CN111471797B - 用于检测猫冠状病毒的rt-rpa引物对、探针、试剂盒及检测方法 - Google Patents

用于检测猫冠状病毒的rt-rpa引物对、探针、试剂盒及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供用于检测猫冠状病毒的RT‑RPA引物对、探针、试剂盒及检测方法，属于分子生物学检测技术领域。本发明针对猫冠状病毒Fcov MP基因序列，设计特异引物对、探针，经过反复试验建立了实时荧光RPA检测方法。本发明方法扩增特异性强，且敏感度高，可以在一次检测试验中将两种均可导致FIP的FCoV－Ⅰ型和FCoV－Ⅱ型两个血清型的病毒都检测出来，因此更高效。为Fcov快速诊断及防控提供了技术参考。

Description

用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对、探针、试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对、探针、试剂盒及检测方法，属于分子生物学检测技术领域。
背景技术
猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)为不分节段、单股正链RNA病毒，属于尼多病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、α冠状病毒属(Alphacoronavirus)。FCoV有猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus，FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis viruses，FIPV)两个生物型。虽然大部分感染FCoV的猫患轻微肠炎或无症状，但仍有12％的猫会发展成为猫传染性腹膜炎(FIP)，而FIP致死率高。基于病毒中和抗体反应和S基因氨基酸序列不同，FCoV分FCoV－Ⅰ型和FCoV－Ⅱ型两个血清型，两个血清型均可导致FIP。
现有检测FCoV的实验方法主要是PCR法，包括普通PCR和荧光定量PCR，还有间接免疫荧光法和ELISA方法。PCR技术由于检测灵敏度高，适用范围广，操作简便等原因应用广泛，但FCoV的PCR检测技术程序复杂、需要精密的仪器、检测时间较长，不利于非实验室环境下现场检测以及基层实验室的推广应用。
重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification RPA)是近年来发展起来的一种快速诊断不同病原的方法，已广泛用于病毒、细菌、寄生虫诊断中。RPA利用重组酶蛋白与引物形成复合物，该复合物促进引物与双链RNA的同源靶序列的结合，聚合酶进行后续的合成，整个过程仅需在37-42℃下反应20-30分钟即可。与普通PCR方法与荧光定量PCR方法相比，整个过程不需要高温变性和低温退火步骤，操作简单，不需要昂贵的仪器。
目前，国内外尚无采用实时荧光RPA检测Fcov的报道。因此，建立实时荧光RPA检测Fcov的方法十分必要。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对、探针、试剂盒及检测方法。本发明针对Fcov MP基因序列，设计特异引物对、探针，经过反复试验建立了实时荧光RPA检测方法。本发明方法快速准确，且可以同时检测冠状病毒的两个血清型，为Fcov快速诊断及防控提供了技术参考。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对，所述RT-RPA引物对上、下游引物序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示：
F:5′-GAAATCTATATGCTGAAGGTTTCAAAATGG-3′(SEQ ID No.1)；
R:5′-TAGTTGCTTTTAATTGTTTCCCAACTAATG-3′(SEQ ID No.2)。
