CN111189947B - 一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，采用大赛璐键合型手性色谱柱，以正己烷、异丙醇、甲醇的混合溶液作为流动相，在一定条件下进行等度洗脱；本发明分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，该方法简便，能够同时分离检测富马酸丙酚替诺福韦的多个异构体及其他有关物质，并且色谱峰峰型良好，结果准确，可用于富马酸丙酚替诺福韦生产过程的质量控制。

Description

一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法
技术领域
本发明涉及一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，属于医药分析检测领域。
背景技术
富马酸丙酚替诺福韦，其结构式如图1所示，富马酸丙酚替诺福韦，英文名字为Tenofovir Alafenamide，为吉利德(Gilead)公司推出的一个抗艾滋病毒和乙肝病毒的替诺福韦的前药(代号GS-7340)。富马酸丙酚替诺福韦是一个含有3个手性中心化合物，如图2所示，其理论上应该有7个光学异构体(其中3对非对映异构体，1个对映异构体)，均为杂质。在医药领域中，对化学药品的杂质的控制关乎到药品的质量和使用安全，因此对化学药品的有关物质进行准确地分析检测，控制其含量是非常有意义的。
中国专利申请号01813161.1核苷酸膦酸酯类似物前药及其筛选和制备方法中公开了一种采用反相HPLC分离检测富马酸丙酚替诺福韦及其一个非对映异构体的分析方法；该分析方法采用Phenomenex Luna C18 5μm，100A°(或等效色谱柱)；保护柱是PellicularC18(或等效色谱柱)；流动相是，A相含有0.02％磷酸(85％)的水-乙腈(95:5)溶液，B相是含有0.02％磷酸(85％)的水-乙腈(50:50)溶液；
梯度洗脱程序示意图如图3所示，
操作时间：50min；
平衡延迟：在100％流动相A的条件下为10min；
流速：1.2mL/min；温度：室温；检测：UV260nm；样品溶液：20mmol/L磷酸钠缓冲溶液，pH6。
上述方法能够有效地分离检测富马酸丙酚替诺福韦及其中之一的非对映异构体，但是其未能同时有效地分离检测其他的非对映异构体，以及存在的其他有关物质。因此，为了能够同时检测富马酸丙酚替诺福韦及其异构体以及其它有关物质，亟待提出一种新的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出了一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，分离方法简便，能够同时分离检测富马酸丙酚替诺福韦的多个异构体及其他有关物质，结果准确，可用于富马酸丙酚替诺福韦生产过程的质量控制。
本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，包括：
1）色谱柱：大赛璐键合型手性色谱柱；
2）流动相：正己烷、异丙醇、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和乙腈中的一种或几种的混合溶液；为实现较好的手性分离效果，可在流动相中添加合适的添加剂如二乙胺、乙二胺等；
3）检测波长：260nm；
4）柱温：27～45℃；
5）流速：0.7mL/min～1.5mL/min；
6）异构体混合储备溶液：分别取各异构体约5mg，置于10ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度作为异构体混合储备溶液；
7）系统适用性溶液：取富马酸丙酚替诺福韦样品约30～70mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入异构体混合储备溶液1ml，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。
作为优选的实施方案，所述色谱柱为大赛璐CHIRALPAK IC柱，其粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm。
作为优选的实施方案，所述流动为正己烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，且体积比为正己烷：乙醇：二乙胺=800：200：1。
作为优选的实施方案，所述流动相正己烷、异丙醇和甲醇的混合溶液，且体积比为正己烷：异丙醇：甲醇=85：7：8。
本发明与现有技术相比较，本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，分离方法简便，能够同时分离检测富马酸丙酚替诺福韦的多个异构体及其他有关物质，结果准确，可用于富马酸丙酚替诺福韦生产过程的质量控制。
附图说明
图1是背景技术中的富马酸丙酚替诺福韦的化学结构式示意图。
图2是背景技术中的富马酸丙酚替诺福韦的异构体的化学结构式示意图。
图3是背景技术中的核苷酸膦酸酯类似物前药及其筛选和制备方法中的梯度洗脱程序示意图。
图4是本发明的实施例1的样品混合溶液的色谱图。
图5是本发明的实施例2的样品混合溶液的色谱图。
具体实施方式
实施例1：
本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，包括：
1）色谱柱：大赛璐键合型手性色谱柱；
2）流动相：正己烷、异丙醇、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和乙腈中的一种或几种的混合溶液；为实现较好的手性分离效果，可在流动相中添加合适的添加剂如二乙胺、乙二胺等；
3）检测波长：260nm；
4）柱温：27～45℃；
5）流速：0.7mL/min～1.5mL/min；
