CN103285079B - 一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及兽药，特别是一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺。该工艺通过水提、浓缩、酸析等工艺提取黄芩、山银花、益母草有效成份。该中药灌注剂无毒，无刺激性和致过敏性；该中药灌注剂对奶山羊临床乳房炎模型具有较好的治疗效果，且以每个乳区灌注10mL为最佳；该中药灌注剂可显著增强病羊血清中SOD和GSH-Px的活性，降低NO、MDA的含量。

Description

一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺
技术领域
本发明涉及兽药，特别是一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺。
背景技术
近年来，随着人们物质生活水平的提高，消费者对动物源食品的要求越来越高，这也逐渐提高了对养殖业的要求。养殖业的迅速发展令国人欣喜，但随之而来的疾病预防与治疗也带来了诸多问题。奶牛乳房炎是奶牛养殖中最常见的疾病，这种疾病严重影响奶牛的产奶量，不仅会给奶农造成严重的经济损失，而且还会对乳品质有很大的影响。国内外专家对奶牛乳房炎进行长期不懈的研究，在一些方面取得了一定的成就，但是不能完全消除奶牛乳房炎所带来的影响，因此奶牛乳房炎仍是各国学者研究的热门话题。
奶牛乳房炎是奶牛乳腺发生的炎症，是严重危害奶牛养殖业的一种疾病。目前全世界约有2.2亿头奶牛，其中1/3奶牛患有各种类型乳房炎[1]。在法国、芬兰、瑞典、丹麦、英国，奶牛乳房炎的发病率分别为20％、10.9％、11.1％、21％、22％，每年全世界临床乳房炎发病率大约为50％[2]，而我国的奶牛乳房炎发病率高于世界水平[3]。孙福先(1996)、萧乾庆(1997)、杨章平(1998)等报道奶牛隐性乳房炎头数阳性率分别达85.7%、51.3%、54.1%[4-6]。据相关文章指出，乳房炎每年给奶牛养殖业带来巨大的的经济，这些影响主要包括奶牛产奶量下降，奶品质下降，治疗的费用昂贵，治疗效果不明显等。在一个牛群中，大多数奶牛患有隐性乳房炎；因此，这就给养牛业多加了一个负担，因为隐性奶牛乳房炎相对于临床型奶牛乳房炎来说不易发现，不易治疗，对于养殖户来说，往往造成无形的损失[7]。我国每年因隐性乳房炎造成的损失约1.35亿元人民币[8]。虽然进行了多年不懈地研究，但是对奶牛乳房炎的防治问题一直未能得到很好的解决。
奶牛乳房炎不仅影响奶牛的产奶量和牛奶的营养成分，而且病牛乳汁中含有大量致病菌，如果消费者饮用了消毒不严的牛奶，极易使人感到身体不适；其次，牛乳中含有丰富的蛋白质、脂肪和糖，患有乳房炎的乳腺组织受到病原菌侵害，导致某些营养成分丢失。目前，牛场普遍使用抗生素治疗奶牛乳房炎；但是长期不合理的使用抗生素，导致细菌耐药性的问题越来越严重，给人类治疗奶牛乳房炎带来了不便；另外，抗生素的滥用极易导致乳汁中药物残留，人们不慎饮用这种牛奶后，尤其是老年人和婴幼儿，长期饮用有抗生素残留的牛奶极易引起变态反应，甚至增加了人体发生癌变的风险。
鉴于以上技术的不足，我们认为。研究开发一种治疗奶牛乳房炎的产品已迫在眉睫。
发明内容
本发明针对上述现有技术的不足，本发明提供一种用于治疗奶牛乳房炎灌注剂的制备工艺。
本发明的目的是通过如下途径实现的：一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂的制备工艺，其步骤如下：
A.原料准备：按重量百分比取以下药物组分：黄芩20-60%，山银花10-40%，益母草10-40%；
B.黄芩的提取:
a.水提：第一次先将水加热至80℃以上，再加入黄芩，煎煮2小时，第二、三次各1小时，黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过；
b.浓缩：滤液加热至80℃,真空度控制在0.06-0.07Mpa浓缩，浓缩至相对密度1.10-1.20；
c.酸析：在80℃加入2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水；
d.碱溶：用40%的氢氧化钠溶液调PH值为7.0,再加等量乙醇，搅拌至溶解，滤过；
e.酸析：滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过；
f.醇洗：沉淀用乙醇洗至PH值为7.0；
g. 回收乙醇，得黄芩提取物备用;
C. 山银花、益母草的提取：
a.水提：山银花、益母草加10倍水，煎煮3次，第一次煎煮2小时，第2、3次每次煎煮1小时，合并煎液，煎液滤过；
b.浓缩：滤液真空浓缩至相对密度为1.15～1.20的浸膏；
c.纯化：浸膏放冷至40℃以下，加入1%的明胶溶液，1%的明胶溶液与浸膏的体积比为1:1，搅拌均匀，滤过，滤液加乙醇至醇浓度75%，搅匀，净置12小时；
d.回收乙醇，得山银花、益母草浓缩液；
D.在浓缩液中分别加入纯化水、黄芩提取物及0.3%的苯甲酸钠，加水调至每mL灌注剂相当于1g原生药材，搅拌，滤过，灌装，即得成品。
2.如权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂的制备工艺，其特征在于：所述的步骤A中，原料按重量百分比为：黄芩40%，山银花30%，益母草30%。
