RU2425380C1 - Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии - Google Patents
Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425380C1 RU2425380C1 RU2010126117/15A RU2010126117A RU2425380C1 RU 2425380 C1 RU2425380 C1 RU 2425380C1 RU 2010126117/15 A RU2010126117/15 A RU 2010126117/15A RU 2010126117 A RU2010126117 A RU 2010126117A RU 2425380 C1 RU2425380 C1 RU 2425380C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acetonitrile
- vol
- mobile phase
- minutes
- dimethyl terephthalate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. Способ характеризуется тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику. Достигается высокая чувствительность способа, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов. 4 з.п. ф-лы, 6 табл.
Description
Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) в моче, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности.
Из уровня техники известен ряд методик определения количества подобных веществ. Так, из источника [1] известен способ определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в воде. Согласно известному способу измерение выполняют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором. Температура испарителя 280°С, температура детектора и колонок 165°С, расход газа-носителя (аргона) 40 см3/мин. Определению не мешают п-ксилол, ацетальдегид, дифенил, дифенилоксид, муравьиная, уксусная, бензойная, п-толуиловая, терефталевая и изофталевая кислоты, а также метиловые эфиры этих кислот при содержании их в воде до 10 ПДК.
Концентрирование из воды проводят методом жидкостной экстракции: в делительную воронку, вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 анализируемой воды, вносят 10 г натрия хлорида, подкисляют хлористо-водородной кислотой до рН 3, добавляют внутренний стандарт - 0,1 см3 раствора дипропиладипината в этиловом спирте (0,05 мг) и экстрагент - 2 см3 хлороформа. Экстрагируют в течение 2 мин, и через 15 мин нижний хлороформный слой помещают в бюкс. Экстракт упаривают в токе воздуха в вытяжном шкафу до объема 0,2-0,3 см3 и хроматографируют 1-2 мм3 экстракта. Диапазон измеряемых концентраций составляет 0,15-3 мг/дм3. Недостаток известного способа - низкая чувствительность определения.
Также известен способ определения в моче 16 моноэфиров фталевой кислоты [2] с использованием твердофазной экстракции и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией. Согласно этому способу, образцы мочи обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут и перемешивают встряхиванием. Затем к 100 мм3 мочи добавляют 25 мм3 ферментативного раствора и проводят реакцию деглюкуронизации при температуре 37°С в течение 90 мин. Затем реакцию деглюкуронизации останавливают, добавляя к пробе 50 мм3 уксусной (ледяной) кислоты и 200 мм3 5%-ного водного раствора ацетонитрила. Анализ проводят на жидкостном хроматографе Agilent серии 1100, соединенном с квадрупольным масс-спектрометром с электроионизационным распылителем. Подвижная фаза - 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле, оптимизированная в градиентном режиме, скорость движения элюента 0,35 см3/мин. Погрешность определения составляет 21,0%. Предел обнаружения моноэфиров фталевой кислоты составляет 0,00011-0,0043 мг/дм3. По данной известной методике анализируются лишь моноэфиры о-фталевой кислоты. Диметиловый эфир терефталевой кислоты не определяется описанным выше способом. Кроме того, длительная пробоподготовка и дорогостоящее оборудование не приемлемы для использования известного способа при проведении массового анализа.
Из источника информации [3] известен метод определения диэтилгексилфталата в образцах мочи газовой хроматографией/масс-спектрометрией. Проба мочи в количестве 0,5 см3 подкислялась до рН=2-3 и извлекалась дважды 1,5 см3 этилацетата до и после ферментативного гидролиза с бета-глюкуронидазой. Объединенные экстракты высушивали под струей азота и проводили реакцию дериватизации с диазометаном для перевода исследуемых веществ в соответствующие метиловые эфиры. Количественный анализ диэтилгексилфталата и продуктов его гидролиза выполнен газовой хроматографией/масс-спектрометрией на капиллярной колонке с массовым спектрометром (Германия). Температура детектора 280°С, температура термостата колонки запрограммирована следующим образом: 40°С (1 минута), повышение до 80°С со скоростью 20°С/мин, повышение до 320°С со скоростью 10°С/мин, выдержка (5 минут). Газ-носитель - гелий. Предел определения 0,01 мг/дм3.
