CN110833570A - 一种三花当归灌注液的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种改进的三花当归灌注液的制备方法，本发明的提取工艺采用低温醇沉技术，可以很好地将药物中的有效成分提取出来；并且提取工艺次数少、操作简单；通过添加硼酸作为pH缓冲剂，采用溶液缓冲对平衡技术，使得产品的pH可以保持长期有效；通过本发明制备方法可以大大增强产品的稳定性。

Description

一种三花当归灌注液的制备方法
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，具体涉及应用于预防和治疗临床型奶牛乳房炎的一种三花当归灌注液的制备方法。
背景技术
奶牛乳房炎是奶牛生产中最常见、最多发的疾病之一，它主要是由病原微生物侵入乳腺组织引起的乳腺组织炎症，从而导致乳腺组织泌乳功能障碍，产奶量减少或者停乳，严重时导致乳腺组织变性失去泌乳功能。乳房炎有多种类型。如浆液性乳房炎、纤维素性乳房炎、急性脓性卡他性乳房炎、乳房脓肿、出血性乳房炎、隐性乳房炎、乳房坏疽等。若不及时进行防治，则会进一步恶化为临床型乳房炎，最直观的临床症状是：乳房红肿、结块、泌乳减少、乳房化脓。奶牛乳房炎发病率较高，由于乳房炎的发生而引起产奶量减少和产生的乳房炎奶、抗生素治疗产生的有抗奶以及严重失去泌乳能力而淘汰的奶牛等，对奶牛生产损失巨大，影响了奶牛也业的发展。据统计我国奶牛场乳房炎疾病的发病率为46%~70%，造成的经济损失可达30亿美元，且每年用于乳房炎防控经费支出约2080万美元，严重影响着我国奶牛养殖业的发展。
引起奶牛乳房炎的病因有多种因素，其中最为主要和常见的是病原菌的感染，细菌是引发奶牛乳房炎主要的病原微生物。除此之外，挤奶过程中奶牛乳房受到的物理创伤，动物机体受饲养物料、饲养方法、环境因素引起的奶牛机体的抗病能力的下降等原因都会引起奶牛乳房炎的发生。治疗奶牛乳房炎的方法主要有抗生素疗法、生物疗法和中药疗法。其中，最常用的是抗生素疗法，该疗法虽然可以快速治疗，但是长期使用抗生素会导致奶牛乳腺泌乳能力下降，还会造成严重的耐药性和药物残留，严重影响着人们的健康。
中草药富含有多种抑菌或者杀菌的活性物质，对病原菌有直接或间接的杀灭作用，具有无残留、无耐药性等多种优点，广泛应用于畜禽疾病防治。已有研究表明，中药对防治奶牛乳房炎有着低残留、刺激性小、效果好等优点。三花当归灌注液是由中药药材混制而成，具有清热解毒、活血通乳、散结消肿的功效，对牛、羊慢性乳腺炎、隐性乳腺炎有良好的治疗效果。但是，在现有的三花当归灌注液制备过程中存在有效成分难萃取提纯，成品药物难保存，稳定性差，存在变质发霉，酸碱不平衡使pH不稳定等问题。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种三花当归灌注液及其制备方法，其主要应用于预防和治疗临床型奶牛乳房炎。
为实现上述目标，本发明采用如下技术方案：
一方面，本发明提供一种三花当归灌注液，其药物组分按重量份数：蒲公英450-550份，金银花450-550份，野菊花200-300份，当归200-300份，龙脑1-5份，硼酸15-25份，无水硫酸钠15-25份，吐温80 20-40份。
作为一种三花当归灌注液的进一步优化，所述药物组分按重量份数：蒲公英490份，金银花510份，野菊花245份，当归260份，龙脑3份，硼酸20份，无水硫酸钠20份，吐温8030份。
另一方面，本发明提供一种三花当归灌注液的制备方法，包括以下步骤：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英450-550份，金银花450-550份，野菊花200-300份，当归200-300份，龙脑1-5份，硼酸15-25份，无水硫酸钠15-25份，吐温80 20-40份；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水26-34L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水13-17L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.5-0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇0.8-1.2L，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.5-0.7L，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水200-300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80-85℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80-85℃下恒温45-60min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本发明三花当归灌注液。
作为一种三花当归灌注液的制备方法的进一步优化，步骤（3）所述的乙醇的质量分数为65%。
作为一种三花当归灌注液的制备方法的进一步优化，步骤（4）所述的乙醇的质量分数为75%。
