CN103690544A - 头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了头孢喹肟在制备治疗禽细菌性疾病药物中的应用，具体涉及头孢喹肟原料及其制剂在治疗禽抗菌药物中的应用。头孢喹肟具有独特的双极性分子结构，能够快速透过革兰氏阴性菌细胞壁，本发明证实了其对鸡细菌性疾病尤其是对禽巴氏杆菌病、大肠杆菌、沙门氏菌的治疗作用，系统提出了头孢喹肟在禽中的给药剂量、用药周期和预期达到的有益效果。

Description

头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用

技术领域

本发明涉及头孢喹肟及其制剂在制备治疗禽细菌性疾病药物中的应用。 

背景技术

头孢喹肟（Cefquinome）又译头孢喹诺、头孢喹咪，又名克百特（Cobactan），是德国赫斯特动物保健公司于二十世纪八十年代开发与研制的动物专用的第四代头孢类抗生素，于1993首次批准上市，用于敏感菌引起的猪、牛呼吸系统感染和奶牛乳房炎及母猪的无乳综合症（MMA）。其在猪、牛大动物中的药动学研究深入，临床能有效控制大动物的细菌性感染疾病。 

国内所批准的硫酸头孢喹肟注射液均指明用于猪，主要用于治疗猪的细菌性感染。如：治疗多杀性巴氏杆菌或胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸道疾病。使用剂量为肌内注射：一次量每1kg体重猪2mg（以头孢喹肟计），一日1次，连用3日。头孢喹肟在禽细菌性疾病治疗的计量、给药周期没有明确研究，本发明通过系统研究，明确了头孢喹肟在鸡、水禽等家禽中的使用方法，特提出本药物在家禽中的应用保护。 

在过去的几年中，有关家禽养殖中的细菌耐药性研究已成为国际上的热点。在国内更是大为关注。研究发现，许多常见致病菌的耐药谱随着时间的推移而逐渐变宽。目前，在国内养殖场分离到的大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、空肠弯曲杆菌、副鸡嗜血杆菌等病原菌可同时对几种乃至几十种常用的抗菌药物都产生了抗性。多年来，抗菌药物的不合理使用或者滥用（获得性耐药性）导致了如今无药可用的后果。 

头孢喹肟对产β-内酰胺酶的耐药菌株仍有很强的抗菌活性，甚至对氨基糖苷类耐药菌株也非常有效。与各类抗生素交叉耐药性低，保证了头孢喹肟对细菌的敏感性。但头孢喹 肟在禽给药应用中的数据缺乏，一直没有明确的临床给药计量、给药周期使用指导。本发明结合鸡、鸭对头孢喹肟代谢的药物代谢动力学数据，结合药物敏感实验，分析MIC、MBC值与注射给药血药浓度峰值之间的关系，提出了切合临床实际的应用方案。本发明所述的硫酸头孢喹肟原料及其制剂在治疗禽细菌性疾病时效果显著，具有广阔的应用前景。 

发明内容

发明人经过大量的研究和试验，确证了头孢喹肟在禽细菌性疾病中的应用。 

所述头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用，在禽中的给药剂量为以头孢喹肟计0.1-5mg/kg·bw，每日用药一次，连用1-5天； 

优选的给药剂量是以头孢喹肟计0.5-3mg/kg·bw，每日用药一次，连用1-3天； 

更优选的给药剂量是以头孢喹肟计2mg/kg·bw，每日用药一次，连用3天。 

所述头孢喹肟原料可以为硫酸头孢喹肟或头孢喹肟钠中的一种或两种；头孢喹肟制剂可以为硫酸头孢喹肟油性混悬注射液、粉针剂、注射用头孢喹肟钠 

所述治疗范围包括鸡、鸭、鸽、鹅、火鸡、鹌鹑的细菌性疾病的预防与治疗。 

本发明的有益效果： 

按发明的用法用量使用，可以有效进行禽细菌性疾病的预防与治疗，是控制目前尚无很好防治方法而又造成重大经济损失的禽细菌性疾病的有力方法。本发明明确了有效给药剂量，避免药物过量使用造成的肝肾损伤；并且本发明发现头孢喹肟在细菌最常侵害的靶部位（如肺脏、消化道、生殖道等）高速聚集，药效发挥充分。 

