CN111607542A - 一种微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于家禽养殖技术领域，具体涉及一种微生态制剂及其制备方法和应用。本发明提供了一种微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢杆菌BDY11；所述枯草芽孢杆菌BKC23的保藏编号为CCTCC NO:M2019907；所述地衣芽孢杆菌BDY11的保藏编号为CCTCC NO:M2019908。本发明提供的微生态制剂不仅能够提高鸡的生产性能和鸡蛋的品质，还能够对蛋鸡粪便微生物的平衡有积极的影响，能减少病原菌的数量以及增加粪便有益菌的数量。

Description

一种微生态制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于家禽养殖技术领域，具体涉及一种微生态制剂及其制备方法 和应用。
背景技术
鸡蛋是人们日常生活中重要的营养来源，饲料中添加抗生素能够促进禽 畜的生长，不仅能预防畜禽疾病，而且能改善畜禽的新陈代谢，促进畜禽生 长,提高成活率和饲料转化率。然而长期或大量乱用抗生素，会造成机体内菌 群失调，微生态平衡遭到破坏，使敏感的细菌生长繁殖受到抑制，而不敏感 的细菌大量繁殖，从而引起畜禽内源性感染，同时，抗生素还会消灭体内第 三菌，在体内一些微生物附着点上造成大量空位，为外界耐药细菌乘虚而入 提供机会，从而造成外源感染。长期使用抗生素造成畜禽机体免疫力下降抗 生素在轻松控制胃肠道内的微生物数量的同时，也对胃肠道内的有益微生物 造成了极大的破坏，大大降低了动物机体的免疫能力。在养殖业中，大量长 期使用抗生素在畜禽产品中造成残留，对人体构成危害。人们吃进含有药物 残留的动物性食品时，各种抗生素必然在人体内蓄积，然后导致各种危害， 主要是药物的不良反应、过敏反应、变态反应、细菌耐药、菌群失调，更为 严重的是可以产生致畸、致癌、致基因突变的不良作用。抗生素在畜禽养殖中的广泛应用引发了系列养殖和环境污染问题，继而导致对食品的安全产生 了巨大威胁。
因此，发展绿色健康养殖、保障食品安全，蛋鸡无抗养殖势在必行。因 此，一种可替代抗生素，实现鸡无抗养殖的微生态制剂符合当代需求，但现 有技术中的微生态制剂，例如CN201510856151.1添加中药成分和微生物制 剂的提高产蛋量的鸡饲料，其主要针对鸡的生产性能，并不能提高鸡蛋的品 质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生态制剂及其制备方法和应用，本发明提 供的菌株制备的微生态菌株不仅能够提高鸡的生产性能和鸡蛋的品质，还能 够对蛋鸡粪便微生物的平衡有积极的影响，能减少病原菌的数量以及增加粪 便有益菌的数量。
为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案；
本发明提供了一种微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢 杆菌BDY11；
所述枯草芽孢杆菌BKC23的保藏编号为CCTCCNO:M2019907；
所述地衣芽孢杆菌BDY11的保藏编号为CCTCCNO:M2019908。
优选的，所述地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23的活菌数比 为1～2:4～8。
优选的，所述的微生态制剂中芽孢杆菌的活菌数≥2×109CFU/g。
优选的，所述微生态制剂还包括吸附稀释剂。
本发明提供了上述技术方案所述微生态制剂的制备方法，包括以下步 骤：
将所述地衣芽孢杆菌BDY11接种于LB液体培养基，液态培养得到地 衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液，将所述地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液离 心，得到地衣芽孢杆菌BDY11菌体；
