权利要求5-9任一所述的方法在生产灵菌红素中的应用。
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CN111548977A (zh) * | 2020-05-09 | 2020-08-18 | 江南大学 | 一株粘质沙雷氏菌工程菌及其在生产灵菌红素中的应用 |
Citations (2)
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CN104059913A (zh) * | 2014-06-05 | 2014-09-24 | 江南大学 | 一种源于灵菌红素高产菌株粘质沙雷氏菌的温度调控型启动子 |
CN106676119A (zh) * | 2015-11-05 | 2017-05-17 | 中国科学院微生物研究所 | 细菌无痕遗传操作载体及其构建方法与应用 |
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