CN110964215A - 一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法及所得产品 - Google Patents

一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法及所得产品 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法及所得产品，将透明质酸或其盐与左旋聚乳酸先制成海绵状复合物，然后再将海绵状复合物溶解后在不同的温度下进行两次酸性交联，得最终产品。海绵状复合物极易吸水，降低了原料的混匀难度，缩短了混匀所需时间，可提高透明质酸在溶液中的浓度、降低交联剂的使用，也可以减少透明质酸在酸性环境下的降解，提高了安全性。通过交联将左旋聚乳酸微粒锁定在凝胶内部，减少了因颗粒聚集造成的不良反应，减少了在推注过程中因左旋聚乳酸微粒在凝胶间活动而造成的针头部位堆积阻塞情况的发生，并且酸性条件下交联减少了左旋聚乳酸的降解，更好的维持了左旋聚乳酸颗粒的稳定性。

Description

一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法 及所得产品
技术领域
本领域涉及一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法及所得产品，具体涉及一种安全性高、稳定性好、注射容易、聚乳酸微粒不易发生移位和堆积、不良反应少的注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法及所得产品。
背景技术
透明质酸(Hyaluronic acid，HA)是由N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸组成的一种高分子多糖，广泛存在于动物体和微生物体中，无种属差异性和免疫原性，具有很高的生物安全性，是备受关注的新型生物医学材料，具有很高的医用价值。
近年来，在微整形手术中，软组织填充手术越来越受欢迎，主要是填充皱纹、填平凹陷部位、修正面部轮廓。在所用的软组织填充剂中，透明质酸因其安全性高、生物相容性好、术后的不良反应少、注射后填充效果立即显现等优势成为国内外最常用的软组织填充剂。但透明质酸类填充剂因其自身限制，在体内的维持时间较短，仅为6-12个月。
聚乳酸(Polylactic acid，PLA)是20世纪90年代迅速发展起来的新一代可完全降解高分子材料，它是以乳酸为单体聚合而成，在人体内可以通过非酶水解缓慢降解为乳酸，最终降解为CO2和H2O。左旋聚乳酸(PLLA)作为美容注射用材料也有其独特之处。与单纯填充剂不同，它是一种可以刺激皮下胶原蛋白生长的人工合成真皮填充剂。PLLA可以引起一种异物巨细胞反应，从而导致胶原蛋白逐渐生成。随着时间的增加使真皮层增厚，填充部位完全被新生的自体组织代替，在人体内可以维持2年以上，得到一个“永久性美容”的效果。目前市售聚乳酸填充剂多为聚乳酸与透明质酸或羧甲基纤维素钠的混合冻干产品，这类产品使用时需要先用注射水混匀后使用，混合水化时间长，如果混合不充分均匀注射时可能会发生针头阻塞，并且该类填充剂中以聚乳酸为主，其注射后填充效果不能立即显现。
公开号为CN 104258470 A的专利提供了一种注射用聚乳酸微球和交联透明质酸混合凝胶的制备方法，该方法先制备交联透明质酸钠凝胶，再加入聚乳酸微球混匀制得混合凝胶。该混合凝胶的聚乳酸微球容易与凝胶分离，在注射过程中容易引起微球堆积，造成注射器针头的阻塞，给医生造成很大麻烦。同时，这种简单的混匀方式使得注射后聚乳酸微球容易发生移位和堆积，加大了皮下结节、肉芽肿的发生机率。
公开号为CN 105879124 A的专利提供了一种注射用左旋聚乳酸填充剂的制备方法，其为左旋聚乳酸与蜂巢HA、增效剂复配后的冻干产品，该填充剂中蜂巢HA含量低，作用是提高左旋聚乳酸的分散性，只有左旋聚乳酸起到美容填充作用。这类冻干产品填充机理主要是植入凹陷部位后聚乳酸微粉刺激胶原生成，注射后填充效果无法立即显现，需要通过胶原的慢慢生成来填充凹陷部位。
公开号为CN 102911380 A的专利提供了一种透明质酸与生物可降解高分子改性材料的制备方法，该方法在有机相二氯甲烷中将聚乳酸与透明质酸溶解，酸性条件下碳二亚胺(EDC) 活化后用己二酸二酰肼(ADH)交联得到不溶于水的固体颗粒，该方法制备过程中用到有机试剂和毒性物质(EDC有毒)，对后期产品纯化产生很大压力，并且所得产品并非凝胶，不是理想的注射填充材料。