В источнике информации [4] описан способ определения концентрации фталевой кислоты и ее изомеров (изофталевой и терефталевой кислот), а также их производных, в том числе диметилтерефталата, в микробиологическом субстрате, используемом для биодеградации, методом высокоэффективной жидкостной хроматографиии (ВЭЖХ) с УФ-детектором. Образцы субстрата центрифугируют 3 минуты со скоростью 10000 об/мин, разбавляют до концентраций, меньше, чем 50 мг/дм3, и анализируют аликвоты объемом 10 мкл. Разделение смеси достигается при использовании колонки (100×3 мм), заполненной фазой Chromospher 5C18. В качестве элюирующей жидкости используется смесь метанола и 1%-ного водного раствора уксусной кислоты в соотношении 40:60, расход подвижной фазы 0,3 мл/мин. Обнаружение отдельных компонентов смеси проводится ультрафиолетовым детектором (Spectroflow 773) при длине волны 230 нм. Недостаток известного метода - низкая чувствительность определения.
Также известен способ количественного определения фталатов (диэтилфталата, дибутилфталата, дигексилфталата и диоктилфталата) в поверхностных и питьевых водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительным проведением процедуры твердофазной экстракции [5]. Согласно известному способу концентрирование проб воды методом твердофазной экстракции проводят путем пропускания 250 см3 анализируемой пробы воды со скоростью 10-20 см3/мин через картридж марки Diapak П, который предварительно конденционируют 12 см3 метанола и промывают 18 см3 дистиллированной воды. После нанесения на сорбент Diapak П исследуемой пробы воды картридж промывают 6 см3 дистиллированной воды и сушат под вакуумом в течение 7 мин. Затем элюируют фталаты 1,5 см3 метанола, упаривают растворитель в токе азота и растворяют остаток в 100 мм3 метанола. Аликвотную часть экстракта анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1100» с диоидно-матричным детектором при длине волны детектирования 220 нм. Нижний предел определения указанных фталатов в воде составляет 0,0005-0,024 мг/дм3. Данной методикой не определяется диметиловый эфир терефталевой кислоты.
Указанный известный способ неприменим для определения диметилтерефталата в моче с нижним пределом определения 0,0005 мг/дм3, т.к. при анализе мочи необходимо проводить 2 параллельных определения одного образца и поэтому потребуется объем пробы мочи в количестве 500 мл, что не всегда выполнимо при неинвазивном отборе пробы. Кроме того, в силу мешающего влияния матрицы, снижающей аналитический сигнал, нижний предел определения диметилтерефталата в моче будет выше указанного нижнего предела определения для воды, как в этом известном способе.
Технический результат, обеспечиваемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении высокой чувствительности способа определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов.
Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, согласно которому производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.
Центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.
Скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см3/мин.
Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.
Хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.
Указанный технический результат достигается за счет следующего.
Благодаря тому, что отобранную пробу мочи подвергают центрифугированию, обеспечивается денатурация белка, что исключает его влияние на точность определения.
Экспериментальным путем было установлено, что высокая чувствительность и точность определения диметилтерефталата в пробе мочи достигается лишь при строго определенной последовательности осуществления твердофазной экстракции на сорбенте Oasis HLB с использованием в качестве экстрагента - 100%-ного ацетонитрила. При этом пропускание (конденционирование) сорбента 100%-ным ацетонитрилом и 1 см3 дистиллированной воды обеспечивает очистку сорбента от возможного присутствия посторонних примесей и увлажнение сорбента перед пропусканием пробы мочи (в целом - это подготовка сорбента к анализу), а промывка сорбента после пробы мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила необходима для цели удаления с сорбента слабоудерживаемых компонентов матрицы и повышения селективности извлечения. Использование водного раствора ацетонитрила именно такой концентрации обеспечивает хорошее удаление ненужных компонентов, и в то же время не производится экстракция.
