CN1628834A - 一种柴胡冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种柴胡冻干粉针剂及其制备方法。它是由柴胡的挥发油HP－β－CD包合物、提取物和药用辅料制备而成。挥发油采用水蒸气蒸馏法得到后，并用HP－β－CD进行包合，使其更加稳定，易于吸收，生物利用度提高；提取物采用水提醇沉、大孔吸附树脂分离纯化的方法获得，其中的主要有效成分柴胡皂苷a、d的重量百分含量大于25％。本发明还公开了其制备方法。含量测定结果和药理实验结果说明，本发明含有的有效成分更全，药理作用更强，具有更好的清热解毒功效。

Description

一种柴胡冻干粉针剂及其制备方法

所属技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种柴胡冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

柴胡为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，有“北柴胡”和“南柴胡”之分，具有解表、退热、疏肝解郁功能，主治感冒发热，寒热往来，胸肋腹痛等症。柴胡中含有的挥发油及柴胡皂苷是其主要有效成分。在柴胡的多种制剂中，大部分为口服制剂。已有以柴胡经水蒸气蒸馏制成的灭菌水溶液—柴胡注射液(部颁中药十七册)，其中以挥发油为主要有效成分，但其中挥发油浓度低，用药剂量大，而未能达到预期的临床效果。最重要的是，其制备方法制成的柴胡注射液中舍去了柴胡的另一大类有效成分—柴胡皂苷。柴胡皂苷有明显的抗炎、解热、镇痛作用，它在柴胡的功能主治中发挥着重要的作用。药理实验研究表明：柴胡皂苷可使热刺法所致发热家兔，1.5小时后体温恢复正常或更低，随后又上升至正常。柴胡挥发油对三联菌苗致热的家兔，有明显的解热作用。由此可以看出，柴胡所含的挥发油和皂苷分别对不同机理的发热症状有着不同的治疗作用，两者相互补充，在疾病的治疗中都不可缺少。

申请号为CN02137936.X的专利文献制成了富含柴胡黄酮的组合物。其所用的药材为柴胡的地上部分，这与《中国药典》中柴胡的用药部位根有着本质的区别，所含成分差别很大。

注射液对稳定性要求高，在携带、储藏、运输时容易破碎，带来许多麻烦。

在资料检索中未发现有关柴胡冻干粉针剂的任何报道。

发明内容

本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、方便使用的柴胡冻干粉针制剂。

本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现。

一、制备方法

(1)原料药为：柴胡；

(2)取柴胡药材，粉碎，加6-15倍量的水浸泡8-20小时后，经水蒸气蒸馏6-10小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加4-10倍量的水提取1-2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.23-1.27的浸膏，加乙醇使含醇量达70％-90％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，上清液过已处理好的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，再用2-5倍柱体积60％-90％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，用葡甲胺调节pH值至4.0-7.0，灌装，冷冻干燥，即得。

我们研究人员在柴胡冻干粉针剂的制备中，采用水蒸气蒸馏法提取柴胡中的挥发油后，再用羟丙基倍他环糊精(HP-β-CD)进行包合。HP-β-CD为水溶性的包合物，用其包合的挥发油制成分粉针剂在溶液中溶解性好，注射时吸收好，生物利用度高，患者痛感小，易于被患者愉快的接受；而且用HP-β-CD对挥发油进行包合，使其在制备、贮藏、运输的过程中不易被空气氧化而变质，增加了挥发油的稳定性，提高了疗效。水提液中含有大量的有效成分柴胡皂苷，我们利用皂苷可溶于水又可溶于醇的性质，采用经典的水提醇沉法在除去大量的杂质后，又用大孔吸附树脂对皂苷进行了分离纯化，使得水提物中主要有效成分柴胡皂苷a、d的含量大于25％。

二、含量测定分析

1、高效液相色谱法测定柴胡制剂中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量

1.1仪器与试药  高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯乙腈(德国默克公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。柴胡注射液(漯河三汇药业有限公司)；本发明柴胡冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；柴胡皂苷a对照品和柴胡皂苷d对照品(中国药品生物制品检定所)。