具体实施方式

实施例1：硫酸头孢喹肟对家禽体内分离菌的药敏试验（一） 

1.1药敏试验材料 

硫酸头孢喹肟注射液（瑞普生物，批号：12122101））、样品1（盐酸林可霉素+硫酸壮观霉素可溶性粉（辉瑞制药，批号：12081901A））、样品2（注射用头孢噻呋钠（辉瑞制药，批号：CVA130203））、头孢喹肟钠（瑞普生物，批号：13110901）普通培养肉汤、市场分离耐药菌、96孔酶标板。 

1.2试验方法 

1.2.1菌液制备将鸡场分离到的相对耐药的2株大肠杆菌、从鸭场分离的大肠杆菌耐药菌3株和从鸡场分离1株沙门氏菌、从鸭场分离2株沙门氏菌接种肉汤培养6-8h，试验细菌用灭菌肉汤稀释1000倍备用。 

1.2.2药物稀释用灭菌蒸馏水将对照药物按照使用说明中饮水浓度做相应的稀释备用。 

1.2.3抗菌液的稀释取酶标板纵放于超净台面上，第一孔加肉汤180μL，其余孔加肉汤100μL。吸取配好的抗菌液20μL加入第1孔，混合后取100μL加入第二孔，以此类推，直到第11孔，第12孔不加药物作为对照孔。 

1.2.4各孔内加入试验菌20μL，充分混匀，置37℃培养18～24h观察结果。 

1.2.5结果判定培养18～24h后，观察肉汤培养基的浑浊度，无细菌生长时，肉汤清晰、透明，说明该浓度有效，记“+”号；有细菌生长时，课件肉汤混浊，有时可见菌膜或菌环，说明该浓度无效，记“-”号。凡无细菌生长的药物的最高稀释度，即为药物对该菌的最小抑菌浓度。 

1.3药敏实验结果 

4种药物对5株大肠杆菌和3株沙门氏菌的药敏结果见表1所示。 

表1不同药物对分离菌株MIC值（单位：μg/mL） 

1.4实验结论 

硫酸头孢喹肟、头孢喹肟钠的最小抑菌浓度仅为头孢噻呋钠的1/4～1/8，头孢噻呋钠效果好于盐酸林可霉素硫酸壮观霉素。 

实施例2：硫酸头孢喹肟对禽用标准菌株和家禽分离菌的药敏试验 

1硫酸头孢喹肟对禽标准大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、链球菌最小抑菌浓度试验 

试验方法：试验菌株接种琼脂平板，置37℃过夜培养后，挑取1-2个单菌落接种于MH液体培养液，其中巴氏杆菌和链球菌的MH培养基中加入5%牛血清，置37℃孵育18h，使生长浊度达5×10⁸-7.5×10⁸/mL。将原菌液用MH液体培养基做1:1000稀释作为试验菌液。 

将药液用MH液体培养基依次倍比稀释成64、32、l6、8、4、2、1、0.5、0.25μg/mL；加入上述制备好的待测菌悬液各2.0mL，置37℃培养箱培养48h。以培养基中完全没有细菌生长时(澄清)的最低浓度为MIC。 

试验结果：试验结果见下表2“硫酸头孢喹肟对主要细菌的MIC值”。从结果中我们可以看出，硫酸头孢喹肟对四种靶细菌的MIC值处于0.25μg/mL以下，即结论头孢喹肟对上述几种菌株非常敏感。 

表2硫酸头孢喹肟对主要细菌的MIC值 

2硫酸头孢喹肟与其他药物对标准菌株和市场耐药菌株的药敏试验结果：市场耐药菌为从相同养殖场分离的耐药大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的混合菌，市场耐药菌1、2、3表示分离地点不同。 

4种药物对标准菌株和市场分离耐药菌株的药敏结果见表3所示。 

表3硫酸头孢喹肟对禽用标准菌株和家禽分离菌的抑菌直径比较 

注：^*表示抑菌圈生长不清晰，^**表示抑菌圈生长不太清晰，^***表示抑菌圈生长清晰；0表示抑菌圈未出现。 

实施例3：硫酸头孢喹肟在肉鸡体内药代动力学试验 

试验目的：通过肌肉注射，研究硫酸头孢喹肟在鸡体内的药物代谢过程，及其主要药效成分硫酸头孢喹肟随时间变化而发生的量变规律，为制定用药的合理方案包括剂量、疗程、给药途径、给药间隔、休药期等提供重要理论和实践依据。 

