CN101744887B - 一种中药组合物制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物制剂的检测方法，其中所述的中药组合物制剂是取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成药学上可接受的各种剂型。检测方法包括鉴别和含量测定：对白芷中欧前胡素、异欧前胡素，辛夷中木兰脂素的薄层色谱鉴别，经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰；同时对辛夷中木兰脂素的含量采用高效液相色谱法测定，结果表明木兰脂素色谱峰与杂质峰能较好分离；通过本发明的质量控制，提高了产品稳定性，有利于工业化生产的质量控制。

Description

一种中药组合物制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物制剂的检测方法，特别涉及一种清风热、通鼻窍的中药组合物制剂的检测方法。

背景技术

鼻炎是耳鼻喉科的常见病，近年来发病呈上升趋势，中医药治疗该病具有疗效显著而持久的特点，因此治疗鼻炎的中药复方很多，一般具有清风热，通鼻窍的功效，主要用于外感风热或风寒化热，鼻塞流涕，头痛流泪，慢性鼻炎等。但是没有具体的质量标准，或者只规定了鉴别项，未规定有效成分的含量测定，因此形成一套完善的质量标准体系一直是值得研究的问题。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种中药组合物制剂的检测方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种：

鉴别：

A：取本发明制剂日用制剂量的1/10-9/10重量倍，加乙醚10-45体积份，浸泡0.5-1.5小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI

B)试验，吸取对照品溶液0.0005-0.0015体积份，供试品溶液0.002-0.007体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-10∶1-5∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取本发明制剂日用制剂量的1/18-1/3重量倍，加甲醇6-12体积份，密塞，浸泡15-40分钟，超声处理15-40分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液0.0005-0.0015体积份，供试品溶液0.002-0.006体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-8∶0.5-1.5∶0.01-0.03的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以35-50∶0.5-1.5∶50-65的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/15-1/3重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15-35体积份，称定重量，密塞，浸泡15-40分钟，超声处理15-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.002-0.015体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.5-2.4mg。

本发明检测方法优选如下鉴别和含量测定中的一种或几种：

鉴别：

A：取本发明制剂日用制剂量的1/2-3/5重量倍，加乙醚30体积份，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液0.001体积份，供试品溶液0.004体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取本发明制剂日用制剂量的1/10-1/9重量倍，加甲醇10体积份，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液0.001体积份，供试品溶液0.004体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以42∶1∶57的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本发明制剂日用制剂量的1/9-1/5重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25体积份，称定重量，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.005-0.01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.8mg。

本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。本发明药物组合物检测方法可以应用于组合物的各种剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、口服液体制剂或注射剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行检测时，所选用样品量可统一折算为日用制剂量为计量单位，每单位制剂可以为每片、每粒、每支或每丸等。

本发明中药组合物制剂的原料药组成为：

炒苍耳子150-240重量份 辛夷30-80重量份 白芷105-140重量份 鹅不食草30-80重量份 薄荷150-240重量份 黄芩150-240重量份 甘草30-80重量份

本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为：

炒苍耳子187.5重量份 辛夷62.5重量份  白芷125重量份

鹅不食草62.5重量份  薄荷187.5重量份 黄芩187.5重量份

甘草62.5重量份

本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为：

炒苍耳子192.5重量份 辛夷54.5重量份  白芷114重量份

鹅不食草73.5重量份  薄荷195.5重量份 黄芩163.5重量份

甘草57.5重量份

本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为：

炒苍耳子163.5重量份 辛夷74.5重量份  白芷136重量份

鹅不食草53.5重量份  薄荷162.5重量份 黄芩198.5重量份

甘草76.5重量份

本发明所述的质量检测方法中的中药组合物制剂是取上述原料药，按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。

附图说明

图1：本发明中药组合物制剂水蜜丸白芷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、欧前胡素、异欧前胡素对照品溶液；3-5、供试品溶液；

图2：本发明中药组合物制剂水蜜丸白芷的薄层鉴别(烟台预制板)；1、阴性对照品溶液；2、欧前胡素、异欧前胡素对照品溶液；3-5、供试品溶液；

图3：高湿条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸白芷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、欧前胡素、异欧前胡素对照品溶液；3-5、供试品溶液；

