CN103156826B

CN103156826B - 百秋李醇的用途

Info

Publication number: CN103156826B
Application number: CN201310083795.2A
Authority: CN
Inventors: 彭成; 万峰; 熊亮; 林大胜; 唐正伟
Original assignee: Chengdu Huanshen Group Co Ltd; Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Chengdu Huashen Technology Group Co., Ltd; SICHUAN TAIJI PHARMACEUTICAL C, CN
Priority date: 2012-03-16
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2016-04-06
Anticipated expiration: 2033-03-15
Also published as: CN103127038B; CN103127038A; EP2826473A1; EP2826473B1; WO2013135192A1; CN103156826A; EP2826473A4

Abstract

本发明涉及百秋李醇在制备抗细菌药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品中的用途。本发明还提供了一种抗菌药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品。百秋李醇对致病菌或条件致病菌有良好的抑制活性，可有效用于治疗细菌感染性疾病，同时，百秋李醇还能够有效对抗耐甲氧西林耐药菌，其药效活性甚至与万古霉素相当，为减缓或避免耐药菌的出现提供了可能。

Description

百秋李醇的用途

技术领域

本发明涉及百秋李醇的新用途，属药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品等领域。

背景技术

细菌感染性疾病，是致病菌或条件致病菌侵入血液循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的全身性感染，它一直被视为极其凶险的疾病，直至AlexanderFleming于1928年偶然发现青霉素并用于临床后，人类与感染性疾病的斗争才有了一个重大突破。然而随着抗生素的广泛使用，滥用抗生素的危害远远超出人们的想象：英国的Jevons就首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，已成为医院内感染的重要病原菌之一。研究发现，MRSA除对甲氧西林耐药外，对其它所有与甲氧西林相同结构的β-内酰胺类和头孢类抗生素均耐药，MRSA还可通过改变抗生素作用靶位、产生修饰酶或降低膜通透性等不同机制，对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药，即具有广谱耐药性，而万古霉素成为了攻克MRSA感染的最后一道防线。但是，近年来随着万古霉素的使用，又出现了数例耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA)，为耐药菌感染的有效控制又蒙上了一层阴影。

耐药菌的出现使人们认识到，细菌耐药性产生的速度远远超出了新药研发的速度，如果继续发展，终有一天会因为耐药性而导致现有所有抗生素无效。正当人类面对耐药菌和机体耐药性迅速发展的严峻现实而焦头烂额之时，中医药作为新的抗菌药物脱颖而出，以其抗菌性强、毒副作用小而受到广大患者的青睐。

百秋李醇，又称广藿香醇，是存在于天然植物中的一种三环倍半萜化合物，其分子式为C₁₅H₂₆O，分子量为222.37，结构式名称1,6-Methanonaphthalen-1(2H)-ol,octahydro-4,8a,9,9-tetramethyl-,(1R,4S,4aS,6R,8aS)-，为无色晶体，有较淡的广藿香香气。不溶于水，溶于石油醚、乙醇和其它常用有机溶剂。

百秋李醇

当前对百秋李醇的生物活性研究发现，百秋李醇能有效抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀及角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀，且呈一定的剂量依赖关系，其中高剂量可明显降低致炎大鼠足趾中的NO、PGE-2、TNF-α含量，抑制iNOSmRNA的表达^[1]。百秋李醇在体内外均具有明显抗流感病毒活性，在体外抗流感病毒A/PR/8/34（H1N1）IC₅₀约为2.635μM，且呈剂量依赖性；对A型流感病毒（H2N2）的IC₅₀是4.03±0.23μM。在体内，灌胃5mg/（kg·d）对H2N2致流感病毒感染模型小鼠有明显保护作用^[3]；给药30mg/kg能抑制甲I型流感病毒所致小鼠肺炎病变，提高流感病毒感染小鼠生存率及延长其生命存活时间；灌胃40、80mg/kg，连续7天，可明显提高流感病毒A/FM/1/47（H1N1）致非致死及致死感染模型小鼠存活率，升高模型小鼠血清IgA、IgM、IgG含量，增加淋巴细胞CD3⁺、CD4⁺数目，减少CD8⁺数目。百秋李醇具有调节免疫功能低下小鼠体液免疫和单核吞噬细胞功能的作用，灌胃40、80mg/（kg·d），连续7天，能有效升高醋酸泼尼松致免疫低下小鼠的胸腺指数、脾指数、血素含量和廓清指数^[4]。此外，百秋李醇对白蚁有明显毒性和祛除作用^[5]；在体外0.05、0.5、5μg/ml能抑制雌激素受体β亚型中的Aβ_25～35引起的细胞内ROS水平和[Ca²⁺]_i升高，使细胞凋亡减少，对Aβ_25～35的神经毒性具有抑制作用^[6]；给药50-70mg/kg可明显抑制CuSO₄致鸡的呕吐反应^[7]；灌胃80、40mg/kg，可显著增强东莨菪碱致获得性学习记忆障碍小鼠的学习记忆能力，明显下降模型小鼠脑AchE活性，提高Chat活性、脑内M1受体水平^[8]。对百秋李醇的安全评价研究表明，用0.5%CMC-NA配制的百秋李醇溶液以最大浓度和最大给药体积给小鼠灌胃且连续观察14天，发现小鼠对百秋李醇的最大耐受量小于12.5g/kg^[9]。

