CN105560374A - 一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，是由按照重量份计的以下物质组成的：薰衣草精油1份，肉桂精油1-2份，牛至精油1-3份，辅料3-6份；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明是采用植物精油作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎的作用，治疗奶牛乳腺炎效果极好，同时由于采用纯中药制剂，不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全；通过搅拌得均用固体，性质稳定且质量可控，非常有利于工业化生产；作为一种中药药物，其效果确切，无残留及毒副作用，并在泌乳期可用，将成为抗生素良好的替代品，所得到的中药复方软膏在兽医临床上有较高的应用价值。

Description

一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，具体涉及一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法。

背景技术

奶牛乳腺炎最常见的发病原因是病原微生物通过奶牛乳头管侵入乳腺，原奶为病原微生物生长提供了优越的环境，病原微生物在乳腺内大量繁殖，产生毒素与酶，刺激脆弱的乳腺组织，使乳腺发炎。据报道，引起奶牛乳腺炎的病原微生物多达150余种，较常见的有20余种，其中，金黄色葡萄球菌、链球菌具有国际广泛性，约占整个奶牛乳腺炎病例的70%，占我国病例的90%以上。

抗生素疗法目前仍是国内外所采用的治疗乳腺炎最常用的方法，在乳腺炎治疗及控制奶品质量的综合防治中具有重要作用。对于临床型乳腺炎目前国内外都选用抗生素进行治疗，抗生素疗法作用快速，可直接杀灭病原菌，但有的病原菌易产生耐药性，对于泌乳期奶牛来说，大量应用抗生素还会导致抗生素在乳中残留，对人类健康造成威胁。因此近年来人们逐渐把目光转移到了中药治疗上，中药属纯天然物质，毒性低，不会造成严重的药物残留，不易产生抗药性，克服了使用抗生素的不足，应用复方中药制剂替代抗生素，预防药物，已逐渐被广大用户所接受。国内外研究表明,天然植物精油对日常生产生活中的致病菌有很好的抑制作用。如薰衣草精油对单核细胞增多性李斯特菌、沙门氏菌等常见的食物传播性致病菌有很强的抑菌活性。肉桂精油对肠炎沙门氏菌和单核细胞增多性李斯特单核细胞菌具有抑制作用。其后又通过对抑菌范围的测定,发现牛至精油可以在食品中起到抑菌作用。研究发现,牛至精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、黑曲霉、青霉等食品常见污染菌有广谱抑菌作用。

透皮吸收促渗剂有助于药物克服皮肤角质层的障碍，其促渗机制是溶解皮肤脂质或使皮肤蛋白变性，可逆地改变皮肤角质层的屏障作用，且不损伤任何活性细胞，达到增加药物在皮肤的溶解度，使药物透皮吸收率增加的目的。早期的透皮促渗剂研究多限于有机溶剂如丙二醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等，这类化合物使用浓度较高，其中以二甲基亚砜促渗效果最好，但其毒性和对皮肤的刺激性限制了它的临床应用。目前多采用添加氮酮等化学性促渗剂，近年来氮酮已广泛应用于药物的外用制剂，在提高治疗效果、减少药物的不良反应、开发制剂新品种等方面起了重要作用，但是在对中药透皮促渗剂中因为中药成分复杂故效果一般。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法。主要是利用植物挥发油即有抗菌作用又有促进渗透作用的特性，研制动物乳腺的局部用药，可以有效治疗感染性疾病。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，是由按照重量份计的以下物质组成的：薰衣草精油1份，肉桂精油1-2份，牛至精油1-3份，辅料3-6份。

进一步的，上述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，是由按照重量份计的以下物质组成的：薰衣草精油1份，肉桂精油2份，牛至精油3份，辅料6份。

进一步的，上述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，所述辅料中各物料的重量比为硬脂酸：甘油：单硬脂酸甘油酯：尼泊金乙酯：十二烷基硫酸钠：凡士林：蒸馏水为20:40:2:2:20:1:200。

进一步的，上述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，所述复方制剂的剂型为软膏剂。

本发明得第二个目的是提供了上述一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）于无菌条件下，按配比称取薰衣草精油、肉桂精油和牛至精油，水浴加热，70～80℃水浴保温0.5小时，得到主料混合物；