本发明各中药组分药理作用：
蒲公英：性味甘，微苦，寒；归肝、胃经；含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分；具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋等功效；用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛；可治急性乳腺炎、淋巴腺炎、胆囊炎、尿路感染等。
金银花：味甘，性寒；入肺、心、胃经；含有绿原酸、木犀草素等药理活性成分；具有清热解毒、抗炎、补虚疗风等功效；主治胀满下疾、温病发热、热毒痈疡和肿瘤等症；对急性乳腺炎、菌痢、肠炎、丹毒等病症均有一定疗效。
野菊花：性微寒，味苦、辛；归肺经、肝经；含有多种黄酮类化合物；具有祛风散热，散瘀，明目，降血压等功效。
当归：性温，味甘、辛；归心、肝、脾三经；具有补血，活血，调经止痛，润燥滑肠等功效；主治血虚诸证，月经不调，症瘕结聚，虚寒腹痛，肌肤麻木；肠燥便难，赤痢后重，痈疽疮疡，跌扑损伤等病症。
龙脑：又名冰片；气清香，味辛、凉，性微寒；归心、脾，肺经；具有开窍醒神、清热散毒、明目退翳等功效。
有益效果
三花当归灌注液的成分简单，在治疗奶牛乳房炎方面效果显著，但是，在现有的三花当归灌注液制备过程中存在有效成分难萃取提纯，成品药物难保存，稳定性差，存在变质发霉，酸碱不平衡使pH不稳定等问题。本发明提供了一种改进的三花当归灌注液的制备方法，本发明的提取工艺采用低温醇沉技术，可以很好地将药物中的有效成分提取出来；并且提取工艺次数少、操作简单；通过添加硼酸作为pH缓冲剂，采用溶液缓冲对平衡技术，使得产品的pH可以保持长期有效；通过本发明制备方法可以大大增强产品的稳定性；同时进一步对三花当归灌注液的药效机制进行研究，明确了其治疗效果和药理作用。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种三花当归灌注液，按照以下步骤制备：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英450g，金银花450g，野菊花200g，当归200g，龙脑1g，硼酸15g，无水硫酸钠15g，吐温80 20g；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水26L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水13L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.5L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇0.8L，乙醇的质量分数为65%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.5L，乙醇的质量分数为75%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水200g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80℃下恒温45min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本三花当归灌注液。
实施例2
一种三花当归灌注液，按照以下步骤制备：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英550g，金银花550g，野菊花300g，当归300g，龙脑5g，硼酸25g，无水硫酸钠25g，吐温80 40g；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水34L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水17L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇1.2L，乙醇的质量分数为65%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.7L，乙醇的质量分数为75%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80℃下恒温45min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本三花当归灌注液。
实施例3
一种三花当归灌注液，按照以下步骤制备：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英480g，金银花480g，野菊花230g，当归230g，龙脑2g，硼酸18g，无水硫酸钠18g，吐温80 25g；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水30L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水15L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇1L，乙醇的质量分数为65%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.6L，乙醇的质量分数为75%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80℃下恒温45min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本三花当归灌注液。