目前，还未见将百秋李醇用于治疗细菌感染性疾病的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供百秋李醇的新用途。

本发明提供了百秋李醇在制备抗细菌药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品中的用途。

进一步地，所述药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品是预防、治疗或辅助治疗细菌感染性的药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品。所述细菌感染即由致病菌或条件致病菌引起的感染。

更进一步地，所述细菌为耐药菌。

进一步地，所述细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。

进一步地，所述革兰氏阳性菌为葡萄球菌属、肠球菌属、链球菌属、库特氏菌属、巨型球菌属、李氏杆菌属、丹毒丝菌属、肾杆菌属、芽孢杆菌素、梭菌属、分支杆菌属、放线菌属、奴卡菌属、棒状杆菌属、红球菌属、炭疽杆菌、丹毒杆菌、破伤风杆菌、李氏杆菌、产气荚膜杆菌、气肿疽杆菌或结核杆菌。

进一步地，所述革兰阴性菌为普通变形菌、阴沟肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、铜绿假单胞菌、鲁氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌。

更进一步地，所述耐药菌为耐甲氧西林或产超广谱β-内酰胺酶的细菌。

进一步优选地，所述耐药菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林表皮葡萄球菌。

进一步优选地，所述耐药菌为产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌或产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌。

进一步地，所述日化用品为洗浴用品或清洗剂。

更近一步地，所述洗浴用品为香皂、牙膏、沐浴露、洗手液、洗衣液或漱口水；所述清洗剂为洗洁精。

本发明还提供了一种抗菌药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品，其特征在于：它是由百秋李醇为活性成分，加上药物、保健食品、食品、化妆品、消毒剂或日化用品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述制剂为液体制剂、气体制剂、固体制剂、半固体制剂。

显然，根据本发明的上述内容，按照本发明相关领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

百秋李醇对致病菌或条件致病菌有良好的抑制活性，可有效用于治疗细菌感染性疾病，同时，百秋李醇还能够有效对抗耐甲氧西林耐药菌，其药效活性甚至与万古霉素相当，为减缓或避免耐药菌的出现提供了可能。

具体实施方式

本发明中所用百秋李醇（简称PC），均购买于市售产品，经结构鉴定为

百秋李醇

经含量测定，其纯度为98%以上。

实施例1本发明药物颗粒剂的制备

取百秋李醇，加入适量淀粉和糊精，制粒，即得颗粒剂。

实施例2本发明漱口水的制备

取百秋李醇，与丙二醇、吐温-60、蒸馏水、甘油、表面活性剂、异丙醇，分散均匀后，过滤，取滤液，包装即得漱口水。

实施例3本发明化妆品的制备

取百秋李醇，与适量羊毛脂、单硬脂酸甘油酯、凡士林、虫白蜡、硬脂酸、液体石蜡、苯甲酸、三乙醇胺、丙二醇、蒸馏水、吐温-60、偏重亚硫酸钠、香精、防腐剂、脑素肽、果酸钠、十六醇，均匀混合后，冷却储存，即得化妆品。

实施例4本发明消毒水的制备

取百秋李醇适量，与吐温-60、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇200、蒸馏水混匀，即得消毒水。

