CN107854526A - 一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法和应用，该组合物由以下重量份的中药组成：小鱼眼草7～21重量份，凉粉草15～45重量份，圆穗蓼6～18重量份，梁王茶9～27重量份。本发明的中药组合物具有标本兼治，整体疗效高，疗程短，不易产生耐药性，残留低，毒副作用小等优点，对于促进养鸡业的健康发展，具有十分重要的经济效益和社会效益。

Description

一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中兽药领域，具体涉及一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
鸡大肠杆菌病是目前养鸡场较为常发且影响面较广的一种细菌性传染病，该病可引起不同日龄及品种的鸡发病。在临床上，以败血症、肝周炎、气囊炎和心包炎为主要特征。特别是在家禽方面，一但有大肠杆菌出现，通常会导致多种疾病同时出现，如禽流感，新城疫等。鸡大肠杆菌病的发病原因主要表现在两个方面，一是环境、水源等污染导致的原发性感染，二是饲养管理应激或其它疫病发生时导致的继发感染。由于鸡大肠杆菌的血清型较多，不同的地理区域其血清型存在很大差异，给该病的免疫预防带来很多困难，至今未研究出理想的疫苗，而鸡大肠杆菌病的治疗，一直依赖抗生素及化学药品制剂，由于长期使用，使大肠杆菌产生了很强的耐药性，药物用量越来越大，又给禽类肉、蛋食品安全带来很大的危害。在今后的养鸡生产中，抗生素及化学药品的大面积使用将逐步受到一定的限制。我国中药资源丰富，容易获取，价格低廉，毒副作用小，几乎无残留，无抗药性，不污染环境，还能达到标本兼治的效果。因此，研究中药制剂治疗鸡大肠杆菌病，显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，该中药组合物能迅速杀灭鸡体内大肠杆菌，排泄体内毒素，提高机体免疫力，达到标本兼治的目的。
本发明的另一目的是提供该治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供该治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物的应用。
本发明的目的是通过下列技术方案来实现的：
一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，该组合物由下列重量份的组分制成：
小鱼眼草7～21重量份，凉粉草15～45重量份，圆穗蓼6～18重量份，梁王茶9～27重量份。
上述组合物优选由下列重量份的组分组成：
小鱼眼草8～10重量份，凉粉草17～20重量份，圆穗蓼7～9重量份，梁王茶10～12重量份。
上述治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物优选制备剂型是口服液。
上述治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物通过下列步骤制备得到：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加水浸泡，煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩。
上述治疗鸡大肠杆菌病的中药口服液的制备方法包括以下步骤：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶药材混合，加总重3～4倍的水浸泡24～30小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5～1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95％乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀沉淀，过滤，滤液回收乙醇再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩得浓度为每毫升含1～2克生药量的药液，调pH7.0，制成口服液。
上述制备的中药组合物在制备治疗鸡大肠杆菌病的药物中应用就有显著的效果。
本发明的有益效果：
本发明治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物中，小鱼眼草(Dichrocephala benthamiiC.B.Clarke)功能：清热解毒,祛风明目。主治肺炎，肝炎，消化不良等。凉粉草(Mesonablumes Benth.)功能:消暑，清热，凉血，解毒。主治中暑等。圆穗蓼(Polygonummacrophyllum)功能：清热解毒，止血，活血。主治咽喉肿痛，乳蛾，痈疮肿毒，湿热泄泻等。梁王茶(Nothopanax dalavayi(Franch.)Harms ex Diels.)功能：清热解毒，活血舒筋。主治咽喉肿痛，目赤肿痛，消化不良，风湿腰腿痛，跌打损伤，骨折；现代研究表明，还有免疫双向调节、提高机体抵抗力的作用。本发明采用上述中药组分并优选配比制成的中药组合物能迅速杀灭鸡体内大肠杆菌，排泄体内毒素，提高机体免疫力，达到标本兼治的目的，且整体疗效高，疗程短，不易产生耐药性，残留低，毒副作用小。
下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效：
一、实验室药敏试验
中药药敏片的制备：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆形纸片50片放入灭菌、干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15～20分钟高压灭菌后，放在37℃温箱中数天，使完全干燥。