实施例4
一种三花当归灌注液，按照以下步骤制备：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英520g，金银花520g，野菊花270g，当归270g，龙脑4g，硼酸22g，无水硫酸钠22g，吐温80 35g；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水30L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水15L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇1L，乙醇的质量分数为65%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.6L，乙醇的质量分数为75%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80℃下恒温45min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本三花当归灌注液。
实施例5
一种三花当归灌注液，按照以下步骤制备：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英490g，金银花510g，野菊花245g，当归260g，龙脑3g，硼酸20g，无水硫酸钠20g，吐温80 30g；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水30L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水15L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇1L，乙醇的质量分数为65%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.6L，乙醇的质量分数为75%，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80℃下恒温45min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得本三花当归灌注液。
为探讨本发明的固有稳定性和了解影响其稳定性的因素，为本发明药物制剂的生产工艺、包装、贮存条件提供科学依据，故选用实施例5所制样品对本发明产品进行稳定性研究。
1.1高温试验
试验仪器：稳定性加速试验箱
试验方法：取实施例5所制样品置于试验箱内，温度设定为60℃，放置10天，分别于第5天与第10天取样，对形状、有关物质和标示量等考察项目进行测定。试验结果如表1所示。
表1实施例5样品高温试验测定结果
时间（天） 形状 有关物质 pH 含量
0 棕红色澄明液体 符合规定 6.6 1.65mg/mL
5 棕红色澄明液体 符合规定 6.6 1.65mg/mL
10 棕红色澄明液体 符合规定 6.6 1.65mg/mL
由表1结果可知，在高温条件下，本发明产品稳定性可以保持10天，在形状、pH等指标上没有变化，初步说明本发明产品具有良好的稳定性。
1.2强光照射实验
试验仪器：光照箱
试验方法：取实施例5所制样品置于敞口的称量瓶中并放于光照箱内10天，光照箱照度设置为4500lx±500lx，分别于第5天和第10天取样，对形状、有关物质和标示量等考察项目进行测定。试验结果如表2所示。
表2实施例5样品强光试验测定结果
时间（天） 形状 有关物质 pH 含量
0 棕红色澄明液体 符合规定 6.6 1.65mg/mL
5 棕红色澄明液体 符合规定 6.5 1.44mg/mL
10 棕褐色澄明液体 符合规定 6.6 1.27mg/mL
由表2结果可知，在光照条件下，前5天本发明产品还可以保持原有形状和指标，光照10天后，样品发生明显的变化，颜色由棕红色变为较深的棕褐色，药物含量也有所下降，这可能是由于光照原因使得样品中部分物质发生变质，由此可以得知，本发明产品需要避光保存。
1.3加速试验
取实施例1-3所制得样品，按市售包装，于温度为30±2℃，相对湿度为75±5%的条件下放置6个月，分别与0、1、2、3、6月末取样，按重点考察项目进行测定。结果如表3所示。
表3实施例1-3所制样品加速试验测定结果
由表3结果可知，本发明在包装条件下6个月内形状、pH、无菌情况、药物含量均符合要求，且变化不明显，说明本发明在室温条件下6个月内稳定性良好。
1.4长期试验
取实施例1-3所制得样品，按市售包装，于温度为25±2℃，相对湿度为60±5%的条件下放置24个月，分别与0、3、6、9、12、24月末取样，按重点考察项目进行测定。结果如表4所示。
表4实施例1-3所制样品长期试验测定结果
Figure 803448DEST_PATH_IMAGE002