公开号为CN109621003A的专利公开了一种含有微球的可注射透明质酸钠凝胶的制备方法，包括以下步骤：将透明质酸钠溶解到纯水中，得到溶液A；向溶液A中加入微球材料，均匀搅拌得到均匀分散的悬浊液B；调节悬浊液B的pH值，得到悬浊液C；向悬浊液C中加入交联剂，并均匀搅拌得到混合均匀的悬浊液D，反应一定时间后，悬浊液D中的透明质酸钠交联形成含有均匀分散微球材料的胶体E；将胶体E粉碎，得到凝胶颗粒F，通过不同目数的筛网，得到凝胶颗粒G；将凝胶颗粒G通过反复浸泡或者透析的方式，将可溶性杂质、交联剂除去，得到凝胶颗粒H；使用平衡用PBS缓冲液反复浸泡得到凝胶颗粒I；经过半脱水、灌装、灭菌步骤得到透明质酸钠凝胶。该法在微球混匀过程中需要较低的透明质酸钠溶液浓度(即溶液A的浓度低，所述溶液A的浓度为1％～15％)，这种情况下交联得到凝胶需要加入大量交联剂，对后期纯化造成压力，并且残留交联剂会对人体产生伤害；如果透明质酸钠溶液浓度高，溶液会过于粘稠，无法将微粒彻底混匀，造成凝胶中微粒不均匀现象，从而植入后容易发生肉芽肿等不良反应。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法，该方法将左旋聚乳酸和透明质酸或其盐先制成更容易溶解分散的海绵状复合物，然后将该海绵状复合物加入含交联剂的酸性环境下进行交联，原料分散快速，透明质酸或其盐在交联体系中浓度高，交联剂用量少，左旋聚乳酸微粒通过交联可以均匀且牢固的固定在凝胶中，所得产品注射过程平顺，不易发生左旋聚乳酸微粒的位移和堆积，减少了不良反应的发生。
本发明还提供了按照上述方法制得的注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶，左旋聚乳酸在复合凝胶中均匀、稳定的存在，不易发生团聚和分离，注射后不易发生位移和堆积，注射后不良反应少，且凝胶同时具备交联透明质酸凝胶与左旋聚乳酸填充剂的优点，凝胶注射后功效立即显现，且维持时间长。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)在搅拌下，向透明质酸或其盐的水溶液中加入左旋聚乳酸，超声分散，混合均匀后进行真空冷冻干燥，得到透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物；
(2)将上述透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物加入含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行第一次交联，第一次交联后改变交联温度再进行第二次交联；
(3)交联后，调节pH至中性，透析，得注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶。
进一步的，本发明选择在酸性环境下交联，以避免左旋聚乳酸的降解，但是为了降低透明质酸或其盐在酸性环境的降解，因此要尽量缩短透明质酸或其盐在酸性水溶液中的分散时间。本发明将左旋聚乳酸与透明质酸或其盐混合分散均匀，然后冻干成海绵状复合物。海绵状的结构使该复合物极易吸水，且透明质酸或其盐固定在海绵状结构中，可以更容易的在酸性水溶液中分散混合均匀，极大的降低了混匀难度，缩短了混合时间，减少了透明质酸或其盐与酸性环境的接触时间，降低了透明质酸或其盐的降解。
进一步的，步骤(1)中，透明质酸或其盐的分子量为1000-3000kDa。左旋聚乳酸的分子量为10-80kDa，左旋聚乳酸的粒径为5-80μm。所述透明质酸盐为透明质酸的钠盐、钾盐或钙盐。
进一步的，步骤(1)中，透明质酸或其盐与左旋聚乳酸的质量比为1:0.1-1:10。在此范围内，所得复合凝胶性能更佳。
进一步的，步骤(1)中，透明质酸或其盐在水溶液中的浓度没有特殊要求，只要使透明质酸或其盐与左旋聚乳酸容易混合即可，优选的可以选择较低的浓度，以便透明质酸或其盐与左旋聚乳酸的快速混匀。经过冷冻干燥后，水分被去除，产品以海绵状复合物的固体形式加入到步骤(2)中，因为该海绵状复合物吸水速度快、粘度低，因此可以提高步骤(2)的溶液中的透明质酸的总浓度，也可以降低混匀时间，减少了透明质酸在酸性环境下的降解。一般的，步骤(1)中，透明质酸或其盐在水溶液中的浓度为0.5-5wt％，优选小于等于1wt％。
