CN101618025B - 一种兽用盐酸多西环素冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种兽用盐酸多西环素冻干制剂及其制备方法，由活性成分盐酸多西环素和医用辅料组成，医用辅料是赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮，盐酸多西环素与赖氨酸的重量比为1∶0.8-1∶1、与亚硫酸钠的重量比为1∶0.01-1∶0.05和与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1∶0.05-1∶0.1。其步骤是在盐酸多西环素中按重量比取赖氨酸、亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮；将过滤后的溶液置于分装处理过的管制抗生素玻璃瓶中，压半塞，真空冷冻干燥，得到本发明所述兽用盐酸多西环素冻干制剂。本发明的制剂复溶后能够使pH值达到8-8.33，从而彻底解决了盐酸多西环素兽用药pH值较低的问题；没有毒性，并且有易于运输、储存时间长、不变质、稳定性好、肌肉注射刺激性极小，制造成本低等优点。

Description

一种兽用盐酸多西环素冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及盐酸多西环素，是一种兽用盐酸多西环素冻干制剂及其制备方法。

背景技术

盐酸多西环素属于四环素类抗生素，具有抗菌性强，耐药株少，半衰期长等特点，兽药临床用于治疗畜禽的支原体病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、布氏杆菌病、炭疽、螺旋体病、急性呼吸道感染、马鼻疽、马腺疫和猪支原体肺炎等症，其治疗效果效著。目前，盐酸多西环素兽药制剂以粉剂和片剂应用于临床，但是，这种制剂对药物的吸收较低，显效性较慢，生物利用度较低，因此，本领域技术人员近几年致力于注射液的研究，以提高盐酸多西环素的生物利用度。据已报道的资料可知，这类兽用药剂以复合药物较多，由于复合药物有些需要使用激素类药，对兽类的肉质有较大影响，另外，这类复合药物的副作用大，口服刺激性大，影响畜禽进食。故至今较难推广使用。

另有公开的注射液，其使用的有机溶剂存在毒性，使用的乙二胺四乙酸二钠注入机体后易与血液中钙离子络合，存在导致骨钙流失的危害。同时，研究表明，盐酸多西环素制的注射液，溶液的稳定性较差，易氧化变质。因此，盐酸多西环素的注射液目前尚不能做为药物产品推广使用。

虽然，人用盐酸多西环素的冻干制剂已有公开，但是，由于人的机体与兽类机体有较大差异，导致人用药物与兽用药物之间的启示差别较大，故，兽用盐酸多西环素的冻干制剂是近几年本领域技术人员研究的重要课题之一。

发明内容

本发明的目的是，提供一种兽用盐酸多西环素冻干制剂及其制备方法，使它达到具有较高的稳定性和较好的生物利用度的目的。

本发明为实现上述目的通过以下技术方案实现：一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，由活性成分盐酸多西环素和医用辅料组成，医用辅料是赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮，盐酸多西环素与赖氨酸的重量比为1∶0.8-1∶1、盐酸多西环素与亚硫酸钠的重量比为1∶0.01-1∶0.05和盐酸多西环素与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1∶0.05-1∶0.1。

