CN111337689A - 一种新型冠状病毒检测试剂盒 - Google Patents
一种新型冠状病毒检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111337689A CN111337689A CN202010256958.2A CN202010256958A CN111337689A CN 111337689 A CN111337689 A CN 111337689A CN 202010256958 A CN202010256958 A CN 202010256958A CN 111337689 A CN111337689 A CN 111337689A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- colloidal gold
- solution
- pad
- membrane
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 83
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title claims abstract description 29
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 35
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 17
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 11
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 238000007639 printing Methods 0.000 claims description 10
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 9
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 3
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 5
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 abstract description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710147732 Small envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical compound [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
- G01N33/587—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Abstract
本发明公开了一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括底板和固定在底板上的样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水垫，在NC膜上设置检测线和质控线，胶体金垫上包被的抗原是由胶体金标记的N蛋白和胶体金标记的S‑RBD蛋白组成的混合抗原蛋白，检测线为小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体检测线。本发明检测试剂盒以N蛋白和S‑RBD蛋白作为抗原，可以提高COVID‑19初步检测的灵敏度，适用于大规模人群的快速筛查。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶体金检测试剂盒，特别是涉及一种针对新型冠状病毒的胶体金试剂盒及其制备方法。
背景技术
2019新型冠状病毒（2019-nCoV）是目前已知继SARS、MERS之后第7种可以感染人的冠状病毒。2019-nCoV主要通过呼吸道飞沫传播和接触传播，具有潜伏期长、传染力强、无症状感染等特点。因此，开发有效的诊断试剂盒是有效防控新冠肺炎疫情的关键技术支撑。
目前2019-nCoV感染的实验室检测方法主要为病毒核酸检测，这是临床诊断疑似病例的金标准。然而，该检测方法繁琐、成本高、检测周期较长，而且需要在经过认证的实验室进行，并由专业技术人员操作和判断检测结果，不仅对场地和操作人员有特殊要求，而且检测结果很容易受到样品质量的影响。
2019-nCoV的快速筛查对临床早发现、早诊断、早隔离、早治疗至关重要，开发一种简便、快速、准确的2019-nCoV筛查方法十分必要。
血清特异性抗体是快速、高灵敏诊断病毒感染的指标。与SARS和MERS类似，新型冠状病毒也属于β-冠状病毒，这表明其在宿主体内可能具有相似的免疫反应过程。
当机体感染病毒后，IgM是初次体液免疫应答最早出现的抗体，血清中IgM升高，提示新近发生感染，可用于病毒感染的早期诊断。但IgM的浓度和亲和力较低，持续时间较短，无法判断病毒感染中晚期，特别是对无症状感染者容易漏检。IgG抗体的产生时间晚于IgM，但其浓度和亲和力较高，维持时间较长。特异性IgG抗体具有长期免疫记忆，是判断病毒感染中晚期或既往感染的重要指标。
新型冠状病毒是一种带有囊膜的正链RNA病毒，膜表面编码有刺突蛋白S、膜蛋白M、小包膜蛋白E三种结构蛋白。此外，在病毒核衣壳内还编码有一种重要的结构蛋白，即核衣壳蛋白N（N蛋白）。
目前针对新型冠状病毒的检测试剂盒也大都是选取2019-nCoV的N蛋白作为抗原，且2019-nCoV的N蛋白序列已被公开。在现有胶体金试剂盒技术的基础上，已有公司和研究机构开发并成功制作出N蛋白作为抗原的胶体金示踪试剂盒。