Проведение последующего анализа экстракта методом жидкостной хроматографии с особыми режимами, а именно: используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме (градиентное элюирование), который осуществляют путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, соответствует оптимизации элюирования, а значит, обеспечивает высокую чувствительность способа. Следует пояснить, что изменение объемного соотношения ацетонитрила и воды в подвижной фазе осуществляется за счет работы 4-канального градиентного насоса Agilent 1200, смешивающего до 4 компонентов подвижной фазы.
Скорость потока подвижной фазы 1,0 см3/мин является оптимальной при проведении исследований.
Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента 3:1 соответственно выбрано исходя из результатов экспериментальных исследований по изучению полноты экстракции диметилтерефталата с картриджей Oasis HLB 3сс в диапазоне определяемых концентраций 0,001-1,0 мг/дм3 в моче. Для степени извлечения, равной 99,3% от дозы, введенной в пробу мочи, не содержащей диметилтерефталат, достаточно пропустить через картридж 1 см3 100%-ного ацетонитрила, причем сначала пропускают 0,5 см3 100%-ного ацетонитрила в первую виалу, а затем следующие 0,5 см3 ацетонитрила во вторую виалу. Содержимое виал анализируют отдельно, а конечный результат выдают, суммируя обнаруженные количества диметилтерефталата в первой и второй виалах.
Исследование экстракта на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм обусловлено достижением максимального сигнала флуориметрического детектора, что влияет на чувствительность и точность определения.
Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:
- производят отбор пробы мочи в количестве 10 см3;
- переносят указанную пробу в центрифужную пробирку и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин;
- отбирают 6 см3 верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 1 см3 100%-ного ацетонитрила, 1 см3 дистиллированной воды, 3 см3 мочи (пропускают только 3 см3, потому что проводят 2 параллельных определения одного образца, результат представляют как среднеарифметическое двух параллельных определений), 3 см3 дистиллированной воды, 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила со скоростью потока 1 см3/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см3 экстрагента - 100%-ного ацетонитрила;
- аликвотную часть полученного экстракта в количестве 10 мм3 анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.% (т.е. 25 об. ч. ацетонитрила и 75 об. ч. воды), затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% (т.е. 90 об. ч. ацетонитрила и 10 об. ч. воды) и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин;
- количественное содержание диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику, который строится посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб мочи и стандартных растворов диметилтерефталата.
Для построения градуировочного графика в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 50,0 мг диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в исходном растворе (раствор №1) составляет 0,5 мг/см3. Затем 0,1 см3 раствора №1 вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в разбавленном растворе (раствор №2) составляет 0,5 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от концентрации диметилтерефталата в моче (мг/дм3) и строится по 6 сериям рабочих стандартных растворов. Каждую серию, состоящую из 3 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 25 см3. Для этого в каждую колбу вносят растворы для градуировки №1 и 2 в соответствии с таблицами 1 и 2, доводят объем колбы до метки мочой и перемешивают. По 10 см3 свежеприготовленных стандартных растворов переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 6 см3 верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB 3сс как в предлагаемом способе. Полученные экстракты хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором.
| Таблица 1 | ||||||
| Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,001-0,020 мг/дм3 | ||||||
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Объем раствора №2, см3 | 0,05 | 0,10 | 0,15 | 0,25 | 0,50 | 1,00 |
| Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг | 0,025 | 0,050 | 0,075 | 0,125 | 0,250 | 0,500 |
| Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм3 | 0,001 | 0,002 | 0,003 | 0,005 | 0,010 | 0,020 |
| Таблица 2 | ||||||
| Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,020-1,0 мг/дм3 | ||||||
| Номер раствора | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Объем раствора №2, см3 | 1,0 | 2,5 | 5,0 | - | - | - |
| Объем раствора №1, см3 | - | - | - | 0,005 | 0,012 | 0,025 |
| Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг | 0,50 | 1,25 | 2,5 | 5,0 | 12,0 | 25,0 |
| Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм3 | 0,020 | 0,05 | 0,1 | 0,2 | 0,48 | 1,0 |
Отработка оптимальных жидкостно-хроматографических параметров для определения диметилтерефталата в моче предлагаемым способом осуществлялась с использованием жидкостного хроматографа «Agilent 1200», оснащенного термостатом колонок, градиентным насосом и флуориметрическим детектором.
