CN102636596A - 一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法及其应用，其中样品前处理方法包括如下步骤：在纸基薄层层析板底部位置负载待测样品浓缩液，将纸基薄层层析板放入展开槽，加入展开剂进行薄层层析分离，剪切下恒定比移值位置的目标检测物条带，提取待测物，完成所述的样品前处理。本发明方法可以将待测组分恒定比移值位置的条带剪切下来并进行后续的定量分析，避免了其余位置处干扰物质的影响，回收率高；可以在同一展开条件下，同时进行多条纸基薄层层析分离，避免了处理过程中条件差异对分离结果的影响，平行性好；所使用的纸基薄层层析板价廉易得，整个处理过程操作简单，环保高效，经济实用。

Description

一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法及其应用

技术领域

本发明涉及薄层色谱分离领域，具体涉及一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法及其应用。

背景技术

色谱技术是对复杂混合物分离分析最有效的方法。薄层色谱(Thin LayerChromatography)又称为薄层层析，是属于固-液吸附色谱。其点样斑点小、清晰不扩散、分离时间短、灵敏度高、分离效果好，是近年来发展起来的一种高效、快速而又简单的色谱法。因此，薄层色谱被广泛应用于医药、化工、环保、食品等领域，尤其是对天然化学产物中有效成分的分离和分析发挥着很大的作用。

与纸层析相比，薄层层析具有较好的分离效能，混合物展开分离迅速，一般展开一次约在15-60分钟，分离效能比纸层析好。此外，样品溶液上样量少，一般几微升至几十微升就可以在薄层层析板上很好的分离，且操作简便，不需要特殊昂贵而又复杂的仪器，便于普及。因为薄层层析色谱的固定相物质多为惰性无机化合物，所以可以使用一些腐蚀性显色试剂，这是纸层析法所不能比拟的。另外，薄层色谱的分离容量较纸色谱大，因此可以用作微量物质分离的制备色谱。

作为一种纯化手段，薄层层析色谱与气相色谱、液相色谱、红外光谱等方法联用常见于报道，利用薄层层析色谱做为样品的前处理方法，操作简单，应用广泛。

近年来，食品中农药残留、兽药残留和非法食品添加剂等成为食品安全领域的热点话题。在检测手段上，针对这些问题发展了一系列检测方法，而这些方法中样品的前处理成为一个影响分析质量的重要环节。为提高仪器灵敏度，减少干扰，固相萃取以及凝胶色谱净化等技术在这些样品前处理中被广泛应用并取得极大的发展。然而，尽管当前固相萃取技术已经成为一项相当成熟的样品前处理技术，但本身也一些不足。如需要一定量的溶剂分别完成净化、洗脱的过程，耗材成本较高、溶剂消耗量大、操作过程较为繁琐等。因此，将薄层色谱引入这些样品前处理过程中，可以通过较为简单的薄层层析过程对样品提取液进行净化，以减少溶剂的消耗，极大的降低了检测成本。薄层层析色谱兼备了柱色谱和纸色谱的优点，既能适用于少量样品(几到几百微克，最少甚至0.01微克)的分离，调整吸附层固相物质的量，也可分离较大量的样品，最多可达500毫克。

现有技术中的样品前处理方法中所使用的薄层层析板，不能方便地随意裁减和卷曲折叠，得到样品恒定比移值的条带进行处理时，富集的目标化合物难以被完全洗脱附，不可避免受到其余位置富集物的影响，进而影响了制备效率，难以实现方便快捷的样品前处理。

发明内容

本发明提供了一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法及其应用，所要富集的待测组分能够有效集中在条带恒定比移值位置，且富集区域的色谱条带可以按需要剪切下来，用有机溶剂提取待测组分，然后用气相色谱等仪器进行定量分析，重现性好，并可同时分析多个样品，快速高效地完成对复杂样品的净化和待测物的富集。

一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，包括如下步骤：在纸基薄层层析板底部位置负载待测样品浓缩液，将纸基薄层层析板放入展开槽，加入展开剂进行薄层层析分离，剪切下恒定比移值位置的目标检测物条带，提取待测物，完成所述的样品前处理。

所述的待测物即为采用本发明的前处理方法对被检样品进行处理得到的。在固定的层析条件下，待测物在纸基薄层层析板上的比移值是恒定的，这一点可以通过预先的实验获得，在之后的前处理过程中，直接在预定位置剪切下对应部分的纸基薄层层析板(剪切下恒定比移值位置的目标检测物条带)即可。

