CN103134862B - 一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 - Google Patents
一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103134862B CN103134862B CN201110382839.2A CN201110382839A CN103134862B CN 103134862 B CN103134862 B CN 103134862B CN 201110382839 A CN201110382839 A CN 201110382839A CN 103134862 B CN103134862 B CN 103134862B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- paracetamol
- mobile phase
- diluted
- scale
- need testing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 320
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 title claims abstract description 319
- DBAKFASWICGISY-BTJKTKAUSA-N Chlorpheniramine maleate Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C=1C=CC=NC=1C(CCN(C)C)C1=CC=C(Cl)C=C1 DBAKFASWICGISY-BTJKTKAUSA-N 0.000 title claims abstract description 265
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 190
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000008187 granular material Substances 0.000 title abstract description 3
- 206010004542 Bezoar Diseases 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 68
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 357
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 281
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 220
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methyl alcohol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 206
- PLIKAWJENQZMHA-UHFFFAOYSA-N 4-aminophenol Chemical compound NC1=CC=C(O)C=C1 PLIKAWJENQZMHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 178
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 145
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 108
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 98
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 90
- 229960003291 chlorphenamine Drugs 0.000 claims description 70
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 63
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 63
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 41
- 229940098895 maleic acid Drugs 0.000 claims description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 39
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 34
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 claims description 19
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 15
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 15
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 14
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 14
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 14
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 claims description 13
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 claims description 13
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 claims description 13
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 13
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 13
- DGABKXLVXPYZII-SIBKNCMHSA-N hyodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1[C@@H](O)C2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 DGABKXLVXPYZII-SIBKNCMHSA-N 0.000 claims description 13
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 13
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 13
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 13
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 12
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 93
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 30
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 19
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 15
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 9
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 8
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010028748 Nasal obstruction Diseases 0.000 description 1
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的质量检测方法，其特征是采用高效液相色谱法和梯度洗脱技术相结合，同时测定了处方中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量，检查了有关物质，测定了马来酸氯苯那敏的含量均匀度，对处方中各成分进行了定性鉴别。此方法专属性、精密度、准确性效果都良好。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测方法，尤其涉及一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法。
背景技术
小儿复方氨酚黄那敏颗粒每袋含对乙酰氨基酚125毫克，马来酸氯苯那敏0.5毫克，人工牛黄5毫克。辅料为：蔗糖，规格一般为6g/袋。主要用于治疗感冒引起的头痛、发热、咽喉痛、鼻塞等。
小儿复方氨酚黄那敏颗粒质量标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准：WS-10001-(HD-0214)-2002，该标准存在较多不完善之处：使用薄层色谱鉴别处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏，操作复杂，重现性不好，溶剂毒性大；鉴别人工牛黄时使用大量氯仿作为提取溶媒，污染严重。在含量测定中仅测定了对乙酰氨基酚含量，方法采用紫外吸收系数法，专属性差，没有对马来酸氯苯那敏含量进行测定。在标准中没有对有关物质进行控制，增加了杂质引起的产品安全性风险。在标准中没有对微量成分马来酸氯苯那敏进行含量均匀度检验，增加了产品不均匀导致的安全性风险。
发明内容
本发明目的在于提供一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法。
本发明包括如下检测方法的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A是pH2.0～4.0浓度为0.01～0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=100～80:0～20，流动相B为80：20～100：0的甲醇-水，检测波长：205～215nm；流速为0.8～1.2ml/min，柱温为30～45℃，进样量为10-30μl。