进一步的，步骤(1)中，超声所用的设备为实验室常用的超声仪即可，超声的功率、超声间隔时间可以根据混合情况进行选择，将各原料分散混合均匀即可。混合均匀的溶液进行真空冷冻干燥，干燥的温度为-10～-50℃，时间为24-60h。干燥温度越低，所需干燥时间越短，干燥条件对海绵状复合物影响不大。
进一步的，步骤(2)中，通过交联将左旋聚乳酸微粒牢固且均匀的包裹在交联产物中，减少了左旋聚乳酸微粒团聚和位移情况的发生。原料采用透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物的形式加入，可以大大提高透明质酸或其盐的浓度，步骤(2)中，透明质酸或其盐的质量与酸性水溶液的质量比为1:3-10，优选为1:4-10。透明质酸或其盐浓度高，减少了交联剂的用量，提高了交联剂的利用率，降低了交联剂在最终产品中的残留，提高了产品的安全性。
进一步的，步骤(2)中，在酸性水溶液中进行交联，所述酸性水溶液为盐酸、醋酸、乳酸等酸的水溶液，优选为乳酸水溶液。酸性水溶液中酸的浓度一般为0.1-1mmol/L，优选为 0.5-1mmol/L。所用交联剂为现有技术中公开的交联剂，例如改性聚乙二醇、1,4-丁二醇二缩水甘油醚等。交联剂用量一般为步骤(1)和(2)中加入的透明质酸或其盐总质量的1％-10％，优选为2％-10％，更优选为5％-10％，最优选为5％。由于BDDE本身的毒性，为保证产品安全性在交联过程中要控制BDDE的使用量。而改性聚乙二醇交联剂本身无毒性而且无抗原性，具有良好的水溶性，制备的交联透明质酸凝胶具有很高的安全性；且其分子量大小可调节，不同的分子量和不同的活化形式，使得改性聚乙二醇交联的透明质酸凝胶具有巨大的性能调节空间，可以获得兼具高粘弹性和高内聚性的凝胶。优选的，所述改性聚乙二醇为聚乙二醇二缩水甘油醚或四臂星形聚乙二醇环氧化物。
进一步的，左旋聚乳酸微粒在碱性环境下降解，且降解速度快。为了避免这一问题，步骤(2)选择在酸性环境下进行交联，并且通过海绵状复合物的形式提高了原料的混合速度，降低了透明质酸在酸性环境中的存在时间，降低了透明质酸的降解。步骤(2)的交联分为两次，分别在不同温度下进行。第一次交联的温度为40-60℃，时间为2-10h，第二次交联的温度为20-50℃，时间为2-24h。这两次交联的温度不同，优选的，第一次交联的温度大于第二次交联的温度。通过交联剂的长链分子与高低温两次交联的方式，控制凝胶的交联化程度，改变了复合凝胶的单一性状，使所得复合凝胶具有强粘弹性和高内聚性，植入皮下后减少了因肌肉运动引起的凝胶分散和移位的发生。
优选的，步骤(2)中，第一次交联的温度为40-50℃，第二次交联的温度为20-30℃。
进一步的，步骤(3)中，交联反应后，用碱调节pH至中性，然后透析除去交联剂等成分，对复合凝胶进行纯化，得到最终的产品。透析可以在中性的磷酸盐缓冲液中进行，透析的次数和透析的时间可以根据需要进行调整。通过控制透析的时间，可以调整最终的复合凝胶中透明质酸或左旋聚乳酸的浓度。本发明透析所得的最终复合凝胶中，透明质酸或其盐的含量为0.5-3wt％，左旋聚乳酸的含量为0.1-5wt％。
本发明所得复合凝胶性能优异，具有高的粘弹性和内聚性，左旋聚乳酸微粒均匀且牢固的分散在复合凝胶中，植入皮下后减少了复合凝胶分散和位移的发生，减少了皮下结节和肉芽肿等不良反应的发生。并且该复合凝胶中同时存在左旋聚乳酸微粒填充剂和交联透明质酸凝胶，兼具这两者的优势，该复合凝胶植入后填充效果立即显现，同时随着交联透明质酸凝胶的降解，聚乳酸微粒逐渐从凝胶中暴露，刺激机体胶原生成，延续填充效果，进而延长了维持时间。因此，按照上述方法得到的该注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶产品也在保护范围之内。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明复合凝胶同时具备聚乳酸填充剂和交联透明质酸钠凝胶的特性，维持时间长，植入后填充效果立即显现，并且聚乳酸微粒分布均匀，减少了普通聚乳酸填充剂容易出现的皮下结节和肉芽肿等不良反应的发生。
