CN103610768B - 一种治疗大肠杆菌病的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种治疗大肠杆菌病的组合物，其特征是：由下列药物组成，按重量份数计地锦草20～30份、穿心莲20～30份、十大功劳15～25份、虎杖10～20份、黄芩10～15份。将上述药材混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾0.25份、苯甲酸钠0.25份、丙二醇10体积份，及95％乙醇5体积份，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得。该药临床使用方便，无耐药性，对鸡大肠杆菌病有良好的治疗效果，可在养禽业广泛应用。
Description
技术领域
本发明涉及大肠杆菌病的防治技术领域，特别涉及一种用于治疗鸡大肠杆菌病的药物。
背景技术
鸡大肠杆菌病是我国临床常见的鸡病之一，具有发病快、死亡率高、病程长的特点，给养鸡业造成了极大的危害。目前对于大肠杆菌病多采用抗菌药物治疗，但由于此类药物的过量使用，已导致大肠杆菌的耐药谱不断扩大，防治效果下降，同时抗菌药物在机体内的残留，降低了肉蛋产品品质，影响了人类健康和公共卫生安全。抗鸡大肠杆菌病的疫苗尽管不断研制并投放市场，但致病性大肠杆菌血清型种类繁多，造成预防效果地下。临床实践表明，中药对鸡大肠杆菌病有较好的防治效果，并具有低残留、低毒性、治愈率高、不易产生耐药性等特点，符合当今社会倡导的绿色养殖的行业要求，有着广阔的发展前景。然而，目前养殖业中使用的治疗鸡大肠杆菌病的中药制剂，存在处方组成不科学、用药剂量过大、给药方式不合理、治疗效果不明显等弊端。因此，迫切需要依据传统中兽医理论基础，结合当前鸡大肠杆菌病的发病特征，筛选出疗效显著、使用方便的治疗鸡大肠杆菌病中药方剂。
本方剂以复方黄芩片的处方为基础，采用复方优化及拆方方法学的设计思路，发明人对大量具有清热解毒、抑菌消炎作用的中药进行筛选，通过考察不同中药组方及配比对禽大肠杆菌O78菌株致肉鸡大肠杆菌病病理模型的治疗效果，最终筛选出最佳中药组合物。该中药组合物经提取、浓缩等工艺制备成中药合剂，经对鸡大肠杆菌病自然病例的治疗效果研究，发现临床应用时有效率、治愈率高，效果显著，故可考虑将其用于鸡大肠杆菌病的治疗应用。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种疗效显著的治疗大肠杆菌病的组合物。
为实现上述目的，发明人以中兽药理论为基础，经过长期研究，筛选出本发明配方，主要采用如下实施方式：
一种治疗大肠杆菌病的组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料药制成：地锦草20～30份、穿心莲20～30份、十大功劳15～25份、虎杖10～20份、黄芩10～15份。
所述的原料药以重量份数表示时，地锦草与穿心莲的重量份数相等，虎杖与黄芩的重量份数相等，经方剂筛选试验研究发现，该组合比例具有治疗大肠杆菌病的最佳功效。
优选为：地锦草25份、穿心莲25份、十大功劳20份、虎杖15份、黄芩15份。
本发明采用行业通用方法制得：将上述药材混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾0.25份、苯甲酸钠0.25份、丙二醇10体积份，及95％乙醇5体积份，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得。
本发明所说的组合物的使用方法及用量是：混饮，每100ml兑水8kg，连用5天。
本发明的组方及其原理：
中医辩证认为鸡大肠杆菌病是属于外感风热，热结肠间形成湿热下注，热结于上中下三焦，引起三焦实热，耗损津液。治则以清热解毒、燥湿止痢、凉血生津为主。本发明组方中，地锦草、穿心莲具有清热解毒，凉血止血的作用，可清三焦实热，为君药；十大功劳有清热燥湿、解毒止痢的功效，辅助有燥湿、止痢的功效，为臣药；虎杖有祛风利湿，散瘀定痛，止咳化痰的作用，为佐药；使药为黄芩，引药入肺、大肠经，奏泻实火，除湿热的功效。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