梯度洗脱程序：
0分钟时流动相A比例为100%～80%、流动相B比例为0～20%；5～25分钟时流动相B的比例升高至40%～60%；10～28分钟时流动相B的比例升高至100%，并维持到22～30分钟；26～38分钟时流动相B的比例降到0%，并维持到30～45分钟;
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50～200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5～20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1ml含0.5～2mg马来酸氯苯那敏的混合溶液，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚适量，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50～200μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计;
其中对乙酰氨基酚（主峰保留时间2～7min）含量应在标示含量的90%～110%，马来酸氯苯那敏（主峰保留时间15～22min）含量应在标示含量的85%～115%。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚适量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5～2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为5～20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算10袋的平均含量X，标准差S及标示量与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15.0。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇15～35ml，超声处理20～40min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以配比为10～20:5～9:3～7的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
本发明的检测方法优选条件为：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇（80:20），流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长为210nm；流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样量为20μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为1μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为10μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算每袋标示含量；计算10袋平均含量X，标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（15:7:5）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
本发明的检测方法优选条件为：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，250mm×4.6mm，流动相A是pH2.5浓度为0.025mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=90:10，流动相B为80：20的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～20～28～30～34～36～43分钟，流动相B由0～55%～55%～100%～100%～0～0，检测波长：215nm；柱温：35℃；流速：1.2ml/min；进样量：10μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.48g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：精密称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；精密称取对乙酰氨基酚20mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；精密量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液（相当于对乙酰氨基酚200μg/ml、马来酸氯苯那敏20μg/ml）。
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置25ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算每袋标示含量；计算10袋平均含量X，标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇20ml，超声处理25min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（11:8:4）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在102℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
本发明的检测方法优选条件为：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，100mm×2.1mm，流动相A是pH2.0浓度为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液，流动相B为95：5的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～5～10～22～25～26～30分钟，流动相B由0～40%～40%～100%～100%～0～0，检测波长：205nm；流速：0.9ml/min；柱温：30℃；进样量：30μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒3g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏5mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚5mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置100ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为5μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏5mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算每袋标示含量；计算10袋平均含量X，标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇30ml，超声处理35min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（19:6:6）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在104℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
本发明的检测方法优选条件为：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18,150mm×3.9mm，流动相A是95:5的pH4.0浓度0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇，流动相B是100%甲醇，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～25～28～30～35～38～45分钟，流动相B由0～60%～60%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：45℃；流速：0.8ml/min；进样量：15μl;
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.36g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为150μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒6g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为10μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚15mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为150μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计;
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约15mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为1.5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为10μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算10袋平均含量X，标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇18ml，超声处理32min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（11:8:4）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在108℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
