CN107412667A - 一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，将姜黄纯露与钙制剂混合，经加热搅拌后，调节pH值再进行杀菌处理，制得奶牛专用乳头消毒剂。该方法以天然的姜黄纯露为主要消毒剂，无刺激性，安全可靠，无任何毒副作用，对环境不造成任何污染，绿色环保。通过该方法制得的消毒剂对细菌具有显著的杀灭作用，可降低奶牛急性乳腺炎的发病率，具有芳香气味，不仅可以调理乳头，而且无对人体和食品卫生有危胁的药物残留，是一种理想的乳头消毒剂。

Description

一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体的，涉及一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法。
背景技术
奶牛乳腺炎最常见的发病原因是病原微生物通过奶牛乳头管侵入乳腺，原奶为病原微生物生长提供了优越的环境，病原微生物在乳腺内大量繁殖，产生毒素与酶，刺激脆弱的乳腺组织，使乳腺发炎。据报道，引起奶牛乳腺炎的病原微生物多。其中，金黄色葡萄球菌、链球菌具有国际广泛性，约占整个奶牛乳腺炎病例的70%，占我国病例的90%以上。奶牛乳腺炎的综合防制是一个极为复杂的系统工程，但是只要采用专用乳头消毒剂，按照相关挤奶规程及奶牛饲养管理规范进行定期消毒，就能降低奶牛乳腺炎的发病率。目前，国内外的奶牛专用乳头消毒剂相关产品较少，主要是碘制剂，具有更好的抑菌作用,但使用时间太长,会引起乳头的干裂，导致二次感染，药物的残留会对人体和食品卫生有一定影响。
姜黄属植物主要含精油（4.2%-14%）、脂肪油（4.4%-12.7%）等挥发油及姜黄素类成分，此外还有树脂类、糖类、甾醇类、脂肪酸、多肽类、生物碱及微量元素，其中类姜黄素类是二苯基炔类成分，有酚性和非酚性成分，现已分离并鉴定出20 多个类姜黄素化合物，具有很好的抗菌、抗氧化、抗艾病毒、抗肿瘤等作用，其通过用水蒸气蒸馏法获得。“纯露”是指精油在蒸馏萃取过程中留下来的水,是一种具有较好抗菌活性的溶液，使用安全，抗菌效果好、无残留，引起人们高度关注。
钙对畜禽的代谢和骨骼发育起着重要的作用。钙缺乏引起多种家畜疾病，也可降低乳腺导管括约肌的收缩能力，增加乳导管开张时间，增大乳腺炎感染机会。临床上静脉注射钙剂是目前常用的治疗钙缺乏症的可靠手段，但操作比较复杂，限制了其使用范围。口服钙剂多为固体剂型，溶解性差，吸收速度慢，生物利用度低，不能满足治疗低钙血症群的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，通过该方法制得的消毒剂不仅具有一般消毒剂的特点，还具有较稠、不易造成乳头干裂的效果，并附加了钙剂，能够增强乳导管括约肌收缩力，可有效用于奶牛的乳腺炎防治。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现的：
一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，将姜黄纯露与钙制剂混合，经加热搅拌后，调节pH值再进行杀菌处理，制得奶牛专用乳头消毒剂。
进一步的，所述消毒剂中还包括羧甲基纤维素钠。
更进一步的，所述姜黄纯露是采用水蒸气蒸馏法制取姜黄精油过程中留下来的水溶液，所述钙制剂包括CaCl2·2H2O。
上述奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将0.5-2g CaCl2·2H2O加入800mL姜黄纯露中，搅拌溶解；
（2）将1-10g羧甲基纤维素钠加入步骤（1）得到的混合液中，混合；
（3）步骤（2）得到的混合液进行水浴加热并搅拌；
（4）调节步骤（3）得到的混合液pH值至7.0-7.4，用姜黄纯露定容至1000mL；
（5）步骤（4）得到的溶液进行灭菌即得。
进一步的，所述步骤（3）中，水浴温度为85℃，加热搅拌的时间为1-2h。
进一步的，所述步骤（5）的灭菌方式为蒸汽灭菌。
依上述方法得到的奶牛专用乳头消毒剂。