将所述枯草芽孢杆菌BKC23菌株接种于LB液体培养基，液态培养得 到枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液，将所述枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵 液离心，得到枯草芽孢杆菌BKC23菌体；
将所述地衣芽孢杆菌BDY11菌体与枯草芽孢杆菌BKC23菌体混合，得 到混合菌体；将混合菌体与吸附稀释剂混合、干燥，得到微生态制剂。
优选的，所述混合菌体与吸附稀释剂的质量比为0.8～1:1～1.2；
所述吸附稀释剂包括海藻酸钠和轻质碳酸钙；
所述海藻酸钠和轻质碳酸钙的质量比为6～7:3～4。
本发明还提供了上述技术方案所述的微生态制剂或上述技术方案所述 制备方法制得的微生态制剂在提高鸡生产性能和/或鸡蛋品质中的应用。
优选的，包括：将所述微生态制剂与全价饲料混合后饲喂鸡；
所述微生态制剂与全价饲料的质量比为0.3～1.2:1000。
优选的，当鸡处于健康状态时，所述微生态制剂与全价饲料的质量比为0.3～0.6:1000。
优选的，当鸡处于应激期或疾病治疗恢复期时，所述微生态制剂与全价 饲料的质量比为(0.6～1.2]:1000。
本发明提供了一种微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢 杆菌BDY11；所述枯草芽孢杆菌BKC23的保藏编号为CCTCC NO:M2019907；所述地衣芽孢杆菌BDY11的保藏编号为CCTCC NO:M2019908。所述枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢杆菌BDY11均具有较 强耐胃酸、耐胆盐特性，可适用于机体肠道环境；具有较强产蛋白酶、淀粉 酶等消化酶的能力，促进营养物质的消化吸收、提高饲料利用率；对大肠杆 菌、沙门氏菌等病原菌具有抑制能力，可减少肠道中有害菌群、调节肠道微 生态平衡。且地衣芽孢杆菌BDY11与枯草芽孢杆菌BKC23之间不存在相互 抑制作用。本发明提供的芽孢杆菌制备的微生态制剂不仅能够提高鸡的生产 性能和鸡蛋的品质，还能够对蛋鸡粪便微生物的平衡有积极的影响，能减少病原菌的数量以及增加粪便有益菌的数量。
附图说明
图1为试验组与对照组粪便中微生物含量比较的试验结果；
图2为试验组粪便中微生物含量变化；
图3为试验组与对照组蛋品质比较；
图4为试验组0～90d蛋品质的变化；
图5为微生态制剂对蛋鸡生产性能的影响结果；
图6为微生态制剂对蛋鸡粪便中微生物含量的影响；
图7为试验组蛋鸡0～90d粪便中微生物含量变化；
图8为试验组与对照组蛋品质比较；
图9为试验组0～90d蛋品质的变化。
生物保藏说明
枯草芽孢杆菌BKC23，拉丁文为Bacillussubtilis，保藏于中国典型培养 物保藏中心，具体地址为中国.武汉.武汉大学，保藏时间为2019年11月23 日，保藏编号为CCTCCNO:M2019907。
地衣芽孢杆菌BDY11，拉丁文为Bacillus licheniformis，保藏于中国典 型培养物保藏中心，具体地址为中国.武汉.武汉大学，保藏时间为2019年11 月23日，保藏编号为CCTCC NO:M2019908。
具体实施方式
本发明提供了一种微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢 杆菌BDY11；所述枯草芽孢杆菌BKC23的保藏编号为CCTCC NO:M2019907；所述地衣芽孢杆菌BDY11的保藏编号为CCTCC NO:M2019908。枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢杆菌BDY11产生消化酶等 有益物质，促进营养物质的消化吸收、提高饲料利用率的基础上，地衣芽孢 杆菌BDY11进一步抑制沙门氏菌等病原菌的生长，促进肠道微生态平衡， 提高鸡的生产性能和鸡蛋的品质。