6）异构体混合储备溶液：分别取各异构体约5mg，置于10ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度作为异构体混合储备溶液；
7）系统适用性溶液：取富马酸丙酚替诺福韦样品约30～70mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入异构体混合储备溶液1ml，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。
实施例1：
本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，包括：
1）色谱柱：大赛璐CHIRALPAK IC（4.6mm×250mm，5μm）；
2）流动相：正己烷：乙醇：二乙胺=800：200：1；
3）检测波长：260nm；
4）柱温：40℃；
5）流速：1.0mL/min；
6）进样量：10µL；
7）异构体混合储备溶液：分别取各异构体约5mg，置10ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度作为异构体混合储备溶液；
8）系统适用性溶液：取富马酸丙酚替诺福韦样品约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入异构体混合储备溶液1ml，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液10ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果如图4所示；该色谱条件项下，富马酸丙酚替诺福韦与其中5个异构体能分离，与其中一个异构体分离度达不到要求，其中异构体RRR与SSR出峰位置重合，未能达到有效分离。
实施例2：
本发明的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，包括：
1）色谱柱：CHIRALPAK IC（4.6mm×250mm，5μm）；
2）流动相：正己烷：异丙醇：甲醇=85：7：8；
3）检测波长：260nm；
4）柱温：30℃；
5）流速：1.0mL/min；
6）进样量：10µL；
7）异构体混合储备溶液：分别取各异构体约5mg，置10ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为异构体混合储备溶液；
8）系统适用性溶液：取富马酸丙酚替诺福韦样品约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入异构体混合储备溶液1ml，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为系统适用性溶液。
取系统适用性溶液10ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果如图5所示；图5中30.187min的色谱峰为磷异构体RRS的色谱峰，32.458min的色谱峰为非对映异构体SRS的色谱峰，33.959min的色谱峰为非对映异构体SSR的色谱峰，34.896min的色谱峰为非对映异构体SSS的色谱峰，36.767min的色谱峰为主峰，其为富马酸丙酚替诺福韦的色谱峰，39.508min的色谱峰为对映异构体SRR的色谱峰，40.954min的色谱峰为非对映异构体RSR的色谱峰，45.129min的色谱峰为非对映异构体RRR的色谱峰；
图5表明富马酸丙酚替诺福韦及其异构体杂质能有效分离，并且能和其他有关物质(如中间体杂质、工艺杂质和富马酸药物活性成分)色谱峰有效分离。
上述实施例，仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均包括于本发明专利申请范围内。

Claims (2)

1.一种分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，其特征在于，包括：
1）色谱柱：大赛璐CHIRALPAK IC柱；
2）流动相：正己烷、乙醇和二乙胺的混合溶液，且体积比为正己烷：乙醇：二乙胺=800：200：1；或正己烷、异丙醇和甲醇的混合溶液，且体积比为正己烷：异丙醇：甲醇=85：7：8；
3）检测波长：260nm；
4）柱温：27～45℃；
5）流速：0.7mL/min～1.5mL/min；
6）样品溶液：取样品适量，精密称定，置量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释制成浓度为0.3mg/ml～0.7mg/ml的溶液；
所述富马酸丙酚替诺福韦异构体的名称和结构式如下：
非对映异构体SSS：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
，
非对映异构体RSR：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，
对映异构体SRR：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
，
磷异构体RRS：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
，
非对映异构体RRR：
Figure DEST_PATH_IMAGE005
，
非对映异构体SRS：
Figure DEST_PATH_IMAGE006
，
非对映异构体SSR：
Figure DEST_PATH_IMAGE007
。
2.权利要求1所述的分离检测富马酸丙酚替诺福韦异构体的分析方法，其特征在于，所述色谱柱的粒径为5μm，内径为4.6mm，长度为250mm。
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