实施例5本发明日化用品——清洗剂的制备

取百秋李醇，加入适量羧酸聚合物、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、酶、酶稳定剂、泡沫控制剂、吐温-80、水制备得到。

实施例6本发明日化用品——洗手液的制备

取百秋李醇，与甘油、苯甲酸钠、氯化钠、去离子水、香精、三乙醇胺、单硬脂酸甘油酯、氢化羊毛脂、硬脂酸、尼泊金乙酯、白兰香精，分散均匀后，灌装，即得洗手液。

实施例7本发明食品——杨梅蜜饯的制作

取百秋李醇与杨梅，加适量橘皮粉、桂皮粉、砂糖、公丁香粉、甘草粉、小茴香粉、食盐及明矾，制备杨梅蜜饯。

取杨梅备妥后先放一层约20cm厚的杨梅，再放一层混合的食盐、明矾、百秋李醇，马上压紧。以后同样相间放杨梅和食盐明矾百秋李醇混合物，经压紧腌制后即成杨梅坯。取杨梅坯需加砂糖、香料粉、橘皮粉、桂皮粉、公丁香粉、甘草粉、小茴香粉后，再经浸水、晾晒、拌料、包装，即得杨梅蜜饯。

实施例8本发明保健食品——保肝茶的制作

取百秋李醇，加适量羧甲基纤维素钠，与适量经萎凋槽萎凋、双锅杀青机杀青、揉捻机揉捻后的茵陈、砂仁、枸杞、佛手、大青叶鲜茶、菊花、决明子、金银花、白术、山萸肉、白芍、桑叶、五味子、小茴香、山药混合均匀，制备养肝茶。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。

试验例1百秋李醇的体外抑菌活性研究

1材料及仪器

1.1实验仪器

多点接种仪（日本佐久间制作所，SAKUMAMIT-P型），电热恒温水浴锅（北京同华医疗器械厂，DSY-1-6孔），实验室用高压灭菌器（SANYO，MLS-3780型），CO₂INCUBATOR(SANYO，MOC-15A)，节能净化工作台（成都新光非兰特净化工程有限公司）。

1.2实验菌株

①质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213；金黄色葡萄球菌ATCC25923；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC43300；表皮葡萄球菌ATCC12228；屎肠球菌ATCC33186；粪肠球菌ATCC29212；粪肠球菌（高耐）ATCC51299；肺炎链球菌ATCC49619；大肠埃希菌ATCC25922；肺炎克雷伯菌ATCC700603。以上标准质控菌株均为四川抗菌素工业研究所提供。

②受试菌株：金黄色葡萄球菌MSSA、金黄色葡萄球菌MRSA、表皮葡萄球菌MSSE、表皮葡萄球菌MRSE、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、牛链球菌、棒状杆菌、吉氏库特氏菌、埃氏巨型球菌、沃氏葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、耳葡萄球菌、溶血葡萄球菌、普通变形菌、阴沟肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、铜绿假单胞菌、鲁氏不动杆菌、弗氏志贺氏菌等菌株。以上菌株均为2010年10月至2012年1月在四川成都地区、北京地区三等甲级医院收集的临床分离致病菌。标本主要来源于血液、痰、尿液等。在收集单位经法国梅里埃（BioMeriruk）VITEK-32、VITEK-60自动微生物鉴定分析仪进行鉴定，再经四川抗菌素工业研究所用Biolog细菌鉴定仪（美国）及API20E、20NE、Staph系列和常规方法重新鉴定后用于实验。

1.3药物

试验药物：百秋李醇(PC)。

阳性药物：注射用阿奇霉素（湖南中南科伦药业有限公司，批号：B1103141）；注射用盐酸万古霉素（浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：111204）；注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司，批号：Y1104101）；注射用盐酸头孢吡肟（华北制药凯瑞特药业有限公司，批号：B8070803）；盐酸左氧氟沙星注射液（扬子江药业集团有限公司，批号：11121831）。

1.4培养基、试剂及耗材

Mueller-Hintonagar(OXOID，批号：729683），营养琼脂培养基（杭州微生物试剂有限公司，批号：20100831-02），氯化钠（天津市大茂化学试剂厂，批号：20080328），MILLEX-GPFilterUnit（0.22μm），一次性无菌培养皿（90mm，购自江苏康健生物有限公司），McfarlandStandard（bioMeriéux,Inc.批号：821772701）等。

