CN108205043A - 一种左旋米那普仑中间体有关物质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种左旋米那普仑中间体有关物质的检测方法，该方法采用薄层色谱法进行。本发明的薄层色谱检测方法通过异丙醇对供试样品进行溶解、重结晶，取过滤后的上清液作为供试品溶液，然后以特定配比的展开剂对供试品溶液进行展开和检测，尤其是展开剂A(石油醚和乙酸乙酯比例为3:1～5:1)和展开剂B(石油醚和乙酸乙酯比例为1:2)的联合应用，实现了(1S,5R)‑1‑苯基‑3氧杂‑二环(3.1.0)已烷‑2酮中有关物质的分离鉴定。本发明的检测方法对有关物质的展开效果较好，斑点清晰易于分辨，且方法简便，易于操作。

Description

一种左旋米那普仑中间体有关物质的检测方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种左旋米那普仑中间体有关物质的方法。
背景技术
(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮是一种医药中间体，其结构式如下：
分子式C11H10O2，分子量174.196。其通常由苯乙腈和环氧氯丙烷合成(FR2302994B；J.Org.Chem.，1996，61，915-923；CN100513402C等)。
该中间体也是合成治疗抑郁症的药物—米那普仑或左旋米那普仑的关键中间体(参见Bernard Bonnaud et al.，Journal of Chromatography，1985，318，398-403；Satoshi Shuto et al.，TetrahedronLetters，1996，37，641-644；Satoshi Shuto et al.,J.Med.Chem.，1998，41，3507-3514；Doyle and Hu，Advanced Synthesis and Catalysis，2001，343，299-302；WO2010086394A等)，该中间体的纯度直接影响下游产物的收率和纯度。申请人实验发现，当直接以市售的该中间体合成(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺时，产物纯度不到70％，而对该中间体进行提纯之后投料，(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺的纯度可达到99％以上，因此推测该中间体原料中含有大量杂质未参与反应，或参与反应生成了副产物，大大降低了目标产物的收率。查阅现有技术，有多篇关于左旋米那普仑有关物质或光学异构体检测方法的文献报道(Synthesis andCharacterization of Process Related Impurities of (±)-Milnacipran，P.RajaGopal et al.，J.Chin.Chem.Soc.，2013，60，639-644；Chiral HPLC Analysis ofMilnacipran and Its FMOC-Derivative on Cellulose-Based Stationary Phases，ANGELA PATTI et al.，CHIRALITY，2008，20，63–68等)，但还没有专门针对左旋米那普仑中间体-(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的检测方法公开。
在有关物质的质量控制方面，色谱法由于方法简便、快速，并且可以同时反映化学组成及含量情况，已经成为应用范围最广，最主要的方法之一。常用的色谱法有以下几种：高效液相色谱法(HPLC)，薄层色谱法(TLC)，气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等。其中，HPLC由于分离效率高、分析速度快、灵敏、检测手段多样性等特点，已经成为有关物质鉴定方法的首要选择。然而当发明人通过HPLC色谱法对含杂质的中间体进行检测，发现含杂质的样品与提纯后的样品其HPLC色谱图并无明显差异，而熔点测试也显示二者无明显差异，因此迫切需要开发其他有效的检测方法。TLC色谱法除了具有HPLC色谱法分离能力强、灵敏度高等优点外，还具有可同时展开多个试样，所用仪器简单，操作方便的特点。因此最终尝试选择薄层色谱对左旋米那普仑中间体的有关物质进行质量控制。
目前，仅有少量文献报道利用TLC对(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮进行鉴定，如Alliot等报道了该中间体的合成与检测工艺，当以乙酸乙酯：环己烷＝3:7为展开剂，测定该中间体的Rf为0.4(Enantioselective Synthesis of Levomilnacipran，Chem.Comm，Alliot et al.，2012，48(65)，8111-8113)；Roggen等也报道了以该中间体合成纯的米那普仑异构体类似物，并公开了对于该中间体，当以乙酸乙酯：环己烷＝1:3为展开剂，测定该中间体的Rf为0.27(Synthesis of enantiomerically pure milnaciprananalogs and inhibition of dopamine,serotonin,and norepinephrine transporters，Roggen et al.，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2007，17，2834–2837)；而FR2302994B也公开了该中间体的合成工艺和检测方法，TLC检测以石油醚：乙酸乙酯＝30:70为展开剂，测定该中间体的Rf为0.46。虽然这些方法都能够成功鉴定该中间体，但其主要目的还是对后续反应过程中该原料的反应程度进行控制，并没有提到该色谱条件对有关物质的分离效果，发明人也通过实验验证了这些色谱条件并不能适用于该中间体的有关物质检测。因此有必要建立起一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质切实可行的质量控制方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的检测方法，从而实现对该中间体的质量控制。
