CN111454375A - 一种银耳多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品领域，公开了一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：对银耳子实体进行干燥，粉碎过筛，加水提取，减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液；对一次银耳渣分别进行多次加水提取、减压精滤，得多次银耳渣和多次银耳提取液；将一次银耳提取液、……多次银耳提取液进行合并，并与膨润土混合均匀，煮沸，减压精滤，调节pH至8～9，减压精滤，再调节pH至6～7，再次减压精滤，脱色，浓缩，醇沉，真空干燥，得银耳多糖；本发明所得的银耳多糖的含量为90.5％以上、白度为87以上，收率为14.2‑15.6％、平均分子量为436‑496kDa、分子量分布比较均一，提取方法简单，生产成本低，易于企业规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域，具体涉及一种银耳多糖的提取方法。
背景技术
银耳(Tremella fuciformis Berk)是一种大型高等真菌，属于有隔担子菌亚纲银耳科，是世界公认的珍贵食用菌和重要药材。国内外学者对银耳的主要生物学活性成分——银耳多糖(Tremella fuciformis Polysaccharide)的研究较多，并发现银耳多糖具有多种生物学活性，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化衰老、降血糖血脂、抗凝血血栓、抗溃疡、促进蛋白质合成、抗病毒、促进神经细胞生长及改善记忆力等。银耳多糖以其丰富的原料来源、独特的生物学功能和良好的食用安全性，近年来在天然功能性食品添加剂、医药保健品、日用化妆品等领域越来越来受到重视，具有广泛的开发应用前景。
银耳多糖作为银耳的主要活性成分，是以α-(1→3)-D-甘露糖为主链的杂多糖。按存在部位银耳多糖可分为子实体多糖、孢子多糖、发酵液多糖和细胞壁多糖；按多糖性质可分为酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖。
银耳多糖的提取方法有热水浸提法、碱提取法、酸提取法、酶提取法等。郑良对这几种提取方法进行比较，发现热水浸提法多糖得率最高，并且在工业化生产中热水浸提具有操作简便和成本低等优点应用较多。而银耳所含的化学成分比较复杂，主要可分为三大类，分别为脂类、蛋白类(包括酶、蛋白质、氨基酸)和多糖类，此外还有无机盐、维生素B族等，因此得到的粗多糖中含有大量的蛋白质和其他杂质。为提高多糖纯度，常见的采用sevag法(氯仿和正丁醇沉淀法)除去多糖中的蛋白质。但该方法有溶剂残留，或者存在设备要求高、能耗高、成本高等问题。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于一种银耳多糖的提取方法，所得的银耳多糖的含量为90.5％以上、白度为87以上，收率为14.2-15.6％、平均分子量为436-496kDa、分子量分布比较均一，提取方法简单，生产成本低，易于企业规模化生产。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。
一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，对银耳子实体进行干燥，粉碎过筛，得干银耳粉；
步骤2，向干银耳粉中加水，提取，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液；
步骤3，对所述一次银耳渣依次进行加水提取、减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液；
步骤4，对所述二次银耳渣重复进行步骤3，依次类推，得多次银耳渣和多次银耳提取液；
步骤5，将一次银耳提取液、二次银耳提取液、……多次银耳提取液进行合并，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土混合均匀，煮沸，减压精滤，得一次精滤液；
步骤6，调节一次精滤液的pH至8～9，保温，减压精滤，得二次精滤液；调节二次精滤液的pH至6～7，保温，再次减压精滤，得三次精滤液；
步骤7，对三次精滤液进行脱色，得脱色液；对所述脱色液进行浓缩，得浓缩液，向所述浓缩液中加无水乙醇进行醇沉，得醇沉液；对所述醇沉液进行真空干燥、粉碎过筛，得银耳多糖。
优选的，步骤1中，所述干燥的温度为50～80℃，干燥为干燥至银耳子实体水分含量≤10％。
优选的，步骤1中，所述粉碎过筛为过60～80目筛网。
优选的，步骤2中，所述干银耳粉与水的质量比为1:(30～50)。
优选的，步骤2中，所述提取的温度为80～95℃，提取的时间为1.5～3h。
优选的，步骤3中，所述一次银耳渣与水的质量比为1:(10～30)。
优选的，步骤3中，所述提取的温度为80～95℃，提取的时间为0.5～2h。
优选的，步骤4中，所述多次为3-5次。
优选的，步骤5中，所述银耳提取混合液与膨润土的质量比为(500～1000)：1。
优选的，步骤5中，所述煮沸的温度为100℃，煮沸的时间为0.5～1.5h。
优选的，步骤6中，调节一次精滤液的pH采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节；调节二次精滤液的pH采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节。
优选的，步骤6中，所述保温的温度为60～80℃，保温的时间为30～60min。
优选的，步骤7中，所述脱色为采用活性炭对三次精滤液进行脱色。
优选的，步骤7中，所述浓缩的温度为50～80℃，所述浓缩为浓缩至脱色液的体积是浓缩液体积的10～30倍。
优选的，步骤7中，所述无水乙醇的体积是所述浓缩液体积的2～5倍。
优选的，步骤7中，所述醇沉的时间为22～26h。
优选的，步骤7中，所述真空干燥的压强为-0.1MPa，真空干燥的温度为40～70℃，真空干燥的时间为1～4h。
优选的，步骤7中，所述粉碎过筛为过60～80目筛网。