2试验方法

含药平板的制备：采用倍比稀释法用DMSO溶解液对百秋李醇溶解液（DMSO溶解）进行稀释，在一次性无菌培养皿中分别加入不同浓度梯度的药液1ml和14ml灭菌的MH培养基，将供试药物分别稀释成768到0.006μg/ml等不同浓度梯度，充分混匀，烘干后备用，以平板内加入等量生理盐水代替药物制备阳性对照平板。

菌液配置：将受试菌株和药敏质控菌株用无菌生理盐水调至菌液浓度10⁶CFU/ml。

体内抑菌活性测定：采用多点接种仪将实验菌株的菌液加入不同浓度梯度的含药平板和阳性对照平板，并以5μL生理盐水代替菌液作阴性对照。

金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌用MH培养基(含2%的NaCl)，35-37℃孵育18-24h；肺炎链球菌：含5%羊血的脑心浸液琼脂培养基，35℃含5％的CO₂孵育箱中孵育24小时；革兰氏阴性菌及其他菌种置于35-37℃培养箱内培养18-20h；观察记录结果。

结果判定：以无细菌生长平板内药物的最小浓度为此药对该菌株的最低抑菌浓度(MIC)。

3.实验结果

对受试革兰阳性菌、革兰阴性菌的体外抑菌活性实验结果参见表1-5。

其中，MSSA：甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌；MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；

MSSE：甲氧西林敏感表皮葡萄球菌；MRSE：耐甲氧西林表皮葡萄球菌；

大肠埃希菌埃希菌E^-：非ESBLs菌株；大肠埃希菌埃希菌E⁺：ESBLs菌株；

肺炎克雷伯菌E^-：非ESBLs菌株；肺炎克雷伯菌E⁺：ESBLs菌株；

ESBLs：为产超广谱β-内酰胺酶菌株。

表1

表2

表3

表4

表5

由表1-5可知，百秋李醇对革兰阳性菌、革兰阴性菌（甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、牛链球菌、棒状杆菌、吉氏库特氏菌、埃氏巨型球菌、沃氏葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、耳葡萄球菌、溶血葡萄球菌、普通变形菌、阴沟肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、铜绿假单胞菌、鲁氏不动杆菌、弗氏志贺氏菌等）均具有较强的抑菌活性，MIC为1.5～200μg/ml；对大肠埃希菌ESBLs^－/ESBLs⁺、肺炎克雷伯菌ESBLs^－/ESBLs⁺的MIC值均大于或等于768μg/ml。

上述结果表明，百秋李醇对革兰阳性菌、革兰阴性菌的敏感或耐药菌株均具有良好的抗菌活性，其中，百秋李醇抑制耐甲氧西林耐药菌的效果显著。

试验例2百秋李醇的体内抗菌活性

1实验材料

1.1药物

供试药物，百秋李醇（PC）；

阳性药物，注射用盐酸万古霉素，规格：50万单位，浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：111204；

造模药物：MucinformPorcineStomach(TypeⅡ),规格：100g，SIGMA-ALDRICH，批号：018K0079。

1.2菌株

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC43300，四川抗菌素工业研究所提供。

1.3动物

KM小鼠，SPF级，雌雄各半，体重（20±2）g，四川省生物制品研究所提供，合格证号SCXK（川）2008-08。

2实验内容

2.1预试验

实验菌株毒力的测定：37℃恒温培养受试耐甲氧西林金黄色葡萄球菌至对数生长期，用生理盐水稀释成不同浓度梯度的菌液。取不同浓度的菌液与10%胃膜素等量混合，按0.5ml/20g的菌液量腹腔注射小鼠，并以5%胃膜素为对照。在对照小鼠不死亡的前提下，记录小鼠14d内的死亡率，测定小鼠全部死亡的最低细菌量，即该菌液的最小致死量（MLD）。

体内有效剂量的预试：设置多个不同剂量组对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所引起的感染模型小鼠进行腹腔注射，每组4只，1次/d，并提前1天给药，在第2天给药后0.5h攻毒，观察动物14d内的死亡情况，确定正式试验给药剂量。