本发明以姜黄纯露为消毒剂主要成分，氯化钙为增强乳导管括约肌收缩力的元素，羧甲基纤维素钠为增稠剂。姜黄纯露是有较强抗菌活性的天然植物提取物为主要成分，使用安全，抗菌效果好、无残留。增稠剂羧甲基纤维素钠能够提高保护膜的形成速度，降低其分解速度，防止因长期使用消毒剂而造成的乳头干裂。乳腺导管括约肌的收缩可以起到屏障的作用，为了提高奶牛自身防御机能，增加乳腺导管括约肌的收缩能力，提高机体对乳腺抗感染能力，本发明在天然植物消毒剂中加入促进奶牛乳腺导管括约肌收缩的钙元素，这样可缩短乳导管开张时间，减少病原微生物入侵进入乳腺组织的机会，从而降低奶牛乳腺炎的发病率。
本发明的有益效果为：
本发明提供的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，以天然的姜黄纯露为主要消毒剂，无刺激性，安全可靠，无任何毒副作用，对环境不造成任何污染，绿色环保。通过该方法制得的消毒剂对细菌具有显著的杀灭作用，可降低奶牛急性乳腺炎的发病率，具有芳香气味，不仅可以调理乳头，而且无对人体和食品卫生有危胁的药物残留，是一种理想的乳头消毒剂。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明以下实施例中的姜黄纯露是采用水蒸气蒸馏法制取姜黄精油过程中留下来的水溶液，厂家：河南黑马药业有限公司；CaCl2·2H2O厂家：上海泗联化工厂有限公司；其余药剂为国产试剂。
实施例1
一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法：
精确称取 0.5g 的 CaCl2·2H2O，加入姜黄纯露800mL搅拌使之溶解，然后加1g羧甲基纤维素钠，混合均匀，置于水浴 85℃搅拌加热1h，直至形成完全透明溶液，调节 pH 值至7.0-7.4，姜黄纯露定容至 1000mL，经蒸汽高温灭菌，最终制成产品。
实施例2
一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法：
精确称取 1g 的 CaCl2·2H2O，加入姜黄纯露800mL搅拌使之溶解，然后加5g羧甲基纤维素钠，混合均匀，置于水浴 85℃搅拌加热1.5h，直至形成完全透明溶液，调节 pH 值至7.0-7.4，姜黄纯露定容至 1000mL，经蒸汽高温灭菌，最终制成产品。
实施例3
一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法：
精确称取 2g 的 CaCl2·2H2O，加入姜黄纯露800mL搅拌使之溶解，然后加10g羧甲基纤维素钠，混合均匀，置于水浴 85℃搅拌加热2h，直至形成完全透明溶液，调节 pH 值至7.0-7.4，姜黄纯露定容至 1000mL，经蒸汽高温灭菌，最终制成产品。
对本发明实施例制得的消毒剂与对照药碘伏（聚维酮碘溶液）进行抑菌试验、安全性试验和临床应用观察，其中碘伏购自广州市润铭医疗器械有限公司。
一、奶牛专用乳头消毒剂抑菌性试验
奶牛乳腺炎最常见的发病原因是病原微生物通过奶牛乳头管侵入乳腺，原奶为病原微生物生长提供了优越的环境，病原微生物在乳腺内大量繁殖，产生毒素与酶，刺激脆弱的乳腺组织，使乳腺发炎。据报道，引起奶牛乳腺炎的病原微生物多。其中，金黄色葡萄球菌、链球菌具有国际广泛性，约占整个奶牛乳腺炎病例的70%，占我国病例的90%以上。
1试验材料
药剂：本发明实施例1-3制得的消毒剂，对照药为碘伏
2试验方法
2.1 乳样采集
乳样采自兰州市某奶牛场，共采集5头有明显乳腺炎症状患牛的牛乳各一份。奶牛乳腺按常规消毒后，每个乳头挤去头2把乳，后无菌取乳样约15mL于灭菌采乳管中，标明牛号和日期后放入冰桶，送回实验室进行细菌检验，如当天不能检验，则放入40C保存，不超过48h。
2.2病原菌的分离
将乳样分别划线接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，置370C温箱培养24h后观察菌落形态特征，挑取典型菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，然后进一步纯化培养，培养方法同上，链球菌需要用血平板培养基进行培养，纯培养后进行镜检细菌，将无杂菌者保存于试管斜面培养基内，然后可按有关生化鉴定方法进行鉴定。