然而，在2019-nCoV病毒感染的初期，由于机体内产生的抗体量极少，N蛋白可能无法准确标记出机体内的抗体，可能会导致漏检。
同时，试剂盒的检测灵敏度通常也低于核酸检测，同样会造成检测结果出现漏检的现象。因此，基于胶体金示踪法的高灵敏度试剂盒还有待进一步开发。
发明内容
本发明的目的是提供一种以N蛋白和S-RBD蛋白作为金标抗原，针对IgG和IgM抗体进行联合检测的新型冠状病毒检测试剂盒，以快速筛查大规模人群，提高新型冠状病毒初步检测的准确度。
本发明所述的新型冠状病毒检测试剂盒包括底板，以及固定在所述底板上的包被有抗原的胶体金垫、设置有质控线和检测线的NC膜、吸水垫和样品垫，其中，在所述NC膜的检测线端依次固定胶体金垫和样品垫，质控线端固定吸水垫。
具体地，本发明所述胶体金垫上包被的抗原是由胶体金标记的N蛋白和胶体金标记的S-RBD蛋白混合组成的混合抗原蛋白。
进而，本发明所述NC膜上设置的检测线为小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体检测线。
为了保证抗原抗体反应的特异性和检出的准确性，本发明选择的小鼠抗人IgG抗体和小鼠抗人IgM抗体均为单克隆抗体。
更进一步地，本发明所述的检测线可以是将小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体分别设置成两条检测线，也可以是将小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体混合后设置成小鼠抗人IgM/IgG混合抗体检测线。
本发明还在所述胶体金垫上包被有胶体金标记的第一动物IgG抗体，并相应在所述质控线上包被有第二动物抗第一动物IgG抗体。
优选地，本发明是在所述胶体金垫上包被有胶体金标记的兔IgG抗体，并相应在所述质控线上包被有山羊抗兔IgG抗体。
本发明所述的新型冠状病毒检测试剂盒是采用免疫层析技术原理，以2019-nCoV的体外重组N蛋白和S-RBD蛋白作为混合抗原，应用捕获法同时检测人血清中的2019-nCoV特异性IgG抗体和IgM抗体。
将待检测的血液样本滴加在本发明新型冠状病毒检测试剂盒的样品垫上后，会自动向吸水垫方向移动。如果血液中含有2019-nCoV的特异性IgM和/或IgG抗体，就会与胶体金垫上的金标抗原结合，并被检测线的上的抗IgM和/或IgG抗体截留，从而使试剂盒上的检测线显色。同时设置的质控线保证检测结果的有效性。
进而，本发明还提供了所述新型冠状病毒检测试剂盒的具体制备方法。
1）将胶体金溶液、碳酸钾溶液及重组N蛋白抗原混匀，静置得到重组N蛋白抗原胶体金溶液，加入牛血清白蛋白溶液混匀，静置后离心，以磷酸缓冲液重悬沉淀，再次离心后，将沉淀溶于胶体金缓冲液中，制备得到胶体金标记的N蛋白溶液。
2）按照与1）相同的方法，分别制备胶体金标记的S-RBD蛋白溶液，以及胶体金标记的第一动物IgG抗体溶液。
3）将胶体金垫置于多聚酯纤维素膜预处理液中室温浸泡后，干燥，分别取胶体金标记的N蛋白溶液、S-RBD蛋白溶液和第一动物IgG抗体溶液，以胶体金缓冲液稀释，等体积混合后印膜、干燥。
4）取小鼠抗人IgG抗体和IgM抗体溶液，磷酸缓冲液稀释，于NC膜上印膜、干燥。
5）取第二动物抗第一动物IgG抗体溶液，磷酸缓冲液稀释，于NC膜上印膜、干燥。
6）在NC膜两端分别粘贴吸水垫及胶体金垫，固定于底板上，并在胶体金垫侧加上样品垫，组装得到新型冠状病毒检测试剂盒。
本发明所述试剂盒在低湿度、低温度环境下组装，成品放入铝箔袋，加入干燥剂，密封保存。
本发明上述制备方法中，所述的磷酸缓冲液pH值为7.4，浓度50mmol/L。
进而，本发明上述制备方法中使用的多聚酯纤维素膜预处理液的组成为：0.5%聚乙烯醇、50mM PBS、0.5% BSA、0.88% NaCl，pH值7.4。
本发明优选将胶体金垫在所述多聚酯纤维素膜预处理液中预处理1小时。
所述胶体金缓冲液的组成为：pH=9.0的10mmol/L Tris-HCl、0.2% BSA、5%海藻糖、2%蔗糖、0.286%柠檬酸钠。
采用本发明制备的新型冠状病毒检测试剂盒检测2019-nCoV抗体，操作快速方便，取样简单，检测速度快，检测结果特异性强、灵敏度高。
胶体金是一种常用的示踪剂，广泛应用于病毒的检测。本发明利用胶体金开发的新型冠状病毒检测试剂盒能够快速实现对人体血清、血浆或全血中2019-nCoV的IgM和IgG抗体同时体外定性检测。与核酸检测相比，取样容易、操作简便，可及时诊断，避免了场地的限制，适用于大规模人群的快速筛查，为学校开学、企业复工等需求提供高效的排查手段，从而及早预防疫情扩散。
本发明新型冠状病毒检测试剂盒的检测灵敏度高，可以有效提高检出效率，避免核酸检测的假阴性，对新冠病毒的早期诊断和排查具有重要价值，并为临床判断急性期或恢复期提供有价值的参考数据。
本发明的新型冠状病毒检测试剂盒与单独使用N蛋白的检测试剂盒相比，加入S-RBD蛋白后的检测灵敏度和准确度进一步提高，并可同时检测早期感染和中晚期感染，与核酸检测试剂盒联用，还可以进一步排除治愈患者、假阳性患者，避免漏检。
附图说明
图1是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的结构示意图。
图中，1—样品垫；2—胶体金垫；3—NC膜；4—IgM检测线；5—IgG检测线；6—质控线；7—吸水垫；8—底板。
图2是本发明新型冠状病毒检测试剂盒的检测结果判读标准。
图中，A是阳性结果，血液中存在IgM与IgG；B是阳性结果，血液中存在IgM；C是阳性结果，血液中存在IgG；D是阴性结果，血液中不存在IgM和IgG；E、F、G、H均为无效检测结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不是限制本发明的保护范围。本领域普通技术人员在不脱离本发明原理和宗旨的情况下，针对这些实施例进行的各种变化、修改、替换和变型，均应包含在本发明的保护范围之内。