所述的盐酸多西环素与赖氨酸的重量比是1∶0.9。

所述的盐酸多西环素与亚硫酸钠的重量比是1∶0.04。

所述的盐酸多西环素与聚乙烯吡咯烷酮的重量比是1∶0.08。

本发明所述的一种兽用盐酸多西环素冻干制剂的制备方法，其步骤如下：

①按权利要求1中所述的重量比取盐酸多西环素、赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮；

②将步骤①中所述赖氨酸、亚硫酸钠及聚乙烯吡咯烷酮置入无菌容器内，加入注射用水至用水总量的85％，在真空或通氮气状态下搅拌使其溶解，得到辅料溶液；

③将步骤①中所述的盐酸多西环素加入到辅料溶液中，在真空或通氮气状态下搅拌至溶解，加入注射用水至用水总量的15％，搅拌均匀；

④取样测定pH值及盐酸多西环素含量，待指标检测合格后，先用0.45μm纤维素滤膜过滤，再用0.22μm纤维素滤膜过滤，除去杂质；

⑤将步骤④中过滤后的溶液置于分装处理过的管制抗生素玻璃瓶中，每瓶装10ml，压半塞，真空冷冻干燥，得到本发明所述兽用盐酸多西环素冻干制剂。

本发明的制剂复溶后能够使pH值达到8-8.33，从而彻底解决了盐酸多西环素兽用药pH值较低的问题。虽然盐酸多西环素复合药剂pH值能达到较高值，但是，盐酸多西环素本身的pH值非常难调，即使人药的冻干剂复溶后的溶液也只能达到pH值为2.2-2.3，这不符合注射剂的酸碱度要求，较低的酸碱度在肌肉注射时刺激性较大，不能用于兽药，易导致兽类发生狂躁等症。申请人研究发现，选用赖氨酸与盐酸多西环素结合，生成可溶性的盐，从而可增加药物的溶解性，而降低刺激性，赖氨酸还可以活化淋巴细胞和吞噬细胞的酶系统，从而能够杀死细菌，起到抗炎作用。赖氨酸与盐酸多西环素组合，可以大幅降低刺激性，使pH值复溶后达到8-8.33，并可进一步提高盐酸多西环素的抗炎效果及生物利用度。本发明制剂没有毒性，并且有易于运输、储存时间长、不变质、稳定性好、肌肉注射刺激性极小，制造成本低等优点，还具有可增强机体免疫、促进动物生长的优点等。

本发明实验结果如下：

一、药效学实验

1、实验目的

本试验观察注射用盐酸多西环素制剂药效学的影响。

2、实验材料

盐酸多西环素原料，注射用盐酸多西环素冻干粉(批号0906001)，普通营养琼脂培养基，大肠埃希氏菌ATCC25922，金葡ATCC25923，酒精灯，牛津杯，SW-CJ-2FD型超净工作台。

3、实验方法

在超净台中，将18ml左右的琼脂倒平板，再加入5ml混有100μ10.5麦氏比浊标准的菌液(菌液于45-50℃加入琼脂)于辅好的平板上，待琼脂凝固后，把平板平均划分四等份，每个区域中央放一个牛津杯，其中一杯中加入50μl生理盐水对照，其余三杯分别加入盐酸多西环素原料对照和冻干制剂药液50μl(含有效成分30μg)，每个药品做三个平行，将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察结果。

4、判定标准

1、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

抑菌圈直径(毫米)	敏感度
		20以上	极敏
15-20	高敏
		10-14	中敏

10以下	低敏
		0	不敏

5、结果观察

在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，因此在纸片周围一定距离内的细菌生产受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。

6、结论

药效学实验表明，本发明药剂的抗菌效果明显优于盐酸多西环素原料。

二、注射用盐酸多西环素肌肉注射刺激性实验

1、实验目的

本试验观察注射用盐酸多西环素肌肉注射有无刺激性，为临床应用提供参考。

2、实验材料

新西兰白兔，雌雄各半，体重2.5kg-2.8kg，由齐鲁制药有限公司动物实验中心提供，用前在实验环境下，预饲养两周。

3、试验方法

取健康新西兰白兔12只，随机分成2组，每组6只。对照组和注射用盐酸多西环素给药，给药组每只于一侧股四头肌肉以无菌操作法注入100mg/ml浓度的注射用盐酸多西环素溶液1ml，另侧注射等容积的无菌注射用水；对照组每只于一侧股四头肌内以无菌操作法注入100mg/ml浓度的盐酸多西环素溶液1ml，另侧注射等容积的无菌注射用水。

4、观察指标

给药后，肉眼观察给药局部静脉血管及周围组织的变化情况；48h后处死动物，解剖，取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位局部刺激反应，并作病理切片检查。并按表中所列标准评分；

