CN107519248A - 一种奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法 - Google Patents

一种奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及兽药技术领域，具体涉及一种奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法。由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油1‑3份，杜仲叶提取物和茶树精油组成混合油，混合油中添加辅料制得灌注液,辅料包括大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水。采用杜仲叶提取物作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎的作用，治疗奶牛临床型乳腺炎效果极好；采用茶树精油复配，不但增加了其抗菌活性，而且大大增加了其渗透性，产品不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全，也不易产生耐药性。

Description

一种奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法
技术领域
本发明涉及兽药技术领域，具体涉及一种奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法。
背景技术
奶牛乳腺炎最常见的发病原因是病原微生物通过奶牛乳头管侵入乳腺，牛奶为病原微生物生长提供了优越的环境，病原微生物在乳腺内大量繁殖，产生毒素与酶，刺激脆弱的乳腺组织，使乳腺发炎。据报道，引起奶牛乳腺炎的病原微生物多达150余种，较常见的有20余种，其中，金黄色葡萄球菌、链球菌具有国际广泛性，约占整个奶牛乳腺炎病例的70%，占我国病例的90%以上。抗生素疗法目前仍是国内外所采用的治疗乳腺炎最常用的方法，在乳腺炎治疗及控制奶品质量的综合防治中具有重要作用。对于临床型乳腺炎目前国内外都选用抗生素进行治疗，抗生素疗法作用快速，可直接杀灭病原菌，但有的病原菌易产生耐药性，对于泌乳期奶牛来说，大量应用抗生素还会导致抗生素在乳中残留，对人类健康造成威胁。因此近年来人们逐渐把目光转移到了中药治疗上，中药属纯天然物质，毒性低，不会造成严重的药物残留，不易产生抗药性，克服了使用抗生素的不足，应用复方中药制剂替代抗生素，已逐渐被广大用户所接受。
发明内容
本发明解决现有技术不足提供一种便于制备、性能稳定的奶牛乳腺炎中药灌注液及其制备使用方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：
一种奶牛乳腺炎中药灌注液，由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油1-3份，杜仲叶提取物和茶树精油组成混合油，混合油中添加辅料制得灌注液, 辅料包括大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水。
所述混合油中添加辅料制得灌注液，灌注液由以下重量份的混合油1份和辅料6份混合。
所述辅料由以下重量份的各物质组成：大豆油1份、甘油2份、单硬脂酸甘油酯0.1份、尼泊金乙酯0.1份、环糊精1份、凡士林0.05份和蒸馏水10份。
由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油2份。
一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，包括如下步骤：
A、混合油制备
无菌条件下，杜仲叶提取物和茶树精油室温下混合，水浴加热至40～50℃，水浴保温0.5h；
B、辅料制备
将辅料中大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水混合，水浴加热至60～70℃，水浴保温0.5h；
C、主辅料混合
将辅料液体加入混合油中，加入时不断搅拌制得混合液，冷凝至室温。