2.3供试菌液的制备
将本试验中分离鉴定的临床型奶牛乳腺炎主要致病菌为无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种细菌液，用接种环轻取接种于肉汤琼脂培养基，按照菌种所需的培养条件进行培养，在 370C恒温培养箱中分别培养18-20h后，稀释，用分光光度计在波长为 625nm处比色，吸光度为0.08-0.1时的稀释浓度为所需浓度，即含细菌数约为 1-2×108个/mL，备用。
2.4体外抑菌试验
将专用消毒剂相应浓度，用管碟法进行试验，抑菌圈的大小表示抑菌作用的强弱；用二倍稀释法测定专用消毒剂的最低抑菌浓度，抑菌浓度的高低表示抑菌作用的弱强。
3试验结果
本发明实施例1-3的最低抑菌浓度结果见表1。
表1 本发明实施例1-3消毒剂的最低抑菌浓度
由表1可知，本发明实施例1-3的专用消毒剂对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌具有抑菌效果，其中实施例2的消毒剂抑菌效果最好，所以采用实施例2的消毒剂进行后续试验。本发明实施例2的专用消毒剂与对照药的抑菌结果见表2。
表2 本发明实施例2消毒剂与碘伏的抑菌结果
由表2可知，本发明实施例2的专用消毒剂抑菌作用较强,特别是对大肠埃杆菌，故对奶牛乳腺炎有预防作用。
二、奶牛专用乳头消毒剂安全性试验
目前，市场上流通使用的环境消毒剂种类繁多，多数有毒有害、有污染、有残留、有刺激性。随着抗生素、消毒剂的广泛应用，耐药菌株不断增多，严重危害人类健康和生存环境。因此，筛选研制无毒、高效、无残留、使用方便的专用消毒剂是消毒药物发展的必然趋势。
1试验材料
药剂：本发明实施例2的专用消毒剂
动物：清洁级昆明小鼠60只，体重18-22g；普通级日本大耳白兔21只，体重2.5-3.0kg，购于兰州生物制品研究所实验动物中心
2试验方法
2.1急性经口毒性试验
以昆明小鼠为对象，设计4000mg/kg、5000mg/kg、6000mg/kg体重3 个剂量组。投药前禁食12h，用灌胃器经口灌胃，按0.2ml/10g体重一次灌胃，自由采食及饮水，观察14d。
2.2一次皮肤刺激试验
按照试验所用专用消毒剂使用浓度为4000mg/L、5000mg/L、6000mg/L 3个剂量，每组家兔 6只，空白对照3只。试验前24h将21只家兔背部脊柱两侧被毛用脱毛剂脱掉，去毛范围3cm×3cm。正式试验时，分别取3 组消毒液 0.5mL 滴在面积为2.5cm×2.5cm的 4层纱布上，并敷贴在左侧去毛区皮肤上，右侧去毛区皮肤作为空白对照。除去消毒剂贴敷物后第1，24，48h分别观察皮肤反应，进行皮肤刺激反应积分和刺激强度评价。
3试验结果
小鼠急性经口毒性试验结果见表3，家兔一次皮肤刺激试验结果见表4。
表3 小鼠急性经口毒性试验结果
表4 家兔一次皮肤刺激试验结果
由表3 可见：灌胃后各组小鼠未出现中毒症状，观察 14d未见异常，生长发育正常，参照急性经口毒性试验评价标准，该消毒剂实际无毒级。由表4可知，参照消毒技术规范-皮肤刺激强度级别评分标准，该消毒剂实际无刺激。该消毒剂剂量在小于6000 mg/kg使用浓度时为无毒级，在浓度小于6000 mg/L使用浓度时无刺激性。
三、奶牛专用乳头消毒剂临床应用效果观察
1试验材料
药剂：本发明实施例2制得的专用消毒剂；对照药为碘伏；LMT-test诊断试剂，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药厂
试验牛：经临床检查,选用甘肃凯悦奶牛场，非临床型乳腺炎奶牛处于泌乳期的93头黑白花奶牛，其中31头应用碘伏进行试验(第1组)，32头用本发明实施例2的奶牛专用乳头消毒剂 (第2组)，浓度均为6000 mg.kg-1。30头不用消毒药，只用温水擦洗，作为对照组，泌乳奶牛全部使用挤奶厅挤奶。该奶牛场以前未进行过专用乳头消毒剂。