在本发明中，所述地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23的活菌 数比优选为1～2:4～8，更优选为1:4。所述微生态制剂中芽孢杆菌的活菌数优 选≥2×109CFU/g，更优选≥3×109CFU/g，在该活菌数的范围下，能够保证最 大限度地发挥微生态制剂的益生作用。本发明对微生态制剂的制备方法没有 特殊限定，采用常规的菌剂制备方法即可。
本发明提供了上述技术方案所述微生态制剂的制备方法，包括以下步 骤：将所述地衣芽孢杆菌BDY11接种于LB液体培养基，液态培养得到地 衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液，将所述地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液离 心，得到地衣芽孢杆菌BDY11菌体；将所述枯草芽孢杆菌BKC23菌株接种 于LB液体培养基，液态培养得到枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液，将所 述枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液离心，得到枯草芽孢杆菌BKC23菌体； 将所述地衣芽孢杆菌BDY11菌体与枯草芽孢杆菌BKC23菌体混合，得到混 合菌体；将混合菌体与吸附稀释剂混合、干燥，得到微生态制剂。在本发明 中，所述混合菌体与吸附稀释剂的质量比优选为0.8～1:1～1.2，更优选为1:1； 所述吸附稀释剂优选包括海藻酸钠和轻质碳酸钙；所述海藻酸钠和轻质碳酸 钙的质量比优选为6～7:3～4，更优选为3:2。所述将地衣芽孢杆菌BDY11接 种于LB液体培养基前优选还包括将地衣芽孢杆菌BDY11接种于LB平板活 化培养得到地衣芽孢杆菌BDY11单菌落；所述活化培养的条件优选为：温 度为37±1℃，时间为12～16h。所述将枯草芽孢杆菌BKC23接种于LB液体 培养基前优选还包括将枯草芽孢杆菌BKC23接种于LB平板活化培养得到 枯草芽孢杆菌BKC23单菌落；所述活化培养的条件优选为：温度为37±1℃， 时间为12～16h。所述液态发酵液的条件优选为：温度为37℃，转速为200r/min，培养时间为24～36h。所述地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液的浓 度优选为5×109CFU/ml，所述地衣芽孢杆菌BDY11菌剂的浓度优选为5×109 CFU/g；所述枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液的浓度优选为2×1010CFU/ml， 所述枯草芽孢杆菌BKC23菌剂的浓度优选为2×1010CFU/g；所述地衣芽孢 杆菌BDY11菌剂与枯草芽孢杆菌BKC23菌剂混合的质量比优选为1:1。
本发明还提供了上述技术方案所述的微生态制剂在提高鸡生产性能和/ 或鸡蛋品质中的应用。在本发明中，所述的微生态制剂在提高鸡的生产性能 和鸡蛋的品质中的应用优选包括：将所述微生态制剂与全价饲料混合后饲喂 鸡。在本发明中，饲喂的次数和时间没有特殊的限定，在鸡生长的任意阶段 均可使用；所述微生态制剂与全价饲料的质量比优选为0.3～1.2:1000，更优 选为0.4～1.1:1000，在该质量比下，能够最大限度地发挥微生态制剂的益生 作用，并降低成本。
在本发明中，当鸡处于健康状态时，所述微生态制剂与全价饲料的质量 比优选为0.3～0.6:1000。当鸡处于应激期或疾病治疗恢复期时，所述微生态 制剂与全价饲料的质量比优选为(0.6～1.2]:1000。
下面结合实施例对本发明提供的一株芽孢杆菌、微生态制剂及其应用进 行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
测试例
地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23之间的体外抑制试验