肌肉刺激反应分级标准

给药后48h，取股四头肌观察，给药组均未见充血、水肿、变性或坏死等刺激反应，反应分值均为0；病理组织检查：肌纤维呈长圆柱形，核位于周缘，肌浆内含肌原纤维，可见明暗相间的横纹，肌膜贴封附在外，未见明显病变。对照组多数出现坏死，有褐色变性，少数出现重度充血，伴有肌肉变性。

三、稳定性试验

根据《药物稳定性试验指导原则》(中国药典2000版二部附录)，对一批注射用盐酸多西环素进行了加速稳定性试验，重点考察了制剂的性状、酸度、溶液的澄清度有关物质的含量，其中有关物质的含量测定采用高效液相色谱法。

1、试验方法

仪器：重庆四达SH02G型恒温恒湿箱；

条件：温度40℃±1℃，相对湿度60％±10％；

包装：市售包装。

2、试验结果

检测时间(月)	性状	10％溶液澄明度	碱度	含量(％)
					0	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.33	102.5
1	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.32	102.3
					2	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.33	102.3
3	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.31	102.2
					4	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.30	101.9
5	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.31	101.8
					6	黄色、疏松、块状	澄明、透明	8.29	101.6

结论：

对本发明药剂加速稳定性考察6个月，有关物质含量略有降低，但仍在合格范围之内，其他各项观察指标均无明显变化。

四、饲养基地临床资料总结：

猪570头，用于治疗感染支源体肺炎，每天按每公斤体重5-10毫克量注射，注射1天后食欲增加，显效率100％，3-5天症状全部消失，无不愈病例。

羊1230只，用于治疗急性呼吸道感染，每天按每公斤体重5-10毫克量注射，注射1天后精神好转，4-6天症状全部消失。

6个饲养基地试验，仔猪650头，用于治疗仔猪腹泻，每天按每公斤体重5-10毫克量注射，注射8小时后有明显效果，显效率为100％，食欲增加，注射3-5天治愈率达98％，效果特别显著。

临床资料显示未出现任何毒副作用。

具体实施方式

实施例：

本发明是一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，由活性成分盐酸多西环素和医用辅料组成，医用辅料是赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮，盐酸多西环素与赖氨酸的重量比为1∶0.8-1∶1、与亚硫酸钠的重量比为1∶0.01-1∶0.05、与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1∶0.05-1∶0.1。

本发明所述赖氨酸可用精氨酸替代，亚硫酸钠可用焦亚硫酸钠、半胱氨酸或吊白块替代。

本发明所述盐酸多西环素与赖氨酸的重量比为1∶0.8-1∶1，优选重量比为1∶0.9；

本发明所述盐酸多西环素与亚硫酸钠的重量比为1∶0.01-1∶0.05，优选重量比为1∶0.04；

本发明所述盐酸多西环素与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1∶0.05-1∶0.1，优选重量比为1∶0.08；

举例说明盐酸多西环素与辅料的重量比：取盐酸多西环素100克，则赖氨酸为80克、90克或100克，亚硫酸钠为1克、2克、3克、4克或5克，聚乙烯吡咯烷酮为5克、6克、7克、8克、9克或10克。