以下给出了本发明实施例中使用到的各种试剂及其来源。
小鼠抗人IgG和IgM抗体：购自中国深圳菲鹏生物股份有限公司。
2019-nCoV的N蛋白：为体外重组蛋白，购自中国深圳菲鹏生物股份有限公司。
兔IgG和山羊抗兔IgG抗体，均购自Sigma公司。
NC膜：购自Millipore公司。
多聚酯纤维素膜：购自Alstrom公司。
实施例1。
1）制备胶体金溶液：在圆底烧瓶中加入500mL超纯水，再加入1%氯化金溶液10mL，搅拌下加热至刚开始沸腾时，一次性迅速加入12mL 10%柠檬酸三钠溶液，在溶液完全变成深红色后停止加热，利用余热继续反应10分钟。随后用冷水降温至室温，加入去离子水定容至500mL，4℃避光保存。
2）抗原标记：取10mL胶体金溶液，加入60μL 0.1mol/L碳酸钾溶液，迅速加入100μgN蛋白抗原，混匀后室温放置30分钟。迅速加入100μL 20%牛血清白蛋白溶液，混匀后室温放置30分钟，12000rpm离心20分钟。弃上清液，再加入50mmol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液5mL将沉淀悬浮，12000rpm离心20分钟，弃上清液，将沉淀溶于1.0mL胶体金缓冲液（10mmol/L、pH9.0 Tris-HCl，0.2% BSA，5%海藻糖，2%蔗糖，0.286%柠檬酸钠）中，4℃避光保存。
以同样方法标记S-RBD蛋白和兔IgG抗体。
3）胶体金垫制备：配制含有0.5% PVA、50mmol/L PBS、0.5% BSA、0.88% NaCl，pH7.4的多聚酯纤维素膜预处理液，将待处理的多聚酯纤维素膜置于预处理液中，室温下浸泡１小时，将膜取出，置37℃干燥后密封备用。
分别取胶体金标记的N蛋白、S-RBD蛋白和兔IgG抗体溶液等体积混合，用胶体缓冲液稀释至OD530为5。启动印膜仪，装载抗体，设定喷笔移动速度30mm/秒，液体推进速度3.0μL/cm，在多聚酯纤维素膜上进行印膜。将印制后的多聚酯纤维素膜于干燥箱内37℃干燥6小时，置于含干燥剂的密封袋内保存。
4）NC膜包被抗体：取鼠抗人IgM抗体溶液和IgG抗体溶液，分别用磷酸盐缓冲液(50mmol/L、pH7.4)稀释至1.2mg/mL。同样方法获得山羊抗兔IgG抗体溶液。
分别装载不同的抗体溶液，启动印膜仪，设定喷笔移动速度30mm/秒，液体推进速度0.5μL/cm，在贴有硝酸纤维素膜的PVC片上分别进行印膜，包被检测线和质控线。将印制好的膜于干燥箱内37℃干燥6小时，置于含干燥剂的密封袋内保存。
5）试剂盒组装：启动除湿机，使操作室内的湿度降至25%以下，同时保持温度低于28℃。
如图1所示，将NC膜3固定于底板8上， NC膜上从左向右依次包被有IgM检测线4、IgG检测线5和质控线6。在NC膜3的左端和右端分别粘贴胶体金垫2和吸水垫7，最后在胶体金垫2的左侧粘贴上样品垫1。将粘贴好的检测片于切条机上切成4.0mm宽的试纸条，放入塑料卡扣底座的凹槽中，塑料盖置于其上，压紧，组装得到新型冠状病毒检测试剂盒。包装的成品放入铝箔袋中，加入1g/袋干燥剂，密封保存。
实施例2：新型冠状病毒检测试剂盒的使用。
1）准备工作：首先将试剂盒与血液样本置于室温条件下恢复至常温状态。
2）沿包装袋切口部位撕开，取出试剂盒放于水平台面上并按样本编号。
3）向加样孔内加入血浆或血清10μL，再立即加入样本稀释液80μL。
4）10分钟后在结果观察区读取结果，并做出判断。
判断标准如图2。
阳性：C区（质控线）显示红线，T区（检测线）出现一条或两条红线（图2A、B、C）。
阴性：C区（质控线）显示红线，T区（检测线）无显色（图2D）。
无效：C区（质控线）无显色（图2E、F、G、H）。
实施例3：单一抗原试剂盒与两种抗原试剂盒对比。
按照实施例1方法，分别制备胶体金垫上只包被有N蛋白抗原的A试剂盒，以及包被抗原为N & S-RBD两种蛋白的B试剂盒。
获取山西医科大学第一医院、山西医科大学附属肺科医院40名临床确诊COVID-19患者的血清/血浆，以及30名健康人血清/血浆，分别以A、B试剂盒对其进行检测。检测结果见表1。
从表1结果可以看出，使用N & S-RBD两种蛋白的B试剂盒检测灵敏度明显高于A试剂盒，表明增加S-RBD蛋白作为抗原，可以降低错检、漏检率，提高初步筛查的准确度。
Claims (10)
1.一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括底板，以及固定在所述底板上的包被有抗原的胶体金垫、设置有质控线和检测线的NC膜、吸水垫和样品垫，其中，在所述NC膜的检测线端依次固定胶体金垫和样品垫，质控线端固定吸水垫，其特征是在所述胶体金垫上包被的抗原是由胶体金标记的N蛋白和胶体金标记的S-RBD蛋白混合组成的混合抗原蛋白，所述NC膜上设置的检测线为小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体检测线。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征是在所述胶体金垫上包被有胶体金标记的第一动物IgG抗体，相应在所述质控线上包被有第二动物抗第一动物IgG抗体。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征是将所述小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体分别设置成两条检测线。
4.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征是将所述小鼠抗人IgM抗体和小鼠抗人IgG抗体混合设置成小鼠抗人IgM/IgG混合抗体检测线。