附图说明
附图1：色谱条件初步筛选-梯度
附图2：色谱条件初步筛选-等度
附图3：色谱条件优化-梯度
附图4:色谱条件确定
附图5：马来酸线性图
附图6：对乙酰氨基酚线性图
附图7：氯苯那敏线性图
附图8：专属性试验——流动相色谱图
附图9：专属性试验——不含马来酸氯苯那敏阴性空白色谱图
附图10：专属性试验——不含对乙酰氨基酚阴性空白色谱图
附图11：含量测定混合对照液
附图12：含量测定供试品溶液（马来酸氯苯那敏）
附图13：含量测定及有关物质供试品溶液（对乙酰氨基酚）
附图14：有关物质1%自身对照液
附图15：有关物质对氨基酚对照液
附图16：含量均匀度混合对照液
附图17：含量均匀度供试品溶液
附图:18：人工牛黄的鉴别
本发明所要解决的技术问题是改变小儿复方氨酚黄那敏颗粒原国家标准中不合理、落后、甚至错误的检测方法，提供更先进、更科学的分析方法。同时测定处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量，检查有关物质，测定马来酸氯苯那敏的含量均匀度，鉴别处方中成分，提供更环保、更科学的鉴别试验方法，确保产品质量安全有效，同时体现了节能、环保的主题。
实验例1流动相的筛选
（1）流动相筛选1
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18）,150×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 20 22 30
流动相B(%): 0 50 50 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：35℃ 进样量：20μl 波长：210nm
精密称取人工牛黄、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，分别置100ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，进样，确定各峰保留时间：
对乙酰氨基酚：7.45min
咖啡因：9.87min
氯苯那敏：14.73min
人工牛黄：未见明显主峰
取上述四种溶液各2ml，混合，进样，对乙酰氨基酚、咖啡因和氯苯那敏峰分离完好，保留时间与单独进样的保留时间一致。
小结：该色谱条件能较好分离对乙酰氨基酚、咖啡因和氯苯那敏，但在氯苯那敏出峰位置有溶剂峰干扰，不适合有关物质检测，需要进一步优化色谱条件。人工牛黄因没有吸收，在该色谱条件下没有峰，详见附图1。
（2）流动相筛选2
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mm×4.6mm
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）-甲醇（60:40）
流速：1.0ml/min 柱温：35℃ 进样量：20μl 波长：215nm
精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，同置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，进样，确定各峰保留时间：
马来酸：1.72min
对乙酰氨基酚：2.30min
咖啡因：3.07min
氯苯那敏：10.98min
小结：该色谱条件能较好分离对乙酰氨基酚、咖啡因和氯苯那敏，但峰形不佳，各峰拖尾严重，通过和梯度比较，不及梯度程序，详见附图2。
（3）流动相筛选3
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mm×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 16 25
流动相B(%):0 50 50 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：35℃ 进样量：20μl 波长：215nm
精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，同置100ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，进样，确定各峰保留时间：
马来酸：2.05min
对乙酰氨基酚：4.56min
咖啡因：6.74min
氯苯那敏：11.68min
小结：处方中各成分分离较好，峰形对称，理论板数较高，但色谱图中有较多空白溶剂的干扰峰，为了达到良好分离，需要进一步调整梯度程序，结果详见附图3。
（4）流动相筛选4
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mm×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%): 0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：20μl 波长：210nm
精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，同置100ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，进样，确定各峰保留时间：
马来酸：2.02min
对乙酰氨基酚：4.17min
咖啡因：6.63min
氯苯那敏：12.20min
小结：处方中各成分分离很好，基本排除溶剂峰的干扰，因此确定色谱柱和流动相条件如上，结果详见附图4。
实验例2波长筛选
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mm×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%): 0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：20μl
波长：205nm，210nm，220nm，230nm，245nm，250nm，260nm，270nm，300nm
（多波长同时测定）。
精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，同置100ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，进样，比较各波长处检出主杂峰情况，结果详见表1。
表1波长选择性试验结果
| 检测波长（nm） | 205 | 210 | 220 | 230 | 245 | 250 | 260 | 270 | 300 |
| 马来酸峰面积 | 8415 | 9172 | 6853.4 | 2575.2 | 760.96 | 576.98 | 342.54 | 193.85 | 30.659 |
| 对乙酰氨基酚峰面积 | 21848 | 13428 | 8436.2 | 13307 | 18633 | 17567 | 11522 | 5663.6 | 764.15 |
| 咖啡因峰面积 | 21868 | 20313 | 9191.5 | 5326.7 | 2690.1 | 3375.8 | 6243 | 9438.1 | 285.73 |
| 氯苯那敏峰面积 | 11884 | 8427 | 7242.9 | 6011.8 | 1833.3 | 2266.2 | 3312.3 | 2310.6 | 15.647 |
| 杂峰总量（%） | 0.08 | 0.07 | 0.03 | 0 | 0 | 0 | 0.07 | 0.08 | 0 |
| 杂峰个数 | 2 | 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 |
小结：205nm检出峰面积响应最高，杂峰个数最多，但都是微小杂峰，相对而言，在210nm各主峰响应较大，干扰较小，因此确定为检测波长。
实验例3pH的筛选
称取磷酸二氢钾20.41g，置烧杯中，加水溶解并稀释至3000ml，平分称6份，每份
500ml，分别用磷酸或氢氧化钾调节pH至2.5、3.0、4.0、5.0、6.0和7.0，作为磷酸盐缓
冲液(0.05mol/L)。
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液-甲醇（80:20）（pH分别为2.5、3.0、4.0、5.0、6.0和7.0）,流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%): 0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：20μl 波长：210nm
精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因各约10mg，同置100ml量瓶中，共6份，分别加不同pH的流动相A溶解并稀释至刻度，各样连续进样6针，比较不同pH条件下检出主杂峰情况。详见表2。
表2pH筛选试验结果
小结：通过各种pH的流动相条件筛选，结果表明处方中各种成分受pH影响较小，但在偏酸性条件下更易检出有关物质，对系统也更稳定，因此确定流动相A的pH值为3.0。
实验例4方法的检测限、定量限和线性范围
仪器：Agilent1200（VWD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mm×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%): 0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：20μl
分别精密称取马来酸氯苯那敏对照品100.70mg，对乙酰氨基酚100.32mg,同至50ml量瓶中，加乙腈溶解后，用流动相稀释至刻度,作为混合对照储备液，并逐级稀释至不同浓度的混合对照液。进样分析，结果见表3～5。
表3马来酸检测限、定量限和线性范围试验结果
表4对乙酰氨基酚检测限、定量限和线性范围试验结果
表5氯苯那敏检测限、定量限和线性范围试验结果
小结：马来酸检测限为0.1007ng/ml；定量限为4.028ng/ml；线性范围：0.1007ng/ml～251.75ng/ml；回归方程：y=2.2713x+1.8552；相关系数：R=0.9999，标准曲线见附图5；
对乙酰氨基酚检测限为0.2006ng/ml；定量限为4.0128ng/ml；线性范围：0.2006ng/ml～250.80ng/ml；回归方程:y=2.7976x+13.951；相关系数:R=0.9999，标准曲线见附图6；
氯苯那敏检测限为40.28ng/ml；定量限为201.4ng/ml；线性范围：40.28ng/ml～250.75μg/ml；回归方程:y=1.8181x-26.492；相关系数:R=0.9997，标准曲线见附图7。
