CN107064327A - 一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法 - Google Patents

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Abstract

一种应用于分析领域中检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法，该检测方法包括如下步骤：色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱，粒径5μm；柱温：30℃～40℃；流速：1.3ml/min～1.7ml/min；检测波长：210nm、250nm；进样量：10μl～25μl；流动相：磷酸盐缓冲液和甲醇。该发明采用HPLC法进行检测，通过该方法检测具有试剂易得、操作简便、时间短、精密度高、检测成本低等优点。

Description

一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法
技术领域
本发明涉及药物分析领域中的一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法。
背景技术
复方甘草片，英文名为Compound Liquorice Tablets，本品为棕色片；有特臭，味甜，易吸潮。复方甘草片收载于《中国药典》2015年版二部，主要由甘草浸膏粉、阿片粉、樟脑、八角茴香油、苯甲酸钠等组成，是目前治疗上呼吸道感染、急性支气管炎等疾病所致咳嗽的常用药。其中，甘草浸膏粉为保护性镇咳祛痰剂；阿片粉有较强镇咳作用；樟脑及八角茴香油能刺激支气管黏膜，反射性地增加腺体分泌，稀释痰液，使痰易于咳出；苯甲酸钠为防腐剂。上述成分组成复方制剂，有镇咳、祛痰、消炎的协同作用。因复方甘草片毒副作用小、价格低廉，深受广大患者青睐，是居家常备的药品之一。《中国药典》(2015年版)中复方甘草片功效成分吗啡及甘草酸分别采用两个完全不同的液相色谱系统进行检测，其中吗啡测定时，样品首先在固相萃取柱提取后，于辛烷基硅烷键合硅胶柱检测，该方法操作复杂、精密度低、耗时长、成本高，因此，研制开发一种复方甘草片含量的检测方法一直是亟待解决的新课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复方甘草片含量的检测方法，该方法采用HPLC法(浓度、梯度淋洗、变波长法)进行检测，该方法具有试剂易得、操作简便、时间短、精密度高、检测成本低等优点。
本发明的目的是这样实现的：一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法，该检测方法包括如下步骤：
(1)色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，规格250×4.6mm，5μm
柱温：30℃～40℃
流速：1.3ml/min～1.7ml/min
紫外检测器波长：210nm、250nm
进样量：10μl～25μl
流动相：磷酸盐缓冲液和乙腈
(2)磷酸盐缓冲液的制备：
取磷酸二氢钾6.8g，加水适量溶解，加入庚烷磺酸钠1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液调pH至4.9±0.1，用水稀释至1000ml；
(3)稀释剂的制备：
取50ml冰醋酸，加水至500ml，混匀，加入500ml甲醇，摇匀，即得；
(4)供试品溶液的制备：
取本品适量，精密称定，研细，精密称取约1片量，置50ml量瓶中，加稀释剂适量，超声30分钟，取出，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(5)对照品溶液的制备：
精密称取吗啡对照品10mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为吗啡对照品溶液；精密称取甘草酸铵对照品15mg，置100ml量瓶中，精密加入吗啡对照品溶液10ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(6)测定方法：
精密量取对照品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，重复5次，记录色谱图，吗啡峰及甘草酸峰的理论板数均不得低于2000，吗啡峰及甘草酸峰面积的相对标准偏差均应≤2.0％，甘草酸与相邻色谱峰的分离度应大于1.5；精密量取供试品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；
(7)计算公式
式中：
A吗啡对：对照品溶液中吗啡峰面积；
A吗啡样：供试品溶液中吗啡峰面积；
W吗啡对：吗啡对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，g；
P吗啡：吗啡对照品的纯度，％；
式中：
A甘草酸对：对照品溶液中甘草酸峰面积；
A甘草酸样：供试品溶液中甘草酸峰面积；
W甘草酸对：甘草酸铵对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，mg；
P甘草酸：甘草酸铵对照品的纯度，％。
所述十八烷基硅烷键合硅胶柱选自SUPERIOREX MG C18柱；所述测定方法中流动相磷酸盐缓冲液和乙腈采用浓度、梯度淋洗、变波长法：所述浓度、梯度淋洗、变波长法为如下步骤，洗脱开始后0-4分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm；洗脱开始后4-4.01分钟，磷酸盐缓冲液由83％到73％，乙腈由17％到27％，波长250nm；洗脱开始后4.01-28分钟，磷酸盐缓冲液73％，乙腈27％，波长250nm；洗脱开始后28-28.01分钟，磷酸盐缓冲液由73％到50％，乙腈由27％到50％，波长250nm；洗脱开始后28.01-47分钟，磷酸盐缓冲液50％，乙腈50％，波长250nm；洗脱开始后47-47.01分钟，磷酸盐缓冲液由50％到83％，乙腈由50％到17％，波长210nm；洗脱开始后47.01-65分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm。
本发明的要点在于它的检测方法，采用HPLC(浓度、梯度淋洗、变波长法)进行检测。