5.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征是所述第一动物IgG抗体为兔IgG抗体，所述第二动物抗第一动物IgG抗体为山羊抗兔IgG抗体。
6.权利要求1或2所述新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，包括：
1）将胶体金溶液、碳酸钾溶液及重组N蛋白抗原混匀，静置得到重组N蛋白抗原胶体金溶液，加入牛血清白蛋白溶液混匀，静置后离心，以磷酸缓冲液重悬沉淀，再次离心后，将沉淀溶于胶体金缓冲液中，制备得到胶体金标记的N蛋白溶液；
2）按照与1）相同的方法，分别制备胶体金标记的S-RBD蛋白溶液，以及胶体金标记的第一动物IgG抗体溶液；
3）将胶体金垫置于多聚酯纤维素膜预处理液中室温浸泡后，干燥，分别取胶体金标记的N蛋白溶液、S-RBD蛋白溶液和第一动物IgG抗体溶液，以胶体金缓冲液稀释，等体积混合后印膜、干燥；
4）取小鼠抗人IgG抗体和IgM抗体溶液，磷酸缓冲液稀释，于NC膜上印膜、干燥；
5）取第二动物抗第一动物IgG抗体溶液，磷酸缓冲液稀释，于NC膜上印膜、干燥；
6）在NC膜两端分别粘贴吸水垫及胶体金垫，固定于底板上，并在胶体金垫侧加上样品垫，组装得到新型冠状病毒检测试剂盒。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述磷酸缓冲液的pH值为7.4，浓度50mmol/L。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述多聚酯纤维素膜预处理液的组成为：0.5%聚乙烯醇、50mM PBS、0.5% BSA、0.88% NaCl，pH值7.4。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是将所述胶体金垫在多聚酯纤维素膜预处理液中预处理1小时。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征是所述胶体金缓冲液的组成为：pH=9.0的10mmol/L Tris-HCl、0.2% BSA、5%海藻糖、2%蔗糖、0.286%柠檬酸钠。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010256958.2A CN111337689A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010256958.2A CN111337689A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111337689A true CN111337689A (zh) | 2020-06-26 |
Family
ID=71186662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010256958.2A Pending CN111337689A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种新型冠状病毒检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111337689A (zh) |
Cited By (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111638332A (zh) * | 2020-07-13 | 2020-09-08 | 浙江省人民医院 | 一种新型冠状病毒IgA/IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒 |
| CN111751527A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-09 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN111978395A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-11-24 | 四川大学 | 抗新型冠状病毒rbd结构域抗原的单克隆抗体 |
| CN112079907A (zh) * | 2020-09-22 | 2020-12-15 | 上海捷门生物技术有限公司 | 一种重组新型冠状病毒covid-19 s-rbd蛋白及其制备方法和应用 |
| CN112114140A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN112114139A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgM-IgA-IgG抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN112114141A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgA抗体化学发光法检测试剂盒 |
| CN112305218A (zh) * | 2020-08-18 | 2021-02-02 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫侧向层析检测方法及其应用 |
| CN112505325A (zh) * | 2021-01-22 | 2021-03-16 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种针对SARS-CoV-2野生株与突变株抗原检测试纸条、检测卡及试剂盒 |