实验例5方法的精密度
仪器：Agilent1200（DAD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18），150mmx4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%):0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min柱温：40℃进样量：20μl
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒（实施例1制备）20袋，置研钵中，磨细，精密称取小儿复方氨酚黄那敏细粉约0.24g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为对乙酰氨基酚供试液（相当于对乙酰氨基酚100μg/ml）；另精密称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒约9g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为马来酸氯苯那敏供试液（相当于马来酸氯苯那敏15μg/ml），各样制备6份。
对照品溶液配制：精密称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；精密称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；精密量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液（相当于对乙酰氨基酚100μg/ml、马来酸氯苯那敏15μg/ml）。
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据处方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅以氯苯那敏计，结果见表6。
表6方法的精密度试验结果
| 序号 | 对乙酰氨基酚标示含量（%） | 氯苯那敏标示含量（%） |
| 1 | 97.18 | 94.39 |
| 2 | 98.75 | 96.67 |
| 3 | 97.56 | 97.85 |
| 4 | 98.45 | 95.97 |
| 5 | 99.46 | 96.44 |
| 6 | 97.77 | 95.38 |
| 平均值 | 98.20 | 96.12 |
| RSD(%) | 0.86 | 1.20 |
小结：两种成分含量测定的精密度良好（RSD小于2.0%，n=6）。
实验例6方法的准确性
仪器：Agilent1200（DAD）
色谱柱：日本资生堂MGⅡ（C18）,150mm×4.6mm
流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调节pH至3.0）-甲醇（80:20）
流动相B：甲醇-水（90:10）
梯度洗脱程序：
Time（min）：0 10 15 25 30 31 35
流动相B(%):0 50 50 100 100 0 0
流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：20μl
马来酸氯苯那敏对照贮备液：精密称取马来酸氯苯那敏对照品15mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得。
混合对照溶液：精密称取对乙酰氨基酚约10mg，置100ml量瓶中，再精密量取马来酸氯苯那敏贮备液1ml，同置该量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，即得。
对乙酰氨基酚加样回收溶液配制：分别精密称取处方中不含对乙酰氨基酚的辅料空白0.34g、0.48g、0.62g，及对乙酰氨基酚对照品7mg、10mg、13mg，同置100ml量瓶中，作为对乙酰氨基酚加样回收溶液（每种浓度配3份）。
马来酸氯苯那敏加样回收溶液配制：分别精密称取处方中不含马来酸氯苯那敏的辅料空白12.6g、18.0g、23.4g，分别置100ml量瓶中，各加马来酸氯苯那敏照贮备液各0.7ml、1.0ml和1.3ml，加流动相A稀释至刻度，作为马来酸氯苯那敏加样回收溶液（每种浓度配3份）。
测定法：分别取各加样回收溶液和混合对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚、咖啡因和氯苯那敏，以外标法定量，根据处方量计算各成分的含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计，结果见表7。
表7方法的准确度试验结果
小结：两种成分含量测定的准确度良好（RSD小于2.0%，n=9）。
实验例7方法的专属性
称取处方中不含马来酸氯苯那敏的空白辅料约7.5g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，标记为专属性溶液1；另称取处方中不含对乙酰氨基酚的空白辅料0.25g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，标记为专属性溶液2。色谱条件同准确度项下。
测定：分别取专属性溶液1、专属性溶液2及流动相A进样分析。
结果：辅料空白溶液不干扰样品中主成分含量测定，辅料溶液中除去空白溶剂的峰，不再有其他干扰峰，因此方法的专属性良好，详见附图8～10。
实验例8：方法的耐用性
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒（实施例1制备），6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
仪器：SSI1500HPLC（高压二元）
色谱柱：Waters SYMMETRY SHIELD RP18，3.9mm×150mm
流动相A：0.1mol/L KH2PO4（加磷酸调节pH至4.0）-甲醇（95：5）；
流动相B：甲醇；
梯度程序：
Time（min）：0 25 28 30 35 38 45
B（%）： 0 60 60 100 100 0 0
检测波长：215nm；柱温：45℃ 进样量：15μl 流速：0.8ml/min
（1）对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量测定
供试品溶液配制：精密称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒约0.36g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为对乙酰氨基酚供试液（相当于对乙酰氨基酚150μg/ml）；精密称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒约6g，置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为马来酸氯苯那敏供试液（相当于马来酸氯苯那敏10μg/ml）。
对照品溶液配制：精密称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；精密称取对乙酰氨基酚15mg，置50ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；精密量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液（相当于对乙酰氨基酚150μg/ml、马来酸氯苯那敏10μg/ml）。
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据处方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结果：见表8。
表8小儿复方氨酚黄那敏颗粒含量测定结果(批号：20110201)
| 名称 | 对乙酰氨基酚 | 马来酸 | 氯苯那敏 |
| 保留时间（min） | 4.58 | 2.243 | 19.62 |
| 标示含量（%） | 98.11 | / | 96.32 |
结论：对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量测定结果均符合规定。
（2）有关物质检查
色谱条件：同含量测定项下；
供试品溶液：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试液
自身对照液：精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1.0%自身对照液；
对氨基酚对照液：精密称取对氨基酚15mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，精密量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为对氨基酚对照液（相当于1.5μg/ml）。
测定法：分别取各供试品溶液、0.5%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂峰不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%自身对照液（相当于产品中检出杂峰总和不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）结果见表9。
表9小儿复方氨酚黄那敏颗粒有关物质检查结果(批号：20110201)
| 名称 | 对氨基酚 | 单个杂质 | 杂峰总量 |
| 检测结果 | 未检出 | 0.2% | 0.3% |
| 限度要求 | ＜0.1% | ＜0.5% | ＜1.0% |
结论：处方中有关物质符合要求。
（3）马来酸氯苯那敏含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定项下；
供试品溶液：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液（相当于马来酸氯苯那敏10μg/ml）。
对照品溶液：精密称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照液。
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。结果见表10
表10小儿复方氨酚黄那敏颗粒含量均匀度测定结果(批号：20110201)
结论：处方中马来酸氯苯那敏含量均匀度均符合要求（A+1.8S＜15)。
（4）对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品溶液中对乙酰氨基酚核对马来酸氯苯那敏峰保留时间应与对应对照品峰保留时间一致。结果见表11。