1.2色谱条件与系统适用性试验  色谱柱：迪马公司C₁₈柱(5μm，250mm×4.6mm，I.D)；流动相：乙腈-水(50∶50)；流速：1.0ml/min；检测波长203nm；理论板数按柴胡皂苷a峰记算应不低于3000。

1.3对照品混合溶液配制  精密称取柴胡皂苷a对照品和柴胡皂苷d对照品各5.0mg，置10ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。

1.4标准曲线制备  精密吸取上述对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10μl，在上述测定条件下进样测定。结果表明，柴胡皂苷a和柴胡皂苷d在1.00μg～10.00μg范围内进样量与峰面积呈良好线性关系，线性方程分别为：Y＝587483X+50138，r＝0.9998；Y＝604937X+48726，r＝0.9999；

1.5供试品溶液的制备  取本品内容物，精密称定，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心(12000rpm)10min，取上清液过滤，取续滤液，即得。

1.6测定法  精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表1。

       表1  制剂中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和比较

                                    制剂中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和^*

组别

                                    (mg/支)

柴胡注射液                          -

本发明柴胡冻干粉针剂                22.7

注：-表示未检测出。

以上制剂含量测定结果说明，柴胡注射液中未含有皂苷类有效成分，而本发明的柴胡冻干粉针剂由于采用新的制备方法，含有皂苷类有效成分。说明：本发明的制备方法更加合理、更加科学、更具有实用性，制成的柴胡冻干粉针剂效果也一定会更好。

2、高效液相色谱法测定柴胡提取物中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量

测定仪器、试药及方法同上。柴胡提取物按上述制备方法所得，由北京乾露春科技有限公司提供。结果见表2。

      表2  提取物中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量测定

                                柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和

批号

                                (％)

1                               27.4

2                               25.8

3                               28.3

4                       26.5

以上含量测定结果表明，本发明柴胡冻干粉针剂的提取物中主要有效成分柴胡皂苷a、d的含量之和高于25％。

三、药理实施例

1.柴胡制剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

取健康昆明种小鼠30只，体重20～24g。随机分成对照组、柴胡注射液组、本发明柴胡冻干粉针剂组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为：待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给予蒸馏水，连续给药7天，最后1次给药后30分钟，每只小鼠左耳前后两面涂布二甲苯0.03ml致炎，30分钟后颈椎脱臼处死动物，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm直径打孔器分别在同一对称部位打下圆耳片，扭力天平称重，每鼠的左耳片重减去右耳片重量即为肿胀度，计算各组肿胀度之均值和标准差，并作t检验，比较组间差异性，按下列公式计算肿胀抑制百分率：抑制率＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100％。结果见表2。

         表2  柴胡制剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用(X±SD)

                            鼠数        耳肿胀率            抑制率

组别

                            (只)        (％)                (％)

对照组                      10          15.74±2.88         -

柴胡注射液组                10          10.62±3.58^*       32.5

本发明柴胡冻干粉针剂组      10          8.03±3.24^*#       48.9

注：与对照组比较：^*P＜0.01；

    与柴胡注射液组比较：#P＜0.01

本发明柴胡冻干粉针剂和柴胡注射液对二甲苯致小鼠耳肿胀均有抑制作用(P＜0.01)；本发明柴胡冻干粉针剂和柴胡注射液相比，对二甲苯致小鼠耳肿胀也有显著差异(P＜0.01)。说明：本发明柴胡冻干粉针剂的药理作用强于柴胡注射液。

2.热板法镇痛试验

水温恒定在55±0.5℃，取预选合格的小鼠30只，随机分3组。对照组、柴胡注射液组和本发明柴胡冻干粉针剂组。各组分别连续给药7天，末次给药后1h测量各小鼠的痛阈值。结果见表3。

                表3  柴胡制剂热板法镇痛实验(X±SD)

                          鼠数                    痛阈值(s)

组别

                          (只)        给药前                    给药后

对照组                    10          16.47±5.36               17.57±4.63

柴胡注射液组              10          16.83±4.75               23.27±5.38^*

本发明柴胡冻干粉针剂组    10          17.34±4.62               29.15±5.54^*#

注：与对照组比较：^*P＜0.01；

    与柴胡注射液组比较：#P＜0.01

本发明柴胡冻干粉针剂和柴胡注射液均能显著增加小鼠的痛阈值(P＜0.01)；本发明柴胡冻干粉针剂和柴胡注射液相比，痛阈值提高也有显著差异(P＜0.01)。说明：本发明柴胡冻干粉针剂的药理作用强于柴胡注射液。

