CN111426779B - 一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂有关物质的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂有关物质的测定方法。本发明的测定方法采用高效液相色谱法进行，并筛选合适的HPLC的色谱条件，可在同一条件下同时测定对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂中的右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3‑羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G共10种有关物质，能实现多种杂质的有效分离，大大节省了检测时间和检测成本。本发明方法可用于含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂产品的质量研究和质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂有关物质的测定方法。
背景技术
感冒作为一种常见的呼吸道疾病，其表现的症状主要为：头疼、发热、咳嗽、鼻塞、流鼻涕、过敏等。通常用于治疗这些症状的药物包括：解热镇痛药(对乙酰氨基酚)、镇咳药(氢溴酸右美沙芬)、减充血药(盐酸去氧肾上腺素)。
含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊是一种采用明胶制成的复方口服固体制剂，其制备方法如中国专利201310360549.7所述，目前对于该产品的研究仍有待改进。现有技术中还没有能够同时测定含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊有关物质的方法。
发明内容
为解决上述现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种能够同时测定含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊有关物质的方法，该方法能实现多种杂质的有效分离和测定，大大节省了检测时间和检测成本。
为实现其目的，本发明采取的技术方案为：
一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂有关物质的测定方法，所述有关物质包括右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G，上述各杂质的结构式具体如下表所示：
所述方法是采用高效液相色谱法进行的，具体包括以下步骤：
(1)配制含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂样品溶液，所述含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂样品溶液包括供试品溶液、对照品溶液、灵敏度溶液和系统适应性溶液；
(2)样品检测：分别将对照品溶液、系统适应性溶液、灵敏度溶液和供试品溶液注入色谱仪，采用有机相和水相作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；
其中，色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，150×4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
流动相：有机相为含冰乙酸的乙腈，水相为含辛烷磺酸钠的乙酸铵水溶液；
进样量：8μL；
流速：0.8mL/min,1.0mL/min；
检测波长：200nm～400nm；
梯度洗脱的程序如下：
0min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
15min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
21min时流动相为：88体积％水相+12体积％有机相，流速为1.0mL/min；
28min时流动相为：88体积％水相+12体积％有机相，流速为1.0mL/min；
45min时流动相为：67体积％水相+33体积％有机相，流速为1.0mL/min；
53.5min时流动相为：67体积％水相+33体积％有机相，流速为1.0mL/min；
54min时流动相为：62体积％水相+38体积％有机相，流速为1.0mL/min；
65min时流动相为：62体积％水相+38体积％有机相，流速为1.0mL/min；
65.1min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
80min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min。
本领域技术人员应当理解，HPLC的色谱条件，尤其是色谱柱的类型、流动相的组成以及流速都会显著影响HPLC法确定供试液中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素有关物质的准确性。发明人通过实验发现，采用上述特定的HPLC条件，HPLC图谱中在各已知杂质及对乙酰氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬出峰时间处没有明显干扰，对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素与最近的杂质峰均具有较好的分离度。同时，发明人还发现，当采用其它HPLC条件时，可能会无法有效地同时采集对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的特征峰，从而无法准确地基于HPLC图谱中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的峰面积确定供试液中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的有关物质。
