CN115856145A

CN115856145A - 一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法

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Publication number: CN115856145A
Application number: CN202211642298.7A
Authority: CN
Inventors: 刘婷; 莫秀芬; 刘彪; 刘铭恒; 潘梅; 蒋文晗
Original assignee: Guilin Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Guilin Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2022-12-20
Filing date: 2022-12-20
Publication date: 2023-03-28

Abstract

本发明公开了一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法，属于药物分析技术领域。本发明所述方法包括：1)配制泊沙康唑对照品溶液，配制时对照品用稀释剂溶解并稀释；2)配制供试品溶液，配制时供试品用稀释剂溶解并稀释；3)用高效液相色谱检测对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，流动相由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按49～55：44～50：0.1～2的体积比组成；4)根据供试品溶液的色谱图和泊沙康唑对照品溶液的色谱图，确定试品溶液中手性异构体的限度；以上步骤中涉及的稀释剂与流动相的组成相同。本发明所述方法能够有效分离泊沙康唑及其手性异构体，且灵敏度和准确度理想的。

Description

一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法

技术领域

本发明涉及一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

泊沙康唑(posaconazole)是伊曲康唑的衍生物，为第二代三唑类抗真菌药物，原研产品由美国默沙东制药研制。泊沙康唑含有4个手性中心，除泊沙康唑外，还有15个手性异构体。含手性因素的化学药物的异构体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异。据文献报道，泊沙康唑的手性异构体的疗效不如泊沙康唑或具有一定毒性，考虑到用药的安全性和有效性，需要严格控制泊沙康唑中手性异构体的含量。

泊沙康唑的肠溶片剂型和注射液剂型已被列入我国第一批鼓励仿制药品目录建议清单。目前，《中华人民共和国药典》中还未有该产品的检验分析方法。经检索发现，现有技术多采用高效液相色谱检测泊沙康唑中手性异构体的含量。如公布号为CN106442807A的发明专利，公开了一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，该方法采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，流动相A为二元流动相，流动相B为三元流动相。该发明中确定的色谱条件虽可以较好地分离泊沙康唑及其手性异构体，但其流动相为双流动相，而且组成相对较为复杂。又如公布号为CN112903857A的发明专利，公开了一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法，包括以下步骤：步骤一，配制系统适用性溶液；步骤二，配制供试品溶液；步骤三，配置对照溶液；步骤四，设置色谱条件；步骤五，系统适用性要求；步骤六，检测方法；步骤七，数据对比计算，供试品溶液的色谱图中如有与杂质保留时间一致的色谱峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较。该发明采用硅胶表面涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱以及三元单流动相的色谱条件，虽能够较好地分离泊沙康唑及其对映异构体，但其灵敏度和准确度不够理想。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够有效分离泊沙康唑及其手性异构体，且灵敏度和准确度理想的泊沙康唑中手性异构体的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法，包括以下步骤：

1)配制泊沙康唑对照品溶液，配制时对照品用稀释剂溶解并稀释；

2)配制供试品溶液，，配制时供试品用稀释剂溶解并稀释；

3)用高效液相色谱检测对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，流动相由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按49～55：44～50：0.1～2的体积比组成；

4)根据供试品溶液的色谱图和泊沙康唑对照品溶液的色谱图，确定试品溶液中手性异构体的限度；

以上步骤中涉及的稀释剂与流动相的组成相同。

泊沙康唑有15个手性异构体，采用本发明所述方法至少可以有效分离PSK-E、PSK-DS-2和PSK-DS-9三种手性异构体中的一种或两种以上的组合，所述PSK-E、PSK-DS-2和PSK-DS-9三种手性异构体的结构分别如下：

作为优选，所述的流动相由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按52：48：0.1的体积比组成，所述的稀释剂由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按52：48：0.1的体积比组成。

作为优选，高效液相色谱检测时的进样体积为5～15μL，流动相流速为0.4～0.6mL，柱温为22～32℃，检测波长为254～265nm。进一步优选进样体积为10μL，流动相流速为0.5mL，柱温为27℃，检测波长为262nm。