本发明还提供一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA荧光探针，其序列如SEQ IDNo.13所示：
5′-TCTTACCATCGAGCATTTACCTAAATATGTFNATQGATTGCTACACCT-3′(SEQ ID No.13)。
其中TF表示连接有荧光基团的T，TQ表示连接有淬灭基团的T，TF和TQ之间的碱基N用四氢呋喃残基THF替换，3′末端标记阻抑聚合酶延伸或扩增的修饰基团。
所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE或VIC中的任一种；所述荧光淬灭基团为BHQ，即BHQ1、BHQ2或BHQ3中的任一种。
优选地，修饰后的探针序列为：TCTTACCATCGAGCATTTACCTAAATATG(FAM-dT)(THF)A(BHQ-dT)GATTGCTACACCT(C3spacer)。
在RPA体系中引入一个带有荧光标记的探针，一方面可以提高RPA检测的特异性，另一方面还能实现对RPA扩增进行实时监控。
本发明还提供一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA试剂盒，包含上述的RT-RPA引物对和RT-RPA荧光探针。
所述的RT-RPA试剂盒，还包括其他逆转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)所需试剂：酶、dNTP、Buffer、MgOA等；
所述的RT-RPA试剂盒，还包括阴性对照和阳性对照；所述阴性对照为无RNase的水空白对照品；所述阳性对照为猫冠状病毒样品，浓度是1μg/mL。
所述的RPA试剂盒中的试剂可以采用市售商品试剂，如杭州纵测生物科技有限公司的荧光型RT-RPA试剂盒等市售试剂盒。
本发明还提供一种用于检测猫冠状病毒的实时荧光RT-RPA方法，步骤如下：
(1)提取待测样本RNA作为模板；
(2)用本发明的引物对及荧光探针对步骤(1)所得模板及对照样品进行RT-RPA扩增；
(3)根据荧光信号即可快速实现病毒检测。
优选地，所述步骤(2)用本发明所述的RT-RPA引物对及RT-RPA荧光探针对步骤(1)所得模板及对照样品进行RT-RPA扩增；具体地，采用50uL反应体系进行RT-RPA反应：正向RT-RPA引物(10um)2ul，反向RT-RPA引物(10um)2ul，RNA模版2ul，探针(10um)0.6ul，Buffer补足至50uL。RT-RPA反应在39℃下在实时恒温荧光检测器中扩增20-30分钟。
所述样本取自猫胸、腹腔积液、脑脊液、房水、肾肉芽肿、猫鼻、咽拭子、粪便、直肠拭子等。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明首次采用实时荧光RPA检测Fcov。本发明提供的检测方法，扩增特异性强，且敏感度高。本发明检测方法的灵敏度可以达到102拷贝。
2、本发明的引物对和探针是针对猫冠状病毒(FcoV)MP基因序列设计筛选获得的，一次可以同时检测两个血清型。即，可以在一次检测试验中将两种均可导致FIP的FCoV-Ⅰ型和FCoV-Ⅱ型两个血清型的病毒都检测出来，因此更高效。
3、本发明RT-RPA实时荧光检测方法简单，对温度和机器要求低，用时短，适合实验室或现场快速检测。本发明为FcoV快速检测诊断及防控提供了技术参考。
附图说明
图1为实施例1用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对筛选结果。
图2为实施例2本发明建立的检测猫冠状病毒的RT-RPA方法的检测结果。
图3为本发明检测猫冠状病毒的RT-RPA方法特异性试验结果。
图4为本发明检测猫冠状病毒的RT-RPA方法灵敏度试验结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，但本发明不限于此。本发明中所涉及的方法，如无特殊说明均为本领域常用方法，所涉及的试剂，如无特殊说明均可以从商业途径获得。