本发明的检测方法按照《中国药典2015年版四部通则0502》的薄层色谱法进行：取样品溶液点于硅胶薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂A展开后显色，置于紫外灯光下检视；其中样品溶液的制备方法为：取样品适量，加异丙醇超声溶解后，冷却，离心，取上清液，作为供试品溶液。供试品色谱中若显荧光斑点，则表明供试品中含有杂质。
本发明的展开剂A中石油醚和乙酸乙酯的体积比为3:1～5:1，优选为4:1。发明人通过实验证实，当石油醚和乙酸乙酯的比例小于3:1，部分荧光物质将于展开剂前沿检出，Rf不符合要求。而石油醚和乙酸乙酯的比例在3:1～5:1范围之内分离效果较好。
本发明的检视波长优选为365nm，薄层板为硅胶GF254板。有荧光的物质或显色后可激发产生荧光的物质可在紫外光灯(365nm或254nm)下观察荧光斑点。发明人通过实验证实，当波长为254nm，样品溶液无特异成分检测，因此选定365nm为检测波长。而实验也证实GF254硅胶薄层板较硅胶G板更灵敏。
本发明样品溶液制备过程中，通过异丙醇溶解、冷却结晶，离心后，中间体在下层沉淀，杂质富集于上清液中，以该上清液作为供试品溶液进行检测。其中中间体与异丙醇的质量体积比例约为0.2g/ml～0.8g/ml时，检出的荧光斑点较多，且较明显，尤其是0.8g/ml检出的斑点最多，最明显。而且以异丙醇作为溶剂的检测效果要优于乙酸乙酯、甲醇等常用溶剂。发明人也曾尝试直接以含杂质的样品溶解后作为样品溶液进行点样，然而，点样的同时，中间体析出，不利于点样，导致上样量偏低，结果杂质斑点数目较少，且斑点不明显。因此最后选定以样品杂质富集的异丙醇溶液作为供试品溶液。
本发明的检测方法进一步包含以下步骤：取样品溶液适量，点于硅胶GF254薄层板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为1:2为展开剂B展开，置于365nm波长紫外灯光下检视。经过石油醚与乙酸乙酯体积比为1:2的展开剂B对样品进行展开，能够将展开剂A展开时停留在原点的荧光斑点完全展开。因此，本发明的样品溶液通过展开剂A和展开剂B的展开，能够完全分离样品溶液中的荧光物质，准确鉴定样品中的有关物质。
本发明进一步提供了一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的检测方法，其包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品0.2～0.8g，定量加入1ml异丙醇，于30-35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20～-5℃冰箱中冷却5～30min，离心，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液1～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为3:1～5:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。若显荧光斑点，则表明样品溶液中含有杂质。
本发明更进一步提供了一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的检测方法，其包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品0.8g，定量加入1ml异丙醇，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，以10000/rmp离心5min，取上清液作为供试品溶液；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为4:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。若显荧光斑点，则表明样品溶液中含有杂质。
本发明还提供了一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的检测方法，其包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品0.2～0.8g，定量加入1ml异丙醇，于30-35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20～-5℃冰箱中冷却5～30min，离心，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液1～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为3:1～5:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视；再次取步骤1)的样品溶液1～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为1:2，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。若显荧光斑点，则表明样品溶液中含有杂质。
本发明更进一步提供了一种(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮的检测方法，其包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品0.8g，定量加入1ml异丙醇，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，以10000/rmp离心5min，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为4:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视；再次取步骤1)的样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为1:2，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。若显荧光斑点，则表明样品溶液中含有杂质。
本发明所述的薄层色谱检测方法也能够用于合成(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮过程中进行质量控制。
