CN103494913B - 复方黄芪免疫激活注射液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种免疫激活注射液的制备方法，该注射液作稀释剂使用可增强疫苗特别是血清的免疫效果，强力增效抗生素粉针剂的抗菌效能；单独注射可保肝利胆、退烧，改善动物机体生长性能。特征在于：黄芪10-20g、陈皮5-10g，切片，煎煮后乙醇提浓，制得A液备用；柴胡5-10g，切断，加水蒸馏，加PEG400溶解，制得B液备用；B液加入A液中，添加注射用水至85-95ml，使用pH调节剂、活性炭0.1-0.2g，微沸1小时，放冷，加入苯甲醇1ml后定容至100ml；滤过，灌封，灭菌即得。该注射液制造成本低，单用具和作为稀释剂都有良好的作用，尤其是对头孢噻呋钠的增效作用显著。

Description

复方黄芪免疫激活注射液的制备方法

本申请是申请号为：201210224030.1，专利名称为：“兽用免疫激活注射液的制备方法”的发明专利的分案申请，原案申请日：2012年6月30日。

技术领域

本发明涉及一种注射液的制备方法，尤其是可以作为注射用稀释剂使用或者单独注射使用的注射液的制备方法。也涉及复方黄芪药物。

背景技术

在畜禽疾病的预防和治疗中，使用了各种类型的冻干状疫苗制剂和粉末状粉针制剂，在临床使用时需按比例稀释后注射或点滴。目前兽医经常使用的稀释剂有注射用生理盐水和葡萄糖注射液两种，它们在使用功能上都有不足之处。葡萄糖注射液在稀释药物的同时可以兼顾给动物机体提供能量，但其pH值为3.0左右，远低于稀释疫苗及大多数抗生素粉针的最佳酸碱度（pH=7-8），注射用生理盐水的pH值稍高为4-5，也达不到最佳使用值且无法提供能量。以至于临床使用环节，有兽医师自主添加碳酸氢钠来提高药液的pH值。这样使用不方便。

另外，注射用生理盐水和葡萄糖注射液由于成分简单，生产厂商众多，质量上存在带菌、pH值变化、保存时间短等诸多问题。

中草药是人类最早应用的物质，可起到防病治病的作用，并且毒副作用小，无耐药性，不会在食用畜禽产品中产生有害残留，还可避免大量使用化学药物造成的病原微生物产生抗药性、畜产品药物残留和环境污染等问题。以天然中草药的物性、物味、物间关系的传统理论为主导，辅以现代中药药物有效成分提取技术及药物制剂技术制成的注射液统称为中药注射液，这类产品因其功能多样、纯天然、绿色环保等优势而日益受到有关专家学者的关注与推崇。

发明内容

本发明的主要目的旨在提供一种纯天然多用途的中药免疫激活注射液及制备方法，所制备的注射液作稀释剂使用可增强疫苗特别是血清的免疫效果，强力增效抗生素粉针剂的抗菌效能；单独注射可保肝利胆、退烧，改善动物机体生长性能。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种兽用免疫激活注射液的制备方法，步骤包括：

a、黄芪10-20g、陈皮5-10g，切片，加5倍重量注射用水水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至2倍中药材重量水量，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，制得A液备用；

b、柴胡5-10g，切断，加水温浸，经4倍重量水蒸馏，收集初馏液，再重蒸馏，收集重馏液，加20-40ml的PEG400，搅拌使油完全溶解，制得B液备用；

c、将B液加入A液中，添加注射用水至85-95ml，使用pH调节剂调节pH为7.0-7.5，加入活性炭0.1-0.2g，微沸1小时，放冷，加入苯甲醇1ml后定容至100ml；

d、滤过，灌封，灭菌即得。灌装时，可以灌装于西林瓶、安瓿瓶、玻璃瓶中，装量常用的例如5ml、10ml、100ml等。

所述的注射液经115℃、压力0.2MPa灭菌30分钟。

所述的pH调节剂为0.5mol/L的氢氧化钠溶液或0.5mol/L的盐酸溶液。实际制备时，根据情况进行调节，PH值高出这个范围，可用盐酸溶液调节，PH值低于这个范围，可用氢氧化钠溶液调节。

优选的，所述的黄芪15-20g、陈皮7-10g、柴胡7-10g。

优选的，所述的PEG400用量为30-40ml。

苯甲醇为本发明优选的特定防腐剂。PEG400为优选的特定脂溶性溶媒，对很多中药有效成分如蛋白质、氨基酸、多糖、维生素、微量元素、挥发油有良好的亲和性，并且有利于制剂的pH值稳定性。

在本发明中，黄芪主要功能为增强动物体特异性免疫功能和非特异性免疫功能，在动物体内吸收转化为黄芪多糖后能刺激巨噬细胞和T细胞的功能，使E环形成细胞数增加，诱生细胞因子，促进白细胞介素诱生，而使动物机体产生内源性干扰素，从而达到抗病毒的目的。与疫苗的抗病毒机制相同，能够诱导机体免疫系统的配合，达到协同免疫增效作用。更好的稀释效果体现在血清类制剂上，黄芪的非特异性免疫功能能改善血清抗体特异性免疫在效果持续时间上的不足。另外黄芪的抗炎、利尿、降压、解热、保肝等多种生物活性，具有清热燥湿、泻火解毒的功效，适用于畜禽病毒性疾病和细菌性疾病的辅助治疗。