以上药理实验证明，用新工艺制备的本发明柴胡冻干粉针剂具有更好的治疗效果。

六、制备实施例

实施例1：

(1)原料药的处方为：柴胡1200g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加15倍量的水浸泡20小时后，经水蒸气蒸馏10小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物15g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加10倍量的水提取2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.27的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以12000转/分的速度离心，上清液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，再用5倍柱体积90％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物85g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮200g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺调节pH值至7.0，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

实施例2：

(1)原料药的处方为：柴胡800g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加6倍量的水浸泡8小时后，经水蒸气蒸馏6小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物6g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加4倍量的水提取1小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.23的浸膏，加乙醇使含醇量达90％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以20000转/分的速度离心，上清液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用5倍柱体积的水洗脱后，再用2倍柱体积60％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物40g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇和葡聚糖254g，加注射用水至1000ml，调节pH值至4.0，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

实施例3：

(1)原料药的处方为：柴胡1000g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加10倍量的水浸泡12小时后，经水蒸气蒸馏8小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物10g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加8倍量的水提取2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.25的浸膏，加乙醇使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以15000转/分的速度离心，上清液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，再用3倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物65g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖和果糖225g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺调节pH值至6.0，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

实施例4：

(1)原料药的处方为：柴胡900g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加8倍量的水浸泡18小时后，经水蒸气蒸馏7小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物8g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加6倍量的水提取1小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达75％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以18000转/分的速度离心，上清液过已处理好的NKA大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，再用4倍柱体积70％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物73g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入右旋果糖和乳糖219g，加注射用水至1000ml，调节pH值至5.0，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

实施例5：

(1)原料药的处方为：柴胡1100g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加12倍量的水浸泡16小时后，经水蒸气蒸馏9小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物11g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加9倍量的水提取2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.26的浸膏，加乙醇使含醇量达85％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以13000转/分的速度离心，上清液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用5倍柱体积的水洗脱后，再用5倍柱体积75％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物52g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖237g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺调节pH值至6.5，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

实施例6：

(1)原料药的处方为：柴胡1050g；

(2)取柴胡药材，粉碎，加9倍量的水浸泡10小时后，经水蒸气蒸馏8小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃以下干燥，得到包合物13g；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加7倍量的水提取2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.25的浸膏，加乙醇使含醇量达81％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以16000转/分的速度离心，上清液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，再用3倍柱体积82％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物67g。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇、果糖和右旋果糖220g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺调节pH值至5.5，灌装，冷冻干燥，即得本发明柴胡冻干粉针剂500支。

肌内注射，一次1-2支，一日1-2次。

Claims (10)

1、一种柴胡冻干粉针剂，其特征在于它是由柴胡的挥发油HP-β-CD包合物6-15重量份、提取物40-85重量份和药用辅料254-200重量份制备而成；其特征还在于提取物中柴胡皂苷a、d的重量百分含量之和大于或等于25％。

2、根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于药用辅料为冻干赋型剂，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。

3、一种柴胡冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤：

(1)原料药为：柴胡；

(2)取柴胡药材，粉碎，加6-15倍量的水浸泡8-20小时后，经水蒸气蒸馏6-10小时提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物；

(3)将提取挥发油后煎煮液过滤，药渣再加4-10倍量的水提取1-2小时；合并两次煎煮液，静置，过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.23-1.27的浸膏，加乙醇使含醇量达70％-90％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，再用2-5倍柱体积60％-90％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。

(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，用葡甲胺调节pH值至4.0-7.0，灌装，冷冻干燥，即得。

4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，醇沉时乙醇浓度优选为75％-85％。

5、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，醇沉时乙醇浓度最佳为79％-81％。

6、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂为非极性或弱极性。

7、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂优选为D101型。

8、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度优选为70％-85％。

9、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度最佳为75％-82％。

10、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，高速离心速度以12000-20000转/分为宜。