将地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23菌株在LB平板上活化， 分别挑取单菌落接种于LB液体培养基中，37℃，200r/min摇床培养24h。 各取1mL培养液6000r/min离心5min收集菌体，用灭菌生理盐水洗涤菌体 两次，最后菌体复溶于灭菌的生理盐水中，调整菌的浓度至108CFU/mL，制 成菌悬液。
分别取地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23菌悬液100μL，涂 布于LB固体培养基上，室温静置1h。用直径6mm的无菌圆形滤纸片蘸取 枯草芽孢杆菌BKC23菌悬液，按四角排列的方式贴于涂有地衣芽孢杆菌 BDY11的LB固体培养基上；用直径6mm的无菌圆形滤纸片蘸取地衣芽孢 杆菌BDY11菌悬液，按四角排列的方式贴于涂有枯草芽孢杆菌BKC23的LB固体培养基上；37℃培养24h后观察抑菌圈产生情况。
结果显示：地衣芽孢杆菌BDY11菌悬液对枯草芽孢杆菌BKC23无抑制 作用，枯草芽孢杆菌BKC23菌悬液对地衣芽孢杆菌BDY11也无抑制作用。 即地衣芽孢杆菌BDY11与枯草芽孢杆菌BKC23之间不存在相互抑制作用。
实施例1
复合微生态制剂：地衣芽孢杆菌BDY11含量为5×109CFU/g、枯草芽孢 杆菌BKC23含量为2×1010CFU/g。
将地衣芽孢杆菌BDY11接种于LB平板于温度为37℃活化培养12小时 得到地衣芽孢杆菌BDY11单菌落；将所述地衣芽孢杆菌BDY11单菌落接种 于LB液体培养基，于37℃温度、转速为200r/min的条件下，液态培养24h， 得到浓度为5×109CFU/ml的地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液，将所述地衣 芽孢杆菌BDY11液态发酵液离心，得到地衣芽孢杆菌BDY11菌体；
将枯草芽孢杆菌BKC23接种于LB平板于温度为37℃活化培养12小时 得到枯草芽孢杆菌BKC23单菌落；将所述枯草芽孢杆菌BKC23单菌落接种 于LB液体培养基，于37℃温度、转速为200r/min的条件下，液态培养24h， 得到浓度为2×1010CFU/ml的枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液，将所述枯草 芽孢杆菌BKC23液态发酵液离心，得到枯草芽孢杆菌BKC23菌体；
将所述地衣芽孢杆菌BDY11菌体与枯草芽孢杆菌BKC23菌体等比例混 合，混合菌体再与吸附稀释剂按1:1比例混合、干燥，得到含有5×109CFU/g 地衣芽孢杆菌BDY11、2×1010CFU/g枯草芽孢杆菌BKC23的微生态制剂。 其中混合菌体中地衣芽孢杆菌BDY11与枯草芽孢杆菌BKC23的质量比为 1:1，吸附稀释剂中海藻酸钠与轻质碳酸钙的质量比为6:4。
应用例1
1、试验设计
选取日龄相近的两栋小体型绿壳土蛋鸡各11000只，一栋为对照组 (11006只)，饲喂全价饲料，一栋为试验组(10992只)，在全价饲料中添 加1g/kg实施例1制备的复合微生态制剂。
2、饲养管理
试验在武汉市新洲区某养殖场进行，采用蛋鸡“124”标准化养殖模式， 即1栋全封闭式鸡舍，层叠式笼养蛋鸡2万只以上，生产过程采用自动喂料机、 自动集蛋鸡、传送带清粪机、湿帘风机4机配套进行生产蛋鸡的高效健康养 殖模式。试验期三个月。
3、指标检测
a生产性能测定
试验期间，每三天记录饲料消耗量、蛋鸡病死时间与数量、产蛋量等， 计算每月死亡率、产蛋率等指标。
b鸡舍空气中有害气体含量的检测
测定鸡舍空气中NH3、H2S的含量，每月测定一次。每栋鸡舍各取5个 点，按照四角及对角线交点的方式分布采样点，并避开通风口。分别采用 Honeywell霍尼韦尔硫化氢检测仪、BW氨气检测仪测定NH3(检测限1-250 ppm)和H2S(检测限1-100ppm)含量。
c粪便微生物检测