作为优选，上述步骤1)中，在配制泊沙康唑对照品溶液时，每1mL泊沙康唑对照品溶液含2.5～7.5μg泊沙康唑；进一步优选每1mL泊沙康唑对照品溶液含5μg泊沙康唑。

作为优选，上述步骤2)中，在配制供试品溶液时，每1mL供试品溶液含2.5mg泊沙康唑。本发明中可以是以泊沙康唑肠溶片或泊沙康唑注射液为供试品。

根据本发明提供的高效液相色谱条件，本领域技术人员可以选择适宜的计算方法计算泊沙康唑含量和其手性异构体的限度，所述计算方法包括但不限于内标法、外标法。优选外标法，进一步采用加校正因子(RRF，也称相对响应因子)的外标法。

本发明的一些实施例采用泊沙康唑主成分为对照品的外标法确定手性异构体的限定(相对于使用多个杂质对照品的外标法可以节约对照品和人工成本)，具体方法如下：

a)配制流动相和稀释剂，备用；其中流动相由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按52：48：0.1的体积比组成，稀释剂的组成与流动相相同；

b)配制泊沙康唑对照品溶液：取泊沙康唑对照品适量，加稀释剂溶解并稀释制成每1mL含泊沙康唑5μg的溶液，作为泊沙康唑对照品溶液；

c)配制供试品溶液：取泊沙康唑肠溶片适量或泊沙康唑注射液适量，置于容量瓶中，加入适量稀释剂，超声，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液；

d)配制系统适应性溶液：是取泊沙康唑和手性异构体适量，用稀释剂溶解并稀释制成每1mL分别含泊沙康唑2.5mg、手性异构体各5μg的溶液，以该溶液作为系统适用性溶液；

e)在系统适应性通过后，分别取上述制备的泊沙康唑对照品溶液和供试品溶液10μL注入高效液相色谱检测系统中，完成泊沙康唑中手性异构体的检测。

其中高效液相色谱条件如下：

采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，以流动相进行洗脱。高效液相色谱检测时的进样体积为10μL，流动相流速为0.5mL，柱温为27℃，检测波长为262nm。

f)根据步骤e)检测的色谱结果，采用加校正因子的外标法计算手性异构体杂质含量。其中，杂质手性异构体PSK-E的RRF＝0.99，杂质手性异构体PSK-DS-2的RRF＝0.99，杂质手性异构体PSK-DS-9的RRF＝0.98。

试验结果表明，本发明选用的色谱条件能较好地分离主成分及其异构体，方法简便易行，流动相组成简单，能实现在同一色谱条件下检测至少3个异构体的总杂限度，更好地监控泊沙康唑原料药的质量，达到质量控制的目的。

附图说明

图1为本发明所述方法中使用的空白溶剂的高效液相色谱图。

图2为本发明所述方法中使用的空白辅料的高效液相色谱图。

图3为本发明所述方法中使用的系统适应性溶液的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

1.溶液配制

1.1流动相的配制

量取二氯甲烷520mL，异丙醇480mL，二乙胺1mL，混匀，即得。

1.2稀释剂(空白溶液)的配制

以流动相作为稀释剂(空白溶液)。

1.3空白辅料溶液的配制

称取空白辅料约673mg，置50mL量瓶中，加入适量稀释剂，超声20min，期间每隔5min振摇一次，冷却至室温后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，以4000rpm的转速离心10min，取上清液，即为空白辅料溶液。

1.4系统适应性溶液的配制

手性异构体杂质储备液：分别称取PSK-E杂质、PSK-DS-2杂质和PSK-DS-9各2.5mg，置50mL量瓶中，加入适量稀释剂，超声溶解后用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液：精密称取泊沙康唑对照品约50mg置于20mL量瓶中，加入适量稀释剂，超声溶解，加入手性杂质储备液2mL，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

1.5泊沙康唑对照品溶液的配制

泊沙康唑对照品贮备液：精密称取泊沙康唑对照品约25mg，置于100mL量瓶中，加入适量稀释剂，超声溶解后用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

泊沙康唑对照品溶液：精密量取泊沙康唑对照品贮备液2mL，置于100mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