优选的，步骤3、步骤5、步骤6中，所述减压精滤的压强为-0.1MPa，减压精滤的过滤网为800目。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1)采用本发明的银耳多糖的提取方法所得的银耳多糖的含量为90.5％以上、白度为87以上，收率为14.2-15.6％、平均分子量为436-496kDa、分子量分布比较均一；银耳多糖的提取方法简单，生产成本低，易于工业化生产。
2)采用膨润土进行煮沸吸附蛋白、以及pH等电点调节相结合的方式除去银耳提取混合液中的蛋白，除去的蛋白质主要集中分布在分子量20-130kDa，pH5-7之间的范围，避免了现有Sevag法去除蛋白质的复杂操作和有机溶剂污染的弊端，提高了多糖的纯度，且成本较低，便于银耳多糖的工业化生产。
3)采用活性炭进行吸附脱色，降低了银耳多糖在制备过程中水解的风险，成功的保留了大分子量的银耳多糖，且银耳多糖的分子量分布比较均一。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域的技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。
实施例1
一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，将银耳子实体于60℃条件下，干燥至水分含量为9.6％，粉碎过筛，得60目的干银耳粉。
步骤2，取50g干银耳粉按1:50的料液比加水，于92℃条件下提取3h，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液。
步骤3，将银耳渣按1:15的料液比加水，于92℃条件下提取1.5h，得二次混合液；对二次混合液进行减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液。
步骤4，重复步骤3，对二次银耳渣进行提取、减压精滤，得三次银耳渣和三次银耳提取液。
步骤5，合并一次银耳提取液、二次银耳提取液、三次银耳提取液，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土以500:1的比例混合均匀，煮沸0.5h，并减压精滤，得一次精滤液。
步骤6，采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节一次精滤液的pH至9，于80℃保温30min，减压精滤，得二次精滤液；采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节二次精滤液的pH至6，于80℃保温30min，再次减压精滤，得三次精滤液。
步骤7，采用活性炭对三次精滤液进行脱色，得脱色液；将脱色液于50℃条件下浓缩20倍，再加入5倍浓缩液体积的无水乙醇，醇沉24h，得醇沉液；对醇沉液进行减压精滤，得多糖沉淀；将多糖沉淀于压强为-0.1MPa、温度为70℃真空干燥3h，然后粉碎过80目筛，即得7.7g银耳多糖成品。
所得银耳多糖成品测定多糖含量为91.5％、白度为87，银耳多糖平均分子量为473kDa，Mw/Mn多分散性指数为1.304(如表1所示)；其中Mw、Mn分别为重均、数均分子量。
表1实施例1所得的银耳多糖的分子量和分子量分布情况
实施例2
一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，将银耳子实体于60℃条件下，干燥至水分含量为8.7％，粉碎过筛，得60目的干银耳粉。
步骤2，取50g干银耳粉按1:40的料液比加水，于90℃条件下提取3h，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液。
步骤3，将银耳渣按1:20的料液比加水，于90℃条件下提取1h，得二次混合液；对二次混合液进行减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液。
步骤4，重复步骤3，对二次银耳渣进行提取、减压精滤，得三次银耳渣和三次银耳提取液。
步骤5，合并一次银耳提取液、二次银耳提取液、三次银耳提取液，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土以700:1的比例混合均匀，煮沸0.5h，并减压精滤，得一次精滤液。
步骤6，采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节一次精滤液的pH至9，于60℃保温30min，减压精滤，得二次精滤液；采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节二次精滤液的pH至7，于60℃保温30min，再次减压精滤，得三次精滤液。
步骤7，采用活性炭对三次精滤液进行脱色，得脱色液；将脱色液于60℃条件下浓缩20倍，再加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，醇沉24h，得醇沉液；对醇沉液进行减压精滤，得多糖沉淀；将多糖沉淀于压强为-0.1MPa、温度为60℃真空干燥4h，然后粉碎过80目筛，即得7.8g银耳多糖成品。
所得银耳多糖成品测定多糖含量为90.5％、白度为90，银耳多糖平均分子量为436kDa，Mw/Mn多分散性指数为1.337(如表2所示)。
表2实施例2所得的银耳多糖的分子量和分子量分布情况
实施例3
一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，将银耳子实体于60℃条件下，干燥至水分含量为9.9％，粉碎过筛，得60目的干银耳粉。
步骤2，取50g干银耳粉按1:30的料液比加水，于90℃条件下提取2h，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液。
步骤3，将银耳渣按1:20的料液比加水，于80℃条件下提取2h，得二次混合液；对二次混合液进行减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液。
步骤4，重复步骤3，对二次银耳渣进行提取、减压精滤，得三次银耳渣和三次银耳提取液。
步骤5，合并一次银耳提取液、二次银耳提取液、三次银耳提取液，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土以500:1的比例混合均匀，煮沸1h，并减压精滤，得一次精滤液。