图4：低温条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸白芷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、欧前胡素、异欧前胡素对照品溶液；3-5、供试品溶液；

图5：本发明中药组合物制剂大蜜丸白芷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、欧前胡素、异欧前胡素对照品溶液；3-5、供试品溶液；

图6：本发明中药组合物制剂水蜜丸辛夷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、辛夷对照品(木兰脂素)；3-5、供试品溶液；

图7：本发明中药组合物制剂水蜜丸辛夷的薄层鉴别(烟台预制板)；1、阴性对照品溶液；2、辛夷对照品(木兰脂素)；3-5、供试品溶液；

图8：高湿条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸辛夷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、辛夷对照品(木兰脂素)；3-5、供试品溶液；

图9：低温条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸辛夷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、辛夷对照品(木兰脂素)；3-5、供试品溶液；

图10：本发明中药组合物制剂大蜜丸辛夷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、辛夷对照品(木兰脂素)；3-5、供试品溶液；

图11：本发明中药组合物制剂水蜜丸薄荷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、薄荷对照品(薄荷脑)；3-5、供试品溶液；

图12：本发明中药组合物制剂水蜜丸薄荷的薄层鉴别(烟台预制板)；1、阴性对照品溶液；2、薄荷对照品(薄荷脑)；3-5、供试品溶液；

图13：高湿条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸薄荷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、薄荷对照品(薄荷脑)；3-5、供试品溶液；

图14：低温条件下本发明中药组合物制剂水蜜丸薄荷的薄层鉴别；1、阴性对照品溶液；2、薄荷对照品(薄荷脑)；3-5、供试品溶液；

图15：本发明中药组合物制剂大蜜丸薄荷的薄层鉴别(青岛预制板)；1、阴性对照品溶液；2、薄荷对照品(薄荷脑)；3-5、供试品溶液；

图16：对照品、供试液、阴性对照色谱图

图17：木兰脂素标准曲线

图18：3种型号色谱柱的液相色谱图

本发明对中药组合物制剂的质量标准相比较以前的标准进行了提高和完善，进行了白芷中欧前胡素、异欧前胡素，辛夷中木兰脂素的薄层色谱鉴别，经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰；同时采用高效液相色谱法测定辛夷中木兰脂素的含量，试验结果表明木兰脂素色谱峰与杂质峰能较好分离；并且进行了准确度试验，结果表明本发明的测定方法具有良好的准确度；通过本发明的质量控制，提高了产品稳定性，有利于工业化生产的质量控制。

下面实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。

实验仪器、试剂与试药

仪器：Agilent 1100HPLC系统，Agilent 1200HPLC系统；

试剂：乙腈、四氢呋喃为色谱纯，水为超纯水(自制)，其他试剂为分析纯；

对照品及对照药材：中国药品生物制品检定所提供，木兰脂素(供含量测定用，(批号110882-200504，110882-200605)；欧前胡素(含量测定用，(批号：110826-200712)，异欧前胡素(含量测定用，批号：110827-200407)，薄荷脑(含量测定用，批号：110728-200506)。苍耳子对照药材(批号：121168-200604)；

硅胶G薄层色谱预制板：为青岛海洋化工厂分厂生产，规格：100×100mm，批号：20090121；为烟台化学工业研究所生产，规格：SG 100×100mm，批号：20081006，pH6.2-6.8；

样品：由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供，批号：8012429、8019001、8013244；8032661、8038177、8038178。下述实验例中所述的本发明中药组合物制剂(水蜜丸、大蜜丸)由实施例1所述方法制备。

实验例1白芷的薄层色谱

按实施例1的方法制备不含白芷的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。按实施例1所述的条件展开，结果阴性对照试验未见干扰(见附图1)，。

耐用性考察

分别采用不同品牌薄层预制板，按实施例1所述方法操作。附图1为青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图；附图2为烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图。结果：这两个品牌的预制板中烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板供试液的展开效果不理想，阴性样品略有干扰，而青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板展开效果较好，所以建议选用青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板。