本发明的薄层色谱检测方法通过异丙醇对样品进行溶解、重结晶，获得杂质富集的样品溶液，然后以特定配比的展开剂对样品溶液进行展开和检测，尤其是展开剂A(石油醚和乙酸乙酯比例为3:1～5:1)和展开剂B(石油醚和乙酸乙酯比例为1:2)的联合应用，能够成功检测出(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮中的有关物质。与现有技术相比，本发明结合特定的样品溶液制备方法和展开剂进行薄层色谱检测，有关物质的展开效果较好，斑点清晰易于分辨，且方法简便，易于操作，是(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮有关物质的有效检测方法。
附图说明
图1为对比实施例1中样品溶液的HPLC色谱图；
图2为对比实施例2中样品溶液的薄层色谱图；
图3为对比实施例3中样品溶液的薄层色谱图；
图4为对比实施例4中样品溶液的薄层色谱图；
图5为实施例1中样品溶液的薄层色谱图；；
图6为实施例2中样品溶液的薄层色谱图；
图7为实施例3中样品溶液的薄层色谱图；
图8为实施例4中样品溶液的薄层色谱图；
图9为实施例5中样品溶液的薄层色谱图；
图10为实施例6中样品溶液的薄层色谱图；
图11为实施例7中样品溶液的薄层色谱图；
具体实施方式
本发明通过以下实施例对本发明的内容作进一步的详细说明，并不能用于限制本发明的保护范围。
本发明所涉及的药品、试剂及主要仪器如下：
1)药品：(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮(成都普康生物科技有限公司批号有：150723，160627，160671，160605)
2)试剂；甲醇(fisher批号：145629)、乙腈(scharlau批号：AC03904000)、磷酸二氢钠(广东光华批号：20141104)、三乙胺(天津市科密欧批号：20130223)、磷酸(天津市科密欧批号：20131217)、乙酸乙酯(成都市科龙批号：20101102)、环己烷(成都市科龙批号：20080529)；石油醚(天津市进丰化工批号：20121022)、异丙醇(Honeywell批号：09BG1H)、二乙胺(成都科龙化工批号：20150601)、AlCl3(天津大茂化学批号：20151201)、二氯甲烷(成都科龙化工批号：20151102)
3)仪器：液相色谱仪(岛津LC-2010CHT)、紫外检测器(岛津SPD-M20A)、薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司KH3100)、电子天平(赛多利斯BP221D)、GF254板(青岛海洋化工)
对比实施例1
1、高效液相色谱检测方法
样品溶液制备：
1)取(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)适量，加甲醇溶解并制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液A。
2)取样品(160627)适量，加入样品3倍体积的异丙醇，于80℃搅拌溶解，溶解完全后将溶液置于冰水浴中冷却析晶，静止分上下两层，分别将上、下层分离后，将溶剂蒸干，获得白色精制品和黄色精制残渣。分别取白色精制品和黄色精制残渣加甲醇溶解并制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液B和C。
3)供试品溶液D为稀释剂—甲醇。
液相色谱检测条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil,100-5C18,5μm,250*4.6mm)；以乙腈为流动相A，以0.01M磷酸二氢钠(0.5％三乙胺，磷酸调pH值至3.0)为流动相B；流速为每分钟1.0ml；检测波长为220nm；柱温30℃。梯度洗脱程序如下：
分别量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2、结果
按照上述条件进行高效液相色谱检测，结果如图1所示。从图中可以看出，供试品A(含杂质的样品)和供试品B(精制品)、C(精制残渣)的供试液色谱图无明显区别。即通过高效液相色谱并不能有效鉴定样品中的有关物质。
对比实施例2以乙酸乙酯：环己烷＝3:7为展开剂(Enantioselective Synthesisof Levomilnacipran，Alliot et al.，Chem.Comm，2012，48(65)，8111-8113)
1、薄层色谱检测方法
样品制备：
1)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)若干，加入样品2倍体积的异丙醇，于80℃搅拌溶解，溶解完全后将溶液于5℃冷却析晶，静止分上下两层，分别将上、下层分离后，获得下层(160627精制残液)，将上层溶剂蒸干，获得精致品(160701)。取160627精制残液作为样品溶液1；
2)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160701、160627、150723)各0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液2、3、4；
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以乙酸乙酯：环己烷＝3:7为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视
2、结果
检测结果如图2所示。从图2可以看出，当以乙酸乙酯：环己烷＝3:7为展开剂的供试液色谱图的样品溶液1、3、4中只检出两个荧光斑点，其中有一个斑点离原点较近，Rf约为0.08，不符合要求。而经提纯的样品溶液2未检出荧光斑点。
对比实施例3以乙酸乙酯：环己烷＝1:3为展开剂(Synthesis ofenantiomerically pure milnacipran analogs and inhibition of dopamine,serotonin,and norepinephrine transporters，Roggen et al.，Bioorganic&MedicinalChemistry Letters，2007，17，2834–2837)
1、薄层色谱检测方法
样品制备：同对比实施例2