所述的纸基薄层层析板包括纸基板和涂布在纸基板上的涂布层；所述的纸基板为至少一面覆盖有聚乙烯膜的纸；所述的涂布层涂布在纸基板的聚乙烯膜上。

所述的纸基板的厚度为0.10～0.30mm，所述的涂布层的厚度为0.20～1.00mm。

所述的涂布层采用涂布液制成，该涂布液各组分的质量百分比组成为粘合剂0.75％～7％，吸附剂12％～33.25％，水65％～85％。

所述的粘合剂为聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、淀粉中的一种或多种，可以使吸附剂牢固地涂布在纸基板上，提高层析板的机械强度。

所述的吸附剂为硅胶、硅藻土、氧化铝、硅酸镁、硅酸钙、碳酸锌或玻璃粉，吸附剂的粒径为150目～200目，可以提高分离效果。

该纸基薄层层析板可以通过将粘合剂配制成水溶液形式，过滤去除不溶物后，加入吸附剂，搅拌均匀，成糊状，采用手工或者机器涂布的方式涂布在所述的纸基板上，烘干后再裁切成需要的形状而制成，并且根据不同行业的需要还可以在涂布液中加入一些添加剂，例如煅制石膏、荧光指示剂等。

纸基薄层层析板的固相物质可以根据待处理样品的种类进行选择，纸基薄层层析板的大小规格根据待处理样品的量来选择。

所述的纸基薄层层析板可以剪切。由于以纸作为基板，该纸基薄层层析板可以任意剪切，因此，目标检测物的条带可以方便的剪切下来，放入有机溶剂中提取，然后进行色谱定量分析，避免了其他位置处组分的干扰，操作方便，分离效能有效提高，对被测组分获得满意的回收率。

所述的纸基薄层层析板可以卷曲折叠。由于以纸作为基板，该纸基薄层层析板可以任意弯曲折叠，携带方便，适用于曲面等特殊情况下样品的处理。

所述的纸基薄层层析板宽度可以依据展开槽大小进行调节。由于纸基薄层层析板可以任意剪切，因此，可以依据展开槽的大小或者被处理样品浓缩液的量，剪切出合适宽度的纸基薄层层析板进行样品薄层层析，适应性更强，且操作更方便。

所述的展开槽可以是普通的展开缸也可以是多个底部连接相通的卡槽。卡槽的数目依据样品的量而定，通常选择2～10个，如果样品的量很大，可以选择10个以上以满足分离要求。

所述的薄层层析分离在密封体系下完成，所述的密闭体系可以通过在展开槽上部加盖实现。

所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法可以同时处理多个样品。可以通过在多个同等规格的纸基薄层层析板相同位置处负载不同待测样品浓缩液，将纸基薄层层析板放入展开槽，加入展开剂同时进行薄层层析分离，剪切下恒定比移值位置的目标检测物条带，提取待测物，完成样品前处理，提高了分离的效率，减少了分离过程中所用展开剂、温度等条件差异对分离效果的影响，对检测样品有非常好的平行性。

利用本发明方法进行样品前处理之后，后续的色谱等检测分离手段均采用现有技术。另外就样品本身而言，为现有技术中可以利用薄层层析以及后续检测仪器进行分析的各类样品。

本发明还提供了一种样品检测方法，将样品利用本发明所述的前处理方法进行处理，得到所述的待测物，然后利用气相色谱、液相色谱、质谱联用或红外光谱等检测手段对所述的待测物进行定量分析。

本发明提供的一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，由于所采用的纸基薄层层析板可以任意裁和卷曲折叠，可以根据待处理的样品量方便地裁成某一规格，批处理样品时，同时进行薄层层析分离，避免了分次处理过程中层析条件差异对分离结果的影响，具有很好的平行性，适应不同数量样品的处理。同时，可以将待测物恒定比移值位置的条带剪切下来，进行后续的提取及色谱分析，避免其余位置富集物的干扰，使分析过程操作简单，分离高效。分离过程中展开剂的需要量相对较少，分离过程可以在较短时间内完成，所使用的纸基薄层层析板价廉易得，整个处理过程环保高效，经济实用。

具体实施方式

制备例1

称取1.0g羧甲基纤维素纳，溶于100ml热水中，在磁力搅拌下使其全部溶解，再过滤去除不溶物后，加入粒径为200目的硅胶20g，继续搅拌均匀，得到涂布液，待用。将正面有聚乙烯膜的纸基板平放在平台上，再将一部分涂布液倒在纸基板的上边缘，用玻璃棒或者刮刀将涂布液均匀的涂布在纸基板上。纸基板的厚度为0.20mm，干燥后涂布层的厚度为0.30mm。将薄层层析板在110℃环境中活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱中备用，将制得的薄层层析板裁切为5cm×10cm的薄层层析板。