优选地，所述供试品溶液的制备方法为：精密称取含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂，置于容器中，加入稀释液并加热，振摇，溶解后稀释至刻度，摇匀，过滤，得到供试品溶液，所述供试品溶液中对乙酰氨基酚的浓度为13mg/mL，盐酸去氧肾上腺素的浓度为200μg/mL，氢溴酸右美沙芬的浓度为400μg/mL。
优选地，所述对照品溶液的制备方法为：精密称取对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素和4μg氢溴酸右美沙芬的对照品溶液。
优选地，所述灵敏度溶液的制备方法为：精密称取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含6.5μg对乙酰氨基酚、0.1μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和0.2μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的灵敏度溶液。
优选地，所述系统适应性溶液的制备方法为：精密称取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和4μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的系统适应性溶液。
优选地，所述的稀释液由0.01mol/L盐酸溶液和甲醇按照体积比80:20组成。发明人通过实验发现，以含20体积％甲醇的0.01mol/L盐酸溶液作为稀释液，不仅能有效溶解药物制剂中的对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素，还能溶解4种氢溴酸右美沙芬有关物质和6种盐酸去氧肾上腺素有关物质，而且易于制备。
需要说明的是，本申请的氢溴酸右美沙芬有关物质是指右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ和右美沙芬杂质Ⅳ，盐酸去氧肾上腺素有关物质是指去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G。因此，应当理解，比如上述制备的每1mL灵敏度溶液中盐酸去氧肾上腺素、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G的总质量为0.1μg；氢溴酸右美沙芬、右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ和右美沙芬杂质Ⅳ的总质量为0.2μg。比如，每1mL系统适应性溶液中盐酸去氧肾上腺素、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G的总质量为2μg；氢溴酸右美沙芬、右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ和右美沙芬杂质Ⅳ的总质量为4μg优选地，有机相由乙腈和冰醋酸按照体积比100:1组成。
优选地，水相由5mM的乙酸铵水溶液和辛烷磺酸钠按质量比100:0.1组成，pH值为4.8±0.2，既可提高对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度，又不影响氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度。
本发明中所述药物制剂的有关物质的计算公式为：
式中，Aspl表示杂质样品中杂质峰面积。；
Astd表示工作对照的某个待测物峰平均峰面积；
Cstd表示某个待测物对照的浓度；
Vspl表示配制样品的容量瓶体积数；
Nspl表示样品的称样粒数；
LC表示某个待测物的标识量。
发明人通过研究发现，各物质(对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质)在较大的含量范围内都存在明显的线性关系，采用该公式可以计算一定浓度范围内的有关物质。
优选地，所述药物制剂为软胶囊剂。
本发明的有益效果为：本发明的测定方法可在同一条件下同时测定对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂中的右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G共10种有关物质，能实现多种杂质的有效分离，大大节省了检测时间和检测成本。本发明方法可用于含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂产品的质量研究和质量控制。
附图说明
图1为本发明对照品溶液的液相色谱图；
图2为本发明系统适应性的液相色谱图；
图3为本发明供试品溶液的液相色谱图；
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，本发明通过下列实施例进一步说明。应理解，本发明实施例仅用于说明本发明的技术效果，而非用于限制本发明的保护范围。实施例中，所用方法如无特别说明，均为常规方法。同时，实施例中，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊有关物质的测定方法。下面结合具体实施例对本发明的有关物质测定方法进行详细描述，本发明采用高效液相色谱法进行测定，具体包括如下步骤：
一、溶液的制备
(1)供试品溶液的制备
