CN107347928B - 一种针对布氏杆菌病的体外防护液 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种针对布氏杆菌病的体外防护液，用于对生物体或环境场所的杀菌消毒，以预防布氏杆菌在畜畜以及人畜之间的传播。本防护液含有苦豆根提物和发酵产物以及酯基季胺盐，可以作为牧区日常的消毒制剂，工作者在接触病患牛羊或辅助牛羊产子的过程中喷洒于外露的皮肤表面，或直接喷洒于防护服的外表面，以做到二次防护，工作者佩戴的口罩也可用该防护液进行喷雾处理。牛羊的圈舍、活动场所等也可进行喷淋消毒。该防护液的消毒效果相当于紫外线杀菌或75％乙醇。效果优于现在市场上通用的含氯制剂，本发明的防护液取材于当地药材，无毒无刺激，不会对人体的皮肤和粘膜造成任何刺激损伤作用。

Description

一种针对布氏杆菌病的体外防护液

技术领域

本发明涉及一种体外防护液，用于对生物体或环境场所的杀菌消毒，以预防布氏杆菌在畜畜以及人畜之间的传播。

背景技术

布氏杆菌病简称布病，又称布鲁氏杆菌病，俗称羊病。是由牛羊等布氏杆菌引起的一种动物慢性传染病，也是一种常见的人畜共患病。其主要特征表现为牛羊等动物的性欲下降，公畜主要是伤及睾丸，母畜容易导致流产。患畜多体质瘦弱，乏力，部分患畜关节肿胀，出现跛行等。布病分羊型、牛型、猪型、犬型，其中羊型、犬型布病容易感染人，牛型和猪型布病的传染性稍差。患病牛羊等动物特别是患病牛羊等动物流产的死胎、胎盘、胎衣、羊水及其污染的饲料、饲草、饮水、物品等为引起牛羊等动物布病发生的传染源。其通常是通过消化道、呼吸道、生殖道及皮肤、粘膜等传播。

人感染了布病，表现的症状为生殖器官和胎盘发炎，引起流产、不育和各种组织的局部病症。多表现为类似一般感冒症状，身体酸懒，四肢关节及全身肌肉疼痛，有时表现为低烧、午后明显；男性睾丸肿胀、发热、疼痛，女性长期不孕、反复流产、严重者，终身不孕。

近几来，随着养殖业的蓬勃发展，尤其是牧区随之而来的是布病在畜间以及人畜间的传播。虽然针对这种情况已做了各方面的防护：

如定期消毒：定期使用消毒剂对牛羊圈舍、运动场所以及用具进行消毒，目前最常使用的消毒液有二氯异氰尿酸钠(45％有效氯)、2-4％火碱水、0.5％过氧乙酸、0.5-1％百毒杀、0.5％卫康、4％纯碱热溶液、5-20％漂白溶液、10-20％生石灰乳浊液、1-1.5％农福等消毒液。

定期牛羊等动物布病监测和免疫：一般牛羊等动物饲养场每半年进行1次布病监测和检疫；正在净化的牛羊等动物饲养场每3个月进行1次布病监测和检疫。

对病死动物做无害化处理，即对检出的布病患畜不准转运、不准销售、不准屠宰、不准食用和无害化处理。对检出的患病动物和发现因布病死亡的动物要及时按规定进行无害化处理，以降低传染率、减少经济损失，提升畜产品质量安全。对被布病患畜和患畜尸体及其排泄物污染的场所、物品、用具等用有效的消毒液进行彻底消毒。

免疫用具的处理：布病免疫结束后，要将稀释后用剩的布病疫苗及一次性注射器和其他污染物品进行无害化处理。

布病对人的感染许多是经伤口及血液感染、还有部分是由于皮肤和黏膜渗透感染，对于人的防护，尤其是牧区的牧民除进行疫苗接种外，在日常工作中，要讲究卫生、勤洗手、戴手套、穿工作衣帽、戴风镜，以预防伤口、皮肤和黏膜感染。

然而，虽然各种防护措施都在实施，但是畜间以及人畜间的感染依然时有发生。一种更为有效的防护液是牧区工作者所必需的。

发明内容：

本发明为预防布氏杆菌在畜畜之间以及人畜之间的传播，提供一种预防布氏杆菌感染的体外防护液，该防护液可以喷洒于人体表面如手、胳膊、衣物表面以及佩戴的口罩表面，以预防牲畜饲养人员以及进入牧区的其他人员在工作中或接触中通过呼吸道或粘膜、皮肤感染布氏杆菌，同时该防护液还可以喷洒于动物的圈舍、草料堆、以及动物的活动场所，以杀灭环境中污染的布氏杆菌，防止人畜及畜畜之间的传播。

本发明提供的体外防护液是一种对生物体皮肤、粘膜等无毒性、无刺激性的安全制剂，该制剂含有苦豆根的提取液。

苦豆根(Sophorae tonkinesis Radix.)，又称为广豆根、山豆根、山大豆根，是豆科槐属植物越南槐(Sophora tonkinensis Gapnep.)的干燥根及根茎，具有清热解毒、消肿止痛的功效。现代研究表明，苦豆根萃取物不但具有消炎、抗菌、抗肿瘤的活性，还能调节免疫系统。苦豆根的主要活性成是生物碱类和多糖类。