D、灌注液分装
混合液每10ml灌装在一次性注射液器中，再将一次性注射液器放入塑料袋封口；
E、辐照灭菌
通过60Co-γ辐照，辐照剂量25-35kGy，辐照时间10-30s，得到成品；
F、灌注液注射
使用一次性注射液器将灌注液直接注入奶牛乳腺中。
所述步骤C中辅料液体加入混合油中沿同一方向搅拌，搅拌速度3000转/min搅拌乳化15min。
所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间10-30s，得到成品。
所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间20s，得到成品。
本发明的有益效果为：
1．采用杜仲叶提取物作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎的作用，治疗奶牛临床型乳腺炎效果极好；采用茶树精油复配，不但增加了其抗菌活性，而且大大增加了其渗透性，产品不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全，也不易产生耐药性。
2．通过产品通过辐照交联，增加了其稳定性、杀灭了细菌，使得该灌注液性质稳定且质量可控，非常有利于工业化生产；
3、作为一种有效治疗奶牛乳腺炎的灌注液，其效果确切，使用方便，直接注入乳腺即可，便于推广使用。
此外杜仲是落叶乔木，杜仲科杜仲属，杜仲皮是名贵的药材，已有两千多年的用药历史。以往主要是以杜仲皮入药，近来研究发现杜仲叶和杜仲皮中均含有绿原酸、杜仲酸、多糖、珊瑚苷以及黄酮类等相似活性成分，其中杜仲叶中绿原酸的含量要高于杜仲皮，而且杜仲叶和杜仲皮都具有抑菌、抗炎、抗肿瘤、增强免疫力以及抗氧化等多种药理作用。因此，杜仲叶被正式纳入 2005 版《中国药典》，并确定绿原酸为杜仲叶主要药用有效成分和含量检测标准。杜仲中含有绿原酸、桃叶珊瑚苷以及黄酮类等多种生物活性成分对多种病原菌都有很好的抑制作用。研究表明，杜仲水煎剂对金黄色葡萄球菌、停乳链球菌大肠杆菌、结核杆菌、福氏痢疾杆菌、绿脓杆菌、炭疽杆菌、蜡样芽胞杆菌和白色葡萄球菌等都有抑制作用。同时，探究中药杜仲及其单体化合物对 HIV 的作用，其试验模型为感染 HIV 病毒的MT4 细胞，结果显示，杜仲提取物及其分离出的单体化合物对 HIV 病毒都有抑制作用，除此以外还提出杜仲具有一定的镇痛作用。近年来，茶树油抗菌作用的研究成为国际上的研究热点。体外实验表明茶树油具有广谱抗菌活性。临床数据证明茶树油在处理痤疮、口腔念珠菌病、清除甲氧西林耐药性金葡菌球菌方面有效。因此其抗菌作用主要与其渗透性有关，故茶树油可望开发成为一种新结构的抗菌渗透剂。透皮吸收促渗剂有助于药物克服皮肤角质层的障碍，其促渗机制是溶解皮肤脂质或使皮肤蛋白变性，可逆地改变皮肤角质层的屏障作用，且不损伤任何活性细胞，达到增加药物在皮肤的溶解度，使药物透皮吸收率增加的目的。60Co-γ射线辐射最早应用于食品辐射，在确保辐射食品安全性的前提下,国内外首先展开γ射线在食品保鲜中的研究与应用。γ射线辐射灭菌的优势主要在于不引起被辐射物明显升温，特别适用于热敏物品的灭菌，穿透力强，可杀灭包装箱内被辐射物品的微生物，降低生产成本；化学变化少，无残留；控制因素少、使用方便，管理费用低。辐照交联,是指聚合物在电离辐照的作用下,分子链间发生交联,分子量增大的现象。辐照交联的结果是聚合物的分子量随辐照剂量的增加而增大,以致在原来的稳定性增加。一般聚合物的辐照交联不需添加任何添加剂,在常温下即可达到交联的目的。
本发明筛选到了防治奶牛乳腺炎的中药有效成分杜仲叶提取物、发现了具有协同作用并可作促进皮肤吸收为透皮剂茶树精油，配以课题组多年研制的辅料，再通过辐照聚合增加中药灌注液稳定性并解决了因为包装在一次性注射器中，难于消毒的难题，保障了该灌注液的使用安全性。
具体实施方式