实施例1

称取3份均匀土壤样品各10.0g，分别加入100毫升正己烷∶丙酮以索氏抽提法回流提取，提取液均移入旋转蒸发瓶中浓缩至0.5毫升。各取浓缩液0.1毫升在点样区均匀负载在3块制备例1中得到的5cm×10cm的纸基薄层层析板(硅胶G型)距底部边缘1cm处，溶剂吹干后，将点样完成的纸基薄层层析板放入展开缸(槽)的卡槽中，以正己烷∶乙醚(体积比为50∶10)混合溶剂进行层析分离。待层析分离完成后，剪切下各薄层层析板上目标待测物的条带，各放入5毫升试管中，均加入正己烷∶乙醚(体积比为50∶10)混合溶剂5毫升，超声提取5分钟后取出纸基条带。将提取液试管置于氮吹仪上以氮气流均吹至0.5毫升以下，再以正己烷分别定容至0.5毫升，采用气相色谱-ECD检测器检测土壤中的有机氯类化合物。

实施例2

分别称取菠菜、小青菜、黄瓜各20.0g，每个样品平行3份试验。切碎后各加入30毫升乙腈以均质器均质匀浆，再加入5克氯化钠、5克硫酸镁再次均质，离心分离后，取上清液15毫升过无水硫酸钠层，移入旋转蒸发瓶中浓缩至0.5毫升。将浓缩液0.1毫升在点样区均匀点样在制备例1中得到的5cm×10cm的纸基薄层层析板(硅胶G型)底部边缘1cm处，溶剂吹干后，将点样完成的纸基薄层层析板放入展开缸(槽)的9个卡槽，以体积比为1∶1的苯∶乙醇混合溶剂进行层析分离。待层析分离完成后，剪切下各薄层层析板上目标待测物有机磷的条带，放入5毫升试管中，加入丙酮/二氯甲烷(V∶V＝1∶1)5毫升，超声提取5分钟后取出纸基条带。将提取液置于氮吹仪上以氮气流吹至0.5毫升以下，以丙酮定容至0.5毫升，采用气相色谱检测有机磷。

实施例3

称取3份汽水各50.0g于100毫升烧杯中，加热驱除二氧化碳。称取3份粉碎的奶糖各10.0g，用乙醇-氨溶液溶解，再沉淀蛋白，取滤液。称取3份粉碎的蛋糕各10.0g，加少许海砂混匀，热风风干，加石油醚去脂肪后，用乙醇-氨溶液溶解再沉淀蛋白，取滤液。三种样品的处理液用聚酰胺粉吸附其中的色素，再用乙醇-氨溶液溶解全部色素，收集全部溶解液，并与水浴上驱氨蒸至近干，将浓缩液0.1毫升在点样区均匀点样在制备例1中得到的5cm×10cm的纸基薄层层析板底部边缘1cm处，溶剂吹干后，将点样完成的纸基薄层层析板进行放入展开缸(槽)的9个卡槽，同时进行层析分离。待层析分离完成，剪切下各薄层板上颜色接近的条带，插入5毫升试管中，加4毫升水，超声提取5分钟后取出纸基条带，以水定容至5毫升，采用高效液相色谱检测合成色素。

Claims (8)

1.一种基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：在纸基薄层层析板底部位置负载待测样品浓缩液，将纸基薄层层析板放入展开槽，加入展开剂进行薄层层析分离，剪切下恒定比移值位置的目标检测物条带，提取待测物，完成所述的样品前处理。

2.如权利要求1所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，所述的纸基薄层层析板包括纸基板和涂布在纸基板上的涂布层；所述的纸基板为至少一面覆盖有聚乙烯膜的纸；所述的涂布层涂布在纸基板的聚乙烯膜上。

3.如权利要求2所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，所述的涂布层由涂布液制成，该涂布液各组分的质量百分比组成为粘合剂0.75％～7％，吸附剂12％～33.25％，水65％～85％。

4.如权利要求2所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，所述的粘合剂为聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、淀粉中的一种或多种。

5.如权利要求2所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，所述的吸附剂为硅胶、硅藻土、氧化铝、硅酸镁、硅酸钙、碳酸锌或玻璃粉。

6.如权利要求1所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，所述的薄层层析分离在密封体系下完成。

7.如权利要求1所述的基于纸基薄层层析板的样品前处理方法，其特征在于，在纸基薄层层析板底部位置以点方式或者以条带方式完成待测样品的浓缩液上样。

8.一种样品检测方法，其特征在于，将样品利用权利要求1～7任一项所述的前处理方法进行处理，得到所述的待测物，然后对所述的待测物进行定量分析。