实施例1.用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对、探针的设计及筛选
1.病毒的提取
按TIANGEN公司RNA提取试剂盒说明书对猫的腹水样本进行RNA提取，-80℃保存备用。
2.RT-RPA引物和探针的设计
根据TwistDX设计指南的建议，从NCBI下载Fcov序列(登录号:KY566209.1)并使用RNAstar基于高度保守的MP基因序列设计RT-RPA特异性引物和探针。设计引物的长度范围为30至35个碱基，探针长度范围为48至52个碱基。RPA探针应该有四个基团，包括荧光基团，猝灭基团，四氢呋喃(THF)和3端封闭(C3spacer)。所有引物和探针均在设计完成后由上海生工生物工程有限公司合成。
根据引物筛选原则，共筛选并合成出36对引物对，利用普通RT-RPA试剂盒扩增FCov，最终发现有6对引物可以恒温扩增出目的条带，见图1。6组可恒温扩增的引物对序列如下表1所示：
表1.可扩增出目的条带的引物对
Figure BDA0002454055620000041
6对引物分别检测其灵敏度和特异性，发现6对引物的灵敏度都能达到102个拷贝，但是31号引物对的特异性更好，目的条带大小合适，所以综合对比灵敏度、特异性等因素最后选择了31号引物对。根据探针设计原则，设计合成探针，探针序列：TCTTACCATCGAGCATTTACCTAAATATG(FAM-dT)(THF)A(BHQ-dT)GATTGCTACACCT(C3spacer)(SEQ ID No.13)；
实施例2.用于检测猫冠状病毒的RT-RPA方法的建立
使用杭州纵测生物科技有限公司的荧光型RT-RPA试剂盒以50uL反应体系进行RPA反应。最佳反应体系和条件为：正向引物(10um)2ul，反向引物(10um)2ul，RNA模版2ul，ABuffer40.9ul，B Buffer 2.5ul，探针(10um)0.6ul。RT-RPA反应在39℃下在实时恒温荧光检测器(广州双螺旋基因技术有限公司)中扩增30分钟。分别选择一个阳性对照和阴性对照(均经过qPCR鉴定)，进行荧光型RT-RPA鉴定，鉴定结果与qPCR一致(见图2)。
实施例3、本发明检测猫冠状病毒的RT-RPA方法特异性试验与灵敏度试验
3.1方法
特异性试验：通过检测含有Fcov阳性核酸以及来自其他病原体的核酸来确定构建的实时RPA方法的特异性。其他病原体的核酸包括犬冠状病毒(CCV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病(CDV)、犬腺病毒(CAV)、猫疱疹病毒(FHV)、猫细小病(FPV)、猫杯状病毒(FCV)。灵敏度试验：使用质粒稀释的标准品，用ddH2O以10倍的比例稀释至7个浓度，稀释后的模板拷贝数分别为1*106copies/μL至1copies/μL。
3.2结果
通过检测含有Fcov阳性核酸以及来自其他病原体的核酸来确定构建的实时RPA方法的特异性。其他病原体的核酸包括犬冠状病毒(CCV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病(CDV)、犬腺病毒(CAV)、猫疱疹病毒(FHV)、猫细小病(FPV)、猫杯状病毒(FCV)。从图3显示，除了FCov扩增之外，其他病原核酸没有扩增，证明该方法特异性良好，与其他病原没有交叉反应。
Fcov阳性阳性标准品10倍比例稀释用做模板进行RPA检测，模板浓度从106copies/μL～1copies/μL，共7个梯度，检测方法的灵敏度。从图4可以看出，最低检测值为1*102copies/μL。
实施例4、本发明检测猫冠状病毒的RT-RPA方法用于临床样品的检测实验
用所构建的RT-RPA检测方法对12个本实验室保存临床样本进行测试，样品采样来源包括猫腹水和猫粪便。
为了评估构建的Fcov实时RT-RPA方法的实用性，检测12例疑似Fcov感染的临床样本，同时使用本领域常规qPCR法进行对比。结果显示12例疑似Fcov感染的临床样本中RT-RPA的阳性检出5例，与qPCR的结果一致，两种方法的结果符合率为100％，如表2所示：
表2.