步骤6，采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节一次精滤液的pH至8，于60℃保温60min，减压精滤，得二次精滤液；采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节二次精滤液的pH至6，于60℃保温60min，再次减压精滤，得三次精滤液。
步骤7，采用活性炭对三次精滤液进行脱色，得脱色液；将脱色液于80℃条件下浓缩30倍，再加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，醇沉22h，得醇沉液；对醇沉液进行减压精滤，得多糖沉淀；将多糖沉淀于压强为-0.1MPa、温度为70℃真空干燥1h，然后粉碎过70目筛，即得7.1g银耳多糖成品。
所得银耳多糖成品测定多糖含量为91.3％、白度为92，银耳多糖平均分子量为496kDa。
实施例4
一种银耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，将银耳子实体于80℃条件下，干燥至水分含量为9.6％，粉碎过筛，得80目的干银耳粉。
步骤2，取50g干银耳粉按1:30的料液比加水，于80℃条件下提取3h，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液。
步骤3，将银耳渣按1:30的料液比加水，于95℃条件下提取0.5h，得二次混合液；对二次混合液进行减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液。
步骤4，重复步骤3，对二次银耳渣进行提取、减压精滤，得三次银耳渣和三次银耳提取液。
步骤5，合并一次银耳提取液、二次银耳提取液、三次银耳提取液，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土以1000:1的比例混合均匀，煮沸1.5h，并减压精滤，得一次精滤液。
步骤6，采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节一次精滤液的pH至8.5，于70℃保温45min，减压精滤，得二次精滤液；采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节二次精滤液的pH至6.5，于70℃保温45min，再次减压精滤，得三次精滤液。
步骤7，采用活性炭对三次精滤液进行脱色，得脱色液；将脱色液于50℃条件下浓缩10倍，再加入2倍浓缩液体积的无水乙醇，醇沉26h，得醇沉液；对醇沉液进行减压精滤，得多糖沉淀；将多糖沉淀于压强为-0.1MPa、温度为40℃真空干燥3h，然后粉碎过60目筛，即得7.5g银耳多糖成品。
以上实施例中，减压精滤的条件相同，均是在压强为-0.1MPa、过滤网为800目条件下进行减压精滤。
虽然，本说明书中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种银耳多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，对银耳子实体进行干燥，粉碎过筛，得干银耳粉；
步骤2，向干银耳粉中加水，提取，得一次混合液；对一次混合液进行减压精滤，得一次银耳渣和一次银耳提取液；
步骤3，对所述一次银耳渣依次进行加水提取、减压精滤，得二次银耳渣和二次银耳提取液；
步骤4，对所述二次银耳渣重复进行步骤3，依次类推，得多次银耳渣和多次银耳提取液；
步骤5，将一次银耳提取液、二次银耳提取液、……多次银耳提取液进行合并，得银耳提取混合液；将银耳提取混合液与膨润土混合均匀，煮沸，减压精滤，得一次精滤液；
步骤6，调节一次精滤液的pH至8～9，保温，减压精滤，得二次精滤液；调节二次精滤液的pH至6～7，保温，再次减压精滤，得三次精滤液；
步骤7，对三次精滤液进行脱色，得脱色液；对所述脱色液进行浓缩，得浓缩液，向所述浓缩液中加无水乙醇进行醇沉，得醇沉液；对所述醇沉液进行真空干燥、粉碎过筛，得银耳多糖。
2.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤1中，所述干燥的温度为50～80℃，干燥为干燥至银耳子实体水分含量≤10％；所述粉碎过筛为过60～80目筛网。
3.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤2中，所述干银耳粉与水的质量比为1:(30～50)；所述提取的温度为80～95℃，提取的时间为1.5～3h。
4.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤3中，所述一次银耳渣与水的质量比为1:(10～30)；所述提取的温度为80～95℃，提取的时间为0.5～2h。
5.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤4中，所述多次为3-5次。
6.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤5中，所述银耳提取混合液与膨润土的质量比为(500～1000)：1；所述煮沸的时间为0.5～1.5h。
7.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤6中，调节一次精滤液的pH采用浓度为2～6％的氢氧化钠溶液调节；调节二次精滤液的pH采用浓度为2～6％的盐酸溶液调节；所述保温的温度为60～80℃，保温的时间为30～60min。
8.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤7中，所述脱色为采用活性炭对三次精滤液进行脱色；所述浓缩的温度为50～80℃，所述浓缩为浓缩至脱色液的体积是浓缩液体积的10～30倍。
9.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤7中，所述无水乙醇的体积是所述浓缩液体积的2～5倍，所述醇沉的时间为22～26h。
10.根据权利要求1所述的银耳多糖的提取方法，其特征在于，步骤7中，所述真空干燥的压强为-0.1MPa，真空干燥的温度为40～70℃，真空干燥的时间为1～4h；所述粉碎过筛为过60～80目筛网。
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