CN111175387B - 一种米那普仑异构体的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种米那普仑异构体的检测方法，采用正相色谱方法，以直链淀粉‑三(3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为色谱柱填料，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺为流动相，采用梯度洗脱。本发明检测方法无需对待测样品进行复杂的前处理，可有效分离原料药或药物组合物中的目标成分和干扰成分，具有高效、简便等优点，适于产业应用。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种米那普仑异构体的检测方法。
技术背景
抑郁症是一种严重危害人类身心健康的精神疾病，服用抗抑郁药物是治疗抑郁症的主要方法之一。米那普仑是一种特异性的5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取双重抑制剂，于1997年首次在法国上市，用于治疗严重的抑郁症。
米那普仑化学名为2-(氨甲基)-N,N-二乙基-1-苯基环丙烷甲酰胺，其分子中含有两个手性碳原子，目前临床上使用的是米那普仑的外消旋体和左旋体两种形式。手性药物对映体在体内常呈现不同的药理药效学特性，研究表明米那普仑对映体中左旋米那普仑的活性更高，且具有很好的安全性和人体耐受性，与外消旋体相比，左旋米那普仑降低了心血管紊乱及心脏、肝、肾毒性等风险，疗效安全确切。因此，严格控制左旋米那普仑制剂中对应异构体(右旋体)的含量，对于提高药品质量，降低药品的潜在毒副作用，是十分关键且必要的。
目前文献公开了一些拆分米那普仑对应异构体的方法，可以拆分得到高纯度的左旋米那普仑对应异构体，但是，目前暂未发现一种高效、简便、灵敏的分析方法，可用于制剂产品中微量米那普仑对应异构体的含量测定。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种高效、简便、灵敏的液相色谱检测方法，用于米那普仑异构体的含量测定。本发明提供如下技术方案：
一种米那普仑异构体的检测方法，采用正相高效液相色谱方法，以直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为色谱柱填料，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺为流动相，采用梯度洗脱。
本发明所述方法的色谱条件中，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:23-27:1:1为流动相A，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:100:1:1为流动相B；所述梯度洗脱程序如下：
优选地，本发明所述检测方法的色谱条件中，流动相A为正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:25:1:1，检测波长为220nm，柱温为35℃，所述色谱柱为CHIRALCELAD-H型色谱柱。
优选地，本发明所述检测方法中，供试品溶液的制备方法为：取供试品适量，加入有机溶剂，超声，过滤，离心，取上清液即得；其中，所述有机溶剂优选为乙醇和/或乙醇与正己烷的混合溶液。
本发明进一步提供一种米那普仑异构体的检测方法，采用正相高效液相色谱方法，所述方法包含以下步骤：
1)供试品溶液制备：取含有米那普仑的药物组合物颗粒或粉末适量，加入乙醇使其溶解，再加入正己烷：乙醇＝1000:25的混合溶剂，超声，补足失重，过滤，离心，取上清液即得；
2)色谱检测：以CHIRALCELAD-H色谱柱为固定相，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:25:1:1为流动相A，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:100:1:1位流动相B；采用如下梯度洗脱程序洗脱：
其中检测波长为220nm，柱温35℃，流速为1.2mL/min。
本发明所述检测方法可用于米那普仑原料药或含有米那普仑的药物组合物中对映异构体的含量测定，所述的药物组合物中含有米那普仑和药学上可接受的辅料，例如填充剂、崩解剂、润湿剂、助流剂、矫味剂等。
本发明人在实践研究中发现，药物组合物中辅料杂质、原料药杂质及稀释剂等都会对米那普仑异构体的检测产生干扰，且部分杂质出峰时间较晚，如果没有经过纯化处理，供试品溶液中的各类成分很难在短时间内得到有效的分离。既要保证分离效果，降低各类干扰成分对目标色谱峰的影响，又要尽可能缩短总体分析时间，提高检测效率，对液相色谱分离条件的选择提出了较高的要求。
本发明人在长期的实验研究中发现，色谱填料、流动相、洗脱梯度等色谱条件对米那普仑异构体的分离效果有显著影响，色谱条件选择不当会导致目标峰无法分离、检测时间延长、峰形差、无法准确定性定量等问题。本发明人经过反复摸索和尝试，最终发现在本发明的色谱检测条件下，仅需采用常规的供试品制备方法，无需对目标成分高度纯化，即可有效的分离供试品中的米那普仑异构体，该方法操作简便、分离度好、检测时间相对较短，灵敏度高，适于产业上对米那普仑药物组合物中异构体含量的质量控制。
附图说明
图1为对比例一色谱图
图2为对比例二色谱图
图3为对比例三色谱图
图4为对比例三色谱图
图5为对比例四色谱图
图6为对比例五色谱图
图7为对比例六色谱图
图8为对比例七色谱图
图9为对比例八色谱图
图10为对比例九色谱图
图11为实施例一色谱图
图12为实施例二色谱图
图13为实施例三色谱图
图14为实施例四色谱图
图15为实施例五色谱图
其中，1为左旋米那普仑色谱峰，2为右旋米那普仑色谱峰，3为稀释剂干扰峰，z为杂质干扰峰，a为系统适用性溶液色谱图，b为混合对照品溶液色谱图，c为供试品溶液色谱图，e为稀释剂色谱图，f为左旋米那普仑定位溶液色谱图，g为右旋米那普仑定位溶液色谱图。
具体实施方式
实验材料和试剂
色谱柱：大赛璐药物手性技术(上海)有限公司CHIRALCELAD-H(4.6×250mm；5μm)；Chiralcel OJ(250mm*4.6mm*10μm)
液相色谱仪：安捷伦科技(中国)有限公司Agilent 1100/Agilent 1200；
电子天平：赛多利斯(上海)贸易有限公司BP221D；
盐酸左旋米那普仑对照品来源：英国Pcl公司；批号：pcl-#-l704；
盐酸右旋米那普仑对照品来源：加拿大TLC Pharmaceutical standards ltd.；批号：1456-086A5；