测定蛋鸡粪便微生物含量，每月测定一次。试验当天，无菌采集新鲜粪 便保存于冰盒中，每种样品3个重复，分别检测菌落总数、乳酸菌、芽孢杆 菌、大肠杆菌和“沙门+志贺”氏菌的数量。在超净台内稀释粪样，选择2～3 个适宜稀释度分别接种于营养琼脂、乳酸菌培养基(MRS)琼脂、伊红美蓝 琼脂平板、SS琼脂培养基(所用培养基均购自青岛海博生物技术有限公司)， 分别测定菌落总数、乳酸菌、大肠菌群和“沙门+志贺”氏菌的数量；选择2～3 个适宜稀释度，80℃水浴15min后，接种于营养琼脂平板，测定芽孢杆菌的 数量。采用平板菌落计数法进行统计，结果用1g粪便中细菌数量的对数值 [lg(CFU/g)]表示。
d蛋品质测定
试验当天，采集新鲜鸡蛋60枚，于12h内进行蛋品质测定，每月测定 一次。采用电子天平测定蛋重(精确到0.1g)，并用数显卡尺、数显千分尺 (景有模具五金有限公司，中国)分别测定蛋的纵长、横宽及蛋壳厚度；采 用盐水漂浮法测定蛋比重，蛋壳强度测定仪(ROBOTMATION股份有限公 司，日本)测定蛋壳强度，蛋品质测定仪(ROBOTMATION股份有限公司， 日本)测定蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色，并最终用电子天平测量蛋黄重； 实验过程中记录肉斑、血斑及鸡蛋破损情况。
4、数据处理
试验数据用SPSS18.0进行统计分析，结果用“平均值±标准差”表示。
5、结果与分析
A蛋鸡生产性能测定
微生态制剂对蛋鸡生产性能的影响见表1。总体来看，在夏季高温季节， 试验组与对照组的产蛋率均有下降的趋势，对照组产蛋率从72.22％极显著 降低为60.61％(P<0.01)，降低了11.61％，试验组产蛋率从72.12％降为 71.63％，差异不显著(P>0.05)；试验组与对照组的死亡率差异不显著 (P>0.05)。同一时期，试验组产蛋率(60d、90d)极显著高于对照组(P<0.01)； 试验组死亡率(30d、60d)有高于对照组的趋势，但差异不显著(P>0.05)。
表1蛋鸡的产蛋率与死亡率
Figure BDA0002534637160000081
注：数据后面的标注表示同一列的比较，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，不 同小写字母表示差异显著(P<0.05)；数据前面的标注表示同一行的比较，**表示差异极显著(P<0.01)，*表示差异显著(P<0.05)。
B鸡舍中有害气体含量测定
在蛋鸡“124”标准化养殖模式下，鸡舍空气中NH3浓度未达到最小检测 值，均小于1ppm，H2S除第一次检测值为4ppm，其他均小于1ppm，平均NH3、H2S浓度均低于行业标准。
C蛋鸡粪便微生物检测
(1)试验组与对照组粪便中微生物含量比较
试验组与对照组粪便中微生物含量比较的试验结果如图1所示，可以看 出，在0d时，试验组与对照组鸡舍粪便中的细菌总数、大肠菌群、芽孢杆 菌、乳酸菌及“沙门+志贺”氏菌的数量无显著性差异(P>0.05)(见图1中 的A)；在30d时，与对照组相比，试验组细菌总数显著降低(P<0.05)， 芽孢杆菌、乳酸菌数极显著增加(P<0.01)(见图1中的B)；在60d时，与对照组相比，试验组细菌总数、“沙门+志贺”氏菌数显著(P<0.05)或极 显著(P<0.01)降低，芽孢杆菌、乳酸菌数显著(P<0.05)或极显著(P<0.01) 增加(见图1中的C)；在90d时，与对照组相比，试验组细菌总数、大肠 菌群、“沙门+志贺”氏菌数极显著(P<0.01)降低，芽孢杆菌数极显著(P<0.01) 增加(见图1中的D)。即在蛋鸡日粮中添加1g/kg本发明提供的一种复合 微生态制剂，蛋鸡粪便中的有害微生物显著减少、有益微生物显著增加，复 合微生态制剂改善了蛋鸡的肠道健康。注：图中“**”表示差异极显著 (P<0.01)，“*”表示差异显著(P<0.05)。
(2)试验组粪便中微生物含量变化