| CN112526139A (zh) * | 2020-11-09 | 2021-03-19 | 杭州医学院 | 一种表征covid-19康复患者血浆中和抗体活性的间接elisa检测方法 |
| CN112557653A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-03-26 | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 | 一种抗原抗体混合检测新型冠状病毒的胶体金试剂盒及制备方法 |
| CN112557652A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-03-26 | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 | 一种双抗体夹心法检测新型冠状病毒的胶体金试剂盒及制备方法 |
| CN112881701A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-06-01 | 南昌大学 | 一种用于检测中药中马兜铃酸a和b的试纸条及其制备方法 |
| CN112881681A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-06-01 | 安徽医科大学 | 一种SARS-CoV-2N蛋白IgA的间接ELISA检测方法 |
| CN112904000A (zh) * | 2021-01-21 | 2021-06-04 | 英科新创(厦门)科技股份有限公司 | 一种胶体金标记溶液组合物及其应用 |
| CN112986568A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-06-18 | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） | 一种基于混合抗体的胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒 |
| CN113092778A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-09 | 上海伯杰医疗科技有限公司 | 一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN113267634A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-08-17 | 南京申基医药科技有限公司 | 一种联合检测IgG、IgM和中和抗体的试纸条及其制备方法、试剂盒 |
| CN113295868A (zh) * | 2021-04-16 | 2021-08-24 | 广东海洋大学 | 一种可快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒及其制备方法 |
| WO2021232541A1 (zh) * | 2020-05-18 | 2021-11-25 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgM/IgG胶体金检测试剂盒 |
| CN113702643A (zh) * | 2021-07-12 | 2021-11-26 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置 |
| BE1028465B1 (fr) * | 2020-07-10 | 2022-02-07 | Coris Bioconcept | Test de detection rapide serologique de l'infection covid-19 |
| CN114062673A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-18 | 济南百博生物技术股份有限公司 | 一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法 |
| CN114062669A (zh) * | 2020-08-06 | 2022-02-18 | 天津贝罗尼生物科技有限公司 | SARS-CoV-2 IgG/IgM抗体检测试剂盒 |
| WO2022037010A1 (zh) * | 2020-08-21 | 2022-02-24 | 北京现代高达生物技术有限责任公司 | 一种新型冠状病毒s蛋白和n蛋白联合检测胶体金试纸条及其制备方法和用途 |
| CN114113587A (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-01 | 华中科技大学 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫层析检测卡及应用 |
| CN114184784A (zh) * | 2020-09-14 | 2022-03-15 | 深圳普门科技股份有限公司 | 新型冠状病毒抗体检测试剂盒及新型冠状病毒抗体检测装置 |
| CN115261395A (zh) * | 2022-04-26 | 2022-11-01 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 一种新型冠状病毒n蛋白高效可溶性表达的方法 |
| CN116819070A (zh) * | 2023-07-10 | 2023-09-29 | 希莱乐检(郑州)生物科技有限公司 | 用于体液中目标物检测的试纸条、检测装置及检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103336113A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-10-02 | 苏州万木春生物技术有限公司 | 一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法 |