考察相对湿度75％对薄层鉴别的影响。量取硫酸25ml加水100ml混匀，加入双槽层析缸的一侧槽中(100×100mm层析缸，加入12ml稀硫酸)，将点样后的薄层板放入另一侧槽中，密闭放置20分钟，然后加入展开剂，展开，紫外光灯(254nm)下观察。结果表明高湿时斑点有扩散现象，但对本鉴别项基本无影响。见附图3。

在较低气温4～5℃环境中，按实施例1所述方法操作。结果表明低温时斑点清晰，展开效果较好，见附图4。

在本发明中药组合物制剂水蜜丸薄层鉴别相同的条件下进行本发明中药组合物制剂大蜜丸白芷的薄层鉴别，结果表明，该条件亦适用于本发明中药组合物制剂大蜜丸白芷的薄层鉴别，见附图5。

实验例2辛夷的薄层鉴别

按实施例1所述方法制备不含辛夷的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。依实施例1所述条件试验，阴性样品未见干扰(见附图6)，。

耐用性考察

采用两个品牌的预制板各一块，按实施例1所述方法操作。附图6为青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图；附图7为烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图。结果：使用这两个品牌的预制板均能实现对辛夷的薄层鉴别，只是喷显色剂后，两种品牌的预制板斑点颜色不同，且烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板的阴性对照品略有干扰，故建议选用青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板。

考察相对湿度75％对薄层鉴别的影响，试验结果表明高湿对供试品溶液的薄层色谱基本无影响，见附图8。

在较低气温4～5℃环境中试验，结果表明低温时显色后供试品溶液的斑点颜色较浅，见附图9。

在本发明中药组合物制剂水蜜丸薄层鉴别相同的条件下进行本发明中药组合物制剂大蜜丸辛夷的薄层鉴别，结果表明，该条件亦适用于本发明中药组合物制剂大蜜丸辛夷的薄层鉴别，见附图10。

实验例3薄荷的薄层鉴别研究

按实施例1所述方法制备不含薄荷的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。依实施例1所述条件展开，结果阴性对照试验未见干扰(见附图11)。

耐用性考察

采用两个品牌的预制板各一块，按实施例1所述方法操作。附图11为青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图；附图12为烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板所得薄层色谱图。结果：烟台市化学工业研究所生产的硅胶G预制板的薄层色谱在对照品相应位置上的供试品样品斑点未能达到分离，故建议选用青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板。

考察相对湿度75％对薄层鉴别的影响，试验结果表明高湿时斑点略微散开，但对本鉴别项基本无影响。见附图13。

在较低气温4～5℃环境中试验，结果表明低温时显色后斑点更为清晰，且基本无扩散现象，见附图14。

在本发明中药组合物制剂水蜜丸薄层鉴别相同的条件下进行本发明中药组合物制剂大蜜丸薄荷的薄层鉴别，结果表明，该条件亦适用于本发明中药组合物制剂大蜜丸薄荷的薄层鉴别，见附图15。

实验例4含量测定

(1)色谱条件及色谱柱

色谱柱：

C18色谱柱(4.6×250nm，5μm)，Kromasil C18保护柱；

流速：1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：278nm；

流动相：乙腈-四氢呋喃-水(42∶1∶57)，见附图16。

(2)供试品溶液制备的选择

提取溶剂的选择：

取(水蜜丸)药丸粉碎，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙酸乙酯、甲醇、50％甲醇各25ml，称定重量，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表1。

表1提取溶剂的选择结果

结果表明，甲醇提取效果最好，故确定提取溶剂为甲醇。

溶剂用量的选择：取(水蜜丸)药丸粉碎，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇15ml、25ml、35ml，称定重量，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表2。

表2溶剂用量的选择结果

根据测定结果确定提取溶剂的量为25ml。

(3)线性关系的考察

精密称取13.96mg木兰脂素对照品，以少量的甲醇溶解后转入50ml容量瓶中，经甲醇多次洗涤，并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.2792mg/ml木兰脂素对照品贮备液。取贮备液1ml，分别置25ml、50ml量瓶中，加甲醇至刻度，制备浓度为11.168、5.584μg/ml的标准对照品溶液。再分别取该贮备液8ml、6ml、4ml、2ml、1ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制备浓度为0.22336、0.16752、0.11168、0.05584、0.02792mg/ml的标准对照品溶液。