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以乙酸乙酯：环己烷＝1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
检测结果如图3所示。从图3可以看出，当以乙酸乙酯：环己烷＝1:3为展开剂的供试液色谱图的样品溶液1、3、4中只检出两个荧光斑点，其中有一个斑点离原点较近，Rf约为0.08，不符合要求。样品溶液2未检出荧光斑点。
对比实施例4以石油醚：乙酸乙酯＝3:7为展开剂(FR2302994B)
1、薄层色谱检测方法
样品制备：同对比实施例2
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯＝3:7为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
3、结果
检测结果如图4所示。从图4可以看出，当以石油醚：乙酸乙酯＝3:7为展开剂的供试液色谱图的样品溶液1、3、4于展开剂前沿检出部分荧光物质，Rf约为1.0，不符合要求。
实施例1
1、薄层色谱检测方法
样品制备：
1)取对比实施例1中的黄色精制残渣0.3g，加入1.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀，作为样品溶液1(1μl)、2(2.5μl)、3(5μl)；
2)取对比实施例1中的白色精制品0.3g，加入1.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀作为样品溶液4(5μl)。
3)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)0.3g，加入0.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀作为样品溶液5(2.5μl)、6(5μl)。
4)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160701)0.3g，加入1.0ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀作为样品溶液7(2.5μl)、8(5μl)。
检测方法
吸取上述溶液1～5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯＝2:1为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
检测结果如图5所示。从图5可以看出，当以石油醚：乙酸乙酯＝2:1为展开剂的供试液色谱图中，样品溶液1、2、3、5、6于展开剂前沿检出部分荧光物质，说明该条件不能将有关物质有效分离。
实施例2
1、薄层色谱检测方法
样品制备：同实施例1
检测方法
吸取上述各样品溶液1～5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯＝1:1为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
结果如图6所示，从图中可以看出，同石油醚：乙酸乙酯＝2:1结果类似，色谱图仍于展开剂前沿检出荧光斑点，说明该条件仍不能将有关物质有效分离。
实施例3
1、薄层色谱检测方法
样品制备
1)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160701、160627、150723、160605)0.8g，加入1ml异丙醇，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液1、2、4、5；
2)取160627精制残液作为样品溶液3；
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯＝3:1为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视；
2、结果
检测结果如图7所示。从图7可以看出，样品溶液2、3、4、5均检出多个荧光斑点，且除原点外，各样品中的杂质能够被有效分离，杂质的荧光斑点Rf值在0.3～0.78之间，主斑点Rf值为0.7。
实施例4
1、薄层色谱检测方法
样品制备：同实施例3
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯＝5:1为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
结果如图8所示，从图8可以看出，样品溶液2、3、4、5均检出多个荧光斑点，且除原点外，各样品中的杂质能够被有效分离，杂质的荧光斑点Rf值在0.1～0.65之间，主斑点Rf值为0.45。
实施例5
1、薄层色谱检测方法
样品制备方法：
1)取160627精制残液作为样品溶液1(2μl)、2(5μl)；
2)取对比实施例1中的黄色精制残渣0.3g，加入1.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀，作为样品溶液3(5μl)；
3)取对比实施例1中的白色精制品0.3g，加入1.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀，作为样品溶液4(5μl)；
4)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)0.3g，加入0.5ml乙酸乙酯，溶解后，摇匀，作为样品溶液5(2.5μl)；；
5)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160701)0.3g，加入1ml的乙酸乙酯，溶解后，摇匀，作为样品溶液6(5μl)。
检测方法
吸取上述溶液2～5μl，点于GF254薄层板上，分别以石油醚：乙酸乙酯＝4:1(展开剂A)和石油醚：乙酸乙酯＝1:1(展开剂B)进行展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
结果
检测结果如图9所示。从图9可以看出，在展开剂A条件下，以异丙醇作为溶剂的样品溶液1、2较乙酸乙酯溶剂作为溶剂的样品3、4、5、6检出更多的荧光斑点；说明异丙醇较乙酸乙酯溶剂效果更佳。而展开剂B条件下，各样品在展开剂前沿检出荧光物质，说明展开剂B未能有效分离样品中各杂质。
实施例6
1、薄层色谱检测方法
展开剂A样品制备：