利用稀释液对待测含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊进行处理，以获得供试品液液。本发明实施例中，所述稀释液为含20体积％甲醇的0.01mol/L盐酸溶液。发明人经过实验验证，含20体积％甲醇的0.01N盐酸溶液能够有效地使软胶囊中的对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素以及有关物质溶解。
(2)灵敏度溶液的制备
取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含6.5μg对乙酰氨基酚、0.1μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和0.2μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的灵敏度溶液。
(3)系统适应性溶液的制备
取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和4μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的系统适应性溶液。
(4)对照品溶液的制备
取对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素和4μg氢溴酸右美沙芬的对照品溶液。
二、检测方法的建立
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，150×4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
流动相：有机相由乙腈和冰醋酸按照体积比100:1组成，水相由5mM的乙酸铵水溶液和辛烷磺酸钠按质量比100:0.1组成；
进样量：8μL；
流速：0.8mL/min,1.0mL/min；
检测波长：200nm～400nm；
采用梯度洗脱，洗脱程序如表1所示，其中流动相比例均为体积百分比：
表1洗脱程序
| 时间 | 水相 | 有机相 | 流速 |
| 0min | 95％ | 5％ | 0.8mL/min |
| 15min | 95％ | 5％ | 0.8mL/min |
| 21min | 88％ | 12％ | 1.0mL/min |
| 28min | 88％ | 12％ | 1.0mL/min |
| 45min | 67％ | 33％ | 1.0mL/min |
| 53.5min | 67％ | 33％ | 1.0mL/min |
| 54min | 62％ | 38％ | 1.0mL/min |
| 65min | 62％ | 38％ | 1.0mL/min |
| 65.1min | 95％ | 5％ | 0.8mL/min |
| 80min | 95％ | 5％ | 0.8mL/min |
发明人通过实验发现，采用上述HPLC条件，能够准确地基于HPLC图谱中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的峰面积确定供试液中的有关物质，并且具有较好的精密度。另外，发明人还发现，当采用其他HPLC条件时，可能会无法有效地同时采集对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的特征峰，从而无法准确地基于HPLC图谱中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的峰面积确定供试液中的有关物质。
三、确定有关物质
在确定所得到供试品液中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素及其有关物质的峰面积后，确定待测含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊的有关物质。
通过下式确定待测含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊的有关物质：
式中，
Aspl表示杂质样品中杂质峰面积。；
Astd表示工作对照的某个待测物峰平均峰面积；
Cstd表示某个待测物对照的浓度；
Vspl表示配制样品的容量瓶体积数；
Nspl表示样品的称样粒数；
LC表示某个待测物的标识量；
RRFimp表示已知杂质的相对响应因子。对于未知杂质，则取RRF为1。
实验例1：
检测方法的建立：
一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊有关物质的检测方法，该方法是采用高效液相色谱法进行的。包括下述步骤：
配制含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊样品溶液，所述含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的软胶囊样品溶液包括供试品溶液、对照品溶液、系统适应性溶液和灵敏度溶液。
供试品溶液：取胶囊适量，置一定体积容器中，加入稀释液,加热使囊壳崩解，振摇，溶解后稀释至刻度，摇匀，滤过，得到供试品溶液，供试品溶液中对乙酰氨基酚的浓度为13mg/mL，盐酸去氧肾上腺素的浓度为200μg/mL，氢溴酸右美沙芬的浓度为400μg/mL；
对照品溶液：取对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素和4μg氢溴酸右美沙芬的对照品溶液。
系统适应性溶液：取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和4μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的系统适应性溶液。