2试验方法
2.1消毒
试验牛每次挤乳结束后，立即用专用消毒剂为乳头消毒。消毒前，对93头验牛用LMT-test诊断试剂测定隐性乳腺炎的发病率。消毒35 d后重新进行测定。
2.2采样
各乳区在挤奶前用温水清洗2次，挤去头2把奶，然后进行采样，乳样放进5 mL的冷冻管中，液氮保存。
2.3检测内容和方法
2.3.1 临床型乳腺炎的判定依据 经临床检查，乳房具有红、肿、热、痛特征和乳汁性状变化的规定为临床型乳腺炎。
2.3.2 隐性乳腺炎的检测方法和发病率 药浴前后分别用LMT-test试剂将全部试验牛进行检测，分乳区进行测定。
3试验结果
消毒前后奶牛隐性乳腺炎的发病率见表5，消毒前后奶牛乳区隐性乳腺炎的发病率见表6。
表5 消毒前后奶牛隐性乳腺炎的发病率
表6 消毒前后奶牛乳区隐性乳腺炎的发病率
由表5可知，1组和2组奶牛消毒前隐性乳腺炎的发病率分别为58.1%和59.4%，差异不显著，对照组发病率为56.7%，与1组和2组差异不显著。1组隐性乳腺炎的发病率，由消毒前的58.1%下降到19.4%，与对照组差异显著；2组隐性乳腺炎的发病率由消毒前的59.4%下降到消毒后的31.3%，与对照组差异显著，同时1组与2组比较，隐性乳腺炎的发病率差异显著。
由表6可知，1组和2组奶牛乳区消毒前隐性乳腺炎的发病率分别为22.6%和23.4%，差异不显著，对照组发病率为35.9%，与1组和2组差异显著。1组奶牛乳区隐性乳腺炎的发病率，由消毒前的22.6%下降到5.6%；2组隐性乳腺炎的发病率由消毒前的23.4%下降到消毒后的12.5%，1组与2组比较，隐性乳腺炎的发病率差异显著。
试验证明，奶牛乳头消毒剂可降低奶牛乳腺炎的发病率，这一方面与奶牛乳头消毒剂中钙的收涩作用有关，其能缩短挤奶后乳头管的开张时间，在一定程度上能减少病原菌的侵入，另一方面与姜黄纯露具有明显的抑菌作用有关。碘伏和本发明的奶牛专用乳头消毒液都能明显降低隐性乳腺炎的发病率，说明中药消毒液也能取得与杀菌活性较强的碘伏相同的作用，在临床上具有较强的预防隐性乳腺炎发生的作用。本发明的消毒剂效果较好，具有无刺激性优点，碘伏具有更好的抑菌作用，但使用时间太长，会引起乳头的干裂，导致二次感染，药物的残留会对人体和食品卫生有一定影响。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，将姜黄纯露与钙制剂混合，经加热搅拌后，调节pH值再进行杀菌处理，制得奶牛专用乳头消毒剂。
2.根据权利要求1所述的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，所述消毒剂中还包括羧甲基纤维素钠。
3.根据权利要求1或2所述的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，所述姜黄纯露是采用水蒸气蒸馏法制取姜黄精油过程中留下来的水溶液，所述钙制剂包括CaCl2·2H2O。
4.根据权利要求3所述的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将0.5-2g CaCl2·2H2O加入800mL姜黄纯露中，搅拌溶解；
（2）将1-10g羧甲基纤维素钠加入步骤（1）得到的混合液中，混合；
（3）步骤（2）得到的混合液进行水浴加热并搅拌；
（4）调节步骤（3）得到的混合液pH值至7.0-7.4，用姜黄纯露定容至1000mL；
（5）步骤（4）得到的溶液进行灭菌即得。
5.根据权利要求4所述的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，水浴温度为85℃，加热搅拌的时间为1-2h。
6.根据权利要求4所述的奶牛专用乳头消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）的灭菌方式为蒸汽灭菌。
7.依权利要求1-6任一所述方法得到的奶牛专用乳头消毒剂。
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