1.6供试品溶液的配制

精密称取泊沙康唑肠溶片粉末适量(约含125mg泊沙康唑原料药)，置于50mL量瓶中，加适量稀释剂超声20min，期间每隔5min振摇一次，冷却至室温后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，以4000rpm转速离心10min，取上清液，即为供试品溶液。

2.测试流程

2.1仪器与色谱参数

2.2进样程序

当系统适用性通过后可进行样品分析，进样序列示例如下。

序号	样品名称	进样次数
			1	空白溶液(流动相)	≥1
2	系统适用性溶液	1
			3	对照品溶液	6
4	供试品溶液	1
			5	对照品溶液(回标)	1

2.3保留时间和相对保留时间

序号	峰名称	保留时间(分钟)	相对保留时间(RRT)
				1	PSK-E杂质	22.888	0.60
2	PSK-DS-9杂质	26.312	0.69
				3	泊沙康唑	37.967	1.00
4	PSK-DS-2杂质	52.368	1.38

2.4数据处理

a.对于系统适用性溶液，仅考虑泊沙康唑和手性异构体杂质。

b.对于供试品溶液，只对供试品溶液色谱图中有与系统适用性溶液色谱图中杂质PSK-E、PSK-DS-2、PSK-DS-9保留时间一致的色谱峰积分。

3.计算

其中：

AT：供试品溶液中手性异构体杂质峰面积；

AS：泊沙康唑对照品溶液初始6针泊沙康唑峰面积的平均值；

WS：泊沙康唑对照品重量，mg；

WT：供试品重量，mg；

AW：片子平均片重，mg；

P：对照品含量，％；

LC：标示量，mg；

RRF：相对响应因子；备注：PSK-E杂质的RRF＝0.99；PSK-DS-2杂质的RRF＝0.99；PSK-DS-9杂质的RRF＝0.98。

4.结果

经计算，各手性异构体杂质的含量如下：

PSK-E含量	PSK-DS-9含量	PSK-DS-2含量
			0.041％	＜LOQ(0.006％)	未检出

实施例2：方法的专属性、检测限与定量限、准确度

采用实施例1中相同的溶液体系配制及检测系统和色谱条件评估本发明所述方法的专属性、检测限与定量限以及准确度，结果如下：

1.专属性

本发明所述方法中使用空白溶剂、空白辅料以及的系统适应性溶液的高效液相色谱图分别如图1至图3所示。对比图1至图3可知：空白溶剂、空白辅料均不干扰本品检测，专属性满足要求。系统适用性溶液中泊沙康唑峰与PSK-DS-2峰之间的分离度大于1.5，系统适用性满足要求，表明本发明所述方法专属性良好。

2.检测限定量限

结论：三种手性异构体杂质的检测限浓度和定量限浓度均远小于限度浓度，说明本发明所述方法的灵敏度较高，能够满足检测要求。

3.准确度(回收率)

结论：在50％、100％、150％限度水平的回收率溶液中三种手性异构体杂质回收率均在90～110％之间，均符合中国药典可接受标准规定，说明本发明所述方法能够准确检出样品中的异构体杂质。

Claims

1.一种泊沙康唑中手性异构体的检测方法，包括以下步骤：

2)配制供试品溶液，配制时供试品用稀释剂溶解并稀释；

以上步骤中涉及的稀释剂与流动相的组成相同。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征是，所述的手性异构体为PSK-E、PSK-DS-2和PSK-DS-9中的一种或两种以上的组合，它们的结构如下：

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征是，所述流动相由二氯甲烷、异丙醇和二乙胺按52：48：0.1的体积比组成。

4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征是，高效液相色谱检测时的进样体积为5～15μL，流动相流速为0.4～0.6mL，柱温为22～32℃，检测波长为254～265nm。

5.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征是，步骤1)中，在配制泊沙康唑对照品溶液时，每1mL泊沙康唑对照品溶液含2.5～7.5μg泊沙康唑。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征是，在配制泊沙康唑对照品溶液时，每1mL泊沙康唑对照品溶液含5μg泊沙康唑。

7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征是，步骤2)中，在配制供试品溶液时，每1mL供试品溶液含2.5mg泊沙康唑。