检测方法 阳性样品 阴性样品 检出率
本发明RT-RPA 5 7 41.67％
普通qPCR 5 7 41.67％
实施例5、一种检测猫冠状病毒的RT-RPA试剂盒
该试剂盒包括：
(1)序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对和序列如SEQ ID No.13所示的探针；
(2)RT-RPA扩增试剂；
(3)阳性对照和阴性对照。
所述RT-RPA扩增试剂包括：酶、dNTP、Reaction Buffer、MgOA等；例如杭州纵测生物科技有限公司的荧光型RT-RPA试剂盒中的试剂。
所述阴性对照品为无RNase的水空白对照；所述阳性对照品为猫冠状病毒样品，浓度是1μg/mL。
SEQUENCE LISTING
<110>  广东省实验动物监测所
广州千寻生物技术有限公司
<120>  用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对、探针、试剂盒及检测方法
<130>
<160>  13
<170>  PatentIn version 3.3
<210>  1
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  1
gaaatctata tgctgaaggt ttcaaaatgg                                   30
<210>  2
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  2
tagttgcttt taattgtttc ccaactaatg                                   30
<210>  3
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  3
gttactactc agtcatctgc ttaatcttac                                   30
<210>  4
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  4
agtaatctag tttctgctaa aactttgtgt                                   30
<210>  5
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  5
tcagctggtc tgtaatattg attgttttta                                   30
<210>  6
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  6
cgaacattac atatctggaa acttgatact                                   30
<210>  7
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  7
gagattttgt tcccaaagga ataggtaata                                   30
<210>  8
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  8
atcaatcttg tctttaaatt tagcatcagc                                   30
<210>  9
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  9
ctattgttct agcgcttacg atttttaatg                                   30
<210>  10
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  10
agctgaatag atctcacaaa atacatcatc                                   30
<210>  11
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  11
gaactcagat ataccatgac agagattttc                                   30
<210>  12
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<400>  12
gttaaaaact tttagcttct cactaaagca                                   30
<210>  13
<211>  46
<212>  DNA
<213>  人工序列（Artificial sequence）
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (31)..(31)
<223>  n is a, c, g, or t
<400>  13
tcttaccatc gagcatttac ctaaatatgt natgattgct acacct                 46

Claims (4)

1.一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对和荧光探针组合，其特征是，所述RT-RPA引物对上游引物序列如SEQ ID No.1所示，所述RT-RPA引物对下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述荧光探针序列如SEQ ID No.13所示：
5＇- TCTTACCATCGAGCATTTACCTAAATATGTFNATQGATTGCTACACCT-3＇；其中TF表示连接有荧光基团的T，TQ表示连接有淬灭基团的T，TF和TQ之间的碱基N用四氢呋喃残基THF替换，3＇末端标记阻抑聚合酶延伸或扩增的修饰基团。
2.如权利要求1所述的用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对和荧光探针组合，其特征是，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE或VIC中的任一种；所述淬灭基团为BHQ。
3.如权利要求1所述的用于检测猫冠状病毒的RT-RPA引物对和荧光探针组合，其特征是，所述探针序列为：TCTTACCATCGAGCATTTACCTAAATATG（FAM-dT）(THF)A(BHQ-dT)GATTGCTACACCT-C3spacer。
4.一种用于检测猫冠状病毒的RT-RPA试剂盒，其特征是，包含权利要求1所述的RT-RPA引物对和荧光探针。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111979304A (zh) * 2020-09-08 2020-11-24 韩山师范学院 一种基于实时荧光rt-raa检测新冠病毒的方法
CN112899406A (zh) * 2021-03-23 2021-06-04 上海基灵生物科技有限公司 一种检测猫消化道传染病原体的核酸组合物、试剂盒及检测方法
CN114540494A (zh) * 2022-02-16 2022-05-27 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 一种用于肝癌circRNA标志物检测的试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108559789A (zh) * 2017-12-29 2018-09-21 苏州点晶生物科技有限公司 猫冠状病毒荧光ema检测引物组、试剂盒和检测方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2965137A1 (en) * 2014-10-20 2016-04-28 Envirologix, Inc. Compositions and methods for detecting an rna virus
CN108070677B (zh) * 2017-12-07 2019-12-03 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种用于口蹄疫病毒的可视化快速检测的检测试剂盒及其检测方法
CN108676917B (zh) * 2018-06-05 2022-04-12 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 一种鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法
CN108676920B (zh) * 2018-07-07 2021-07-20 广东省实验动物监测所 一种快速检测小鼠诺如病毒引物、试剂盒及其rt-rpa方法
CN109652597A (zh) * 2019-01-26 2019-04-19 沈阳农业大学 一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的通用的rpa引物、rpa探针、试剂盒及核酸检测方法
CN110699485B (zh) * 2019-08-16 2023-03-28 广州千寻生物技术有限公司 一种快速检测马立克氏病病毒的rpa引物对、探针、试剂盒及检测方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108559789A (zh) * 2017-12-29 2018-09-21 苏州点晶生物科技有限公司 猫冠状病毒荧光ema检测引物组、试剂盒和检测方法

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