1)取对比实施例1中的黄色精制残渣0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后，将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液1；
2)取160627精制残液作为样品溶液2；
3)取对比实施例1中的白色精制品0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后，将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液3；
4)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627、160701)各0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液4、6；
5)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)0.8g，定量加入甲醇1ml，溶解，摇匀，作为样品溶液5。
展开剂B样品制备：
1)取对比实施例1中的黄色精制残渣0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液1；
2)取对比实施例1中的白色精制品0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液2；3)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627、160701)各0.8g，定量加入异丙醇1ml，于35℃下超声溶解，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，再以1000rpm离心5min，取上清液作为样品溶液3、5；
4)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160627)0.8g，定量加入甲醇1ml，溶解，摇匀，作为样品溶液4。
5)取160627精制残液作为样品溶液6。
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，分别以石油醚：乙酸乙酯＝4:1(展剂A)和石油醚：乙酸乙酯＝1:2(展开剂B)为展开剂进行展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
检测结果如图10所示。从图10可以看出，在展开剂A条件下，以异丙醇作为溶剂的样品溶液1、2、4较甲醇溶剂的样品溶液5检出更多的荧光斑点，其中样品1、2共检出4个荧光斑点，其Rf值在0.3～0.8之间，说明异丙醇较甲醇溶剂检出的荧光斑点更多。且展开剂B条件下，异丙醇样品1、3、6均能够发现1个特异性荧光斑点，其Rf约为0.7。
因此，以异丙醇作为样品溶液的溶剂，通过展开剂A和展开剂B的联合运用，能够有效分离(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮中的各有关物质。
实施例7
1、薄层色谱检测方法
样品制备：
1)取样品(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮样品(160701、160627、160723)适量，加入异丙醇适量，于35℃下超声助溶，制成浓度为0.8g/ml的溶液，置于-20℃冰箱中冷却5min，以10000/rmp离心5min，取上清液作为供试品溶液1、2、4、；
2)取160627精制残液作为样品溶液3；
检测方法
吸取上述各样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，分别以石油醚：乙酸乙酯＝4:1(展剂A)和石油醚：乙酸乙酯＝1:2(展开剂B)为展开剂进行展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视。
2、结果
检测结果如图11所示。从图11可以看出，在展开剂A条件下，样品2、3、4均检出5个荧光斑点，其Rf值在0.3～0.8之间；展开剂B条件下，样品2、3、4均能够发现1个特异性荧光斑点，其Rf约为0.4，而样品1中未发现荧光斑点。说明该方法能检出样品中的杂质，且异丙醇处理能够将这些杂质去掉。
实施例8
(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺的制备
称量AlCl319.91g投入反应器中，加入200mlDCM，搅拌，降温至5℃；滴加二乙胺21.84g，控制温度小于25℃，滴加完毕后继续搅拌；然后加入(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮20.01g，升温至20℃继续搅拌，反应完后降温至5℃，然后缓慢加入80ml水，停止搅拌，分液，水层用40mlDCM提取，然后合并DCM层，依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水MgSO4干燥，得黄色油状物(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺26.72g。取样HPLC检测，纯度为67.53％，收率为63.55％。
实施例9
鉴于实施例7中(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺的纯度较低，推测可能是原料(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮存在杂质未参与反应或生成副产物。于是尝试对纯化前和纯化后的该原料进行HPLC检测，其纯化工艺、检测方法和结果如对比实施例1所示。然而纯化前后的样品色谱图无明显区别，即HPLC色谱法不能有效鉴定原料中的有关物质。
因此下面先对原料(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮按照实施例6中样品6或实施例7中的样品1(160701)的纯化方法进行提纯，并利用实施例6或7所示的检测方法进行中间体控制，然后制备(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺，具体过程如下：
1)(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮的纯化