另精密称取13.40mg木兰脂素对照品，以少量的甲醇溶解后转入25ml容量瓶中，经甲醇多次洗涤，并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.536mg/ml木兰脂素对照品贮备液。取该贮备液8ml，10ml容量瓶定容，制备浓度为0.4288mg/ml的标准对照品溶液。

精密吸取上述对照品溶液和贮备液各10μl，按已确定的色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，木兰脂素的进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y＝539.86X+2.9469，r＝0.9999，结果表3和见附图17。

实验表明，木兰脂素在0.05584～5.36μg范围内呈良好的线性关系。

表3线性关系

(4)精密度试验

精密吸取水蜜丸供试品溶液，连续进样6次，每次10μl，测定峰面积，结果见表4。

表4精密度试验结果

结果表明，本色谱条件下的仪器精密度良好。

(5)重复性试验

本发明中药组合物制剂水蜜丸重复性试验：精密称取实施例1制备的粉碎的药丸(批号：8032661)6份，制成供试品溶液，按实施例1所述的木兰脂素含量测定方法，平行测定，结果见表5。

表5重复性试验(水蜜丸)

结果表明，本方法的重现性良好。

本发明中药组合物制剂大蜜丸重复性试验：精密称取剪碎的药丸(批号：8012429)6份，制成供试品溶液，按实施例1所述的木兰脂素含量测定方法，平行测定，结果见表6。

表6本发明中药组合物制剂大蜜丸重复性试验及其结果

结果表明，本方法的重现性良好。

(6)稳定性试验

精密吸取水蜜丸供试品溶液，按上述色谱条件每隔一定时间测定其峰面积，每次进样10μl，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差，结果见表7。

表7稳定性试验结果

结果表明，水蜜丸供试品溶液在24h内是稳定的。

(7)准确度试验

采用加样回收实验法。

本发明中药组合物制剂(水蜜丸)：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8032661，含量1.834mg/g)1g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.0792mg/ml)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表8。

表8回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

本发明中药组合物制剂(大蜜丸)：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8012429，含量1.129mg/g)2g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.0944mg/g)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表9。

表9回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

(8)耐用性试验

另选取2种不同型号的色谱柱，在相同条件下，测定同一个水蜜丸供试品溶液(批号：8032661)，结果见附图18和表10。

表10适用性试验结果

结果表明，在此色谱条件下，3种型号色谱柱的木兰脂素峰与其它峰均达到基线分离，且三种色谱柱所测定含量差异不大。

(9)范围

本发明中药组合物制剂水蜜丸适用范围：

下限：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8032661，含量1.834mg/g)0.5g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.042mg/ml)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表11。

表11回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

上限：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8032661，含量1.834mg/g)3g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.2216mg/ml)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表12。

表12回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

本发明中药组合物制剂大蜜丸适用范围：

下限：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8012429，含量1.129mg/g)1g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.0456mg/ml)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表13。

表13回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

上限：取已知木兰脂素含量的样品(批号：8012429，含量1.129mg/g)6g，精密称定，精密加入木兰脂素对照品溶液(0.2668mg/ml)25ml，按实施例1所述方法制成供试品溶液，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表14。

表14回收率试验及其结果

结果表明，本法回收率良好。

(10)样品的含量测定

本发明中药组合物制剂水蜜丸三批样品的含量测定：取样品，按实施例1所述方法测定，计算含量。样品测定结果见表15。

表15三批样品含量测定结果表

结果表明，三批样品中木兰脂素含量基本稳定，结合药典中辛夷项下有关规定，本发明中药组合物制剂(水蜜丸)中辛夷以木兰脂素计，每1g不得少于0.18mg。

本发明中药组合物制剂大蜜丸三批样品的含量测定：取样品，按实施例1所述方法测定，计算含量。样品测定结果见表16。

表16三批样品含量测定结果表

结果表明，三批样品中木兰脂素含量基本稳定，结合药典中辛夷项下有关规定，本发明中药组合物制剂(大蜜丸)中辛夷以木兰脂素计，每丸不得少于0.90mg。

(11)转移率：按《中国药典》2005年版一部辛夷项下木兰脂素的含量不得少于0.40％，计算转移率，水蜜丸为91.3％，大蜜丸为91.0％。

实验例5标准复核及方法学验证实验

1.性状：与样品实际性状相符。

2.鉴别：(1)为白芷中欧前胡素、异欧前胡素的薄层色谱；(2)为辛夷中木兰脂素的薄层色谱；经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。