越南槐是一种灌木，高约1～2米，部分呈攀援状，枝条呈绿色，无毛。主根部粗壮呈不规则的结节状，根须长短不等，其直径均在1cm。苦豆根外表皮呈现出棕色或棕褐色，切开后的断面皮部呈浅棕色、木部淡黄色，有豆腥气，味极苦。通常在秋季挖掘采集，清洗干净后晾干，切厚片备用，主要产地为广西、广东、云南、贵州、内蒙古、江西以及越南北部等地区，生长于海拔1000～2000米亚热带或温带的石山或石灰岩山地的灌木林中。

本发明的体外防护液还进一步含有季胺盐试剂，该季胺盐是一种酯基季胺盐，全称为二烷基酯甲基羟乙基硫酸甲酯铵，结构如下：

该酯基季胺盐属于阳离子表面活性剂，具有易分散且稳定性好的特点，能够与苦豆根提取物良好的相溶。该制剂通常作为衣物等的调理剂使用，对皮肤柔和无刺激感。

具体实施方式

用于本发明的苦豆根原料主要是产于内蒙古西部杭锦旗、阿拉善地区的苦豆根块茎，在秋季挖掘采集后，清洗表面泥土，切厚片；置于封闭容器中，加入一定量水室温自然发酵5-7天，其中加水量与块茎体积比为2-4：1。发酵后将发酵液收集备用。

发酵后的苦豆根切片加5-8倍量水，浸泡后加热用水提取，提取液滤膜过滤，收集滤液与发酵液混合，浓缩后制备为浓缩膏剂，膏剂的密度为1.10-1.35克/毫升，用于防护液的制备。

用于本发明防护液中的苦豆根浓缩膏剂与酯基季胺盐的含量比为1：3-5，防护液中，浓缩膏剂的体积含量为10-30％，酯基季胺盐的质量含量为5-10％，二者溶于蒸馏水中后经充分振荡混匀，然后滤膜过滤、封装，制备为本发明的防护液，该防护液可以制备为喷洒制剂或喷雾制剂用于人体、人体防护设备或环境的消毒。

实施例

实施例1：苦豆根防护液的制备

苦豆根防护液的配方：

苦豆根浓缩膏剂 100ml

酯基季胺盐 60克

蒸馏水 1000ml

豆根防护液的制备方法：

苦豆根发酵液的制备：

采集的苦豆根清洗，称取1000克苦豆根块茎厚切片置于容器中，加水2L,容器密闭置于室温(20-25℃)下一周，一周后对发酵物过滤，滤液作为发酵液备用。

苦豆根提取液的制备：

过滤后的滤渣加水5L，静置浸泡2h，加热70℃1小时提取，倒出滤液，继续加水4L，加热提取0.5小时，两次滤液合并。

苦豆根浓缩膏剂的制备

将提取的滤液以及发酵液合并，加热浓缩成稠膏状(密度约为1.25克/毫升)备用。

防护液的制备

取苦豆根稠膏状物100毫升，酯基季胺盐60克，溶于1升蒸馏水中，过滤后封装制得本发明防护液。

实施例2：防护液的抗菌性能测试

本试验用于测试本发明防护液的防护性能。

实验所用菌株：

实验原始菌株为羊种布鲁菌NC003317菌株，由内蒙古畜牧研究所制备提供。

实验仪器与试剂：

MIR－153型恒温培养箱(日本SANYO公司)、生物安全柜，其中的紫外灯功率为30W、胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)培养基(批号:6542313)、75％乙醇、二氯异氰尿酸钠(45％有效氯，购自山东绿都安特动物药业有限公司)，实施例1苦豆根防护液、3％苦参碱(苦豆根总生物碱，购自中国食品药品检定所)，无菌纱布、生理盐水、玻片。

原始菌株的分离与鉴定

将实验原始菌株稀释到1×10³个/ml，接种于TSA培养基平板上，每平板0.1ml，置37℃培养3d～5d。挑取单个菌落，分别调整浓度为1×10⁸个/ml及1×10³个/ml，分别接种于TSA培养基平板上，每平板0.1ml，涂布均匀，待菌液吸收后使用。

紫外线杀菌效果的评估

将制备的2种浓度的平板放置在生物安全柜内距紫外灯约60cm处，打开紫外灯，分别照射15min、30min、60min，每个条件均做2个平板重复，置37℃培养箱培养5d后观察细菌生长情况，取未经紫外线照射的原始菌株作为阳性对照。

二氯异氰尿酸钠杀菌效果的评估

将制备的2种浓度平板上铺盖无菌纱布，分别加入10ml二氯异氰尿酸钠使纱布浸湿，同时用生理盐水做对照，每个条件均做2个平板重复。分别作用15min、30min、60min，去掉纱布，待液体挥发后，置37℃培养箱培养，5d后观察细菌生长情况。