称量(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮100.02g，加入样品2倍体积的异丙醇，于80℃搅拌溶解，溶解完全后将溶液于5℃冷却析晶，静止分上下两层，分别将上、下层分离。将上层溶剂蒸干，获得提纯后的(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮80.01g。
2)(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺的制备
称量AlCl39.97g投入反应器中，加入100mlDCM，搅拌，降温至5℃；滴加二乙胺10.94g，控制温度小于25℃，滴加完毕后继续搅拌；然后加入步骤1)中经提纯的(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮10.01g，升温至20℃继续搅拌，反应完后降温至5℃，然后缓慢加入40ml水，停止搅拌，分液，水层用20mlDCM提取，然后合并DCM层，依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水MgSO4干燥，得黄色油状物(1S,5R)-N，N二乙基-2-羟甲基-1-苯基环丙甲酰胺13.93g。取样HPLC检测，纯度为99.52％，总收率为78.02％。
因此，将本发明的检测方法运用到(1S,5R)-1-苯基-3氧杂-二环(3.1.0)已烷-2酮的上下游合成过程中，对于上下游产物的质量控制具有积极的意义。

Claims (10)

1.一种左米那普仑中间体有关物质的检测方法，其特征在于采用薄层色谱法进行：取样品溶液点于硅胶薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂展开后显色，置于紫外灯光下检视；其中样品溶液的制备方法为：取样品适量，加异丙醇超声溶解后，冷却，离心，取上清液，作为供试品溶液。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于石油醚和乙酸乙酯的体积比为3:1～5:1，优选4:1。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于检视波长为365nm，薄层板为硅胶GF254板。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于样品溶液的制备方法中，样品与异丙醇的质量体积比为0.2g/ml～0.8g/ml，优选0.8g/ml。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于还包含以下步骤：取样品溶液适量，点于硅胶GF254薄层板上，以石油醚与乙酸乙酯体积比为1:2为展开剂展开，置于365nm波长紫外灯光下检视。
6.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品适量，加入异丙醇适量，于30-35℃下超声助溶，制成浓度为0.2g/ml～0.8g/ml的溶液，溶解完全后将溶液置于-20～-5℃冰箱中冷却5～30min，离心，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液2～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为3:1～5:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视，不显荧光斑点。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品适量，加入异丙醇适量，于35℃下超声助溶，制成浓度为0.8g/ml的溶液，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，以10000/rmp离心5min，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为4:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视，不显荧光斑点。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品适量，加入异丙醇适量，于30-35℃下超声助溶，制成浓度为0.2g/ml～0.8g/ml的溶液，溶解完全后将溶液置于-20～-5℃冰箱中冷却5～30min，离心，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液2～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为3:1～5:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视；再次取步骤1)的样品溶液2～10μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为1:2，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视，不显荧光斑点。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于包含以下步骤：
1)供试品溶液的制备
取样品适量，加入异丙醇适量，于35℃下超声助溶，制成浓度为0.8g/ml的溶液，溶解完全后将溶液置于-20℃冰箱中冷却5min，以10000/rmp离心5min，取上清液作为供试品；
2)检测方法
取步骤1)的样品溶液5μl，点于GF254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为4:1，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视；再次取步骤1)的样品溶液5μl，点于Gf254薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯为展开剂，展开剂比例为1:2，展开，取出，晾干，置于紫外光灯365nm下检视，不显荧光斑点。
10.权利要求1-9中任一项所述的检测方法在左米那普仑中间体合成中的应用。
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