| CN106405074A (zh) * | 2016-08-25 | 2017-02-15 | 山西医科大学 | 基于PP65蛋白检测人巨细胞病毒IgG和IgM抗体的ELISA试剂盒 |
| CN107561281A (zh) * | 2016-07-16 | 2018-01-09 | 北京康华源科技发展有限公司 | 一种离心层析胶体金免疫检测技术及其用途 |
| CN109856405A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-06-07 | 新兴县国研科技有限公司 | 一种猪流行性腹泻病毒抗体检测试纸条 |
| CN110540578A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-12-06 | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) | 一种伪狂犬病病毒ge基因主要抗原表位区域重组蛋白制备及胶体金免疫层析试纸条 |
-
2020
- 2020-04-03 CN CN202010256958.2A patent/CN111337689A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103336113A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-10-02 | 苏州万木春生物技术有限公司 | 一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法 |
| CN107561281A (zh) * | 2016-07-16 | 2018-01-09 | 北京康华源科技发展有限公司 | 一种离心层析胶体金免疫检测技术及其用途 |
| CN106405074A (zh) * | 2016-08-25 | 2017-02-15 | 山西医科大学 | 基于PP65蛋白检测人巨细胞病毒IgG和IgM抗体的ELISA试剂盒 |
| CN109856405A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-06-07 | 新兴县国研科技有限公司 | 一种猪流行性腹泻病毒抗体检测试纸条 |
| CN110540578A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-12-06 | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) | 一种伪狂犬病病毒ge基因主要抗原表位区域重组蛋白制备及胶体金免疫层析试纸条 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ZHENGTU LI ET AL: "Development and Clinical Application of A Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis", 《J MED VIROL.》 * |
| 王越珉 等: "新型冠状病毒及其检测方法研究进展", 《中国计量大学学报》 * |
| 鲍腾飞 等: "免疫层析法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体的临床应用价值", 《武汉大学学报（医学版）》 * |
Cited By (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021232541A1 (zh) * | 2020-05-18 | 2021-11-25 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgM/IgG胶体金检测试剂盒 |
| CN111751527A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-09 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| BE1028465B1 (fr) * | 2020-07-10 | 2022-02-07 | Coris Bioconcept | Test de detection rapide serologique de l'infection covid-19 |
| CN111638332B (zh) * | 2020-07-13 | 2023-12-19 | 浙江省人民医院 | 一种新型冠状病毒IgA/IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒 |
| CN111638332A (zh) * | 2020-07-13 | 2020-09-08 | 浙江省人民医院 | 一种新型冠状病毒IgA/IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒 |
| CN111978395A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-11-24 | 四川大学 | 抗新型冠状病毒rbd结构域抗原的单克隆抗体 |
| CN111978395B (zh) * | 2020-07-20 | 2022-06-10 | 四川大学 | 抗新型冠状病毒rbd结构域抗原的单克隆抗体 |