正己烷(来源：Thermo Fisher Scientific；批号：172469)
乙醇(来源：Thermo Fisher Scientific；批号：158632)
三氟乙酸(来源：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；批号：I1718064)
二乙胺(来源：SIGMA-ALDRICH中国；批号：STBG8700)
异丙醇(来源：霍尼韦尔中国有限公司(honeywell)；批号：PQCG1H)
盐酸左米那普仑缓释胶囊，购自美国forest pharmaceuticals，inc.，规格：80mg/粒，批号：LOT w00079；
盐酸米那普仑片，购自上海现代制药股份有限公司；规格：25mg/片；批号：151101；
自制盐酸左米那普仑缓释胶囊，根据US8481598B2中实施例一的处方和制备工艺制得。
本发明采用不加校正因子的自身对照法(参见中国药典2015版四部通则0512高效液相色谱法)进行右旋体杂质含量计算，具体计算方法为：测定右旋体杂质含量时，按规定的杂质限度(0.5％)，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液，作为对照溶液；取供试品溶液与对照溶液各1针进样，测量供试品溶液中右旋体杂质峰面积和对照溶液主成分(即左旋体)的峰面积，按下式计算含量：
式中：Ax为供试品的待测成分峰面积；
AR为对照溶液主成分的峰面积；
f为杂质的限度0.5％；
对比例一
左旋米那普仑定位溶液制备方法如下：取盐酸左旋米那普仑对照品12.67mg，加入稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)溶解并稀释至每1ml含盐酸左旋米那普仑126.7μg的溶液,取该溶液200μl用稀释剂(正己烷：乙醇＝90：10，v/v)稀释至每1ml含盐酸左旋米那普仑25.34μg的溶液。摇匀，即得。
右旋米那普仑定位溶液制备方法如下：取盐酸右米那普仑对照品6.34mg，加入稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)溶解并稀释至每1ml含盐酸右米那普仑126.8μg的溶液,取该溶液200μl用稀释剂(正己烷：乙醇＝90：10，v/v)稀释至每1ml含盐酸右米那普仑25.36μg的溶液。摇匀，即得。
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称取不含右旋米那普仑的供试品适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以Chiralcel OJ柱(250mm*4.6mm*10μm)为固定相，以正己烷：乙醇＝90：10(v/v)为流动相，流速1.0mL/min，波长220nm，柱温28℃，进样量20μL。
检测结果：左旋米那普仑色谱峰1出现轻微拖尾，且与右旋米那普仑色谱峰2之间出现杂质干扰，导致多个色谱峰重叠，目标峰无法实现基线分离，难以对米那普仑对映异构体进行准确的定性和定量，可见该色谱条件不适于药物组合物中米那普仑异构体分离检测(详见附图1)。
对比例二
混合对照品溶液制备方法如下:取盐酸左旋米那普仑对照品和盐酸右米那普仑对照品各约10mg，加入乙醇溶解并稀释至10ml，取该溶液5ml用稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至每1ml含盐酸左旋米那普仑和盐酸右米那普仑各5μg的溶液,摇匀，即得。
系统适用性溶液的制备：精密称取不含右旋米那普仑的供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以CHIRALCELAD-H(4.6×250mm；5μm)色谱柱为固定相，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸-二乙胺＝200:10:0.2:0.2为流动相，柱温35℃，流速1ml/min，检测波长220nm，进样量40μL。
检测结果：系统适用性溶液色谱图a中左旋米那普仑色谱峰1严重拖尾，导致无法与其后的右旋对映体2实现有效分离，且右旋体出峰时间发生偏移，难以准确定性或定量(见图2)。
对比例三
供试品(不含米那普仑)溶液的制备：精密称取自制米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备：精密称取不含右旋米那普仑的供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:36:1:1为流动相，以CHIRALCEL AD-H(4.6*250mm；5μm)色谱柱为固定相，柱温35℃，流速1mL/min，检测波长220nm，进样量45μl。
检测结果：米那普仑的两种对映异构体(色谱峰1与2)分离度较好，但稀释剂在左旋米那普仑的出峰位置产生干扰峰(见图4中色谱峰3)，当采用不加校正因子的自身对照法(参见中国药典2015版四部通则0512高效液相色谱法)进行含量计算时，由于左旋体定量误差造成右旋体含量计算不准确，影响检测结果的真实性；同时，该色谱条件下，供试品中的各种干扰峰需在60min左右才能完全洗脱出来，分析时间较长，检测效率较低，不适于产业应用(图3)。
对比例四
右旋米那普仑定位溶液：取盐酸右米那普仑对照品10.43mg，加入乙醇溶解并稀释至10ml，取该溶液0.25ml用稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36)稀释至每1ml含盐酸右米那普仑26.1μg的溶液。
供试品(不含米那普仑)溶液的制备：精密称取自制米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备：精密称取不含右旋米那普仑的供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:34:1:1为流动相，以CHIRALCEL AD-H(4.6*250mm；5μm)色谱柱为固定相，柱温35℃，流速0.8mL/min，检测波长220nm，进样量40μl。
检测结果：将供试品(谱图c)、系统适用性溶液(谱图a)和右旋体定位溶液(谱图g)对比可知供试品色谱图中在右旋米那普仑出峰位置存在一个杂质干扰峰z，与右旋异构体无法有效分离，并且稀释剂(谱图e)对比可知在对左旋米那普仑色谱峰1位置存在干扰峰3，因此，该色谱条件不适于米那普仑制剂中右旋米那普仑的定性和定量分析(详见附图5)。
对比例五