2）按配比称取辅料中各物料并混合，水浴加热至融化得到辅料液，在70～80℃保温0.5小时后将辅料液缓缓加入步骤1）得到的主料混合物中，边加边向一个方向搅拌，3000转/分钟搅拌乳化15分钟，冷凝即得到复方制剂半成品；

3）将步骤2）得到的复方制剂半成品分装到固定容器后，蒸汽灭菌，灭菌温度为100℃，时间为10分钟，得到用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂。

本发明的有益效果为：

本发明提供的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂及其制备方法，具有以下优点：

1、采用植物精油作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎的作用，治疗奶牛临床型乳腺炎效果极好，治愈率80%以上，有效率90%以上；由于采用纯植物精油制剂，不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全，也不易产生耐药性；

2、通过软膏搅拌得均用的固体，性质稳定且质量可控，非常有利于工业化生产；

3、作为一种有效治疗奶牛乳腺炎的中药，其效果确切，从实施例提供的药效学试验及临床可以看出,复方软膏在兽医临床上使用方便、安全、不污染奶源有较高的应用价值。

具体实施方式

实施例1：

1、复方软膏的配方（W/W）：主料精油的配方及来源如表1所示。

表1

2、复方软膏的制备：

2.1通过多年的试验及应用，已经确定了最佳的复方软膏辅料的配方(重量比)为：硬脂酸1，甘油2，单硬脂酸甘油酯0.1，尼泊金乙酯0.1，十二烷基硫酸钠1，凡士林0.05，蒸馏水10。

2.2按照表1中精油的比例，总精油与总软膏辅料量的配比为1:1（W/W）。

2.3制法：无菌条件下，按比例称取各种精油，水浴上加热，70～80℃水浴保温0.5小时。另取辅料中各成分加在一起，水浴加热至融化，在70～80℃，0.5小时后将该液体缓缓加入精油中，边加边向一个方向搅拌，3000转/分钟搅拌乳化15分钟，冷凝即得。分装到固定容器后，蒸汽灭菌的温度为100℃，时间为10分钟。

实施例2：

体外抑菌试验：

为了评价3种精油及复合后的抑菌效果，从中筛选药物的配方，故进行了的精油及复方精油的抑菌试验。

1、材料与方法：

1.1试验药品：

试验样品1、2、3号药均由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程研究室制备，按表1中购得后精油，并按照不同比例配制，不加辅料。对照药：乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20131622)。

1.2奶牛乳腺炎病原菌的分离鉴定：

1.2.1样品的采集：

乳样采自兰州市某奶牛场，共采集5头有明显乳腺炎症状患牛的牛乳各一份。奶牛乳腺按常规消毒后，每个乳头挤去头2把乳，后无菌取乳样约15mL于灭菌采乳管中，标明牛号和日期后放入冰桶，送回实验室进行细菌检验，如当天不能检验，则放入40℃保存，不超过48h。

1.2.2病原菌的分离：

将乳样分别划线接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，置37℃温箱培养24h后观察菌落形态特征，挑取典型菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，然后进一步纯化培养，培养方法同上，链球菌需要用血平板培养基进行培养，纯培养后进行镜检细菌，将无杂菌者保存于试管斜面培养基内，然后可按有关生化鉴定方法进行鉴定。

1.2.3供试菌液的制备：

将本试验中分离鉴定的临床型奶牛乳腺炎主要致病菌无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种细菌液，用接种环轻取接种于肉汤琼脂培养基，按照菌种所需的培养条件进行培养，在37℃恒温培养箱中分别培养18-20h后，稀释，用分光光度计在波长为625nm处比色，吸光度为0.08-0.1时的稀释浓度为所需浓度，即含细菌数约为1-2×10⁸个/mL，备用。

1.2.4抑菌试验：

将药品精油相应浓度，用管碟法进行试验，抑菌圈的大小表示抑菌作用的强弱；用二倍稀释法测定精油的最低抑菌浓度，抑菌浓度的高低表示抑菌作用的弱强。

2、结果：

2.1体外抑菌试验：

经过预实验确定植物精油配比3号抑菌效果最好，故正式试验以3号配比为准。试验结果表明，本发明的植物精油不同配比对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的体外抑菌效果和对照药抑菌效果比较结果如表2、3所示。经过试验结果证明配比3号对三种抑菌效果最好，故以中药复方软膏选用3号的配比，再赋予辅料为制备的药物。