本发明兽用盐酸多西环素冻干制剂的组份可以有多种组合：

①盐酸多西环素100克，赖氨酸80克，亚硫酸钠1克，聚乙烯吡咯烷酮5克。

②盐酸多西环素100克，赖氨酸90克，亚硫酸钠4克，聚乙烯吡咯烷酮8克。

③盐酸多西环素100克，赖氨酸80克，亚硫酸钠1克，聚乙烯吡咯烷酮5克。

④盐酸多西环素100克，赖氨酸100克，亚硫酸钠5克，聚乙烯吡咯烷酮10克。

⑤盐酸多西环素100克，赖氨酸90克，亚硫酸钠3克，聚乙烯吡咯烷酮7克。

⑥盐酸多西环素100克，赖氨酸85克，亚硫酸钠2克，聚乙烯吡咯烷酮5克。

本发明所述的一种兽用盐酸多西环素冻干制剂的制备方法，其步骤如下：

①按权利要求1中所述的重量比取盐酸多西环素、赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮；

②将步骤①中所述赖氨酸、亚硫酸钠及聚乙烯吡咯烷酮置入无菌容器内，加入注射用水至用水总量的85％，在真空或通氮气状态下搅拌使其溶解，得到辅料溶液；

③将步骤①中所述的盐酸多西环素加入到辅料溶液中，在真空或通氮气状态下搅拌至溶解，加入注射用水至用水总量的15％，搅拌均匀；

④取样测定pH值及盐酸多西环素含量，待指标检测合格后，先用0.45μm纤维素滤膜过滤，再用0.22μm纤维素滤膜过滤，除去杂质；

⑤将步骤④中过滤后的溶液置于分装处理过的管制抗生素玻璃瓶中，每瓶装10ml，压半塞，真空冷冻干燥，得到本发明所述兽用盐酸多西环素冻干制剂。

本发明所述制备方法中盐酸多西环素与赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮的组合可以有多种。

例如：

①盐酸多西环素100克，赖氨酸80克，亚硫酸钠1克，聚乙烯吡咯烷酮5克，注射用水为1000毫升。

②盐酸多西环素100克，赖氨酸90克，亚硫酸钠4克，聚乙烯吡咯烷酮8克，注射用水为1000毫升。

③盐酸多西环素100克，赖氨酸80克，亚硫酸钠1克，聚乙烯吡咯烷酮5克，注射用水为1000毫升。

④盐酸多西环素100克，赖氨酸100克，亚硫酸钠5克，聚乙烯吡咯烷酮10克，

注射用水为1000毫升。

⑤盐酸多西环素100克，赖氨酸90克，亚硫酸钠3克，聚乙烯吡咯烷酮7克，注射用水为1000毫升。

⑥盐酸多西环素100克，赖氨酸85克，亚硫酸钠2克，聚乙烯吡咯烷酮5克，注射用水为1000毫升。

本发明制备方法中所述赖氨酸可采用精氨酸替代，亚硫酸钠可用焦亚硫酸钠、半胱氨酸或吊白块替代。

Claims (5)

1.一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，其特征在于：由活性成分盐酸多西环素和医用辅料组成，医用辅料是赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮，盐酸多西环素与赖氨酸的重量比为1∶0.8-1∶1、盐酸多西环素与亚硫酸钠的重量比为1∶0.01-1∶0.05和盐酸多西环素与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1∶0.05-1∶0.1。

2.根据权利要求1所述的一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，其特征在于：盐酸多西环素与赖氨酸的重量比是1∶0.9。

3.根据权利要求1或2所述的一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，其特征在于：盐酸多西环素与亚硫酸钠的重量比是1∶0.04。

4.根据权利要求1所述的一种兽用盐酸多西环素冻干制剂，其特征在于：盐酸多西环素与聚乙烯吡咯烷酮的重量比是1∶0.08。

5.一种兽用盐酸多西环素冻干制剂的制备方法，其特征在于：其步骤如下：

①按权利要求1中所述的重量比取盐酸多西环素、赖氨酸、亚硫酸钠和聚乙烯吡咯烷酮；

②将步骤①中所述赖氨酸、亚硫酸钠及聚乙烯吡咯烷酮置入无菌容器内，加入注射用水至用水总量的85％，在真空或通氮气状态下搅拌使其溶解，得到辅料溶液；

③将步骤①中所述的盐酸多西环素加入到辅料溶液中，在真空或通氮气状态下搅拌至溶解，加入注射用水至用水总量的15％，搅拌均匀；

④取样测定pH值及盐酸多西环素含量，待指标检测合格后，先用0.45μm纤维素滤膜过滤，再用0.22μm纤维素滤膜过滤，除去杂质；

⑤将步骤④中过滤后的溶液置于分装处理过的管制抗生素玻璃瓶中，每瓶装10ml，压半塞，真空冷冻干燥，得到本发明所述兽用盐酸多西环素冻干制剂。