供试品(不含米那普仑)溶液的制备：精密称取自制米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备：精密称取不含右旋米那普仑的供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以正己烷为流动相A，以乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝200:8:8为流动相B，进行梯度洗脱，柱温35℃，流速0.8ml/min，检测波长220nm，进样量40μl，梯度洗脱程序如下：
检测结果：左旋米那普仑色谱峰1严重拖尾，无法与右旋米那普2仑分离，难以对右旋米那普仑进行准确的定性和定量(详见附图6)。
对比例六
供试品(不含米那普仑)溶液的制备：精密称取自制米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备：精密称取供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
以CHIRALCELAD-H(4.6*250mm；5μm)为色谱柱，以正己烷-乙醇-异丙醇-三氟乙酸-二乙胺＝300:10:2:0.3:0.3为流动相，柱温35℃，流速1ml/min，检测波长220nm，进样量40μl。
检测结果：系统适用性溶液a中，主峰后的干扰峰与右旋米那普仑2未充分分离，导致右旋米那普仑无法准确积分和定量(详见附图7)。
对比例七
系统适用性溶液：精密称取供试品适量(约相当于左旋旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，加入右旋米那普仑适量，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
色谱条件：以Chiralcel AD—H柱(250mm*4.6mm*10μm)分别为固定相，以正己烷-三氟乙酸-二乙胺＝500:0.5:0.5为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝500:25:0.5:0.5为流动相B，按下表进行梯度洗脱，柱温35℃，流速1ml/min，检测波长220nm，进样量40μl，按照下述洗脱梯度进行分离检测：
检测结果：基线起伏十分严重，不利于积分，无法准确定性和定量(详见附图8)。
对比例八
系统适用性溶液：精密称取供试品适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
色谱条件：以ChiralcelAD—H柱(250mm*4.6mm*10μm)为固定相，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:30:1:1为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:100:1:1为流动相B，流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：左旋米那普仑与右旋米那普仑分离度尚可，但稀释剂空白对照中的干扰峰3不能与左旋米那普仑1有效分离，无法满足准确定量的要求(详见附图9)。
对比例九
系统适用性溶液：精密称取供试品适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
色谱条件：以Chiralcel AD—H柱(250mm*4.6mm*10μm)为固定相，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:20:1:1为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺＝1000:100:1:1为流动相B，流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：目标成分出峰较晚，未见右旋米那普仑色谱峰，可能被杂质峰或起伏的基线覆盖，无法满足定性定量要求(详见附图10)。
实施例一
供试品溶液的制备方法如下：精密称取自制盐酸米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称取自制米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
右旋米那普仑定位溶液的配置方法如下:取盐酸右米那普仑对照品14.64mg，加乙醇2.5ml，并用稀释剂(正己烷：乙醇＝1000:36，v/v)稀释至每1ml含盐酸右米那普仑585.6μg的溶液,取该溶液50μl用稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至每1ml含盐酸右米那普仑2.9μg的溶液。摇匀，即得。
本发明稀释剂对照溶液为正己烷-乙醇＝1000:25，v/v。
色谱条件：以(直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂(CHIRALCEL AD-H 4.6×250mm 5μm)；以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:25:1:1)为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:100:1:1)为流动相B；流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：左旋米那普仑(RT21min)与右旋米那普仑杂质(RT28min)分离度为4.8，分离良好，且无溶剂峰或其他杂质干扰(详见附图11)。
实施例二
供试品溶液：取市售盐酸米那普仑片数片，研细，混匀，取细粉适量(约相当于左旋米那普仑25mg)至50ml量瓶中，加5ml乙醇振荡使分散，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量超声处理30min，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得。
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称市售盐酸米那普仑片的粉末适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
本发明稀释剂对照溶液为正己烷-乙醇＝1000:25，v/v。
色谱条件：以(直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂(CHIRALCEL AD-H 4.6×250mm 5μm)；以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:25:1:1)为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:100:1:1)为流动相B；流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：稀释剂无干扰，左旋异构体(RT23min)和右旋异构体(RT30min)分离良好(R＝4.08)。该色谱条件可用于市售盐酸米那普仑片异构体的准确测定(详见附图12)。