灵敏度溶液：取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬适量适量，置一定体积容器中，加入稀释液，超声使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含6.5μg对乙酰氨基酚、0.1μg盐酸去氧肾上腺素及其有关物质和0.2μg氢溴酸右美沙芬及其有关物质的灵敏度溶液。
所述色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，150×4.6mm，5μm；
(2)将步骤(1)所得样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；
流动相：有机相由乙腈和冰醋酸按照体积比100:1组成，水相由5mM的乙酸铵水溶液，以及辛烷磺酸钠按质量比100:0.1组成；
采用梯度洗脱，洗脱程序如表1所示，其中流动相比例均为体积百分比：
(3)根据紫外吸收情况，流速0.8mL/min,1.0mL/min；检测波长为270nm，柱温：30℃，进样体积：8μL
实验例2：
本实验例验证了本发明所用色谱条件的可行性。具体地，采用上述实验方法的色谱条件分别测定了对照品溶液，系统适应性溶液和供试溶液，从图1～3和表2-3可看出，采用本发明的HPLC条件采集得到的系统适应性溶液中三个主成分峰及其有关物质峰之间具有良好的分离度。采用本发明的HPLC条件采集得到的供试溶液中三个主成分峰附近均没有其他干扰峰，分离度好。
表2系统适应性试验结果
表3供试品溶液试验结果
| 峰名称 | 保留时间 | 峰面积 | 分离度 |
| Phenphrine Related Compound G | 4.714 | 374807 | / |
| unspecified 1 | 4.938 | 2479556 | 1.0 |
| unspecified 2 | 5.823 | 4326227 | 4.5 |
| unspecified 3 | 6.857 | 1789877 | 5.3 |
| unspecified 4 | 6.954 | 1299989 | / |
| unspecified 5 | 7.305 | 97012384 | / |
| Acetaminophen | 8.342 | 133507987513 | 2.9 |
| unspecified 6 | 18.794 | 13235229 | 19.9 |
| unspecified 7 | 22.219 | 866511 | 8.1 |
| unspecified 8 | 23.369 | 18333790 | 4.2 |
| unspecified 9 | 25.636 | 735164 | 9.0 |
| unspecified 10 | 26.962 | 10258868 | 4.2 |
| unspecified 11 | 29.452 | 983878 | 6.5 |
| Isoquinoline | 30.714 | 1446419 | 3.1 |
| unspecified 12 | 31.514 | 18366864 | 2.0 |
| unspecified 13 | 32.827 | 745337 | 3.6 |
| Phenphrine Related Compound F | 33.506 | 1991965 | 2.0 |
| Norphenphrine | 34.284 | 1304998 | 2.5 |
| unspecified 14 | 35.071 | 675108 | 3.3 |
| unspecified 15 | 35.432 | 1012395 | 1.7 |
| Phenphrine | 35.992 | 798923692 | 2.4 |
| unspecified 16 | 36.617 | 1196575 | 2.4 |
| unspecified 17 | 37.195 | 394115 | 2.5 |
| Phenphrine Related Compound C | 37.731 | 543515 | 3.1 |
| unspecified 18 | 37.997 | 321861 | 1.2 |
| unspecified 19 | 38.187 | 478634 | 0.8 |
| unspecified 20 | 38.954 | 503607 | 3.8 |
| unspecified 21 | 39.190 | 619429 | 1.0 |
| unspecified 22 | 39.413 | 215046 | 0.9 |
| unspecified 23 | 39.642 | 275173 | 0.8 |
| unspecified 24 | 40.391 | 287455 | 2.4 |
| unspecified 25 | 40.656 | 617715 | 1.0 |
| unspecified 26 | 42.027 | 1735025 | 6.7 |
| Dextromethorphan | 53.162 | 752603565 | 24.3 |
| Dextromethorphan Impurity N-O | 56.210 | 45880400 | 6.5 |
实验例3：
本实验例确定了“对乙酰氨基酚”、“氢溴酸右美沙芬”、“盐酸去氧肾上腺素”、“右美沙芬杂质Ⅰ”、“右美沙芬杂质Ⅱ”、“右美沙芬杂质Ⅲ”、“右美沙芬杂质Ⅳ”、“去甲肾上腺素”、“去氧肾上腺素有关物质F”、“4，6二醇异喹啉类似物”、“去氧肾上腺素有关物质C”、“3-羟基苯甲醛”和“去氧肾上腺素有关物质G”十三种成分的线性范围，结果如表4所示。
表4 13种成分的线性范围
| 成分 | 线性范围 | 标准曲线 | R |
| 盐酸去氧肾上腺素 | 0.1074-4.2957μg/mL | y＝3985061.1962x+8243.5054 | 1.00 |
| 对乙酰氨基酚 | 6.1506-246.0257μg/mL | y＝11147357.6129x+10969043.0764 | 1.00 |