3.含量测定：采用高效液相色谱法测定辛夷中木兰脂素的含量，规定大蜜丸木兰脂素不得少于0.90mg/丸；水蜜丸不得少于0.18mg/g。试验结果表明木兰脂素色谱峰与杂质峰能较好分离，经复核，九批样品含量均符合规定，见表17、表18。

表17本发明中药组合物制剂(大蜜丸)木兰脂素含量测定数据

表18本发明中药组合物制剂(水蜜丸)木兰脂素含量测定数据(mg/g)

4.空白试验：按处方中药味比例，配制不含辛夷的群药，按其制法制成空白制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，依法测定，结果空白溶液在与木兰脂素对照品溶液相同保留时间处未出现色谱峰，空白无干扰。

5.重复性试验：取同一批样品(批号8012429)，平行制备3份进行测定，结果见表19。

表19重复性试验结果(mg/丸)

6.准确度试验：采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批样品(批号8012429，木兰脂素含量为1.238mg/g)0.5g，精密加入木兰脂素对照品溶液(含木兰脂素0.04968mg/ml)25ml，照实施例1所述含量测定项下操作，平行制备3份，依法测定，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表20。

表20准确度试验数据

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：本发明中药组合物丸剂的检测方法

炒苍耳子187.5g  辛夷62.5g    白芷125g

鹅不食草62.5g  薄荷187.5g  黄芩187.5g

甘草62.5g

取上述七味原料药，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜40～50g，制成水蜜丸；或每100g粉末加炼蜜150～170g，制成大蜜丸。

鉴别：

A：取水蜜丸6g，粉碎，或取大蜜丸9g，剪碎；加乙醚30ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液1μl，供试品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取水蜜丸1g，粉碎，或取大蜜丸2g，剪碎；加甲醇10ml，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液1μl，供试品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

含量测定：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以42∶1∶57的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取水蜜丸适量，粉碎，取约2g，精密称定，或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.8mg。

用法与用量：口服。水蜜丸一次5g，大蜜丸一次1丸，一日2次。

规格：水蜜丸每100粒重20g；大蜜丸每丸重9g。

实施例2：本发明中药组合物散剂的检测方法

炒苍耳子192.5g辛夷54.5g  白芷114g

鹅不食草73.5g  薄荷195.5g黄芩163.5g

甘草57.5g

取上述七味原料药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成散剂。

鉴别：

A：取散剂日用制剂量的2/5，加乙醚25ml，浸泡1.2小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1.2ml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液0.8μl，供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶2∶1.2的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取散剂日用制剂量的1/15，加甲醇9ml，密塞，浸泡35分钟，超声处理35分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液0.8μl，供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶1.2∶0.015的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

含量测定为：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以48∶0.8∶54的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取散剂日用制剂量的2/15，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，密塞，浸泡35分钟，以功率250W、频率40kHz进行超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6～8μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.6mg。

实施例3：本发明中药组合物片剂的检测方法

炒苍耳子163.5g 辛夷74.5g  白芷136g

鹅不食草53.5g  薄荷162.5g 黄芩198.5g

甘草76.5g

取上述七味原料药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。

鉴别：

A：取片剂日用制剂量的4/5，加乙醚40ml，浸泡1.4小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1.4ml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液1.2μl，供试品溶液6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶4∶1.3的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取片剂日用制剂量的1/6，加甲醇12ml，密塞，浸泡40分钟，超声处理40分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液1.2μl，供试品溶液6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶1.4∶0.025的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

含量测定为：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以45∶1.2∶60的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取片剂日用制剂量的4/15，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇30ml，称定重量，密塞，浸泡40分钟，以功率250W、频率40kHz进行超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8～12μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于2.0mg。