中药药敏纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液(按实施例3制备得到)0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，同时在瓶口上记录药物名称，放在37℃温箱中过夜，干燥后即密盖，置阴凉干燥处存放，有效期6个月。
西药药敏片：卡那霉素、头孢唑啉、环丙沙星、强力霉素、新诺明为对照，由杭州天和微生物试剂有限公司生产。
菌株：O78型大肠杆菌，由中国兽医药品监察所提供。用普通培养基将菌株O78在37℃培养复壮24小时，再接种于肉汤培养基中扩大培养24小时，培养物装瓶于4℃保存备用。
在超净工作台中，用酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量鸡大肠杆菌培养液于少量生理盐水中制成细菌混悬液,用灭菌绵拭子将待检细菌混悬液均匀地涂布于普通平皿培养基表面。
将镊子在酒精灯火焰灭菌后，取药敏片贴到平皿培养基表面，用镊子轻按药敏片，使药敏片与培养基紧密相贴，在平皿中央贴一片，外周等距离贴若干片，标记每种药敏片的名称。将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时，观察结果。
药敏试验结果观察：按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准，抑菌圈直径(毫米)敏感度：＞20为极度敏感，15～20为高度敏感，10～14为中度敏感，＜10为低度敏感，无抑菌圈为不敏感。结果见表1。
表1鸡大肠杆菌药敏试验结果
从表1可以看出，本发明中药口服液对鸡大肠杆菌的抑菌效果和环丙沙星相似，比卡那霉素、头孢唑啉、强力霉素、新诺明还强的多。
二、人工诱发鸡大肠杆菌病模型
1.试验动物与分组
本试验用15日龄来航鸡，试验前剔除过大、过小、体弱的雏鸡，随机分组，每组30只。试验设计了6个组，即本发明样品1(按实施例2制备)高剂量组、中剂量组、低剂量组、西药对照组、感染对照组和空白对照组。
2.试验方法
(1)致死量测定经测定1×107个/毫升的菌液，每只鸡胸部肌肉注射0.5毫升。
(2)操作空白对照组的鸡不用药，不接种菌液，其余5组的鸡在同一时间每只鸡胸部肌肉注射大肠杆菌菌液0.5毫升，菌液浓度为1×107个/毫升。
(3)用药方法与疗效鸡在接种大肠杆菌后第二天，用本发明实施例2饮水。高剂量组，5毫升口服液加水500毫升，自由饮水；中剂量组，2.5毫升口服液加水500毫升，自由饮水；低剂量组，1.25毫升口服液加水500毫升，自由饮水；西药对照组，500mL饮水中加盐酸环丙沙星10毫克，自由饮水。每个组连续饮水治疗5天，感染对照组与空白对照组的鸡不用任何药物，自由饮水。结果见表2。
表2鸡大肠杆菌病治疗结果
3.各组鸡体重、胸腺、脾脏重量情况
各组鸡在接种大肠杆菌的当天与第10天，分别称取体重。鸡在接种大肠杆菌后的第10天，剖杀后称取各组鸡的胸腺、脾脏的重量。结果见表3。
表3中药治疗对鸡的体重及胸腺、脾脏重量的影响
注：同一列中标有不同字母的数值间差异显著(P＜0.05)。
胸腺重量，中药高剂量、中药中剂量组与空白对照组比较差异不显著。
脾脏重量，中药高剂量、中药中剂量组、西药对照组与空白对照组比较差异不显著。
中药高剂量组、中药中剂量组鸡的脾脏与胸腺发育良好，说明中药可以保护机体免疫器官不受损伤，激活机体免疫器官提高机体免疫力来抗大肠杆菌感染。
三、本发明对临床鸡大肠杆菌病的治疗效果
2015年3月，江苏省东台市某鸡场，饲养7200只肉鸡，在11日龄时发病，部分鸡离群呆立或挤堆，羽毛松乱，食欲减退，排黄白色稀粪，肛门周围羽毛污染。心包积液，心包膜混浊，有纤维素性参出物，气囊炎，肝脏肿大。初步诊断为大肠杆菌病，为了确诊，进行了实验室诊断。
1.细菌学诊断
细菌培养：无菌采取病鸡心、肝、气囊、关节液直接在麦康凯琼脂平板划线培养，于37℃培养箱中培养24小时，挑取砖红色、光滑的单个菌落，经革兰氏染色、镜检，观察到革兰氏阴性短杆菌后，挑取该菌落划线接种于伊红美蓝琼脂培养基，于37℃培养箱中培养24h，在挑取紫黑色带金属光泽的单个菌落接种普通肉汤，于37℃培养箱中培养24小时，在4℃冰箱保存备用。
细菌生化试验：对分离纯化的细菌，接种于生化试验微量发酵管，37℃培养24小时，符合大肠杆菌的特征。
2.治疗情况
1200只病鸡，在100公斤水中加本发明口服液500毫升(按实施例2制备)，自由饮水，共用药5天，死亡92只，其余全部康复，治愈率92.33％。
对照组1：1200只病鸡，在100公斤水中加小鱼眼草口服液(按照对比例1方法制备)500毫升，自由饮水，共用药5天，死亡348只，治愈率71.00％。
对照组2：1200只病鸡，在100公斤水中加圆穗蓼口服液(按照对比例2方法制备)500毫升，自由饮水，共用药5天，死亡441只，治愈率63.25％。
对照组3：1200只病鸡，在100公斤水中加梁王茶口服液(按照对比例3方法制备)500毫升，自由饮水，共用药5天，死亡479只，治愈率60.08％。
对照组4：1200只病鸡，在100公斤水中加凉粉草口服液(按照对比例4方法制备)500毫升，自由饮水，共用药5天，死亡288只，治愈率76.00％。
对照组5：1200只病鸡，在100公斤水中加小鱼眼草和圆穗蓼口服液(按照对比例5方法制备)500毫升，自由饮水，共用药5天，死亡229只，治愈率80.92％。
从2015年至今，已在江苏省的南通、盐城、泰州、扬州等市应用本发明治疗鸡大肠杆菌病18个鸡场，治疗达20多万只病鸡，治愈率在92％以上，比抗生素治疗效果好。结果见表4。
表4临床治疗鸡大肠杆菌病的结果
四、安全性评价
取ICR小鼠40只，体重在25～30克，按体重随机分成5组，每组8只，雌雄各半，口服溶液给药(按实施例2制备得到)，给药量分别为0.2毫升/只、0.4毫升/只、0.6毫升/只和0.8毫升/只，每天口服2次，连续给药5天，停药后连续观察20天。对照组自由饮水。结果所有小鼠健存，其活动、饮食、毛发、排泄物未发现异常，未见毒性反应。对小鼠口腔和破损皮肤进行刺激性试验，未见有刺激性反应和其它不良反应。
具体实施方式