一种复方含量的检测方法与现有技术相比，具有该方法采用HPLC法进行检测，通过该方法检测复方甘草片的含量，有试剂易得、操作简便、每批检测时间由2天缩短为一天、精密度高、检测成本低等优点，将广泛地应用于药物分析领域中。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。
图1是本发明的对照品溶液HPLC图谱。
图2是本发明的供试品溶液HPLC图谱。
具体实施方式
以下实例将有助于对本发明的了解，但这些实例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
实施例一
1.色谱条件
色谱柱：SUPERIOREX(资生堂)MG C18 250×4.6mm 5μm，柱温：30℃～40℃，流速：1.3ml/min～1.7ml/min，检测波长：210nm、250nm，进样量：10μl～25μl。
2.溶液制备
2.1流动相：磷酸盐缓冲液和乙腈
2.2磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g，加水适量溶解，加入庚烷磺酸钠1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液调pH至4.9±0.1，用水稀释至1000ml。
2.3稀释剂：取50ml冰醋酸，加水至500ml，混匀，加入500ml甲醇，摇匀，即得。
2.4供试品溶液：取本品20片，精密称定，研细，精密称取0.15881g、0.15675g、0.15656g量，分别置50ml量瓶中，加稀释剂适量，超声30分钟，取出，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.5对照品溶液：精密称取吗啡对照品10.37mg、10.05mg，分别置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为吗啡对照品溶液；精密称取甘草酸铵对照品13.27mg、13.89mg，分别置100ml量瓶中，分别精密加入吗啡对照品溶液10ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
3.测定方法
采用流动相磷酸盐缓冲液和乙腈浓度、梯度淋洗、变波长法；
洗脱开始后0-4分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm；洗脱开始后4-4.01分钟，磷酸盐缓冲液83％→73％，乙腈17％→27％，波长250nm；洗脱开始后4.01-28分钟，磷酸盐缓冲液73％，乙腈27％，波长250nm；洗脱开始后28-28.01分钟，磷酸盐缓冲液73％→50％，乙腈27％→50％，波长250nm；洗脱开始后28.01-47分钟，磷酸盐缓冲液50％，乙腈50％，波长250nm；洗脱开始后47-47.01分钟，磷酸盐缓冲液50％→83％，乙腈50％→17％，波长210nm；洗脱开始后47.01-65分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm。
精密量取对照品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，重复5次，记录色谱图，吗啡峰及甘草酸峰的理论板数均不低于2000，吗啡峰及甘草酸峰面积的相对标准偏差均≤2.0％，甘草酸与相邻色谱峰的分离度符合要求。精密量取供试品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
对照品溶液1连续5针的峰面积为：
对照品溶液2的峰面积为：
A1吗啡＝320270 A2吗啡＝321171 A吗啡对2平均＝320720
A1甘草酸＝762024 A2甘草酸＝764080 A甘草酸对2平均＝763052
4.样品测定
取供试液注入液相色谱仪，记录图谱，各重复一次。
供试品1的吗啡峰面积：A1吗啡＝257095 A2吗啡＝257478 A吗啡1平均＝257286
供试品1的甘草酸峰面积：A1甘草酸＝987465 A2甘草酸＝987276 A甘草酸1平均＝987370
供试品2的吗啡峰面积：A1吗啡＝255210 A2吗啡＝255193 A吗啡2平均＝255202
供试品2的甘草酸峰面积：A1甘草酸＝974100 A2甘草酸＝975284 A甘草酸2平均＝974692
供试品3的吗啡峰面积：A1吗啡＝269060 A2吗啡＝269248 A吗啡3平均＝269154
供试品3的甘草酸峰面积：A1甘草酸＝1036876 A2甘草酸＝1036960 A甘草酸3平均＝1036918
5.计算结果
式中：
A吗啡对：对照品溶液中吗啡峰面积；
A吗啡样：供试品溶液中吗啡峰面积；
W吗啡对：吗啡对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，g；
P吗啡：吗啡对照品的纯度，％。
式中：
A甘草酸对：对照品溶液中甘草酸峰面积；
A甘草酸样：供试品溶液中甘草酸峰面积；
W甘草酸对：甘草酸铵对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，g；
P甘草酸：甘草酸铵对照品的纯度，％。
供试品1：
供试品2：
供试品3：
实施例二浓度、梯度淋洗时流动相中成分配比的选择
其他条件同实施例一，采用流动相磷酸盐缓冲液和乙腈浓度、梯度淋洗、变波长法；
洗脱开始后0-4分钟，磷酸盐缓冲液86％，乙腈14％，波长210nm；洗脱开始后4-4.01分钟，磷酸盐缓冲液86％→73％，乙腈14％→27％，波长250nm；洗脱开始后4.01-28分钟，磷酸盐缓冲液73％，乙腈27％，波长250nm；洗脱开始后28-28.01分钟，磷酸盐缓冲液73％→50％，乙腈27％→50％，波长250nm；洗脱开始后28.01-47分钟，磷酸盐缓冲液50％，乙腈50％，波长250nm；洗脱开始后47-47.01分钟，磷酸盐缓冲液50％→86％，乙腈50％→14％，波长210nm；洗脱开始后47.01-65分钟，磷酸盐缓冲液86％，乙腈14％，波长210nm。
供试品溶液中吗啡的色谱峰受相邻杂质峰干扰，无法进行检测。
实施例三流动相pH值的选择
其他条件同实施例一，采用磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相。磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g，加水适量溶解，加入庚烷磺酸钠1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液调pH至5.1，用水稀释至1000ml。
供试品溶液中甘草酸的色谱峰受相邻杂质峰干扰，无法进行检测。