试验组粪便中微生物含量变化结果如图2所示，可以看出，从0-90d总 体上看，试验组鸡舍粪便中大肠菌群和“沙门+志贺”氏菌的数量呈下降趋 势，芽孢杆菌和乳酸菌的数量呈上升趋势。在试验期间，鸡舍粪便的细菌总 数无显著性差异(P>0.05)，90d时粪便中大肠杆菌数和“沙门+志贺”氏菌 数均极显著(P<0.01)低于30d，粪便的芽孢杆菌数和乳酸菌数显著(P<0.05) 或极显著(P<0.01)高于30d。
D微生态制剂对蛋品质的影响
(1)试验组与对照组蛋品质比较
试验结果如图3所示，可以看出，在0d时，试验组与对照组的蛋重、 蛋形指数、蛋比重、蛋黄比率、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、 哈氏单位均无显著性差异(P>0.05)(见图3中的A)；在30d时，试验组 的蛋黄颜色和哈氏单位显著高于对照组(P<0.05)(见图3中的B)；在60d 时，试验组的哈氏单位显著高于对照组(P<0.05)(见图3中的C)；在90d 时，试验组的蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位显著高于对照组(P<0.05)(见 图3中的D)。即在蛋鸡日粮中添加1g/kg本发明提供的一种复合微生态制 剂，可显著提高鸡蛋的蛋品质。注：图中“**”表示差异极显著(P<0.01)，“*” 表示差异显著(P<0.05)。
(2)试验组蛋品质的变化
试验组0-90d蛋品质的变化结果如图4所示，可以看出，从0-90d总体 上看，试验组的蛋重、蛋白高度极显著增加(P<0.01)，蛋黄比率显著增加 (P<0.05)，蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色和哈氏单位有增加的趋势，但 差异不显著(P>0.05)。
综上所述，在饲料中添加本发明的微生态制剂，可以极显著降低蛋鸡粪 便中有害菌大肠杆菌和“沙门+志贺”氏菌的数量(P<0.01)，极显著增加粪 便中有益菌乳酸菌和芽孢杆菌的数量(P<0.01)。在蛋鸡日粮中添加本发明 微生态制剂能显著提高鸡蛋蛋重、蛋黄比例、蛋白高度和哈氏单位，对蛋形 指数、蛋黄颜色和蛋壳厚度无显著影响。
应用例2
1、试验设计
选取日龄相近的两栋海兰褐蛋鸡，一栋为对照组(10416只)，一栋为 试验组(10224只)。对照组饲喂全价饲料，试验组在全价饲料中添加1g/kg 实施例1制备的复合微生态制剂。
2、饲养管理
试验在武汉市新洲区某养殖场进行，采用蛋鸡“124”标准化养殖模式， 即1栋全封闭式鸡舍，层叠式笼养蛋鸡2万只以上，生产过程采用自动喂料机、 自动集蛋鸡、传送带清粪机、湿帘风机4机配套进行生产蛋鸡的高效健康养 殖模式。试验期三个月。
3、指标检测
a生产性能测定
试验期间，每三天记录饲料消耗量、蛋鸡病死时间与数量、产蛋量等， 计算每月死亡率、产蛋率等指标。
b鸡舍空气中有害气体含量的检测
测定鸡舍空气中NH3、H2S的含量，每月测定一次。每栋鸡舍各取5个 点，按照四角及对角线交点的方式分布采样点，并避开通风口。分别采用 Honeywell霍尼韦尔硫化氢检测仪、BW氨气检测仪测定NH3(检测限1-250 ppm)和H2S(检测限1-100ppm)含量。
c粪便微生物检测
测定蛋鸡粪便微生物含量，每月测定一次。试验当天，无菌采集新鲜粪 便保存于冰盒中，每种样品3个重复，分别检测菌落总数、乳酸菌、芽孢杆 菌、大肠杆菌和“沙门+志贺”氏菌的数量。在超净台内稀释粪样，选择2～3 个适宜稀释度分别接种于营养琼脂、乳酸菌培养基(MRS)琼脂、伊红美蓝 琼脂平板、SS琼脂培养基(所用培养基均购自青岛海博生物技术有限公司)， 分别测定菌落总数、乳酸菌、大肠菌群和“沙门+志贺”氏菌的数量；选择2～3 个适宜稀释度，80℃水浴15min后，接种于营养琼脂平板，测定芽孢杆菌的 数量。采用平板菌落计数法进行统计，结果用1g粪便中细菌数量的对数值 [lg(CFU/g)]表示。
d蛋品质测定