Полнота разделения диметилтерефталата в присутствии диметиловых эфиров фталевой и изофталевой кислот, монометиловых эфиров фталевой, изофталевой и терефталевой кислот, а также фталевой, изофталевой и терефталевой кислот достигнута на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C18 при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы вначале смеси ацетонитрила и воды в объемном соотношении 25:75 со скоростью потока 1,0 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). Максимальный сигнал флуориметрического детектора получен при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм. В случае, если не был применен градиентный режим элюирования чувствительность способа резко изменялась.
В процессе исследований по выбору оптимальных условий проведения твердофазной экстракции диметилтерефталата из мочи, включающей конденционирование сорбента Oasis HLB растворителем - 100%-ным ацетонитрилом и дистиллированной водой, промывку картриджа от мешающих компонентов мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила после нанесения анализируемой пробы мочи на указанный сорбент и последующую десорбцию диметилтерефталата 100%-ным ацетонитрилом, в качестве экстрагента были апробированы следующие растворители: метанол, этанол, ацетонитрил и их водные растворы. Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||
| Средние значения степени экстракции диметилтерефталата из мочи в зависимости от природы растворителя | ||
| № опыта | Растворитель (экстрагент) | Степень экстракции, % |
| 1 | 5%-ный водный раствор метанола | 0 |
| 2 | 100%-ный метанол | 20,5 |
| 3 | 100%-ный этанол | 6,3 |
| 4 | 60%-ный водный раствор ацетонитрила | 51,0 |
| 5 | 100%-ный ацетонитрил | 99,3 |
Данные, приведенные в таблице 3, показывают, что максимальная степень экстракции диметилтерефталата из проб мочи была достигнута при использовании в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, который применяли в дальнейших исследованиях.
Экспериментальным путем также были установлены, наряду с необходимостью применения в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, и другие характеристики и режимы предлагаемого способа, обеспечивающие эффективное и селективное извлечение диметилтерефталата и повышение чувствительности и точности определения, а именно: центрифугирование пробы мочи при 2000 об/мин, использование при твердофазной экстракции 1 см3 100%-ного ацетонитрила и 1 см3 дистиллированной воды для конденционирования сорбента, промывании картриджа 3 см3 дистиллированной воды и 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила после пропускания анализируемой пробы мочи и экстракции 1,0 см3 100%-ного ацетонитрила.
Пример конкретного выполнения предлагаемого способа.
Анализируют пробы мочи (обследуемая группа детей). Каждую пробу мочи анализируют дважды. Свежеотобранную пробу мочи объемом 10 см3 центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 3 см верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3сс 1 см3 100%-ного ацетонитрила, 1 см3 дистиллированной воды, 3 см3 мочи, 3 см3 дистиллированной воды, 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см3 100%-ного ацетонитрила. Скорость экстракции (скорость потока) 1 см3/мин. Аликвотную часть полученного экстракта отбирают и хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1200» с флуориметрическим детектором на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C18 при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды со скоростью потока 1,0 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). При этом длина волны возбуждения флуориметрического детектора составляла 246 нм и длина волны эмиссии 330 нм.
По градуировочному графику определяют содержание диметилтерефталата в пробах 1-5. Полученные результаты приведены в таблице 4.
| Таблица 4 | |||
| Результаты исследования образцов мочи на содержание диметилтерефталата | |||
| № образца | Результаты параллельных определений, мкг/см3 | Результат измерения, мкг/см3 | Относительная погрешность, % |
| 1 | 0,0035 | 0,00325±0,0008 | 24,6 |
| 0,0030 | |||
| 2 | 0,0052 | 0,0050±0,0012 | 24,0 |
| 0,0048 | |||
| 3 | 0,0062 | 0,0061±0,0015 | 24,6 |
| 0,0060 | |||
| 4 | 0,0100 | 0,0105±0,0026 | 24,7 |
| 0,0110 | |||
| 5 | 0,0074 | 0,0071±0,0018 | 25,7 |
| 0,0068 | |||
Чувствительность определения диметилтерефталата в анализируемом объеме пробы мочи (10 мм3) составила 0,01 нг (или 0,001 мг/дм3). Погрешность определения не превышает 26%.
Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблицах 5 и 6.
| Таблица 5 | |||
| Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости предлагаемого способа | |||
| Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 (мкг/см3) | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости),σr, % | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) σR, % | Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р=0,95), ±δ, % |
| Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. | 10,3 | 11,0 | 25,0 |
| Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. | 6,3 | 9,7 | 29,4 |
| Таблица 6 | ||
| Значения пределов повторяемости и воспроизводимости предлагаемого способа при доверительной вероятности Р=0,95 | ||
| Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), rn, % | Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях),  |
| Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. | 29,0 | 31,0 |
| Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. | 17,3 | 27,0 |
Применение предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) как минимум в 3 раза, например, по сравнению со способом, описанным в источнике информации [4].
Способ прост и может быть рекомендован для серийных анализов.
Источники информации
1. МУК 4.1.745-99. Газохроматографическое определение диметилового эфира терефталевой кислоты в воде. Сб. методических указаний Определение концентраций химических веществ в воде централизованных систем питьевого водоснабжения. Вып.2. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999.
2. Kato К., Silva M.J., Needham L.L., Calafat A.M. Determination of 16 Phthalate Metabolites in Urine Using Automated Sample Preparation and Online Preconcentration/High-Performance Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry // J. Analytical Chemistry, Vol.77, No.9, May 1, 2005 2985-2991.
3. Mettang Т., Alscher D., Pauli-Magnus С. Dunst R., Kuhlmann U., Rettenmeier A. Phthalic Acid Is the Main Metabolite of the Plasticizer Di(2-ethylhexyl) Phthalate in Peritoneal Dialysis Patients // Adv. Perit. Dial. 1999. - 15. - p.229-33.
4. Kleerebezem R., Hulshoff P., Lettinga G. Anaerobic biodegradability of phthalic acid isomers and related compounds // J. Biodegradation. - 10. - 1999. - 63-73.
5. Турнаев В.А., Третьяков Н.Ю., Турнаева Е.А. Хроматографические методы определения фталатов в поверхностных и питьевых водах // Вестник Тюменского государственного университета. - 2007. - №3. - с.139-146.
Claims (5)
1. Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, характеризующийся тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.
2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.
3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см3/мин.
4. Способ по п.1, характеризующийся тем, что объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.
5. Способ по п.1, характеризующийся тем, что хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010126117/15A RU2425380C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010126117/15A RU2425380C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2425380C1 true RU2425380C1 (ru) | 2011-07-27 |
Family
ID=44753676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010126117/15A RU2425380C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2425380C1 (ru) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2547884C2 (ru) * | 2013-06-27 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии нефти Сибирского отделения Российской академии наук (ИХН СО РАН) | Способ пробоподготовки водных объектов для определения углеводородных примесей |
| RU2687738C1 (ru) * | 2019-01-21 | 2019-05-16 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Способ подготовки пробы мочи для определения монометилфталата, моноэтилфталата, монобутилфталата, монобензилфталата, моноэтилгексилфталата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии |
| CN110133168A (zh) * | 2018-02-09 | 2019-08-16 | 四川科伦药物研究院有限公司 | Hplc法测定卡巴他赛有关物质的方法 |
| RU2735168C1 (ru) * | 2019-12-27 | 2020-10-28 | Публичное акционерное общество «СИБУР Холдинг» | Качественное и количественное определение фталатов в полимерных материалах |