2、本发明采用先将左旋聚乳酸与透明质酸或其盐制成海绵状复合物，然后将该复合物加入含交联剂的酸性水溶液中进行交联的步骤，极大降低了左旋聚乳酸微粒与透明质酸或其盐的混匀难度，缩短了混匀时间，减少了因长时间处于酸性条件下透明质酸钠的降解。此外，因为原料混合难度的降低，交联可以在高浓度透明质酸或其盐的情况下进行，减少了交联剂的使用，降低了交联剂的残留，提高了产品安全性。
3、本发明通过交联反应将左旋聚乳酸微粒固定在交联透明质酸凝胶内部，使左旋聚乳酸微粒不易分散和团聚，在推注过程中，减少了因左旋聚乳酸微粒在凝胶间活动而造成针头部位堆积阻塞情况的发生。
4、本发明在酸性条件下交联，与传统的透明质酸碱性交联方式不同，酸性条件交联减少了聚乳酸的降解，使得聚乳酸微粒可以保持原始形状和大小，更好的维持了左旋聚乳酸微粒的稳定性，降低了因聚乳酸微粒过小引起的红肿等不良反应的发生概率。
5、本发明通过交联剂的优化以及高低温两次交联的配合，改变了复合凝胶的单一性状，通过交联条件的调整可以控制所得复合凝胶的内聚性和粘弹性，植入皮下后减少了因肌肉运动引起的凝胶分散和移位的发生。
附图说明
图1透明质酸钠-左旋聚乳酸海绵状复合物。
图2实施例2-1的凝胶推注过程中随着推注过程的进行推挤力的变化情况。
图3对比例1的凝胶推注过程中随着推注过程的进行推挤力的变化情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，下述说明仅是示例性的，仅为了更好地解释本发明，并不对本发明保护范围形成限制。
下述实施例中，所用透明质酸钠的分子量均为2000kDa，所用左旋聚乳酸微粒的分子量均为50kDa，微粒平均粒径范围均为30-50μm。
实施例1
本实施例主要考察两次加入的总透明质酸钠与乳酸溶液的配比对注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶(简称复合凝胶，下同)性能的影响，方法如下：
1、将5g透明质酸钠溶解在500g水中，混匀后在搅拌下加入5g左旋聚乳酸，超声分散，混合均匀后进行真空冷冻干燥，温度为-20～-30℃，时间为48h，得到透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物。
2、取20g、25g、50g 0.5mmol/L的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为透明质酸钠质量的5％，搅拌均匀后加入上述制备的10g透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物，混合0.5h至均匀，然后放入40℃水浴中交联2h；然后转移至25℃水浴中交联24h。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶，复合凝胶中透明质酸钠的含量为2％，左旋聚乳酸的含量为2％。各复合凝胶编号如下表1所示。
表1
凝胶编号 透明质酸钠与乳酸的质量比
1-1 1:4
1-2 1:5
1-3 1:10
实施例2
本实施例主要考察交联温度及交联时间对复合凝胶性能的影响，制备方法如下：
1、同实施例1。
2、取25g 0.5mmol/L的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为透明质酸钠质量的5％，搅拌均匀后加入上述制备的10g透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物，混合0.5h至均匀，然后进行第一次交联，然后变化温度进行第二次交联。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到复合凝胶，复合凝胶中透明质酸钠的含量为2％，左旋聚乳酸的含量为2％。
交联的条件以及所得各复合凝胶的编号如下表2所示。
表2
凝胶编号 步骤(1)交联温度/时间 步骤(2)交联温度/时间
2-1 50℃/2h 25℃/2h
2-2 50℃/2h 25℃/12h
2-3 50℃/2h 25℃/24h
2-4 50℃/4h 25℃/2h
2-5 50℃/4h 25℃/12h
2-6 50℃/4h 25℃/24h
2-7 40℃/5h 20℃/2h
2-8 40℃/5h 20℃/12h
2-9 40℃/5h 20℃/24h
2-10 40℃/10h 20℃/2h
2-11 40℃/10h 20℃/12h