75％乙醇杀菌效果的评估

将制备的2种浓度平板上铺盖无菌纱布，分别加入10ml的75％乙醇使纱布浸湿，同时用生理盐水做对照，每个条件均做2个平板重复。分别作用15min、30min、60min，去掉纱布，待液体挥发后，置37℃培养箱培养，5d后观察细菌生长情况。

苦豆根防护液杀菌效果的评估

将制备的2种浓度平板上铺盖无菌纱布，分别加入10ml本发明的苦豆根防护液使纱布浸湿，同时用生理盐水做对照，每个条件均做2个平板重复。分别作用15min、30min、60min，去掉纱布，待液体挥发后，置37℃培养箱培养，5d后观察细菌生长情况。

3％苦参碱杀菌效果的评估

将制备的2种浓度平板上铺盖无菌纱布，分别加入10ml 3％的苦参碱使纱布浸湿，同时用生理盐水做对照，每个条件均做2个平板重复。分别作用15min、30min、60min，去掉纱布，待液体挥发后，置37℃培养箱培养，5d后观察细菌生长情况。

结果：

紫外线杀菌效果

各时间点不同浓度菌液的平板均无菌落生长，未经照射的对照平板上菌落生长较多。结果表明，紫外线对布氏杆菌的灭菌效果良好，15min的持续照射就能完全杀灭布氏杆菌。

二氯异氰尿酸钠杀菌效果

有效氯含量45％的二氯异氰尿酸钠杀菌效果，2种浓度菌液在消毒处理15min时间点收取的平板均有菌落生长，但其他消毒条件的平板均无菌落生长，未使用二氯异氰尿酸钠处理的对照平板上菌落生长较多。

结果表明：二氯异氰尿酸钠的灭菌效果与时间有关，须在半小时及以上。

75％乙醇杀菌效果

在各时间点的不同浓度菌液的平板均无菌落生长，未经消毒处理的对照平板上菌落生长较多。结果表明：75％乙醇对布氏杆菌的灭菌效果较好，15min的照射就能达到杀灭细菌的目的

苦豆根防护液杀菌效果

在各时间点的不同浓度菌液的平板均无菌落生长，生理盐水的对照平板上菌落生长较多。结果表明：本发明的苦豆根防护液对布氏杆菌的灭菌效果较好，即使15min的处理也能达到完全杀灭细菌的目的。

3％苦参碱杀菌效果

苦豆根中的主要活性成分是生物碱类与多糖类的成分，其中生物碱类是苦豆根中的主要活性物质，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌以及调节机体免疫活性的作用，苦参碱在苦豆根中的含量最为丰富，因此通常以苦参碱作为标准测定苦豆根总生物碱的含量。在苦豆根中总生物碱的总含量通常为20-2％，配置3％的苦参碱溶液，观察其杀菌效果，结果显示高浓度菌液在消毒处理15和30min收取的平板有菌落生长，低浓度菌液在消毒处理15min后收取的平板有菌落生长，其他消毒条件的平板均无菌落生长，生理盐水的对照平板上菌落生长较多。结果表明：3％苦参碱对布氏杆菌的杀菌效果较差。

将以上消毒方法杀菌效果比较总结如下表：

表1：不同消毒方法对布氏杆菌消毒效果的比较

注:+代表有大量布氏杆菌生长；－代表无布氏杆菌生长

本发明的防护液可以作为牧区日常的消毒制剂，工作者在接触病患牛羊或辅助牛羊产子的过程中喷洒于外露的皮肤表面，或直接喷洒于防护服的外表面，以做到二次防护，工作者佩戴的口罩也可用该防护液进行喷雾处理。牛羊的圈舍、活动场所等也可进行喷淋消毒。该防护液的消毒效果相当于紫外线杀菌或75％乙醇。效果优于现在市场上通用的含氯制剂，本发明的防护液取材于当地药材，无毒无刺激，不会对人体的皮肤和粘膜造成任何刺激损伤作用。

Claims (1)

1.一种针对布氏杆菌病的体外防护液，该防护液含有苦豆根发酵液和水提取液，其制备方法如下，清洗采集的苦豆根块茎表面泥土，切厚片；置于封闭容器中，加入一定量水，室温自然发酵5-7天，其中加水量与块茎体积比为2-4：1，发酵后将发酵液收集备用；发酵后的苦豆根切片加5-8倍量水，浸泡后加热，用水提取，提取液滤膜过滤，收集滤液与发酵液混合，浓缩后制备为浓缩膏剂，膏剂的密度为1.10-1.35克/毫升，按照苦豆根浓缩膏剂与酯基季胺盐的含量比为1：3-5的比例将苦豆根浓缩膏剂和酯基季胺盐加入到蒸馏水中，浓缩膏剂的体积含量为10-30％，酯基季胺盐的质量含量为5-10％，所述酯基季胺盐是二烷基酯甲基羟乙基硫酸甲酯铵，二者溶于蒸馏水中后经充分振荡混匀，然后滤膜过滤、封装，制备获得防护液。