试验当天，采集新鲜鸡蛋60枚，于12h内进行蛋品质测定，每月测定 一次。采用电子天平测定蛋重(精确到0.1g)，并用数显卡尺、数显千分尺 (景有模具五金有限公司，中国)分别测定蛋的纵长、横宽及蛋壳厚度；采 用盐水漂浮法测定蛋比重，蛋壳强度测定仪(ROBOTMATION股份有限公 司，日本)测定蛋壳强度，蛋品质测定仪(ROBOTMATION股份有限公司， 日本)测定蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色，并最终用电子天平测量蛋黄重； 实验过程中记录肉斑、血斑及鸡蛋破损情况。
4、数据处理
试验数据用SPSS18.0进行统计分析，结果用“平均值±标准差”表示。
5、结果与分析
A蛋鸡生产性能测定
微生态制剂对蛋鸡生产性能的影响结果见图5，注：**表示差异极显著 (P<0.01)，*表示差异显著(P<0.05)。总体来看，试验组与对照组的产蛋 率呈上升的趋势。试验期间，试验组产蛋率均高于对照组，其中30d时差异 不显著(P>0.05)、60d时差异显著(P<0.05)、90d时差异极显著(P<0.01)； 试验组与对照组的死亡率差异不显著(P>0.05)。
B鸡舍中有害气体含量测定
在蛋鸡“124”标准化养殖模式下，鸡舍空气中NH3、H2S浓度未达到最小 检测值，均小于1ppm，低于行业标准。
C蛋鸡粪便微生物检测
(1)微生态制剂对蛋鸡粪便中微生物含量的影响如图6所示，注：** 表示差异极显著(P<0.01)，*表示差异显著(P<0.05)。由试验结果可看出， 在0d时，试验组与对照组鸡舍粪便中的细菌总数、大肠菌群、芽孢杆菌、 乳酸菌及“沙门+志贺”氏菌的数量无显著性差异(P>0.05)(见图6中的 A)；在30d时，与对照组相比，试验组“沙门+志贺”氏菌数显著降低 (P<0.05)，芽孢杆菌数显著增加(P<0.05)(见图6中的B)；在60d时， 与对照组相比，试验组细菌总数、大肠菌群数显著降低(P<0.05)，芽孢杆 菌数显著增加(P<0.05)(见图6中的C)；在90d时，与对照组相比，试 验组细菌总数、大肠菌群、“沙门+志贺”氏菌数显著降低(P<0.01)(见 图6中的D)。即在蛋鸡日粮中添加本发明提供的一种复合微生态制剂，蛋 鸡粪便中的有害微生物显著减少，复合微生态制剂改善了蛋鸡的肠道健康。。
(2)试验组蛋鸡0～90d粪便中微生物含量变化如图7所示，由试验结 果可看出，从0～90d总体上看，试验组鸡舍粪便中的细菌总数、大肠菌群和 “沙门+志贺”氏菌的数量呈下降趋势，芽孢杆菌数呈上升趋势。在试验期 间，鸡舍粪便的细菌总数、大肠菌群和乳酸菌数均无显著性差异(P>0.05)； 90d时粪便中“沙门+志贺”氏菌数极显著低于0-60d(P<0.01)，芽孢杆菌 数显著高于0-30d(P<0.05)。
D微生态制剂对蛋品质的影响
(1)试验组与对照组蛋品质比较如图8所示，注：图中“**”表示差 异极显著(P<0.01)，“*”表示差异显著(P<0.05)。由试验结果可看出， 在0d、30d时，试验组与对照组的蛋重、蛋形指数、蛋比重、蛋黄比率、蛋 壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位均无显著性差异(P>0.05) (见图8中的A和B)；在60d时，试验组的蛋黄比率显著高于对照组(P<0.05) (见图8中的C)；在90d时，试验组的蛋黄颜色显著高于对照组(P<0.05) (见图8D)；在30d-90d，试验组的蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位均有高 于对照组的趋势，但差异不显著(P>0.05)。即在蛋鸡日粮中添加1g/kg本 发明提供的一种复合微生态制剂，可显著提高鸡蛋的蛋黄比率、蛋黄颜色， 具有增加蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位的潜力。
(2)试验组蛋品质的变化如图9所示，由试验结果可看出，从0-90d 总体上看，试验组的蛋重、蛋白高度与哈氏单位有增加的趋势，但差异不显 著(P>0.05)；60d的蛋黄比率极显著高于其他时期(P<0.01)，90d的蛋壳 强度显著高于0d(P<0.05)，90d的蛋黄颜色极显著高于其他时期(P<0.01)。