实施例三
供试品溶液的制备方法如下：精密称取市售盐酸米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml，振荡使分散成独立的小丸，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称市售盐酸米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
本发明稀释剂对照溶液为正己烷-乙醇＝1000:25，v/v。
色谱条件：以(直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂(CHIRALCEL AD-H 4.6×250mm 5μm)；以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:25:1:1)为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:100:1:1)为流动相B；流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：稀释剂无干扰，左旋异构体(RT23min)和右旋异构体(RT30min)分离良好(R＝4.08)；该色谱条件可用于盐酸左米那普仑缓释胶囊异构体含量的准确测定(详见附图13)。
实施例四
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称自制盐酸米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
本发明稀释剂对照溶液为正己烷-乙醇＝1000:25，v/v。
色谱条件：以(直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂(CHIRALCEL AD-H 4.6×250mm 5μm)；以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:27:1:1)为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:100:1:1)为流动相B；流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：稀释剂无干扰，左旋异构体和右旋异构体分离良好(R＝5.2)；该色谱条件可用于盐酸左米那普仑异构体含量的准确测定(详见附图14)。
实施例五
系统适用性溶液的制备方法如下：精密称自制盐酸米那普仑缓释胶囊内容物适量(约相当于左旋米那普仑5mg)置10ml量瓶，加乙醇1ml振荡使分散成独立的小丸，精密加入右旋米那普仑对照品适量，再加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)适量，超声30分钟，放冷，加稀释剂(正己烷-乙醇＝1000:25，v/v)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左旋米那普仑0.5mg、右旋米那普仑2.5μg的溶液，过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。
本发明稀释剂对照溶液为正己烷-乙醇＝1000:25，v/v。
色谱条件：以(直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为填充剂(CHIRALCEL AD-H 4.6×250mm 5μm)；以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:23:1:1)为流动相A，以正己烷-乙醇-三氟乙酸-二乙胺(1000:100:1:1)为流动相B；流速为1.2mL/min；柱温为35℃；检测波长为220nm；梯度洗脱程序如下：
检测结果：稀释剂无干扰，左旋异构体和右旋异构体分离良好(R＝5.1)；该色谱条件可用于盐酸左米那普仑异构体含量的准确测定(详见附图15)。
Claims (6)
1.一种米那普仑异构体的检测方法，采用正相高效液相色谱方法，其色谱条件为：以直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶为色谱柱填料，色谱柱为CHIRALCELAD-H型色谱柱，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:23-27:1:1为流动相A，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:100:1:1为流动相B，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件中，流动相A为正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:25:1:1。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件中，检测波长为220nm，柱温为35℃。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于所述检测方法中供试品溶液的制备方法为：取供试品适量，加入有机溶剂，超声，过滤，离心，取上清液即得。
5.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于所述有机溶剂为乙醇和/或乙醇与正己烷的混合溶液。
6.一种米那普仑异构体的检测方法，采用正相高效液相色谱方法，所述方法包含以下步骤：1)供试品溶液制备：取含有米那普仑的药物组合物颗粒或粉末适量，加入乙醇使其溶解，再加入正己烷：乙醇＝1000:25的混合溶剂，超声，补足失重，过滤，离心，取上清液即得；2)色谱检测：以CHIRALCELAD-H色谱柱为固定相，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:25:1:1为流动相A，以正己烷:乙醇:三氟乙酸:二乙胺＝1000:100:1:1为流动相B；采用如下梯度洗脱程序洗脱：
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