| CN114252533A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-29 | 一汽奔腾轿车有限公司 | 一种检测乘用车内醛酮类物质含量的方法 |
| CN114894951A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-08-12 | 广东工业大学 | 一种在线测定头发或指甲中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法与应用 |
-
2010
- 2010-06-25 RU RU2010126117/15A patent/RU2425380C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ТУРНАЕВ В.А., ТРЕТЬЯКОВ Н.Ю., ТУРНАЕВА Е.А. Вестник тюменского государственного университета, 2007, №3, с.139-146. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2547884C2 (ru) * | 2013-06-27 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии нефти Сибирского отделения Российской академии наук (ИХН СО РАН) | Способ пробоподготовки водных объектов для определения углеводородных примесей |
| CN110133168A (zh) * | 2018-02-09 | 2019-08-16 | 四川科伦药物研究院有限公司 | Hplc法测定卡巴他赛有关物质的方法 |
| RU2687738C1 (ru) * | 2019-01-21 | 2019-05-16 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Способ подготовки пробы мочи для определения монометилфталата, моноэтилфталата, монобутилфталата, монобензилфталата, моноэтилгексилфталата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии |
| RU2735168C1 (ru) * | 2019-12-27 | 2020-10-28 | Публичное акционерное общество «СИБУР Холдинг» | Качественное и количественное определение фталатов в полимерных материалах |
| CN114252533A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-29 | 一汽奔腾轿车有限公司 | 一种检测乘用车内醛酮类物质含量的方法 |
| CN114894951A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-08-12 | 广东工业大学 | 一种在线测定头发或指甲中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法与应用 |
| CN114894951B (zh) * | 2022-05-13 | 2023-07-11 | 广东工业大学 | 一种在线测定头发或指甲中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2425380C1 (ru) | Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии | |
| CN103344725B (zh) | 同时定量检测蒸馏白酒中氨基甲酸乙酯和邻苯二甲酸酯含量的方法 | |
| CN109738565B (zh) | 一种测定保健食品中非法添加化合物的方法 | |
| CN113960211B (zh) | 一种血清中维生素k的测定方法 | |
| CN108872415A (zh) | 一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法 | |
| Chen et al. | Development of a high-performance liquid chromatography method for the simultaneous quantification of four organoarsenic compounds in the feeds of swine and chicken | |
| CN106645518B (zh) | 一种蜂胶原胶中氯霉素残留量的测定方法 | |
| Luo et al. | Rapid determination of Δ9-Tetrahydrocannabinol in saliva by polymer monolith microextraction combined with gas chromatography–mass spectrometry | |
| CN112198249B (zh) | 一种土壤中乙醇胺类化合物的检测方法 | |
| Cai et al. | Determination of four pyridine alkaloids from Tripterygium wilfordii Hook. f. in human plasma by high-performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry | |
| CN103926352B (zh) | 一种热熔胶中12种邻苯二甲酸酯的基质标准校正-气相色谱-质谱联用测定方法 | |
| Sun et al. | Determination of sesamol in sesame oil by anion exchange solid phase extraction coupled with HPLC | |
| CN104897796A (zh) | 一种高效液相色谱法测定芝麻油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法 | |
| CN112782295A (zh) | 一种在线测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法与应用 | |
| Zhang et al. | A highly sensitive method for analyzing marker phytoplankton pigments: Ultra‐high‐performance liquid chromatography‐tandem triple quadrupole mass spectrometry | |
| RU2546530C1 (ru) | Способ количественного определения бенз(а)пирена в крови методом жидкостной хроматографии | |
| CN110927269A (zh) | 定量检测酒中dl-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法 | |
| CN114166974B (zh) | 一种气相色谱-质谱检测土壤和沉积物中三乙胺的方法 | |
| CN111579684B (zh) | 一种胶囊剂的囊材中辣椒总碱的含量测定方法 | |
| CN112782333B (zh) | 一种匹伐他汀异丙基叔丁酯非对映异构体的hplc检测方法 | |
| RU2466406C1 (ru) | Способ количественного определения бенз(а)пирена в моче методом жидкостной хроматографии | |
| CN112114080B (zh) | 一种阿立哌唑有关物质的检测方法 | |
| Xu et al. | Capillary liquid chromatographic analysis of fat-soluble vitamins and β-carotene in combination with in-tube solid-phase microextraction | |
| Joe Jr et al. | High performance liquid chromatography with fluorescence and ultraviolet detection of polynuclear aromatic hydrocarbons in barley malt | |
| CN116124905A (zh) | 一种小鼠血浆、粪便或组织样本中短链脂肪酸的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120626 |