Claims (3)

1.一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法，其特征在于：该检测方法包括如下步骤：
(1)色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，规格250×4.6mm，5μm
柱温：30℃～40℃
流速：1.3ml/min～1.7ml/min
紫外检测器波长：210nm、250nm
进样量：10μl～25μl
流动相：磷酸盐缓冲液和乙腈
(2)磷酸盐缓冲液的制备：
取磷酸二氢钾6.8g，加水适量溶解，加入庚烷磺酸钠1.1g、三乙胺2ml，用20％磷酸溶液调pH至4.9±0.1，用水稀释至1000ml；
(3)稀释剂的制备：
取50ml冰醋酸，加水至500ml，混匀，加入500ml甲醇，摇匀，即得；
(4)供试品溶液的制备：
取本品适量，精密称定，研细，精密称取约1片量，置50ml量瓶中，加稀释剂适量，超声30分钟，取出，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(5)对照品溶液的制备：
精密称取吗啡对照品10mg，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为吗啡对照品溶液；精密称取甘草酸铵对照品15mg，置100ml量瓶中，精密加入吗啡对照品溶液10ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(6)测定方法：
精密量取对照品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，重复5次，记录色谱图，吗啡峰及甘草酸峰的理论板数均不得低于2000，吗啡峰及甘草酸峰面积的相对标准偏差均应≤2.0％，甘草酸与相邻色谱峰的分离度应大于1.5；精密量取供试品溶液10μl～25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；
(7)计算公式
式中：
A吗啡对：对照品溶液中吗啡峰面积；
A吗啡样：供试品溶液中吗啡峰面积；
W吗啡对：吗啡对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，g；
P吗啡：吗啡对照品的纯度，％；
吗啡含量，单位mg；
式中：
A甘草酸对：对照品溶液中甘草酸峰面积；
A甘草酸样：供试品溶液中甘草酸峰面积；
W甘草酸对：甘草酸铵对照品的重量，mg；
W供：供试品的重量，mg；
W平均片重：复方甘草片的平均片重，mg；
P甘草酸：甘草酸铵对照品的纯度，％；
甘草酸含量，单位mg。
2.根据权利要求1所述的一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶柱选自SUPERIOREX MG C18柱。
3.根据权利要求1所述的一种检测复方甘草片中吗啡和甘草酸含量的方法，其特征在于：所述测定方法中流动相磷酸盐缓冲液和乙腈采用浓度、梯度淋洗、变波长法：所述浓度、梯度淋洗、变波长法为如下步骤，洗脱开始后0-4分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm；洗脱开始后4-4.01分钟，磷酸盐缓冲液由83％到73％，乙腈由17％到27％，波长250nm；洗脱开始后4.01-28分钟，磷酸盐缓冲液73％，乙腈27％，波长250nm；洗脱开始后28-28.01分钟，磷酸盐缓冲液由73％到50％，乙腈由27％到50％，波长250nm；洗脱开始后28.01-47分钟，磷酸盐缓冲液50％，乙腈50％，波长250nm；洗脱开始后47-47.01分钟，磷酸盐缓冲液由50％到83％，乙腈由50％到17％，波长210nm；洗脱开始后47.01-65分钟，磷酸盐缓冲液83％，乙腈17％，波长210nm。
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