| 氢溴酸右美沙芬 | 0.1068-4.2705μg/mL | y＝3496487.7209x+295052.9448 | 1.00 |
| 右美沙芬杂质Ⅰ | 0.2016-8.0637μg/mL | y＝2213122.5952x-88755.8090 | 1.00 |
| 右美沙芬杂质Ⅱ | 0.2078-8.3105μg/mL | y＝1496227.0302x-18045.8059 | 1.00 |
| 右美沙芬杂质Ⅲ | 0.2148-8.5902μg/mL | y＝6418529.0947x-41589.8051 | 1.00 |
| 右美沙芬杂质Ⅳ | 0.2074-8.2953μg/mL | y＝1762153.3723x+471131.2118 | 1.00 |
| 去甲肾上腺素 | 0.1033-4.1320μg/mL | y＝4243977.3586x+61089.4106 | 1.00 |
| 去氧肾上腺素有关物质F | 0.1064-4.2560μg/mL | y＝3946628.7154x+43705.3111 | 1.00 |
| 4，6二醇异喹啉类似物 | 0.1013-4.0507μg/mL | y＝3276958.2380x-80163.3888 | 1.00 |
| 去氧肾上腺素有关物质C | 0.1013-4.0539μg/mL | y＝7051780.8109x+41811.0183 | 1.00 |
| 3-羟基苯甲醛 | 0.1080-4.3200μg/mL | y＝12687655.5599x-42547.7672 | 1.00 |
| 去氧肾上腺素有关物质G | 0.0964-3.8559μg/mL | y＝4235393.7207x-47825.3313 | 1.00 |
实验例4：
本实例中，对不同进样量进行比较，确定最优的进样量。按照上述实验例1方法获得灵敏度溶液，测定进样量5μL和8μL下各成分的信噪比，结果如表5所示。
表5不同进样量下各成分的信噪比
从表5可看出，灵敏度溶液在进样量5μL下不能满足要求(＞10)，8μL可以满足要求(＞10)。结合表5结果，在满足灵敏度要求以及对色谱柱的保护，不再提高进样量，因此本发明最终选用8μL作为进样量的体积。
实验例5：
本实例中，对流动相中水相不同pH进行比较，确定最优的流动相中水相的pH。按照上述实验例1方法获得系统适应性溶液，测定不同流动相中水相pH4.5、pH 4.8和pH 5.1下各成分的分离度，结果如表6所示。
表6不同流动相pH 4.5、pH 4.8和pH 5.1下各成分的分离度
从表6可看出，pH 4.5条件下氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度小于pH 4.8，pH 5.1条件下对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度小于pH 4.8。结合表6，流动相中水相pH4.8的条件下，既提高对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度，又不影响氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度，因此本发明最终选用4.8作为流动相中水相的pH值。
实验例6：
本实例中，对不同柱温进行比较，确定最优的柱温箱的温度。按照上述实验例1方法获得系统适应性溶液，测定不同柱温箱25℃、30℃和35℃下各成分的分离度，结果如表7所示。
表7不同柱温下25℃、30℃和35℃下各成分的分离度
从表7可看出，柱温箱35℃条件下氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度小于柱温箱30℃，柱温箱25℃条件下对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度小于柱温箱30℃。结合表7结果，柱温箱30℃的条件下，既提高对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度，又不影响氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度，因此本发明最终选用30℃作为柱温箱的温度值。
实验例7：
本实例中，对流动相不同初始比例进行比较，从而确定最优的流动相的初始比例。按照上述实验例1方法获得系统适应性溶液，测定不同流动相初始体积比例94：6、95：5和95.5：4.5下各成分的分离度，结果如表8所示。
表8不同流动相初始比例(水相：有机相)下各成分的分离度
从表8可看出，流动相初始比例94：6条件下各成分的分离度均小于流动相初始比例95：5，与流动相初始比例95：5相比，流动相初始比例95.5：4.5条件下虽然提高对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度，但降低氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度和去氧肾上腺素有关物质G与最近的杂质峰分离度。结合表8结果，流动相初始比例95：5的条件下，既提高氢溴酸右美沙芬与最近的杂质峰分离度和去氧肾上腺素有关物质G与最近的杂质峰分离度，又不影响对乙酰氨基酚与最近的杂质峰分离度，因此本发明最终选用水相：有机相＝95：5作为流动相的初始比例。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述有关物质包括右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛和去氧肾上腺素有关物质G，所述方法是采用高效液相色谱法进行的，包括以下步骤：