为了更清晰的理解本发明，以下结合实施例对本发明做进一步描述。但实施例的具体细节仅用于解释本发明，不以任何方式限制本发明。
实施例1：
组方：小鱼眼草8克，凉粉草17克，圆穗蓼7克，梁王茶10克。
具体制备过程如下：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍重量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例2：
组方：小鱼眼草9克，凉粉草20克，圆穗蓼7克，梁王茶10克。
具体制备过程如下：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加药材总重3倍的水浸泡24小时，煎煮2次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量水冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1克的药液，调pH7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例3：
组方：小鱼眼草10克，凉粉草18克，圆穗蓼9克，梁王茶12克。
具体制备过程如下：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加药材总重4倍的水浸泡24小时，煎煮2次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加其4倍量的水冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药2g的药液，调pH7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例4：
组方：小鱼眼草21克，凉粉草30克，圆穗蓼18克，梁王茶27克。
具体制备过程如下：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加药材总重4倍的水浸泡30小时，煎煮2次，每次煮沸后维持1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水冷藏沉淀60小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
对比例1：
将小鱼眼草9克加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
对比例2
将圆穗蓼7克加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
对比例3
将梁王茶10克加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
对比例4
将凉粉草20克加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
对比例5
将圆穗蓼7克、小鱼眼草9克加药材总重4倍的水浸泡24小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48小时以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置48小时，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加4倍量的水，冷藏沉淀48小时，过滤，滤液浓缩，得浓度为每毫升含生药1.5克的药液，调pH 7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。

Claims (6)

1.一种治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于，它由以下重量份的中药组分组成：
小鱼眼草7～21重量份，凉粉草15～45重量份，圆穗蓼6～18重量份，梁王茶9～27重量份。
2.根据权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于所述的它由以下重量份的组分组成：
小鱼眼草8～10重量份，凉粉草17～20重量份，圆穗蓼7～9重量份，梁王茶10～12重量份。
3.根据权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于所述中药组合物剂型为口服液。
4.权利要求1～3任意一项权利要求所述的治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加水浸泡，煎煮2～3次，合并煎液后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩。
5.根据权利要求3所述的治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于所述治疗鸡大肠杆菌病的中药口服液的制备方法：
将小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶混合，加药材总重3～4倍的水浸泡24～30小时后煎煮3次，每次煮沸后维持0.5～1小时，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加95％乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀沉淀，过滤，滤液回收乙醇再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩得浓度为每毫升含1～2克生药量的药液，调pH7.0，制成口服液。
6.权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中药组合物在制备治疗鸡大肠杆菌病的药物中的应用。
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