综上所述，在饲料中添加本发明微生态制剂，对蛋鸡粪便微生物的平衡 有积极的影响，能减少病原菌的数量以及增加粪便有益菌的数量在蛋鸡日粮 中添加本发明复合微生态制剂有增加蛋重的趋势，能提高蛋形指数、蛋比重、 蛋黄颜色、蛋黄比例、蛋白高度和蛋壳厚度，对蛋壳强度和哈氏单位有改善 的趋势。
本发明提供了一种微生态制剂及其制备方法和应用，本发明提供的微生 态制剂不仅能够提高鸡的生产性能和鸡蛋的品质，还能够对蛋鸡粪便微生物 的平衡有积极的影响，能减少病原菌的数量以及增加粪便有益菌的数量。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分 实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下 获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种微生态制剂，其特征在于，包括枯草芽孢杆菌BKC23和地衣芽孢杆菌BDY11；
所述枯草芽孢杆菌BKC23的保藏编号为CCTCC NO:M2019907；
所述地衣芽孢杆菌BDY11的保藏编号为CCTCC NO:M2019908。
2.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌BDY11和枯草芽孢杆菌BKC23的活菌数比为1～2:4～8。
3.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于，所述的微生态制剂中芽孢杆菌的活菌数≥2×109CFU/g。
4.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂还包括吸附稀释剂。
5.权利要求1～4任意一项所述微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将所述地衣芽孢杆菌BDY11接种于LB液体培养基，液态培养得到地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液，将所述地衣芽孢杆菌BDY11液态发酵液离心，得到地衣芽孢杆菌BDY11菌体；
将所述枯草芽孢杆菌BKC23菌株接种于LB液体培养基，液态培养得到枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液，将所述枯草芽孢杆菌BKC23液态发酵液离心，得到枯草芽孢杆菌BKC23菌体；
将所述地衣芽孢杆菌BDY11菌体与枯草芽孢杆菌BKC23菌体混合，得到混合菌体；将混合菌体与吸附稀释剂混合、干燥，得到微生态制剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述混合菌体与吸附稀释剂的质量比为0.8～1:1～1.2；
所述吸附稀释剂包括海藻酸钠和轻质碳酸钙；
所述海藻酸钠和轻质碳酸钙的质量比为6～7:3～4。
7.权利要求1～4任意一项所述的微生态制剂或权利要求5～6任意一项所述制备方法制得的微生态制剂在提高鸡生产性能和/或鸡蛋品质中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括：将所述微生态制剂与全价饲料混合后饲喂鸡；
所述微生态制剂与全价饲料的质量比为0.3～1.2:1000。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，当鸡处于健康状态时，所述微生态制剂与全价饲料的质量比为0.3～0.6:1000。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，当鸡处于应激期或疾病治疗恢复期时，所述微生态制剂与全价饲料的质量比为(0.6～1.2]:1000。
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