由表4结果可知，本发明在包装条件下24个月内形状、pH、无菌情况、药物含量均符合要求，且变化不明显，说明本发明在室温条件下24个月内稳定性良好。根据影响因素试验结果，本品贮藏条件为：遮光，密封，在阴凉干燥处保存；本品有效期可定为2年。
在对本发明方法下得到的三花当归灌注液的稳定性研究的基础上，通过以下试验对该药物的药效作用也进行了研究。
2.试验内容
2.1试验材料
2.1.1试验动物
昆明白鼠，体重180-200g，购自内蒙古医科大学动物试验中心。
2.1.2试验药品
三花当归灌注液，实施例1样品；
双丁注射液，内蒙古新开元动物药业发展有限公司，批号180901；
灭菌生理盐水，山东齐都药业有限公司，批号：4B18040206；
安痛定注射液，北流市铜州药业有限公司，批号：180821；
阿司匹林肠溶片，阿斯利康制药有限公司，批号：1807012；
生理盐水，山东科伦药业有限公司，批号：D180826101。
2.1.3试验菌种
从内蒙古乌兰察市某奶牛养殖场已确诊为临床型奶牛乳房炎的病牛奶样中分离到的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌与停乳链球菌。
2.2试验方法
2.2.1体外抑菌试验
采用“牛津杯”法和试管倍比稀释法研究三花当归灌注液的体外抑菌效果。
2.2.1.1牛津杯法
将大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，无乳链球菌、停乳链球菌接种于绵羊血琼脂平板，其中各菌液浓度为1.5×108 CFU/mL，用无菌棉签均匀涂布，无菌操作方法将牛津杯放置于平板上，每个平板上放置4个牛津杯。将1.5 g/mL三花当归灌注液浓缩一倍与稀释一倍，分别至其最大浓度3 g/mL与低浓度0.75 g/mL，将不同浓度的药物用移液枪加入牛津杯，每个牛津杯200µL，37℃恒温培养18～24h后用游标卡尺测量其抑菌圈直径。每类细菌按上述方法重复3次。双丁注射液为对照组，方法同三花当归灌注液组。
2.2.1.2试管倍比稀释法
将从临床患奶牛乳房炎的病牛乳样中分离鉴定出的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌接种于营养肉汤，停乳链球菌和无乳链球菌接种于血清肉汤，37℃培养24h后，采用麦氏比浊法，用肉汤稀释菌悬液至0.5号麦氏比浊管的浊度，使细菌浓度近似为1.5×108CFU/mL，再稀释10倍，使菌液浓度近似为1.5×107 CFU/mL。取灭菌试管40支分为4组，每组10只，依次编号为1到10号。于1～9号管中各加入无菌肉汤培养基2.0mL，然后于第1管中加入1.0g/mL的“三花当归灌注液”2.0mL，混匀后用移液枪吸取2.0mL加入第2管，混匀吸取2.0 mL加入第3管，直到加到第8管吸取2.0mL舍弃，第9管为肉汤对照组，第10管加2mL三花当归灌注液作为对照。然后在每管分别加入100µL稀释好的菌液，4组细菌都分别进行上述操作。此时1～8号管中三花当归灌注液的浓度分别为500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.82、3.91 mg/mL。37 ℃培养18～24 h，肉眼仔细观察，以不发生混浊的管中药物的最低浓度就是药物的最小抑菌浓度（MIC）。
分别无菌操作吸取每组中清澈、透明的试管培养液100 µL，将大肠埃希菌组与金黄色葡萄球菌组接种于营养琼脂平板，无乳链球菌组与停乳链球菌组接种于绵羊血琼脂平板，每管涂布两个平板，在37℃的温度下用恒温培养箱培养24 h，记录所出现的单个菌落数，如果平均菌落数量小于5个，则用于涂平板的药物浓度最低值就是其最小杀菌浓度（MBC）。对照药物选用双丁注射液，方法同三花当归灌注液。
2.2.2抗炎试验
2.2.2.1试验动物分组
采用随机分组的方法将50只体重处于180-200g的昆明小鼠分为5个组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。
2.2.2.2试验给药方案
生理盐水组按0.6 mL/20g剂量，阿司匹林组按0.2 g/kg剂量灌胃小鼠，试验组按60 g/kg，30 g/kg，15 g/kg剂量灌服三花当归灌注液，连续给药3d，在最后一次灌胃给药1.5h后，每只小鼠的右侧耳廓外涂200µL二甲苯使耳廓肿胀，左耳作为对照，不涂二甲苯，30 min后用游标卡尺分别测量小鼠左右耳厚度，右耳与左耳的厚度差值即为小鼠的耳廓肿胀度。
3试验结果
3.1体外抑菌试验结果
3.1.1“牛津杯”法试验结果
表5为三花当归灌注液和双丁注射液对4种致病菌的抑菌圈直径结果，从表5中可知，三花当归灌注液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、停乳链球菌都具有一定抑菌效果，其中对于金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好。4种菌对三花当归灌注液的敏感性呈剂量依赖性。4种细菌对于双丁注射液也有一定的敏感性，敏感性略低于三花当归灌注液高、中剂量组。
表5三花当归灌注液和双丁注射液对4种致病菌的抑菌圈直径（mm）（n=3）
Figure 251747DEST_PATH_IMAGE004
3.1.2 MIC与MBC测定结果