2.2体内抗菌活性

取18～22gSPF级KM小鼠，雌雄各半，每组10只，分为注射用盐酸万古霉素组，百秋李醇高、中、低剂量组，空白组，模型组，胃膜素对照组等8组，均腹腔注射小鼠，1次/d，并提前1天给药，在第2天给药后0.5h攻毒，即选取含5%胃膜素的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌液腹腔注射。其中以生理盐水代替药物为模型组；以既不给药也不攻毒为空白组；以不给药只注射不含细菌的5%胃膜素为胃膜素对照组。

2.3数据统计

观察小鼠攻毒后14d内的存活情况，统计其存活率。

3实验结果

3.1预试验

预试验结果表明，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对小鼠的MLD为1.28×10⁷CFU/g；确定百秋李醇小鼠体内抗菌试验的高、中、低剂量分别为50、100、200mg/kg。

3.2体内抗菌活性

实验结果详见下表。

表6百秋李醇对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的体内保护

由上表可知，百秋李醇腹腔注射，对由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌诱导的被感染小鼠有很好的体内保护作用，其高、中剂量组保护力达到了100%，低剂量亦达到了80%，与注射用盐酸万古霉素保护力相当。

试验例3百秋李醇对细菌感染的预防作用

1实验材料

1.1药物

供试药物，百秋李醇（PC）；

1.2菌株

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC43300，金黄色葡萄球菌ATCC25923，四川抗菌素工业研究所提供。

2实验方法

以上述实验材料中的2株细菌为代表菌，进行试验。

精确称量百秋李醇，再加入适量吐温-60、羧甲基纤维素钠、甘油和无水乙醇搅拌均匀，在导管内壁涂层，其中导管内膜中百秋李醇的浓度分别为1200、800、600、400、200、100、50、25、0μg/ml，自然干燥后放入PBS缓冲液中固定20min，如此重复几遍，直至导管内壁成膜即可。

吸取0.1ml的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC43300或金黄色葡萄球菌ATCC25923菌悬液种入含有4.9ml生理盐水及1cm导管的无菌杯中（导管水平放置），37℃培养，隔日更换液体，连续培养7d后，对导管生物膜上的细菌冲洗后进行菌落计数，每组制备8个样品。

3实验结果

导管内膜中百秋李醇的浓度大于或者等于600μg/ml时，金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的菌落数均为0；400、200、100、50μg/ml时，对两株细菌的菌落数，相较0μg/ml而言，均明显降低。

综上所述，百秋李醇对致病菌或条件致病菌有良好的抑制活性，可有效用于预防、治疗细菌感染性疾病，同时，百秋李醇还能够有效对抗耐甲氧西林耐药菌，其药效活性甚至与万古霉素相当，为减缓或避免耐药菌的出现提供了可能。

附：参考文献

1、LiYC,XianYF,IpSP,etal.Anti-inflammatoryactivityofpatchoulialcoholisolatedfromPogostemonisHerbainanimalmodels[J].Fitoterapia,2011,82(8):1295-1301.

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6、黄晓舞，白林，徐风华，等.广藿香醇对β-淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用[J].解放军药学学报，2008，24（4）：338-340.

7、YangY,KinoshitaK,KoyamaK,etal.Anti-emeticprinciplesofPogostemoncablin(Blanco)Benth[J].Phytomedicine,1999,6(2):89-93.

8、黄晓舞，刘睿婷，吕秋军.百秋李醇对东莨菪碱致记忆障碍小鼠学习记忆功能的影响[J].中草药，2009，40（9）：1431-1433.

9、任守忠，张俊清，刘明生.百秋李醇的急性毒性实验[J].海南医学院学报，2009，15(12)：1503-1504）.

Claims

1.百秋李醇作为唯一活性成分在制备抗细菌药物、食品或日化用品中的用途，其中，所述细菌为耐药菌；所述的耐药菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林表皮葡萄球菌。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的食品是保健食品。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述日化用品为洗浴用品或清洗剂。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述洗浴用品为香皂、牙膏、沐浴露、洗手液、洗衣液或漱口水；所述清洗剂为洗洁精。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物、食品或日化用品是由百秋李醇为活性成分，加上药物、食品或日化用品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的食品是保健食品。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的日化用品为化妆品或消毒剂。

8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述制剂为液体制剂、气体制剂、固体制剂或半固体制剂。