一种奶牛乳腺炎中药灌注液，由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油1-3份，杜仲叶提取物和茶树精油组成混合油，混合油中添加辅料制得灌注液, 辅料包括大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水。所述混合油中添加辅料制得灌注液，灌注液由以下重量份的混合油1份和辅料6份混合。优选的所述辅料由以下重量份的各物质组成：大豆油1份、甘油2份、单硬脂酸甘油酯0.1份、尼泊金乙酯0.1份、环糊精1份、凡士林0.05份和蒸馏水10份。由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油2份。
一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，包括如下步骤：
A、混合油制备
无菌条件下，杜仲叶提取物和茶树精油室温下混合，水浴加热至40～50℃，水浴保温0.5h；
B、辅料制备
将辅料中大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水混合，水浴加热至60～70℃，水浴保温0.5h；
C、主辅料混合
将辅料液体加入混合油中，加入时不断搅拌制得混合液，冷凝至室温。
D、灌注液分装
混合液每10ml灌装在一次性注射液器中，再将一次性注射液器放入塑料袋封口；
E、辐照灭菌
通过60Co-γ辐照，辐照剂量25-35kGy，辐照时间10-30s，得到成品；
F、灌注液注射
使用一次性注射液器将灌注液直接注入奶牛乳腺中。
优选的所述步骤C中辅料液体加入混合油中沿同一方向搅拌，搅拌速度3000转/min 搅拌乳化15min。所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间10-30s，得到成品。
优先的所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间20s，得到成品。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
1、材料与方法
1.1 试验药品
杜仲叶提取物选用西安明泽生物科技有限公司
茶树精油选用天津中澳嘉喜诺生物科技有限公司
大豆油，甘油，单硬脂酸甘油酯，尼泊金乙酯，环糊精，凡士林均采自国产医药级原料。
1.2 仪器
生化培养箱：上海一恒科学仪器有限公司；超低温冰箱：日本三洋。生化培养箱：上海一恒科学仪器有限公司。倒置显微镜：重庆光电有限公司。电子天平：梅特勒、常熟双杰测试仪器厂。
钴 60 辐射：甘肃中农威特辐射公司。
1.3实验设计
实验设计遵循实验要求，筛选药杜仲叶提取物与茶树精油配比，确定60Co-γ辐照可以实现交联，增加了其稳定性，同时可以杀灭了细菌的剂量。
表1筛选配方（W/W）及辐照剂量设计：
2.灌注液的制备：
2.1通过多年的应用，确定灌注液的辅料配方(重量比)：大豆油1份，甘油2份，单硬脂酸甘油酯0.1份，尼泊金乙酯0.1份，环糊精1份，凡士林0.05份，蒸馏水10份。
2.2按照表1中精油的比例，杜仲提取物与茶树精油的总和，再与总软膏辅料量的配比为1:1（W/W）。
2.3制法：
（1）无菌条件下，按比例称取杜仲提取物、茶树精油，室温混合。水浴上加热，40～50℃水浴保温0.5h。
（2）另取重量比取辅料中各成分加在一起，水浴加热至融化，在60～70℃，0.5h后，将该液体缓缓加入杜仲提取物与茶树精油中，边加边向一个方向搅拌，3000转/min 搅拌乳化15min，冷凝到室温。
（3）灌装在10ml一次性注射液器中，再将该产品放塑料袋封口，再通过60Co-γ20-35kGy辐照10-30s即得。
（4）10、11、12号样品，将该产品放塑料袋封口，再放入高压锅消毒15min即得。
3.微生物检测
该实验依据《中国药典》第三部灭菌法中的方法。对包装好的产品进行60Co-γ射线辐射菌，同时产品不同位置及药品进行检测。同时做阳性和阴性对照。
3.1 菌检 20kGy、25kGy、30kGy、35kGy 4个剂量的60Co-γ辐照10-30s及高压锅消毒0.5h的灌注液外包装表面、内注射器表面及药液，每次用胰酪胨大豆琼脂接触性平皿（TSA）分别在灌注液的外包装表面、内注射器表面及药液上、下、前、后、左、右六个外表面及药液接触 10-30s 后放到 20～25℃培养 72h 后转到 30～35℃继续培养 48h 后判定结果，观察 TSA 平皿中长菌结果。