表11小儿复方氨酚黄那敏颗粒鉴别试验结果(批号：20110201)
| 名称 | 对乙酰氨基酚 | 氯苯那敏 |
| 对照液保留时间（min） | 4.58 | 19.62 |
| 供试液保留时间（min） | 4.61 | 19.49 |
结论：各鉴别项均符合规定。
具体实施方式
实施例1：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC，色谱柱为Alltech alltima，C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=80:20，流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。其中对乙酰氨基酚含量应在标示含量的90%～110%，马来酸氯苯那敏含量应在标示含量的85%～115%。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计，见附图11～13。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为1μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。扣除溶剂、对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏峰外，其他杂值峰为有关物质，见附图13～15。结论：处方中有关物质符合要求。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为10μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算10袋平均含量X，标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S应≤15。结论：处方中马来酸氯苯那敏含量均匀度均符合要求（A+1.8S＜15)。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分，见附图16～17。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别试验符合描述。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（15:7:5）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。结果：在紫外光下观察，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。见附图18。
实施例2：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC（DAD），色谱柱为日本资生堂C18，250mm×4.6mm（MG），流动相A是pH2.5浓度为0.025mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇（90：10），流动相B为80：20的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～20～28～30～34～36～43分钟，流动相B由0～55%～55%～100%～100%～0～0，检测波长：215nm；柱温：35℃；流速：1.2ml/min；进样量：10μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.48g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：精密称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；精密称取对乙酰氨基酚20mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；精密量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液（相当于对乙酰氨基酚200μg/ml、马来酸氯苯那敏20μg/ml）。
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置50ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。结论：处方中有关物质符合要求。
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置25ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，计算每袋标示含量。计算10袋的平均含量X、标准差S及标示量（100）与平均含量之间的绝对差A，A+1.8S≤15.0，则含量均匀度符合规定。结论：处方中马来酸氯苯那敏含量均匀度均符合要求（A+1.8S＜15)。
实施例3：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC（MWD），色谱柱为Agilent，C18，100mm×2.1mm，流动相A是pH2.0浓度为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液，流动相B为95：5的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～5～10～22～25～26～30分钟，流动相B由0～40%～40%～100%～100%～0～0，检测波长：205nm；流速：0.9ml/min；柱温：30℃；进样量：30μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒3g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏5mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚5mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚约5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，在供试品溶液的色谱图中，如果检出对氨基酚峰，其面积不得大于对氨基酚对照液的峰面积的1/10（相当于产品中检出对氨基酚不得大于对乙酰氨基酚的0.1%），检出其他单个杂质峰，不得大于1.0%自身对照液的1/2（相当于产品中检出其他杂质不得大于对乙酰氨基酚的0.5%），杂峰总量不得过1.0%的自身对照液（相当于产品中检出杂峰总量不得大于对乙酰氨基酚的1.0%）。结论：处方中有关物质符合要求。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别试验符合描述。
实施例4：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC，色谱柱为Alltech alltima，C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=80:20，流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。其中对乙酰氨基酚含量应在标示含量的90%～110%，马来酸氯苯那敏含量应在标示含量的85%～115%。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别试验符合描述。
实施例5：
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（15:7:5）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。结果：在紫外光下观察，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
实施例6：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC，色谱柱为Alltech alltima，C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=80:20，流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。其中对乙酰氨基酚含量应在标示含量的90%～110%，马来酸氯苯那敏含量应在标示含量的85%～115%。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
E人工牛黄的鉴别方法
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量（约相当于人工牛黄10mg），加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸（15:7:5）为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。结果：在紫外光下观察，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
实施例7：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
样品信息：小儿复方氨酚黄那敏颗粒，6g/袋，四川珍珠制药有限公司，批号：20110201。
色谱条件：HPLC分析方法，仪器：Agilent1200HPLC，色谱柱为Alltech alltima，C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=80:20，流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量。其中对乙酰氨基酚含量应在标示含量的90%～110%，马来酸氯苯那敏含量应在标示含量的85%～115%。马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计。结论：处方中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量均符合标准规定。
Claims (11)