2-12 40℃/10h 20℃/24h
实施例3
本实施例主要考察交联剂用量对复合凝胶性能的影响。
1、同实施例1。
2、取25g 0.5mmol/L的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂分别为透明质酸钠质量的1％、2％、5％、10％，搅拌均匀后加入上述制备的10g透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物，混合0.5h至均匀，然后放入50℃水浴中交联2h；然后转移至25℃水浴中交联24h。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到复合凝胶，复合凝胶中透明质酸钠的含量为2％，左旋聚乳酸的含量为2％。
各复合凝胶编号如下表3所示。
表3
凝胶编号 交联剂用量
3-1 1％
3-2 2％
3-3 5％
3-4 10％
实施例4
本实施例主要考察乳酸溶液浓度对复合凝胶性能的影响：
1、同实施例1。
2、取25g浓度分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为透明质酸钠质量的5％，搅拌均匀后加入上述制备的10g透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物，混合0.5h至均匀，然后放入50℃水浴中交联2h；然后转移至25℃水浴中交联24h。交联完成后调节pH至中性，在pH 为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到复合凝胶，复合凝胶中透明质酸钠的含量为2％，左旋聚乳酸的含量为2％。
各复合凝胶编号如下表4所示。
表4
凝胶编号 乳酸浓度(mmol/L)
4-1 0.1
4-2 0.2
4-3 0.5
4-4 1.0
实施例5
本实施例主要考察透明质酸与左旋聚乳酸的质量比对原料混合时间的影响：
1、将5g透明质酸钠溶解在500g水中，混匀后在搅拌下分别加入0.5g、50g的左旋聚乳酸，超声分散，混合均匀后进行真空冷冻干燥，温度为-20～-30℃，时间为48h，得到透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物。
2、取25g浓度为0.5mmol/L的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为透明质酸钠质量的5％，搅拌均匀后加入上述制备的透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物，混合均匀后放入50℃水浴中交联2h；然后转移至25℃水浴中交联2h。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到复合凝胶。
各复合凝胶编号如下表5所示。
表5
Figure BDA0002337442390000081
对比例1
左旋聚乳酸微粒在透明质酸交联凝胶制备完成后与之混合，步骤为：取25g0.5mmol/L 的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为透明质酸钠质量的5％，搅拌均匀后，加入5g透明质酸钠混匀，放入50℃水浴中进行第一次交联交联2h，然后改变25℃水浴中第二次交联，交联2h。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到凝胶，向凝胶中加入5g聚乳酸微粒搅拌混匀，即得左旋聚乳酸 -交联透明质酸钠凝胶。
对比例2
凝胶的制备方法同实施例2-1，不同之处在于：用25g 1wt％的NaOH溶液代替乳酸溶液，进行碱性交联。
对比例3
左旋聚乳酸微粒不以海绵状复合物的形势与透明质酸交联，步骤为：取25g0.5mmol/L 的乳酸溶液，加入交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚(分子量为500)，交联剂为总透明质酸钠质量的25％，搅拌均匀后，加入5g透明质酸钠混合1h时间，再加入5g左旋聚乳酸，混合1.5 h至均匀，放入50℃水浴中进行第一次交联，交联2h，然后在25℃水浴中第二次交联，交联2h。交联完成后调节pH至中性，在pH为中性的磷酸盐缓冲液中透析24h，得到左旋聚乳酸-交联透明质酸钠凝胶。