| CN114062669A (zh) * | 2020-08-06 | 2022-02-18 | 天津贝罗尼生物科技有限公司 | SARS-CoV-2 IgG/IgM抗体检测试剂盒 |
| CN112305218A (zh) * | 2020-08-18 | 2021-02-02 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫侧向层析检测方法及其应用 |
| WO2022037010A1 (zh) * | 2020-08-21 | 2022-02-24 | 北京现代高达生物技术有限责任公司 | 一种新型冠状病毒s蛋白和n蛋白联合检测胶体金试纸条及其制备方法和用途 |
| CN114113587A (zh) * | 2020-08-26 | 2022-03-01 | 华中科技大学 | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫层析检测卡及应用 |
| CN112114139A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgM-IgA-IgG抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN112114141A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgA抗体化学发光法检测试剂盒 |
| CN112114140A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-22 | 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN114184784A (zh) * | 2020-09-14 | 2022-03-15 | 深圳普门科技股份有限公司 | 新型冠状病毒抗体检测试剂盒及新型冠状病毒抗体检测装置 |
| CN112079907A (zh) * | 2020-09-22 | 2020-12-15 | 上海捷门生物技术有限公司 | 一种重组新型冠状病毒covid-19 s-rbd蛋白及其制备方法和应用 |
| CN112526139A (zh) * | 2020-11-09 | 2021-03-19 | 杭州医学院 | 一种表征covid-19康复患者血浆中和抗体活性的间接elisa检测方法 |
| CN112557652A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-03-26 | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 | 一种双抗体夹心法检测新型冠状病毒的胶体金试剂盒及制备方法 |
| CN112557653A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-03-26 | 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 | 一种抗原抗体混合检测新型冠状病毒的胶体金试剂盒及制备方法 |
| CN112881681A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-06-01 | 安徽医科大学 | 一种SARS-CoV-2N蛋白IgA的间接ELISA检测方法 |
| CN112881701A (zh) * | 2021-01-19 | 2021-06-01 | 南昌大学 | 一种用于检测中药中马兜铃酸a和b的试纸条及其制备方法 |
| CN112904000A (zh) * | 2021-01-21 | 2021-06-04 | 英科新创(厦门)科技股份有限公司 | 一种胶体金标记溶液组合物及其应用 |
| CN112505325A (zh) * | 2021-01-22 | 2021-03-16 | 山东康华生物医疗科技股份有限公司 | 一种针对SARS-CoV-2野生株与突变株抗原检测试纸条、检测卡及试剂盒 |
| CN113092778A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-09 | 上海伯杰医疗科技有限公司 | 一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN113295868A (zh) * | 2021-04-16 | 2021-08-24 | 广东海洋大学 | 一种可快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒及其制备方法 |
| CN112986568A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-06-18 | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） | 一种基于混合抗体的胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒 |
| CN113702643A (zh) * | 2021-07-12 | 2021-11-26 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 一种联合检测新型冠状病毒中和抗体及核衣壳蛋白抗体的装置 |
| CN113267634A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-08-17 | 南京申基医药科技有限公司 | 一种联合检测IgG、IgM和中和抗体的试纸条及其制备方法、试剂盒 |