表2

表3

3、结论：

从表2、3精油的体外抑菌试验和体内抗菌活性试验结果可以看出,复方3号精油的抑菌作用较乳立宁强,特别是对大肠埃希氏菌，故对奶牛乳腺炎有治疗作用。

实施例3：

抗炎试验：

无论临床型还是隐性奶牛乳腺炎，其临床表现症状都是炎性反应。炎症是引起乳房损伤和产奶量下降的直接原因。而许多中药具有非特异性抗炎作用而缓解临床症状。中药抗炎作用也是中药抗感染作用机理的重要组成部分。所以，中药抗炎作用是一项必不可少的指标，故对该药进行抗炎试验。

1、实验动物及方法：

昆明系小鼠30只，雌雄均用，经饲养观察7天后，取体重30±2g健康小鼠20只随机分为2组，每组10只，分别编号，1组为对照组，2组为实验组。将棉签蘸取约20μL的药液均匀的涂布于各组的每只小鼠右侧耳的前后两面，左耳用生理盐水按同样的方法涂布，然后用棉签蘸取约100%的二甲苯20μL均匀快速地涂布于每只小鼠右耳的前后两面，记录每只小鼠的涂药和致敏时间，并分别于致炎0.5h，1.5h，2.5h后重复用药，左耳用等量生理盐水同期对照，致炎后4h将动物断头处死，沿耳廓基线剪下两耳，将两耳用6mm直径环钻器打下耳片称重，每鼠两耳片重量差即为肿胀度，（肿胀度越小越好）。

2、试验药物：

中药复方软膏3号（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，制备按实施例1方法），对照药：乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20131622)。

3、实验记录和统计：

第1组为对照组，第2组为实验组。每只小鼠重量，给药和致敏时间，每只小鼠两耳片重量。

4、结果：

两组小鼠的体重，左右耳片重比较：统计结果发现各小组小鼠的体重间比较，均为P＞0.05，无显著性差异，表明各组小鼠的体重和耳朵的大小相似。两组小鼠左右耳片重量比较，P＜0.01,有显著性差异，表明小鼠的炎症模型造模成功，肿胀度的数值的大小反映药物抗炎的疗效，肿胀度数值越小提示抗炎的效果越好，详见表4。

5、实验结果分析：

每只小鼠重量，给药和致敏时间，每只小鼠两耳片重量。表4显示为各组小鼠体重、左右耳片重及肿胀度。

表4

从表4就可以看出：1组的肿胀度较2组大，说明2组（中药复方软膏3号）较1组（乳立宁）的抗炎效果好。

实施例4：

中药软膏的稳定性试验：

按照新兽药申报要求，进行了稳定性试验，鉴于以上工作基础，主要考察了三个精油配方所制备的软膏的稳定性。

1、离心试验：

取制备的三种植物精油配方中药软膏10g放入带刻度离心管中，3000转/分钟，离心30分钟，观察中药软膏是否有分层及破乳现象。

2、耐寒耐热试验：

取制备的三种植物精油中药软膏置于具塞试管内，分别置55℃恒温箱6h和-15℃冰箱24h，检查中药软膏是否有分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。

3、加速试验：

将样品装入具塞试管内，置于温度为40±2℃，相对湿度为75%的恒温培养箱中，连续放置3个月，定期检查，观察是否有分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。

4、中药软膏的稳定性试验结果：

4.1通过离心试验，三种植物精油配方软膏剂色泽均匀，质地细腻，有适当粘稠性，易于涂布于皮肤，无粗糙感，具有一定的相对稳定性。

4.2通过耐寒耐热试验、离心试验和加速试验发现：采用配方2、3的中药软膏具有良好的稳定性，各项稳定性试验均符合要求。而采用配方1的中药软膏在耐热试验中出现析出和分层现象，但离心试验未见异常。