功效学试验
试验1：凝胶粘弹性评价
将各实施例及对比例制备的复合凝胶用Haake RS6000(赛默飞世尔(中国)公司)仪器测定粘弹性，其条件为：转子：P20 Ti；温度：25℃；Gap值：1.00mm；测定模式：振荡频率扫描CD；应力：1％；频率范围：0.01-1Hz。记录0.1Hz频率下的存储模量(G')和损耗模量(G”)。
各实施例和对比例的复合凝胶在0.1Hz下的存储模量(G')和损耗模量(G”)如下表6 所示：
表6
Figure BDA0002337442390000091
Figure BDA0002337442390000101
结果表明，随着交联剂用量的增多、交联温度的升高、交联时间的延长、总透明质酸与乳酸溶液质量比的增大，所制备的复合凝胶的存储模量(G')逐渐增大，其填充能力更强，有更好的塑形效果，通过分别改变两步交联凝胶的交联温度、交联时间可以更好地调节复合凝胶的性质，从而获得更理想的凝胶。
试验2：交联前混匀时间的比较
在交联过程中，透明质酸钠与左旋聚乳酸不同加入方式混匀所需时间的比较，如下表7 所示。
表7
凝胶编号 混匀时间
实施例2-1 30min
实施例5-1 10min
实施例5-2 50min
对比例3 2.5h
结果表明，采用加入透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物(图1)的方式能够明显的降低物料的混匀时间，由图片可以看出该海绵状复合物为疏松的中空结构，有明显的孔隙，很容易吸水并搅拌均匀。
试验3：交联完成后聚乳酸微粒降解情况
将制备的复合凝胶中加入一定浓度的透明质酸酶进行酶解，待复合凝胶水解完成后，测定聚乳酸微粒的粒径分布，考察碱性交联对聚乳酸微粒的降解，结果如下表8所示。
表8
凝胶编号 平均粒径(μm)
交联前微粒 40.332
实施例2-1 39.016
对比例2 23.028
结果表明，碱性交联后的聚乳酸颗粒明显变小，说明碱性的交联条件下聚乳酸已经明显降解。
试验4：凝胶注射器推挤力测定
将复合凝胶罐装入1mL注射器中，安装27G针头，以10mm/min的推挤速度测定。考察复合凝胶推注情况，结果如下表9所示。
表9
Figure BDA0002337442390000111
Figure BDA0002337442390000121
推注过程中，各实施例以及对比例2的产品所用力度从开始到结束都相差不大，推挤力变化小，凝胶的平均推挤力也比较小，这说明推注过程针头通畅，无堵塞情况。对比例3的产品在整个推注过程中只是在某几个地方存在力度加大的情况，平均推挤力也明显高于实施例的产品，这可能是因为左旋聚乳酸微粒不均匀，存在部分堆积现象。对比例1的产品开始的时候推注比较顺畅，但是后期所需力度较大，直接出现针头堵塞的情况。
图2和3是实施例2-1和对比例1的凝胶在推注过程中的推挤力变化情况，从图中可以看出，实施例2-1的凝胶在推注过程中推挤力平稳，推注过程顺畅稳定，没有针头堵塞情况发生，而对比例1的凝胶在推注前期推挤力平稳，变化不大，而在后期推挤力变化大，出现针头堵塞的情况。

Claims (10)

1.一种注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）在搅拌下，向透明质酸或其盐的水溶液中加入左旋聚乳酸，超声分散，混合均匀后进行真空冷冻干燥，得到透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物；
（2）将上述透明质酸-左旋聚乳酸海绵状复合物加入含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行第一次交联，第一次交联后改变交联温度再进行第二次交联；