3.2 结果 经过20kGy、25kGy、30kGy、35kGy4 个剂量的60Co-γ辐照10-30s及高压锅消毒15min的灌注液灭菌后，发现 20kGy、时间10s个别有染菌情况出现，25kGy、30kGy、35kGy 的60Co-γ 辐照20-30s及高压锅消毒0.5h的灌注液包装及药品都能保证无菌；所以说明 25kGy、30kGy、35kGy 的60Co-γ 辐照20-30s都能保证对该产品的有效灭菌。
4.稳定性试验
按照新兽药申报要求，进行了稳定性试验，鉴于以上工作基础，主要考察了12个灌注液配方所制备的软膏的稳定性。
4.1离心试验
取制备的12个灌注液配方软膏 10mL放入带刻度离心管中，3000转/min， 离心 30min，观察软膏是否有分层及破乳现象。
4.2 耐寒耐热试验
取制备的12个灌注液软膏置于具塞试管内，分别置 55℃恒温箱 6h 和-15℃冰箱24h，检查中药软膏是否有分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。
4.3加速试验
将灌注液软膏装入具塞试管内，置于温度为 40±2℃，相对湿度为 75％的恒温培养箱中，连续放置 3 个月，定期检查，观察是否有分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。
4.4 稳定性试验结果
4.4.1通过离心试验，12种灌注液配方软膏剂色泽均匀，质地细腻，有适当粘稠性，易于涂布于皮肤，无粗糙感，具有一定的相对稳定性。
4.4.2 通过耐寒耐热试验、离心试验和加速试验发现：采用配方通过辐照2、3、4、6、7、8的软膏具有良好的稳定性，各项稳定性试验均符合要求。而采用配方10、11、12的中药软膏在耐热试验中出现析出和分层现象，但离心试验未见异常。
4.4.3通过加速试验，12种灌注液配方软膏剂，在温度 37-40℃，相对湿度 75%以上，在此条件下保存三个月，产品稳定，则可暂定有效期两年。
4.5结果
通过耐寒耐热试验、离心试验和加速试验发现：采用辐照后的配方，特别是25、30kGy的剂量辐照20、30s，该产品具有良好的稳定性，未见分层、破乳、霉败及色泽、均匀性改变等现象；而未采用辐照配方制成的中药灌注液在耐热试验中出现析出和分层现象，表明在耐热方面还不理想。所以综合以上全部试验，故配方2、3、4、6、7、8为初步筛选的产品。
体外抑菌试验
为了评价杜仲提取物、茶树精油及复合后的抑菌效果，从中筛选药物的配方，故进行了的精油及复方精油的抑菌试验。
5.1材料与方法：
5.1.1试验药品：
试验样品2、3、4、6、7、8号药均由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程研究室制备，按表1中不同比例配制，不加辅料。对照药：乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20160622)。
5.1.2奶牛乳腺炎病原菌的分离鉴定
5.1.2.1 样品的采集
乳样采自兰州市某奶牛场，共采集5头有明显乳腺炎症状患牛的牛乳各一份。奶牛乳腺按常规消毒后，每个乳头挤去头2把乳，后无菌取乳样约15mL于灭菌采乳管中，标明牛号和日期后放入冰桶，送回实验室进行细菌检验，如当天不能检验，则放入40C保存，不超过48h。
5.1.2.2 病原菌的分离
将乳样分别划线接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，置370C温箱培养24h后观察菌落形态特征，挑取典型菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，然后进一步纯化培养，培养方法同上，链球菌需要用血平板培养基进行培养，纯培养后进行镜检细菌，将无杂菌者保存于试管斜面培养基内，然后可按有关生化鉴定方法进行鉴定。
5.1.2.3 供试菌液的制备
将本试验中分离鉴定的临床型奶牛乳腺炎主要致病菌无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种细菌液，用接种环轻取接种于肉汤琼脂培养基，按照菌种所需的培养条件进行培养，在 370C恒温培养箱中分别培养18-20h后，稀释，用分光光度计在波长为 625nm 处比色，吸光度为0.08-0.1时的稀释浓度为所需浓度，即含细菌数约为 1-2×108个/mL，备用。