(1)配制含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂样品溶液，所述含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂样品溶液包括供试品溶液、对照品溶液、灵敏度溶液和系统适应性溶液；
(2)样品检测：分别将对照品溶液、系统适应性溶液、灵敏度溶液和供试品溶液注入色谱仪，采用有机相和水相作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；
其中，色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，150×4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
流动相：有机相为含冰乙酸的乙腈，水相为含辛烷磺酸钠的乙酸铵水溶液；
进样量：8μL；
流速：0.8mL/min,1.0mL/min；
检测波长：200nm～400nm；
梯度洗脱的程序如下：
0min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
15min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
21min时流动相为：88体积％水相+12体积％有机相，流速为1.0mL/min；
28min时流动相为：88体积％水相+12体积％有机相，流速为1.0mL/min；
45min时流动相为：67体积％水相+33体积％有机相，流速为1.0mL/min；
53.5min时流动相为：67体积％水相+33体积％有机相，流速为1.0mL/min；
54min时流动相为：62体积％水相+38体积％有机相，流速为1.0mL/min；
65min时流动相为：62体积％水相+38体积％有机相，流速为1.0mL/min；
65.1min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
80min时流动相为：95体积％水相+5体积％有机相，流速为0.8mL/min；
所述右美沙芬杂质Ⅰ为3-甲氧基吗啡喃对映异构体，结构式为：
所述右美沙芬杂质Ⅱ为17-甲基吗啡喃-3-醇对映异构体，结构式为：
所述右美沙芬杂质Ⅲ为3-甲氧基-17-甲基吗啡喃-10-酮对映异构体，结构式为：
所述右美沙芬杂质Ⅳ为右美沙芬氮氧化物，结构式为：
所述去氧肾上腺素有关物质F为(R)-2-Methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-4,8-diol hydrochloride monohydrate；结构式为：
所述4，6二醇异喹啉类似物为2-Methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-4,6-diol；结构式为：
所述去氧肾上腺素有关物质C为(1-(3-Hydroxyphenyl)-2-(methylamino)ethan-1-one hydrochloride)；结构式为：
所述去氧肾上腺素有关物质G为(R)-N-(2-Hydroxy-2-(3-hydroxyphenyl)ethyl)-N-methylglycine；结构式为：
2.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：精密称取含对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬和盐酸去氧肾上腺素的药物制剂，置于容器中，加入稀释液并加热，振摇，溶解后稀释至刻度，摇匀，过滤，得到供试品溶液，所述供试品溶液中对乙酰氨基酚的浓度为13mg/mL，盐酸去氧肾上腺素的浓度为200μg/mL，氢溴酸右美沙芬的浓度为400μg/mL。
3.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为：精密称取对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到每1mL中含130μg对乙酰氨基酚、2μg盐酸去氧肾上腺素和4μg氢溴酸右美沙芬的对照品溶液。
4.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述灵敏度溶液的制备方法为：精密称取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到灵敏度溶液。
5.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述系统适应性溶液的制备方法为：精密称取右美沙芬杂质Ⅰ、右美沙芬杂质Ⅱ、右美沙芬杂质Ⅲ、右美沙芬杂质Ⅳ、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素有关物质F、4，6二醇异喹啉类似物、去氧肾上腺素有关物质C、3-羟基苯甲醛、去氧肾上腺素有关物质G、对乙酰胺氨基酚、盐酸去氧肾上腺素和氢溴酸右美沙芬，置于容器中，加入稀释液，超声溶解后稀释至刻度，摇匀，得到系统适应性溶液。
6.如权利要求2-5任一项所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述的稀释液由0.01mol/L的盐酸溶液和甲醇按照体积比80:20组成。
7.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述有机相由乙腈和冰醋酸按照体积比100:1组成。
8.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述水相由5mM的乙酸铵水溶液和辛烷磺酸钠按质量比100:0.1组成，pH值为4.8±0.2。
9.如权利要求1所述的药物制剂有关物质的测定方法，其特征在于，所述药物制剂为软胶囊剂。
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