（3）交联后，调节pH至中性，透析，得注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，透明质酸或其盐与左旋聚乳酸的质量比为1:0.1-1:10。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，真空冷冻干燥的温度为-10～-50℃，时间为24-60 h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，透明质酸或其盐的分子量为1000-3000 kDa；优选的，透明质酸盐为透明质酸的钠盐、钾盐或钙盐；优选的，步骤（1）中，左旋聚乳酸的分子量为10-80 kDa，左旋聚乳酸的粒径为5-80 μm。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：透明质酸或其盐与酸性水溶液的质量比为1:3-10，优选为1:4-10。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（2）中，酸性水溶液中酸的浓度为0.1-1 mmol/L，优选为0.5-1 mmol/L。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（2）中，交联剂用量为透明质酸或其盐总质量的1%-10%，优选为5%-10%。
8.根据权利要求1、5、6或7所述的制备方法，其特征是：步骤（2）中，第一次交联的温度为40-60℃，时间为2-10 h，第二次交联的温度为20-50℃，时间为2-24 h；优选的，第一次交联的温度大于第二次交联的温度；优选的，第一次交联的温度为40-50℃，第二次交联的温度为20-30℃。
9.根据权利要求1、5、6或7所述的制备方法，其特征是：步骤（2）中，所述交联剂为改性聚乙二醇或1,4-丁二醇二缩水甘油醚，优选为改性聚乙二醇，更优选为聚乙二醇二缩水甘油醚或四臂星形聚乙二醇环氧化物；优选的，步骤（2）中，所述酸性水溶液为盐酸水溶液、醋酸水溶液或乳酸水溶液，更优选为乳酸水溶液。
10.按照权利要求1-9中任一项所述的注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶的制备方法制得的注射用左旋聚乳酸和交联透明质酸复合凝胶；优选的，复合凝胶中透明质酸含量为0.5-3wt%，左旋聚乳酸含量为0.1-5wt%。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113081896A (zh) * 2021-05-10 2021-07-09 拉菲尔(深圳)投资咨询有限公司 一种用于面部年轻化的再生医学针剂及其应用
CN113244450A (zh) * 2021-05-31 2021-08-13 美卓(杭州)医疗科技有限公司 一种用于手部抗衰的活性填充剂及其制备方法
CN113413330A (zh) * 2021-06-29 2021-09-21 玉本妍(南京)医疗科技有限公司 一种胶原蛋白和左旋聚乳酸的复配方法及复配制剂
CN113769174A (zh) * 2021-09-16 2021-12-10 上海玮沐医疗科技有限公司 一种含左旋聚乳酸的透明质酸复合微球及其制备方法
CN115304788A (zh) * 2022-07-08 2022-11-08 浙江工业大学 一种负载聚乳酸的透明质酸水凝胶及其制备方法与应用
WO2022237901A1 (en) * 2021-05-13 2022-11-17 Shanghai Qisheng Biological Preparation Co., Ltd. Hyaluronic acid compositions containing slowly resorbable polymers
CN115920125A (zh) * 2022-11-30 2023-04-07 爱美客技术发展股份有限公司 一种复合凝胶及其制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1340080A (zh) * 1999-02-19 2002-03-13 电气化学工业株式会社 透明质酸凝胶组合物、其制造方法及含该组合物的医用材料
WO2008037171A1 (fr) * 2006-09-29 2008-04-03 Beijing Pro-Medical Biotech Research Institute Procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique en deux stades de réticulation
CN104147640A (zh) * 2013-05-16 2014-11-19 吴学森 右旋聚乳酸微纳米颗粒用作美容整形填充物及其制备方法