1.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法中的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A是pH2.0～4.0浓度为0.01～0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=100～80:0～20，流动相B为80：20～100：0的甲醇-水，检测波长：205～215nm；流速为0.8～1.2ml/min，柱温为30～45℃，进样量为10-30μl；梯度洗脱程序为0分钟时流动相A比例为100%～80%、流动相B比例为0～20%；5分钟时流动相B的比例升高至40%～60%；10分钟时流动相B的比例升高至100%，并维持到22分钟；26分钟时流动相B的比例降到0%，并维持到30～45分钟;
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50～200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5～20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1ml含0.5～2mg马来酸氯苯那敏的混合溶液，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚适量，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50～200μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计;
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚适量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5～2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图；
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为5～20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
2.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法中的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A是pH2.0～4.0浓度为0.01～0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=100～80:0～20，流动相B为80：20～100：0的甲醇-水，检测波长：205～215nm；流速为0.8～1.2ml/min，柱温为30～45℃，进样量为10-30μl；梯度洗脱程序为0分钟时流动相A比例为100%～80%、流动相B比例为0～20%；25分钟时流动相B的比例升高至40%～60%；28分钟时流动相B的比例升高至100%，并维持到30分钟；38分钟时流动相B的比例降到0%，并维持到45分钟;
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50～200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5～20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1ml含0.5～2mg马来酸氯苯那敏的混合溶液，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚适量，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50～200μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计;
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚适量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5～2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为5～20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏适量，置容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5～20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
3.如权利要求1或2所述的一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法还包括E，所述E为人工牛黄的鉴别方法，包括如下步骤：
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇15～35ml，超声处理20～40min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以配比为10～20:5～9:3～7的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
4.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，150mm×4.6mm，流动相A是pH3.0浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇，配比80:20，流动相B为90：10的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～10～15～25～30～31～35分钟，流动相B由0～50%～50%～100%～100%～0～0，检测波长为210nm；流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样量为20μl；
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.24g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒9g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为15μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏15mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为100μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为15μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计；
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为1μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图；
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为10μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
5.如权利要求4所述的一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法还包括E，所述E为人工牛黄的鉴别方法，包括如下步骤：
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:7:5的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
6.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，250mm×4.6mm，流动相A是pH2.5浓度为0.025mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇=90:10，流动相B为80：20的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～20～28～30～34～36～43分钟，流动相B由0～55%～55%～100%～100%～0～0，检测波长：215nm；柱温：35℃；流速：1.2ml/min；进样量：10μl；
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.48g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为200μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为20μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：精密称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；精密称取对乙酰氨基酚20mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；精密量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计；
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为2μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图；
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置25ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为20μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏20mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为20μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
7.如权利要求6所述的一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于还包括E，所述E为人工牛黄的鉴别方法，包括如下步骤：
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇20ml，超声处理25min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以11:8:4的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在102℃加热至斑点显色清晰，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