4.3通过加速试验，三种植物精油配方软膏剂，在温度37-40℃，相对湿度75%以上，在此条件下保存三个月，产品稳定，则可暂定有效期两年。所以该中药软膏的保质期暂可定为两年。

5、结果：

通过耐寒耐热试验、离心试验和加速试验发现：采用配方2、3精油配方的中药软膏具有良好的稳定性，未见分层、破乳、霉败及色泽、均匀性改变等现象；而采用配方1制成的中药软膏在耐热试验中出现析出和分层现象，表明在耐热方面还不理想，但离心试验未见异常。所以综合以上全部试验，故配方3为最终的产品。

实施例5：

复方精油中药软膏的临床药效学试验：

为了评价复方精油中药软膏的临床治疗效果，按照新兽药报批的要求，进行了以下的奶牛临床试验。

1、试验动物与分组：选自兰州市一个奶牛场的临床型奶牛乳房炎患病牛，症状为乳房患病区红、肿，泌乳量显著减少。符合上述标准的共有22例病牛，46个乳区。随机分为二组，中药软膏治疗组16头，共32个乳区，乳立宁（双丁注射液）对照组为6头牛14个乳区。

2、药物：中药软膏的制备按实例1中的3号配方制备（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药物室制备）。

2.1乳立宁（双丁注射液），河北远征药业生产(生产批号20131622)。

2.2治疗方案：

中药软膏治疗组在用药前用温水清洗病牛乳区，用干毛巾擦干后，每个乳区涂抹中药复方软膏22g，一天2次，5天为一个疗程。对照组在挤奶后，用乳立宁50mL灌注乳区，上、下午各1次，5天为一个疗程。病情严重的病例可连续用药2个疗程观察治疗效果。

2.3判定标准：

治疗1-2个疗程后，根据临床症状和乳汁质量的改变进行判断。

治愈：乳区红、肿、热、痛消失，乳汁肉眼观察正常和产奶量恢复，精神、食欲正常。

有效：乳区红、热、痛明显减轻，乳汁絮状物基本消失或明显减少，产奶量回升。

无效：两个疗程后,乳房红、肿、热、痛仍无明显减轻，乳汁仍清稀或发黄，絮片仍较明显，或在治疗过程中病程未减而改用其他方法治疗者。

3、结果：

中药软膏用于临床的治疗效果见表5，中药软膏的治愈率和有效率分别为81.2%和90.6%，达到了良好的治疗效果。中药软膏治疗组在1个疗程完全治愈的病例为12头26个乳区，占治愈数的81.2%，但未治愈病例临床症状明显减轻。而乳立宁组病例在1个疗程完全治愈的病例为4头8个乳区，占治愈数的57.1%。从以上结果可以看出复方精油中药软膏治愈率高，使用方便且对牛无如何副作用，也能保证牛奶的安全，为一种非常好的中药制剂。

表5

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，其特征在于，是由按照重量份计的以下物质组成的：薰衣草精油1份，肉桂精油1-2份，牛至精油1-3份，辅料3-6份。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，其特征在于，是由按照重量份计的以下物质组成的：薰衣草精油1份，肉桂精油2份，牛至精油3份，辅料6份。

3.根据权利要求1或2所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，其特征在于，所述辅料中各物料的重量比为硬脂酸：甘油：单硬脂酸甘油酯：尼泊金乙酯：十二烷基硫酸钠：凡士林：蒸馏水为20:40:2:2:20:1:200。

4.根据权利要求3所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂，其特征在于，所述复方制剂的剂型为软膏剂。

5.根据权利要求4所述的一种用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）于无菌条件下，按配比称取薰衣草精油、肉桂精油和牛至精油，水浴加热，70～80℃水浴保温0.5小时，得到主料混合物；

2）按配比称取辅料中各物料并混合，水浴加热至融化得到辅料液，在70～80℃保温0.5小时后将辅料液缓缓加入步骤1）得到的主料混合物中，边加边向一个方向搅拌，3000转/分钟搅拌乳化15分钟，冷凝即得到复方制剂半成品；

3）将步骤2）得到的复方制剂半成品分装到固定容器后，蒸汽灭菌，灭菌温度为100℃，时间为10分钟，得到用于治疗奶牛乳腺炎的复方制剂。