5.1.2.4抑菌试验
将药品精油相应浓度，用管碟法进行试验，抑菌圈的大小表示抑菌作用的强弱；用二倍稀释法测定精油的最低抑菌浓度，抑菌浓度的高低表示抑菌作用的弱强。
5.2结果：
5.2.1体外抑菌试验：
经过预实验确定灌注液配比6号抑菌效果最好，故正式试验以6号配比为准。试验结果表明，本发明的灌注液不同配比对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的体外抑菌效果和对照药抑菌效果比较结果如表2、3所示。经过试验结果证明配比6号对三种抑菌效果最好，故以中药灌注液用6号的配比，再赋予辅料为制备的药物。
表2各配方灌注液的抑菌结果
表3配方6灌注液与乳立宁的抑菌结果比较
3、结论：
从表2、3，精油的体外抑菌试验和体内抗菌活性试验结果可以看出,复方6号灌注液的抑菌效果较乳立宁强,特别是对大肠埃希氏菌，故对奶牛乳腺炎有治疗作用。
抗炎试验
无论临床型还是隐性奶牛乳腺炎，其临床表现症状都是炎性反应。炎症是引起乳房损伤和产奶量下降的直接原因。而许多中药具有非特异性抗炎作用而缓解临床症状。中药抗炎作用也是中药抗感染作用机理的重要组成部分。所以，中药抗炎作用是一项必不可少的指标，故我们对该药进行抗炎试验。
6.1实验动物及方法：昆明系小鼠 30 只，雌雄均用，经饲养观察7天后，取体重 30±2g 健康小鼠 20只随机分为 2 组，每组 10 只，分别编号，1组为对照组，2组为实验组。将棉签蘸取约 20μL 的药液均匀的涂布于各组的每只小鼠右侧耳的前后两面，左耳用生理盐水按同样的方法涂布，然后用棉签蘸取约 100%的二甲苯 20μL 均匀快速地涂布于每只小鼠右耳的前后两面，记录每只小鼠的涂药和致敏时间，并分别于致炎 0.5h，1.5h，2.5h后重复用药，左耳用等量生理盐水同期对照，致炎后 4h 将动物断头处死，沿耳廓基线剪下两耳，将两耳用 6mm 直径环钻器打下耳片称重，每鼠两耳片重量差即为肿胀度。（肿胀度越小越好）。
6.2试验药物：灌注液6号（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，制备按实例1方法），对照药：乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20160622)。
6.3实验记录和统计
第1组为乳立宁对照组，第2组为配方6灌注液。每只小鼠重量，给药和致敏时间，每只小鼠两耳片重量。
6.4结果
两组小鼠的体重，左右耳片重比较：肿胀度的数值的大小反映药物抗炎的疗效，肿胀度数值越小提示抗炎的效果越好，详见表4。
6.5 实验结果分析
每只小鼠重量，给药和致敏时间，每只小鼠两耳片重量。
表4各组小鼠体重、左右耳片重及肿胀度
表4配方6灌注液与乳立宁的抗炎结果比较
从表4 就可以看出：1组的肿胀度较2组大，说明2组（中药灌注液6号）较1组（乳立宁）的抗炎效果好。
临床药效学试验
为了评价配方6灌注液的临床治疗效果，我们严格按照新兽药报批的要求，进行了以下的奶牛临床试验。
7.1 试验动物与分组：选自甘肃凯悦奶牛场的临床型奶牛乳房炎患病牛，症状为乳房患病区红、肿，泌乳量显著减少。符合上述标准的共有 22 例病牛，46 个乳区。随机分为二组，配方6灌注液治疗组 16 头，共 32 个乳区，乳立宁（双丁注射液）对照组为 6 头牛14 个乳区。
7.2 药物 灌注液的制备按实例1中的6号配方制备（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药物室）。
7.2.1 乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20160622)。
7.2.2治疗方案 中药软膏治疗组在用药前用温水清洗病牛乳区，用干毛巾擦干后，每个乳区配方6灌注液乳头灌入1支10mL，一天 2 次，5d为一个疗程。对照组在挤奶后，用乳立宁50mL 灌注乳区，上、下午各 1 次，5d为一个疗程。病情严重的病例可连续用药 2个疗程观察治疗效果。