CN104258470A (zh) * 2014-05-13 2015-01-07 山东省医疗器械研究所 注射用聚乳酸微球和交联透明质酸混合凝胶及其制备方法
CN105879124A (zh) * 2016-04-26 2016-08-24 华熙福瑞达生物医药有限公司 一种注射用左旋聚乳酸填充剂及其制备方法
CN106589424A (zh) * 2016-12-12 2017-04-26 华熙福瑞达生物医药有限公司 一种注射用交联透明质酸凝胶及其制备方法
CN108619564A (zh) * 2017-03-18 2018-10-09 浙江臻我生物技术有限公司 一种用于皮肤填充的组合物及其制备方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1340080A (zh) * 1999-02-19 2002-03-13 电气化学工业株式会社 透明质酸凝胶组合物、其制造方法及含该组合物的医用材料
WO2008037171A1 (fr) * 2006-09-29 2008-04-03 Beijing Pro-Medical Biotech Research Institute Procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique en deux stades de réticulation
CN104147640A (zh) * 2013-05-16 2014-11-19 吴学森 右旋聚乳酸微纳米颗粒用作美容整形填充物及其制备方法
CN104258470A (zh) * 2014-05-13 2015-01-07 山东省医疗器械研究所 注射用聚乳酸微球和交联透明质酸混合凝胶及其制备方法
CN105879124A (zh) * 2016-04-26 2016-08-24 华熙福瑞达生物医药有限公司 一种注射用左旋聚乳酸填充剂及其制备方法
CN106589424A (zh) * 2016-12-12 2017-04-26 华熙福瑞达生物医药有限公司 一种注射用交联透明质酸凝胶及其制备方法
CN108619564A (zh) * 2017-03-18 2018-10-09 浙江臻我生物技术有限公司 一种用于皮肤填充的组合物及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李红梅等: "注射用聚乳酸和交联透明质酸钠凝胶的制备及性能研究", 《生物医学工程研究》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113081896A (zh) * 2021-05-10 2021-07-09 拉菲尔(深圳)投资咨询有限公司 一种用于面部年轻化的再生医学针剂及其应用
WO2022237901A1 (en) * 2021-05-13 2022-11-17 Shanghai Qisheng Biological Preparation Co., Ltd. Hyaluronic acid compositions containing slowly resorbable polymers
CN113244450A (zh) * 2021-05-31 2021-08-13 美卓(杭州)医疗科技有限公司 一种用于手部抗衰的活性填充剂及其制备方法
CN113413330A (zh) * 2021-06-29 2021-09-21 玉本妍(南京)医疗科技有限公司 一种胶原蛋白和左旋聚乳酸的复配方法及复配制剂
CN113769174A (zh) * 2021-09-16 2021-12-10 上海玮沐医疗科技有限公司 一种含左旋聚乳酸的透明质酸复合微球及其制备方法
CN115304788A (zh) * 2022-07-08 2022-11-08 浙江工业大学 一种负载聚乳酸的透明质酸水凝胶及其制备方法与应用
CN115304788B (zh) * 2022-07-08 2023-09-29 浙江工业大学 一种负载聚乳酸的透明质酸水凝胶及其制备方法与应用
CN115920125A (zh) * 2022-11-30 2023-04-07 爱美客技术发展股份有限公司 一种复合凝胶及其制备方法

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