本发明中选用的柴胡，是因为其挥发油具有抗炎、调节体温、解热镇痛的功效，与氨基比林、安乃近等合成解热镇痛药相比，不会损伤动物机体的自身抵抗力，退烧不反弹。选用陈皮，是因为其具有理气消食益脾健胃的功能，可改善动物体液平衡，增进动物食欲，提高饲料消化利用率以及动物产品质量。

本发明的免疫激活注射液的优点具体表现在：

1.使用途径多样、可以稀释畜禽养殖常用的疫苗、血清、抗生素粉针等制剂，独立注射时具有改善畜禽的生长情况的保健功能和抗炎、调节体温的退热功能。

2、纯天然中药制剂毒副作用小，无耐药性，不会在食用畜禽产品中产生有害残留，还可避免大量使用化学药物造成的病原微生物产生抗药性、畜产品药物残留和环境污染等问题。

3、合理的提取及制剂工艺操作十分便利简单，成本控制低、有利于工业生产需要。

4、稳定的pH值范围，适合抗生素粉针的抗菌使用环境，可增强其杀菌功能，对β-内酰胺类、四环素类粉针增效效果尤为显著，例如对头孢噻呋钠的增效作用显著。同时降低或抵消抗生素抗菌时产生的毒副作用。

5、对疫苗的非特异性免疫功能有协同增效作用，特别对患有免疫抑制性疾病或免疫不应答的畜禽效果良好；对血清的特异性免疫功能缺陷有互补作用，激活动物机体主动免疫功能，延长免疫保护的时间。

具体实施方式

实施例中使用的中药材黄芪、柴胡、陈皮（药用饮片）购于重庆市中药饮片厂，苯甲醇（AR）购于寿光市鲁源盐化有限公司，PEG400（医药级）和医用乙醇购于南京古田化工有限公司，活性碳购于重庆钟山活性碳制造有限公司。

实施例一

免疫激活注射液（1ml相当于原生药0.4g）

1、配方

黄芪20g，柴胡10g，陈皮10g，pH调节剂0.2g，活性碳0.2g，PEG400用量40ml，苯甲醇1ml，注射用水加至100ml。

2：制备方法

第一步：取处方量黄芪、陈皮，切片，加5倍重量注射用水水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至2倍中药材重量水量，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，制得A液备用。

第二步：取处方量柴胡切断，加水温浸，经4倍重量水蒸馏，收集初馏液，再重蒸馏，收集重馏液，加处方量PEG400，搅拌使油完全溶解，制得B液备用。

第三步：将B液加入A液中，添加注射用水至95ml，使用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节体系pH为7.5，加入处方量活性炭，微沸1小时，放冷，加入处方量苯甲醇后定容至100ml，滤过，灌封，经115℃、压力0.2MPa灭菌30分钟即得。

实施例二

免疫激活注射液（1ml相当于原生药0.3g）

1、配方

黄芪15g，柴胡7.5g，陈皮7.5g，pH调节剂0.2g，活性碳0.15g，PEG40030ml，苯甲醇1ml，注射用水加至100ml。

2：制备方法：与实施例1所述法相同。

实施例三

免疫激活注射液（1ml相当于原生药0.2g）

1、配方

黄芪10g，柴胡5g，陈皮5g，pH调节剂0.1g，活性碳0.1g，PEG40020ml，苯甲醇1ml，注射用水加至100ml。

2：制备方法：与实施例1所述法相同。

一、免疫激活注射液的加速稳定性试验

1、材料与方法：取实施例1-3免疫激活注射液，按照《中国兽药典》2010年版一部附录药物稳定性实验方法进行高温高湿强光加速实验，按市售包装，在温度40±2℃、相对湿度75±5%、照度4500±500LX的药物稳定性实验箱（重庆永生实验仪器厂）中放置6个月，在实验期间第1、2、3、6个月底分别取样一次，对注射液的颜色、pH值、含量进行考察。

2、结果：由表1可知，本发明的免疫激活注射液在加速试验6个月后，颜色、pH值、各成份含量均无明显变化，稳定性良好，

表1、兽用免疫激活注射液的加速实验结果

二、免疫激活注射液对鸡新城疫和传染性腔上囊病疫苗免疫力的影响试验

使用实施例1注射液分别稀释配制鸡NDⅠ系、NDⅣ系、ND油乳剂苗和IBD冻干苗，按免疫程序在15天内先后接种于1组（35只）健康非免疫雏鸡为实验组1，同法操作实施例2、例3注射液，按免疫程序在15天内先后接种于2组（每组35只）健康非免疫雏鸡为实验组2和3。同时使用注射用生理盐水分别稀释鸡NDⅠ系、NDⅣ系、ND油乳剂苗和IBD冻干苗，按免疫程序在15天内先后接种于1组（35只）健康非免疫雏鸡作为对照组。在第四次免疫结束10天后用琼脂扩散试验(AGP)监测血清中ND、IBD抗体效价，同时对各组鸡脾、腔上囊重量的变化进行了动态观察。检测结果：各实施例组血清ND、IBD抗体效价显著高于对照组（P＜0.05），其中以实施例1组的抗体效价最高；另外，实施例1-例3组脾和腔上囊重量显著高于对照组（P＜0.05）。试验表明，免疫激活注射液可用作鸡疫苗的免疫佐剂提高鸡的免疫力，实施例1组为最佳。