1、建立了灵敏的HPLC进行血浆中硫酸头孢喹肟含量测定方法 

有关血浆中硫酸头孢喹肟色谱图见说明书附图1-图3。 

2、药代动力学试验 

2.1体内药动学进行方法 

将试验鸡只称重，按每kg体重2mg剂量注射硫酸头孢喹肟注射液，分别于注射液后 15min、30min、60min、120min、180min、240min、300min、1200min、2440min时分别采血，测量鸡体内血液中头孢喹肟血药浓度。 

2.2试验结果 

2.2.1成鸡体内药-时数据曲线 

鸡血浆中头孢喹肟药时曲线见说明书附图4。 

2.2.2药动学参数的计算 

采用药动学房室模型的3p97软件处理所得数据，微机程序处理药-时数据。 

根据房室模型的调整获得合适的消除半衰期（t_1/2β），生物利用度（F）、峰浓度（Cmax）、峰时（Tmax）、表观分布容积（V/F(c)）、药-时曲线下面积（AUC）、吸收半衰期（T_1/2kα）和体清除率（Cl(s)）等药动学数据如下表4所示。 

表4硫酸头孢喹肟在鸡体内的主要药代动力学参数 

3、讨论 

由于硫酸头孢喹肟是有较高极性的两性化合物，与生物体液中的极性物质性质相近，因此生物样品预处理与色谱分离十分困难。本试验建立的用甲醇沉淀蛋白的方法简便快捷，蛋白质沉淀完全，出峰时间快，保留时间为10min左右，峰形良好，整个色谱分析过程不足12min。 

本试验结果表明，鸡只肌内注射硫酸头孢喹肟注射液后，药物浓度一时间曲线较平缓。在鸡体内，头孢喹肟成品的半衰期为351分钟，测定的Tpeak为61min，Cmax为2.27μg/mL，说明按2mg/kg体重给药，可以达到有效血药浓度以上，高于常见菌的MIC值；给药间隔建议为24小时。 

实施例4：硫酸头孢喹肟在鸡细菌性疾病治疗上的临床应用试验 

4.1攻毒和治疗的药效学试验 

分组：按下表5对所饲养的三黄肉鸡随机分成8组，分别为硫酸头孢喹肟高（2mg/kg）、中（1mg/kg）、低剂量组（0.5mg/kg），均肌肉注射给药，连用3天；头孢喹肟高剂量短期组（5mg/kg）仅用1天，头孢喹肟低剂量长期组（0.1mg/kg）给药5天和对照药物氨苄西林钠（20mg/kg）剂量组，同时设健康对照组和感染对照组，每组均30只鸡。 

攻毒：除健康对照组外，每只鸡胸肌注射大肠杆菌液0.8mL。 

试验治疗：在接种病原后12h，按表5进行治疗，连用3d。停药后连续观察15d，每天记录各组鸡的临床症状和死亡数，对死亡鸡只及时进行剖检，并取病料进行病原分离培养和鉴定。待试验结束后，对鸡只称重。 

疗效评价：死亡率：试验期间出现大肠杆菌病症状死亡者，剖检气囊、肝脏和心脏发现有典型病变特征，病料能分离出大肠杆菌的，判断为感染死亡，根据死亡鸡数计算各组的死亡率。 

治愈率：在试验期间，给药后精神状态、食欲恢复正常，不再出现拉稀粪等临床症状均属治愈，分别计算各组治愈率。 

有效率：凡在试验期间经用药后临床症状缓解，精神食欲恢复正常，体重较用药前增加，处死后剖检无病变者，包括完全治愈的鸡和没有死亡但有临床症状表现的鸡判为有效，以每组存活的鸡数占试验鸡数的百分率计算有效率。 

表5动物分组及处理 

注：右上脚标a、b、c不同时表示差异显著，含有相同数字时表示差异不显著。 

试验结果：硫酸头孢喹肟按上述高、中剂量给药，能有效的控制鸡大肠杆菌感染，缓解症状，降低大肠杆菌感染鸡只的发病率和死亡率，并在一定程度上减少成活鸡的体重下降， 效果优于头孢喹肟高剂量短期组、头孢喹肟低剂量长期组和氨苄西林钠组，虽然头孢喹肟高剂量短期组、头孢喹肟低剂量长期组也有一定效果，但在控制死亡、有效率、15d增重等指标上差于头孢喹肟高、中剂量组。 