实施例4：本发明中药组合物口服液体制剂的鉴别方法

炒苍耳子210.5g 辛夷45.5g  白芷120g

鹅不食草68.5g  薄荷220g   黄芩174.5g

甘草38.5g

取上述七味原料药，按照常规方法提取，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液体制剂。

鉴别：

A：取口服液体制剂日用制剂量的1/5，加乙醚20ml，浸泡0.8小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.8ml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液0.6μl，供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶2∶0.8的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B：取口服液体制剂日用制剂量的1/18，加甲醇8ml，密塞，浸泡25分钟，超声处理25分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2005版药典第一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液0.6μl，供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶0.8∶0.013的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

实施例5：本发明中药组合物胶囊制剂的含量测定方法

炒苍耳子176.5g 辛夷68.5g    白芷130g

鹅不食草45.5g  薄荷174.5g   黄芩230.5g

甘草67.5g

取上述七味原料药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊制剂。

含量测定为：照高效液相色谱法(2005版药典第一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以48∶1.4∶62的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm。理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取胶囊制剂日用制剂量的4/15，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇32ml，称定重量，密塞，浸泡40分钟，以功率250W、频率40kHz进行超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～14μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于2.2mg。

Claims (7)

1.一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定步骤：

鉴别：

A：取中药组合物制剂日用制剂量的1/10-9/10重量倍；加乙醚10-45体积份，浸泡0.5-1.5小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.0005-0.0015体积份，供试品溶液0.002-0.007体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-10∶1-5∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B：取中药组合物制剂日用制剂量的1/18-1/3重量倍；加甲醇6-12体积份，密塞，浸泡15-40分钟，超声处理15-40分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.0005-0.0015体积份，供试品溶液0.002-0.006体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-8∶0.5-1.5∶0.01-0.03的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以35-50∶0.5-1.5∶50-65的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm；理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000；

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取中药组合物制剂日用制剂量的1/15-1/3重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇15-35体积份，称定重量，密塞，浸泡15-40分钟，超声处理15-40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.002-0.015体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.5-2.4mg；

其中所述中药组合物的原料药组成为：

炒苍耳子150-240重量份辛夷30-80重量份白芷105-140重量份鹅不食草30-80重量份薄荷150-240重量份黄芩150-240重量份甘草30-80重量份。

2.如权利要求1所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定步骤：

鉴别：

A：取中药组合物制剂日用制剂量的1/2-3/5重量倍，加乙醚30体积份，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含欧前胡素、异欧前胡素各1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.001体积份，供试品溶液0.004体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B：取中药组合物制剂日用制剂量的1/10-1/9重量倍，加甲醇10体积份，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含木兰脂素1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.001体积份，供试品溶液0.004体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；

含量测定：照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以42∶1∶57的乙腈-四氢呋喃-水为流动相；检测波长为278nm；理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000；

对照品溶液的制备：精密称取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含木兰脂素0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取中药组合物制剂日用制剂量的1/9-1/5重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25体积份，称定重量，密塞，浸泡30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.005-0.01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；

每日用制剂量含辛夷以木兰脂素C₂₃H₂₈O₇计，不得少于1.8mg。

3.如权利要求1或2所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为：

炒苍耳子187.5重量份辛夷62.5重量份白芷125重量份

鹅不食草62.5重量份薄荷187.5重量份黄芩187.5重量份

甘草62.5重量份。

4.如权利要求1或2所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为：

炒苍耳子192.5重量份辛夷54.5重量份白芷114重量份

鹅不食草73.5重量份薄荷195.5重量份黄芩163.5重量份

甘草57.5重量份。

5.如权利要求1或2所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为：

炒苍耳子163.5重量份辛夷74.5重量份白芷136重量份

鹅不食草53.5重量份薄荷162.5重量份黄芩198.5重量份

甘草76.5重量份。

6.如权利要求1、2、4或5所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物制剂为：

取原料药，按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，所述剂型为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂或注射剂。

7.如权利要求3所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物制剂为：

取原料药，按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，所述剂型为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂或注射剂。

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