表2、免疫激活注射液对鸡新城疫和传染性腔上囊病疫苗免疫力的影响试验结果表

实施组号	IBD效价	ND效价	脾脏（g/kg）	胸腺（g/kg）
					实验组1	122±2.7	256±5.4	2.21±0.11	0.62±0.09
实验组2	113±2.1	238±5.2	2.17±0.09	0.59±0.11
					实验组3	108±2.2	230±5.0	2.18±0.12	0.57±0.08
对照组	71±1.8	139±3.9	1.58±0.02	0.54±0.09

三、免疫激活注射液对抗生素粉针注射用头孢噻呋钠的增效试验

1、方法和材料

选取合川云门镇某猪场，兽医临床确诊为猪链球菌病感染的病猪，随机分为A、B、C、D三组，A组采用实施例1免疫激活注射液稀释注射用头孢噻呋钠，B组采用实施例2免疫激活注射液稀释注射用头孢噻呋钠，C组采用实施例3免疫激活注射液稀释注射用头孢噻呋钠，D组对照采用葡萄糖注射液稀释注射用头孢噻呋钠。每组均按头孢噻呋3mg/kg肌内注射，一日注射一次，连用3日。

2、结果判定方式

3日后内观察治疗病例，回访并记录病情。

治愈：用药3次后患畜病症完全消失，精神、体温、食欲恢复正常，尿液粪便正常。

有效：用药3次后患畜病症基本消失，精神、体温、食欲有所改善，尿液粪便正常。

无效：用药3次后患畜病症未消失，病情恶化或死亡，尿液粪便颜色、性状不正常。

3、结果：从表3可以看出，使用本发明药物免疫激活注射液稀释的抗生素粉针，对治疗家畜细菌感染有显著疗效，治愈率和有效率都显著高于使用葡萄糖注射液稀释的对照组。其中使用本发明产品的实验组有效率达到98%、治愈90%左右；而对照组D治愈率仅为52.94%，有效率81.88%。

表3、注射用头孢噻呋钠的增效试验

四、免疫激活注射液解热试验

1、方法与材料

1.1药品

免疫激活注射液，采用本发明制备例1-例3。

安乃近注射液，重庆市某兽药厂生产。

0.9%生理盐水，实验室自备。

伤寒弱毒疫苗，购于中国生物技术集团公司。

1.2实验动物：取体重1.5-2.0kg、连续3天体温在39.0±5℃的健康家兔50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。

1.3实施过程：前3组家兔分别注射实施例1-例3的免疫激活注射液，注射剂量按0.1ml/kg。对照组注射安乃近注射液，每只注射剂量按0.1ml/kg。空白组注射0.9%生理盐水，每只注射剂量按0.1ml/kg。各组家兔注射30分钟后按剂量1ml/kg耳静脉注射伤寒弱毒疫苗，然后在注射疫苗前后30、60、90、120、150、180、210、240min时间内测量肛温，记录数据，结果见表4。

2、结果：从表4可以看出，注射伤寒弱毒苗30min后、各组家兔体温显著上升、60min时刻达到峰值，实施例1-例3的免疫激活注射液在120min时基本控制病兔体温正常，安乃近注射液在180min时也基本控制病兔体温正常，免疫激活注射液在各时间段温度波动差值较小，解热效果良好且优于安乃近注射液。

表4、发热家兔解热试验结果（℃、±S）

Claims (1)

1.一种兽用免疫激活注射液的制备方法，所述兽用免疫激活注射液的组成为：黄芪20g，柴胡10g，陈皮10g，pH调节剂0.2g，活性碳0.2g，PEG400用量40ml，苯甲醇1ml，注射用水加至100ml；兽用免疫激活注射液的制备方法为：

第一步：取处方量黄芪、陈皮，切片，加5倍重量注射用水水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至2倍中药材重量水量，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75％乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，制得A液备用；

第二步：取处方量柴胡切断，加水温浸，经4倍重量水蒸馏，收集初馏液，再重蒸馏，收集重馏液，加处方量PEG400，搅拌使油完全溶解，制得B液备用；

第三步：将B液加入A液中，添加注射用水至95ml，使用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节体系pH为7.5，加入处方量活性炭，微沸1小时，放冷，加入处方量苯甲醇后定容至100ml，滤过，灌封，经115℃、压力0.2MPa灭菌30分钟即得。