8.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18，100mm×2.1mm，流动相A是pH2.0浓度为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液，流动相B为95：5的甲醇-水，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～5～10～22～25～26～30分钟，流动相B由0～40%～40%～100%～100%～0～0，检测波长：205nm；流速：0.9ml/min；柱温：30℃；进样量：30μl；
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.12g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为50μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒3g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为5μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏5mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚5mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为50μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计；
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为0.5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图；
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置100ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为5μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏5mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
9.如权利要求8所述的一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于还包括E，所述E为人工牛黄的鉴别方法，包括如下步骤：
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇30ml，超声处理35min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以19:6:6的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在104℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
10.一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别方法的一种或几种：
A对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量测定
色谱条件：HPLC分析方法，色谱柱为C18,150mm×3.9mm，流动相A是95:5的pH4.0浓度0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇，流动相B是100%甲醇，进行梯度洗脱，梯度条件为时间：0～25～28～30～35～38～45分钟，流动相B由0～60%～60%～100%～100%～0～0，检测波长：210nm；柱温：45℃；流速：0.8ml/min；进样量：15μl;
供试品溶液配制：称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒0.36g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为150μg/ml的对乙酰氨基酚供试液；称取小儿复方氨酚黄那敏颗粒6g，置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，配成浓度为10μg/ml马来酸氯苯那敏供试液；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，标记为1#瓶；称取对乙酰氨基酚15mg，置100ml量瓶中，加流动相适量使溶解完全，标记为2#瓶；量取1#瓶溶液1ml，置2#瓶，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液，对乙酰氨基酚对照液浓度为150μg/ml，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液和对照品溶液进样，在色谱图中出现3个主峰，分别是马来酸、对乙酰氨基酚和氯苯那敏，以外标法定量，根据配方量计算各成分的标示含量；马来酸峰不计算，仅仅以氯苯那敏计;
B有关物质的检查
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：同含量测定项下对乙酰氨基酚供试品溶液；
自身对照液配制：量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，作为1%自身对照液；
对氨基酚对照液配制：称取对氨基酚15mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，量取储备液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，对氨基酚对照液浓度为1.5μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、1.0%自身对照液、对氨基酚对照液进样，得到供试品溶液的色谱图；
C马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定
色谱条件：同含量测定；
供试品溶液配制：取小儿复方氨酚黄那敏颗粒10袋，每袋分别置50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，马来酸氯苯那敏供试品溶液浓度为10μg/ml；
对照品溶液配制：称取马来酸氯苯那敏10mg，置10ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度；量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，马来酸氯苯那敏对照液浓度为10μg/ml；
测定法：分别取各供试品溶液、对照液进样分析，以外标法定量，得到每袋标示含量；
D对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏鉴别
在含量测定项下的色谱图中，供试品色谱图中对乙酰氨基酚、马来酸、氯苯那敏主峰的保留时间分别与对照品主峰的保留时间一致，因而可鉴别配方中成分。
11.如权利要求10所述的一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的测定方法，其特征在于还包括E，所述E为人工牛黄的鉴别方法，包括如下步骤：
取小儿复方氨酚黄那敏颗粒磨细，称取适量，加甲醇18ml，超声处理32min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸与猪去氧胆酸对照品各5mg，同置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液；照2010年版中国药典二部附录V B的薄层色谱法试验，取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以11:8:4的异辛烷-醋酸乙酯-冰乙酸为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在108℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110382839.2A CN103134862B (zh) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | 一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110382839.2A CN103134862B (zh) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | 一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103134862A CN103134862A (zh) | 2013-06-05 |
| CN103134862B true CN103134862B (zh) | 2014-07-02 |
Family
ID=48494968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110382839.2A Active CN103134862B (zh) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | 一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103134862B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108051527A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-05-18 | 吉林修正药业新药开发有限公司 | 小儿氨酚黄那敏颗粒的质量控制方法 |
| CN110018254A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-07-16 | 江西和盈药业有限公司 | 一种氨咖黄敏口服溶液的质量检测方法 |
| CN115097049A (zh) * | 2022-07-25 | 2022-09-23 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101606950A (zh) * | 2009-07-13 | 2009-12-23 | 文永盛 | 一种小儿氨酚黄那敏颗粒及质量控制方法 |