试验结论：硫酸头孢喹肟在家禽中按2mg/kg·bw（以头孢喹肟计），每日用药一次，连用3天，可以有效治疗大肠杆菌等细菌性疾病。 

实施例5禽巴氏杆菌、鸭沙门氏菌分离鉴定及药敏试验 

1材料与方法 

1.1药品：5种抗菌药物分别为硫酸卡那霉素注射液、恩诺沙星注射液、硫酸头孢喹肟注射液、注射用头孢噻呋钠、阿莫西林可溶性粉，均由瑞普生物药物研究中心提供；使用浓度参照兽药使用指南2010年版配制。 

1.2培养基及其他试剂：沙门氏菌、巴氏杆菌培养基按《中华人民共和国兽药典》2010年版附录配制；快速染色试剂盒（瑞氏染色、革兰氏染色）购自上海恩康科技有限公司。 

1.3药敏纸片：取定性滤纸，用打孔机制成直径为6mm的圆形纸片。取圆纸片30片放人清洁干燥的西林瓶中，瓶口用单层牛皮纸包扎，经高温高压灭菌15-20min后放人37℃温箱使之完全干燥。吸取制备好的各抗菌药液200uL分别加入装有20片圆纸片的西林瓶中，放人冰箱中浸润1-2h后，放人超净工作台下使之完全干燥后放人冰箱保存备用。 

1.5细菌分离培养用接种环无菌取死亡黄鸡肝脏、鸭肝脏、心肌发病菌，接种于相应培养基中，37℃培养24h，观察菌落形态，挑取单菌落，进行革兰氏染色和瑞氏染色；然后进行纯培养，挑取单个菌落，分别进行鉴定和药敏试验。 

1.6药敏试验方法采用纸片扩散法。用无菌棉签蘸取已制备好的菌液，均匀地涂布在制备好的血琼脂平板上。等其干燥后，用无菌镊子夹取药敏纸片贴上，然后放人37℃箱中培养18h，用直尺量抑菌圈直径，记录数据。 

2实验结果 

2.1细菌分离纯化经过鉴定，从黄鸡肝脏中共分离到巴氏杆菌6株，从鸭肝脏中分离出沙门氏菌5株，各选择三株典型菌株进行了药敏实验。 

2.2药敏试验结果 

试验结果见表6。从表6可以看出，硫酸头孢喹肟对5株菌均表现为高敏，敏感比例远优于其他药物；六株菌中分别有不同的2株菌差异性地对卡那霉素、恩诺沙星、阿莫西林敏感，有三株菌对头孢噻呋敏感。得出，头孢喹肟是禽药临床效果很好的药物。 

表6药敏试验结果(mm) 

附图说明

图1：药物代谢动力学试验中空白鸡血浆 

图2：药物代谢动力学试验中加入头孢喹肟水溶液的空白血浆 

图3：药物代谢动力学试验中注射头孢喹肟注射液后鸡的血浆 

图4：药物代谢动力学试验中鸡血浆中头孢喹肟药时曲线 。

Claims (5)

1.头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用，其特征是在禽中的给药剂量为以头孢喹肟计0.1-5mg/kg·bw，每日用药一次，连用1-5天。

2.如权利要求1所述的头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用，其特征是在禽中的给药剂量为以头孢喹肟计0.5-3mg/kg·bw，每日用药一次，连用1-3天。

3.如权利要求1所述的头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用，其特征是在禽中的给药剂量为以头孢喹肟计2mg/kg·bw，每日用药一次，连用3天。

4.如权利要求1-3任一所述的头孢喹肟原料及其制剂在制备治疗禽抗菌药物中的应用，其特征是头孢喹肟原料可以为硫酸头孢喹肟或头孢喹肟钠中的一种或两种；头孢喹肟制剂可以为硫酸头孢喹肟油性混悬注射液、注射用硫酸头孢喹肟、注射用头孢喹肟钠。

5.如权利要求4所述的头孢喹肟治疗禽细菌性疾病药物中的应用，其特征是所述头孢喹肟治疗范围包括鸡、鸭、鸽、鹅、火鸡、鹌鹑的细菌性疾病的预防与治疗。

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