| CN114062673A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-18 | 济南百博生物技术股份有限公司 | 一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法 |
| CN115261395A (zh) * | 2022-04-26 | 2022-11-01 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 一种新型冠状病毒n蛋白高效可溶性表达的方法 |
| CN115261395B (zh) * | 2022-04-26 | 2023-10-20 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 一种新型冠状病毒n蛋白高效可溶性表达的方法 |
| CN116819070A (zh) * | 2023-07-10 | 2023-09-29 | 希莱乐检(郑州)生物科技有限公司 | 用于体液中目标物检测的试纸条、检测装置及检测方法 |
| CN116819070B (zh) * | 2023-07-10 | 2024-03-22 | 希莱乐检(郑州)生物科技有限公司 | 用于体液中目标物检测的试纸条、检测装置及检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111337689A (zh) | 一种新型冠状病毒检测试剂盒 | |
| US6048735A (en) | Sensor laminates and multi-sectioned fluid delivery devices for detecting by immunoassay target molecules in biological fluids | |
| US5120662A (en) | Multilayer solid phase immunoassay support and method of use | |
| CN109765384B (zh) | 一种犬冠状病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用 | |
| CN111413495B (zh) | 一种新型冠状病毒IgM/IgG胶体金检测试剂盒 | |
| CN111426829A (zh) | 一种检测SARS-CoV-2 IgM-IgG抗体总量的量子点微球免疫层析试纸条 | |
| CN112485436A (zh) | 检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| CN111398603A (zh) | 一种用于检测新型冠状病毒抗体的试纸条、制备方法及其应用 | |
| CN111537720A (zh) | 一种新型冠状病毒2019-nCoV IgM/IgG抗体联合检测试剂盒的制备方法 | |
| CN111781350A (zh) | 检测新型冠状病毒的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| CN105859843A (zh) | 呼吸道合胞病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的呼吸道合胞病毒抗体的快速检测试剂盒 | |
| CN111007257A (zh) | 一种猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测免疫阻断层析试剂盒及其应用 | |
| CN112326966A (zh) | 一种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN107365364A (zh) | 一种腺病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测腺病毒抗体的快速检测试剂盒 | |
| KR100500793B1 (ko) | C형간염바이러스감염증진단약 | |
| CN113321715A (zh) | 新型冠状病毒抗原及其检测用途 | |
| CN106188248A (zh) | 一种eb病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测eb病毒抗体的快速检测试剂盒 | |
| US3914400A (en) | Stable antigen-erythrocytes for measuring antibodies against toxoplasma organism | |
| CN111562392A (zh) | 一种新型冠状病毒IgG抗体荧光免疫法检测试剂盒 | |
| CN105510580B (zh) | 一种检测发热伴血小板减少综合征病毒核衣壳蛋白特异性抗体的多肽‑酶联免疫吸附试剂盒 | |
| CN111796103A (zh) | 一种检测棘球蚴病的胶体金试纸条及其制备方法 | |
| CN113514636A (zh) | 一种新冠中和抗体荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法 | |
| CN111521787A (zh) | 新布尼亚病毒IgG、IgM联合检测试剂卡及其制备方法 | |
| CN214750354U (zh) | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 | |
| CN109917124A (zh) | 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200626 |