实施例1：一种治疗大肠杆菌病的组合物，由下列药物组成，每份按10g计：地锦草250g、穿心莲250g、十大功劳200g、虎杖150g、黄芩150g。将上述中药混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾2.5g、苯甲酸钠2.5g、丙二醇100ml及95％乙醇50ml，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得用于治 疗鸡大肠杆菌病的中药合剂。
实施例2：一种治疗大肠杆菌病的组合物，由下列药物组成，每份按10g计：地锦草300g、穿心莲300g、十大功劳200g、虎杖100g、黄芩100g。将上述中药混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾2.5g、苯甲酸钠2.5g、丙二醇100ml及95％乙醇50ml，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得用于治疗鸡大肠杆菌病的中药合剂。
实施例3：一种治疗大肠杆菌病的组合物，由下列药物组成，每份按10g计：地锦草250g、穿心莲200g、十大功劳200g、虎杖150g、黄芩200g。将上述中药混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾2.5g、苯甲酸钠2.5g、丙二醇100ml及95％乙醇50ml，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得用于治疗鸡大肠杆菌病的中药合剂。
本发明组合物对鸡大肠杆菌病治疗效果的试验报告：
1试验材料
1.1试验用药
试验药物供试组合物分别由实施例1、2、3提供。
大捕快(4％氧氟沙星溶液)，由爱迪森(北京)生物科技有限公司提供。
鸡源大肠杆菌O78标准菌株，购于中国兽药监察所。
1.2试验动物
350只海兰褐公雏，1日龄，购于北京峪口禽业。
1.3饲养管理
试验鸡均饲养在标准鸡舍，自由采食与饮水，饲喂无抗生素添加的全价饲料。
2试验方法
2.1大肠杆菌O78菌株的培养
将大肠杆菌O78标准菌株溶液培养成原液浓度为4.6×1010个/ml，具体方法如下：
大肠杆菌计数，将O78细菌接种于营养肉汤中，培养18h后取出，准确吸取细菌培养液0.1ml，移至含0.9ml无菌生理盐水的试管内，振荡20min，使细菌分散，静置片刻即得1×10-1稀释液；然后用无菌注射器吸取1×10-1稀释液0.1ml移至装有0.9ml无菌生理盐水的试管内，充分振荡摇匀，即得1×10-2稀释液；再换一支1ml注射器，吸取1×10-2稀释液0.1ml移至装有0.9ml的无菌生理盐水的试管内，即得1×10-3稀释液，依次稀释得稀释液1×10-10稀释液。
给无菌培养皿编上不同稀释度的号码，每个号码设3个重复，先将培养基熔化并趁热倒入培养皿中制成平板凝固后编号；然后用注射器吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的平皿上；再用无菌铲将菌液均匀涂抹在平板上，在桌上平放，使细菌液渗透于培养基内；最后将培养皿倒转培养，于37℃条件下培养，分别按1×10-8，1×10-9，1×10-10稀释。选取菌落数在30～300个之间的平皿进行菌落总数的测定，一个稀释度用3个平皿，取其平均数，再乘以稀释倍数，即得菌落总数，最终原液浓度为4.6×10-10。
2.2动物预实验
随机抽取9日龄的鸡只40只，平均分为5个剂量组，每组肌肉注射大肠杆菌O78标准菌株培养液，注射剂量分别为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9ml/只。统计各剂量组鸡的死亡数，计算LD50，正式试验采用LD50剂量攻毒。