7.2.3 判定标准 治疗 1-2 个疗程后，根据临床症状和乳汁质量的改变进行判断。
治愈：乳区红、肿、热、痛消失，乳汁肉眼观察正常和产奶量恢复，精神、食欲正常。
有效：乳区红、热、痛明显减轻，乳汁絮状物基本消失或明显减少，产奶量回升。
无效：两个疗程后,乳房红、肿、热、痛仍无明显减轻，乳汁仍清稀或发黄，絮片仍较明显，或在治疗过程中病程未减而改用其他方法治疗者。
7.3 结果 配方6灌注液用于临床的治疗效果见表5，配方6灌注液的治愈率和有效率分别为84.4%和93.7%，达到了良好的治疗效果。配方6灌注液治疗组在 1 个疗程完全治愈的病例为13头27个乳区，占治愈数的 81.3%，但未治愈病例临床症状明显减轻。而乳立宁组病例在1个疗程完全治愈的病例为4头 8 个乳区，占治愈数的 57.1%。从以上结果可以看出配方6灌注液治愈率高，使用方便且对奶牛及奶产品无任何副作用，也能保证牛奶及产品的安全，为一种非常好的中药灌注液。
表5配方6灌注液的临床疗效

Claims (9)

1.一种奶牛乳腺炎中药灌注液，其特征在于由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油1-3份，杜仲叶提取物和茶树精油组成混合油，混合油中添加辅料制得灌注液, 辅料包括大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水。
2.根据权利要求1所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液，其特征在于所述混合油中添加辅料制得灌注液，灌注液由以下重量份的混合油1份和辅料6份混合。
3.根据权利要求1所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液，其特征在于所述辅料由以下重量份的各物质组成：大豆油1份、甘油2份、单硬脂酸甘油酯0.1份、尼泊金乙酯0.1份、环糊精1份、凡士林0.05份和蒸馏水10份。
4.根据权利要求1所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液，其特征在于由以下重量份的各物质组成：杜仲叶提取物1份、茶树精油2份。
5.根据权利要求1至4任一项所述 一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，其特征在于包括如下步骤：
A、混合油制备
无菌条件下，杜仲叶提取物和茶树精油室温下混合，水浴加热至40～50℃，水浴保温0.5h；
B、辅料制备
将辅料中大豆油、甘油、单硬脂酸甘油酯、尼泊金乙酯、环糊精、凡士林和蒸馏水混合，水浴加热至60～70℃，水浴保温0.5h；
C、主辅料混合
将辅料液体加入混合油中，加入时不断搅拌制得混合液，冷凝至室温。
6.根据权利要求5所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，其特征在于还包括如下步骤：
D、灌注液分装
混合液每10ml灌装在一次性注射液器中，再将一次性注射液器放入塑料袋封口；
E、辐照灭菌
通过60Co-γ辐照，辐照剂量25-35kGy，辐照时间10-30s，得到成品；
F、灌注液注射
使用一次性注射液器将灌注液直接注入奶牛乳腺中。
7.根据权利要求5所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，其特征在于所述步骤C中辅料液体加入混合油中沿同一方向搅拌，搅拌速度3000转/min 搅拌乳化15min。
8.根据权利要求6所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，其特征在于所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间10-30s，得到成品。
9.根据权利要求8所述一种奶牛乳腺炎中药灌注液的制备使用方法，其特征在于所述步骤E中通过60Co-γ辐照，辐照剂量30kGy，辐照时间20s，得到成品。
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