| CN101816681A (zh) * | 2010-05-10 | 2010-09-01 | 贵州神奇药业股份有限公司 | 小儿氨酚烷胺颗粒的质量检测方法 |
| CN102125583A (zh) * | 2010-01-18 | 2011-07-20 | 文永盛 | 一种小儿氨酚黄那敏颗粒及质量控制方法 |
-
2011
- 2011-11-28 CN CN201110382839.2A patent/CN103134862B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101606950A (zh) * | 2009-07-13 | 2009-12-23 | 文永盛 | 一种小儿氨酚黄那敏颗粒及质量控制方法 |
| CN102125583A (zh) * | 2010-01-18 | 2011-07-20 | 文永盛 | 一种小儿氨酚黄那敏颗粒及质量控制方法 |
| CN101816681A (zh) * | 2010-05-10 | 2010-09-01 | 贵州神奇药业股份有限公司 | 小儿氨酚烷胺颗粒的质量检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HPLC 测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量;张火旺;《现代食品与药品杂志》;20060228;第16卷(第2期);第32-33页 * |
| The Simultaneous Determination of Phenylephrine Hydrochloride,Paracetamol, Chlorpheniramine Maleate and Dextromethorphan Hydrobromide in Pharmaceutical Preparations;i.M.Palabıyık 等;《Chromatographia》;20070930;第66卷(第1期);第93-96页 * |
| 小儿氨酚黄那敏颗粒质量标准研究;赵向阳;《中国实用医药》;20070831;第2卷(第24期);第29-31页 * |
| 高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒马来酸氯苯那敏含量与均匀度;张庆 等;《医药导报》;20081130;第27卷(第11期);第1391-1392页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103134862A (zh) | 2013-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Daraghmeh et al. | Determinaton of sildenafil citrate and related substances in the commercial products and tablet dosage form using HPLC | |
| Ebrahimpour et al. | Application of ionic surfactant as a carrier and emulsifier agent for the microextraction of fluoroquinolones | |
| Yan et al. | Water-compatible molecularly imprinted polymers for selective extraction of ciprofloxacin from human urine | |
| Soliven et al. | A simplified guide for charged aerosol detection of non-chromophoric compounds—analytical method development and validation for the HPLC assay of aerosol particle size distribution for amikacin | |
| CN107315059B (zh) | 一种利福平胶囊中利福平及其杂质的含量测定方法 | |
| Katakam et al. | Simultaneous determination of ciprofloxacin hydrochloride and dexamethasone sodium phosphate in eye drops by HPLC | |
| CN103134862B (zh) | 一种小儿复方氨酚黄那敏颗粒的检测方法 | |
| CN110320290A (zh) | 甲钴胺注射液有关物质的hplc检测方法 | |
| CN111551645B (zh) | 一种硫酸羟氯喹有关物质的检测方法及其应用 | |
| Seshamamba et al. | Application of stability indicating HPLC method with UV detector to the analysis of rivaroxaban in bulk and tablet dosage form | |
| Pinto et al. | Development and validation of a stability‐indicating HPLC method for topiramate using a mixed‐mode column and charged aerosol detector | |
| Zeeb et al. | Modified ionic liquid cold-induced aggregation dispersive liquid-liquid microextraction combined with spectrofluorimetry for trace determination of ofloxacin in pharmaceutical and biological samples | |
| CN103134861B (zh) | 一种复方氨酚那敏颗粒的检测方法 | |
| CN115598261B (zh) | 一种盐酸氯哌丁原料及其制剂中有关物质的测定方法 | |
| Kalaichelv et al. | Simple extractive colorimetric determination of pantoprazole sodium by aciddye complexation method in solid dosage form | |
| Singh et al. | Development and validation of RP-HPLC method for the dissolution and assay of etoricoxib in pharmaceutical dosage forms | |
| CN108732272B (zh) | 依诺肝素钠中氯化苄残留的hplc检测方法 | |
| CN101609069A (zh) | 一种用hplc法测定恩替卡韦及其药用组合物有关物质的方法 | |
| Parfant et al. | A robust analytical method for simultaneous quantification of 13 low-molecular-weight N-Nitrosamines in various pharmaceuticals based on solid phase extraction and liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry | |
| Carlucci et al. | Development of a method for the determination of vardenafil in human plasma by high performance liquid chromatography with UV detection | |
| Salem et al. | HPLC determination of indacaterol maleate in pharmaceutical preparations adopting ultraviolet and fluorescence detection | |
| Ghambarian et al. | Dispersive liquid–liquid microextraction with back extraction using an immiscible organic solvent for determination of benzodiazepines in water, urine, and plasma samples | |
| Kalaichelvi et al. | Validated RP‐HPLC Method for Analysis of Aripiprazole in a Formulation | |
| CN105158372A (zh) | 一种化妆品中尿刊酸及其乙酯的测定方法 | |
| JPH071257B2 (ja) | 混合ビタミン剤中の水溶性ビタミン類の同時定量法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: SICHUAN KELUN PHARMACEUTICAL RESEARCH INSTITUTE CO Free format text: FORMER NAME: KELUN PHARMACEUTICAL RESEARCH CO., LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 611138 Sichuan science and Technology Development Zone, Wenjiang District, Chengdu City, Xinhua Road, the central section of the two paragraph Patentee after: SICHUAN KELUN DRUG RESEARCH INSTITUTE CO., LTD. Address before: 610500 Sichuan province Chengdu City satellite city industrial development zone two South Road Patentee before: Kelun Pharmaceutical Research Co., Ltd. |