表6为三花当归灌注液和双丁注射液对4中奶牛乳房炎致病菌的MIC和MBC的结果。由表6结果可知三花当归灌注液对于4种细菌均具有一定的抑菌与杀菌效果。对于金黄色葡萄球菌的抑菌与杀菌效果最好，达到31.25 mg/mL；对于大肠埃希菌与无乳链球菌的抑菌效果相当，最小抑菌浓度（MIC）为62.50 mg/mL，但对于无乳链球菌的杀菌作用效果优于大肠埃希菌；停乳链球菌的最小抑菌浓度（MIC）值与最小杀菌浓度（MBC）值均为125.00 mg/mL。双丁注射液也有较好的抑菌与杀菌效果，但是对于金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的抑菌作用弱于三花当归灌注液；对于大肠埃希菌和停乳链球菌的杀菌作用与三花当归灌注液相当，对于金黄色葡萄球菌与停乳链球菌的杀菌作用弱于三花当归灌注液。
表6三花当归灌注液和双丁注射液对4中奶牛乳房炎致病菌的MIC和MBC
Figure 562642DEST_PATH_IMAGE006
3.2抗炎试验结果
表7为三花当归灌注液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（n=10），即为三花当归灌注液各组抗炎试验结果。从表7结果可知，阿司匹林组、三花当归灌注液高剂量组、中剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，与生理盐水组的差异极显著（P＜0.01），高剂量组效果优于中剂量组。低剂量组的肿胀抑制作用不明显（P＞0.05），但是仍表现出11.12%的肿胀抑制率。三花当归灌注液的肿胀抑制作用呈剂量依赖关系。
表7三花当归灌注液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（n=10）
组别 剂量 肿胀度（mm） 肿胀抑制率（%）
生理盐水组 0.6 mL/20 g 0.109±0.014<sup>A</sup> 0
阿司匹林组 0.2 g/kg 0.063±0.012<sup>Ba</sup> 42.60
三花当归灌注液高剂量组 60 g/kg 0.071±0.014<sup>Ba</sup> 35.20
三花当归灌注液中剂量组 30 g/kg 0.085±0.010<sup>Bb</sup> 22.23
三花当归灌注液低剂量组 15 g/kg 0.097±0.016<sup>A</sup> 11.12
注：同列数据上标不同小写字母者表示差异显著（P＜0.05），标有不同大写字母者表示差异极显著（P＜0.01）。
4.结论
通过以上以上试验对三花当归灌注液的主要药效学进行研究发现，其抑菌抗炎作用效果显著，副作用小，在临床治疗奶牛乳房炎中能够有效发挥药理药效作用。

Claims (5)

1.一种三花当归灌注液，其特征在于，包括以下原料：蒲公英450-550份，金银花450-550份，野菊花200-300份，当归200-300份，龙脑1-5份，硼酸15-25份，无水硫酸钠15-25份，吐温80 20-40份。
2.根据权利要求1所述一种三花当归灌注液，其特征在于，所述原料的重量份数为：蒲公英490份，金银花510份，野菊花245份，当归260份，龙脑3份，硼酸20份，无水硫酸钠20份，吐温80 30份。
3.一种三花当归灌注液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）按重量份数称取各药物组分：蒲公英450-550份，金银花450-550份，野菊花200-300份，当归200-300份，龙脑1-5份，硼酸15-25份，无水硫酸钠15-25份，吐温80 20-40份；
（2）将称取的蒲公英、金银花、野菊花、当归，加入纯化水26-34L，浸泡30min后，大火煎煮120min，随后过滤，留取滤液，滤渣加入纯化水13-17L，大火煎煮60min，过滤，取滤液，并合并两次滤液浓缩至0.5-0.6L，得到过程组分A；
（3）将步骤（2）中过程组分A加入乙醇0.8-1.2L，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分B；
（4）将步骤（3）中过程组分B加入乙醇0.5-0.7L，在温度为-2-8℃下静置48小时，随后回收乙醇，得到过程组分C；
（5）将称取的吐温80和龙脑混合均匀，得到过程组分D；
（6）取注射用水200-300g，加入硼酸和无水硫酸钠混合均匀并加热至80-85℃，将步骤（4）中的过程组分C在搅拌的情况下缓慢加入并混合均匀，随后将步骤（5）中的过程组分D缓慢加入并搅拌均匀；然后加入10g活性炭，80-85℃下恒温45-60min，得到三花当归灌注液粗液；
（7）将步骤（6）中得到的三花当归灌注液粗液先抽滤，随后滤液用滤膜过滤，将所得滤液进行高温消毒、灭菌，即得三花当归灌注液。
4.根据权利要求5所述一种三花当归灌注液的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的乙醇的质量分数为65%。
5.根据权利要求5所述一种三花当归灌注液的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述的乙醇的质量分数为75%。
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