2.3治疗试验
鸡只饲养至11日龄时随机抽取10只，分别采血并从泄殖腔取排泄物进行细菌分离培养，用抗大肠杆菌O78的标准血清作玻片凝集反应，确认试验用鸡群不存在鸡大肠杆菌O78感染。
将300只12日龄的鸡只随机分6组，每组50只鸡。采用胸肌注射菌液的方式攻毒，注射剂量半数致死量，感染对照组死亡率约60％。试验动物分组及处理情况见下表。
表1试验动物分组及处理
2.4观察指标
2.4.1LD50的测定
注射大肠杆菌培养液2天后，统计各剂量组鸡的死亡数，计算LD50。
2.4.2疗效评价指标
发病率：凡在试验期间，健康对照组精神活泼，行为、饮食欲正常。与此相对应，雏鸡接种大肠杆菌后呈现精神沉郁，蹲伏扎堆，不欲饮食等明显临床症状；无菌采集心血、肝脏或气囊等，能分离到大量与攻毒菌株相同血清型大肠杆菌者判定为感染发病。发病率(％)＝组内发病数(只)/该组试验鸡数(只)×100％。
死亡率：试验期间，鸡在接种大肠杆菌后突然死亡或出现明显大肠杆菌病临床症状后死亡，剖检可见多数具有大肠杆菌病内脏器官病变，并从肝脏、心血或气囊等分离等到与接种菌相同的大肠杆菌者判定为感染死亡。感染死亡率(％)＝组内死亡数(只)/该组试验鸡数(只)×100％。
治愈率：试验期间，发病鸡经治疗后精神状态、饮食欲、粪便恢复正常，其它临床症状消失，抽查剖检内脏器官正常，从肝脏、心血或气囊等分离不到与接种菌相同的大肠杆菌者判定为治愈。治愈率(％)＝组内治愈数(只)/该组试验鸡发病数(只)×100％。
保护率：于停药后1天对每组存活的鸡进行剖检，记录每只鸡的心脏、肝脏和气囊的病变情况，计算各药物组的保护率，公式为：保护率(％)＝解剖后无症状、心包炎鸡数(只)×100％/该组试验鸡数(只)。
2.5数据分析
采用SPSS16.0统计软件对试验数据进行显著性检验，发病率、死亡率、治愈率和保护率均用卡方检验。
3试验结果
3.1LD50的测定结果
根据实验结果，确定正式试验攻毒剂量为0.6ml。
表2LD50测定结果
3.2药物疗效结果
各组的发病率、死亡率、治愈率和保护率见表3。
表3中药合剂对鸡大肠杆菌病的疗效
结果显示，试验组(实施例1、2、3)的死亡率、治愈率、保护率与攻毒对照组相比，差异极显著(P＜0.01)，与4％左氧氟沙星组相比无显著性差异(P＞0.05)；实施例1组的治愈率、保护率显著高于实施例3组(P＞0.05)，而与实施例2组相比差异不显著。结果表明，三个实施例组的组合物均能有效治疗鸡大肠杆菌病，且实施例1组的治疗效果最好。
4结论
该组合物对鸡大肠杆菌病有较好的疗效，推荐组合物配比为：以重量份数表示时地锦草25份、穿心莲25份、十大功劳20份、虎杖15份、黄芩15份，推荐给药方式为：混饮，每100ml药液兑水8kg，连续用药5天。
Claims (5)
1.一种治疗大肠杆菌病的组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料药制成：
地锦草20～30份、穿心莲20～30份、十大功劳15～25份、虎杖10～20份、黄芩10～15份。
2.根据权利要求1所述的治疗大肠杆菌病的组合物，其特征在于，地锦草与穿心莲的重量份数相等，虎杖与黄芩的重量份数相等。
3.根据权利要求1、2所述的治疗大肠杆菌病的组合物，其特征在于所述的原料药以重量份数表示优选为：地锦草25份、穿心莲25份、十大功劳20份、虎杖15份、黄芩15份。
4.根据权利要求1、2、3所述的治疗大肠杆菌病组合物的制备方法，其特征是按以下步骤进行：将上述药材混合均匀，每次加入10倍量水煎煮1.5h，煎煮3次，合并煎液过滤，滤液浓缩至每毫升含生药0.8g，加入山梨酸钾0.25份、苯甲酸钠0.25份、丙二醇10体积份，及95％乙醇5体积份，混匀，4℃冷藏24h，滤过，滤液加水调整至每1毫升含生药0.5g，灌装，即得。
5.权利要求1-3任意一项所述的组合物在制备治疗禽类大肠杆菌病的药物中的应用。
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