本发明一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺，提供一种纯天然药物，具有低毒无残留，体内代谢快，不易对病原菌产生耐药性等特点。
本发明治疗奶牛乳房炎的灌注剂与以前的技术比较：有以下创新：
一、成份：
1.现有技术：治疗奶牛乳房炎依耐于抗生素。抗生素仍是控制奶牛乳房炎的主要手段，特别是在防止败血症以及病原菌引起的继发症等方面依然很重要。抗菌药物的长期使用导致病原菌耐药性问题很突出。
2.本专利技术：提供一种含黄芩、山银花、益母草纯中药制剂。中药属于纯天然药物，具有低毒无残留，体内代谢快，不易对病原菌产生耐药性等特点。
二、组方：
1.现有技术：文献报道，高纯一等应用公英加味散治疗奶牛乳房炎；岳春旺等用中药散剂“乳炎康”治疗奶牛临床型乳房炎取得了较好的效果；秦俊文用金银花、蒲公英、紫花地丁、柴胡、白芷、川芍、漏芦等24味中药按一定比例组成“乳炎平”治疗奶牛乳房炎。
2.本专利技术：通过科学组方，组成了6个不同的备选中药组方，经筛选研究获得组方。每1ml灌注剂相当于原生药材1g。含黄芩20-60%，山银花10-40%，益母草10-40%，最佳组方：黄芩40%，山银花30%，益母草30%。
三．机理：
1. 现有技术：应用抗生素抑制细菌细胞壁的合成；增加细菌细胞膜的通透性；阻止肽链延长或阻断肽酰基转移抑制蛋白质合成，细菌的生长受到抑制。
 2本专利技术：在中兽医学上，乳房炎被称作“乳痈”，由于邪毒蕴结化热，乳络不畅，乳汁凝滞，乳房会出现红、肿、热、痛等症状，以清热解毒、活血化瘀为主要治疗原则。从中兽医经络学角度看，乳房炎发病除外伤性外，多系阳明胃经实热、厥阴肝经阈值、冲任二脉失调，只是乳房脉络不畅，乳汁积滞发热腐败而成，从经络学的角度上看，应以疏肝理气，疏通乳络为治疗原则。所以总的治疗原则为：清热解毒、抗菌消炎、通经活血、消肿止痛、活络通乳。
三、工艺
1.现有技术：文献报道：黄芩苷提取工艺通常有：醇提取工艺、碱提取工艺（石灰法等）、水提取工艺（《中国兽药典二O一O年版》与《中国药典2010年版》）。
2.本专利技术：
2.1黄芩苷提取工艺在中国兽药典与中国药典水提取工艺基础进行了优化，第一次煎煮时，先将水加热到80℃以上，再投黄芪药材。这样，黄芩药材中黄芩苷的转移率从35%提高到70%以上。
2.2灌注剂纯化工艺：放冷至40℃以下，加等体积1%的明胶溶液，搅拌均匀，滤过，滤液加乙醇适量至醇浓度75%，这样，可以除掉产品中鞣质（单宁）与非醇溶性杂质，提高产品的澄明度与稳定性。
四、标准：
1.现有技术：产品每毫升含黄芩苷（C21H18O11）不得少于10.0mg/ml(《中国兽药典二O一O年版》与《中国药典2010年版》)。
 2.本专利技术：按最佳组方及工艺生产，标准可以提高至产品每毫升含黄芩苷（C21H18O11）不得少于20.0mg/ml。
产品的澄明度与稳定性好。
五、给药方式
1.现有技术：抗生素主要以注射与口服给药；中药以散剂、口服液口服给药与外用给药。
2.本专利技术：灌注剂主要通过乳池灌注的方式给药。这种治疗方式作用迅速、给药方便、药物中有效成分损失小；灌注的中药可直接作用于病原微生物，抑制病原菌生长繁殖。随着科学技术的发展，一种更加有效的新剂型将会被发现和应用。
六、应用：
1.现有技术：容易出现乳汁凝滞，乳房出现红、肿、热、痛等不良反应症状。
2.本专利技术：减少因植物中的鞣质与乳汁中的蛋白形成鞣质蛋白沉淀导致乳汁凝滞，乳房出现红、肿、热、痛等不良反应症状。
七、安全性与治疗试验研究
1.材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
试验用奶山羊：来自保定清苑养殖场，体重50～60 kg，经LMT法检测乳房炎为阴性的健康泌乳期奶山羊；獭兔：购自清苑獭兔养殖场，2.0±0.1kg，雌雄各半，健康的獭兔。
试验药品  
黄山草灌注剂：由湖南圣雅凯生物科技有限公司生产，批号：121201; LMT诊断液(购自中国农业科学院兰州中兽医研究所，生产许可证号：（2012）兽药生产字28008号)，注射用头孢噻呋钠（山东天振药业有限公司，批准文号：兽药字（2012）150042020）。造模用菌株为：大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Sta.aureus)、无乳链球菌(Str·agalactiae) 由河北农业大学中兽医实验室提供。阿司匹林片（石药集团欧意药业有限公司，批号：018120311）；硫化钠( CP 级，批号: 20090301，天津市福晨化学试剂厂) ，2，4-二硝基氯苯( CP 级，批号: 20120524，石家庄莫高化学试剂有限公司)；
1.1.3 主要仪器设备
手提式压力蒸气灭菌器（上海申安医疗器械厂，SYQ-DSX-280B）；电热干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂，101-3AS）；恒温振荡器（南京畅翔仪器设备有限责任公司，IS-RDV1）；恒温培养箱（宁波东南仪器有限公司，SPX型）；生物显微镜（北京市六一仪器厂，WD-9413A）；超净工作台（哈东联，河北农业大学20040075）；紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司，T6新世纪）；电子天平（上海第二天平仪器厂，MP200A型）；台式高速冷冻离心机（上海天美生化仪器设备工程有限公司），水浴锅（上海森信实验仪器有限公司，DK-S26型）。
试验方法
1.2.1中药乳池灌注剂安全性试验研究
1.2.1.1皮肤用药急性毒性试验
将预备饲养的24只家兔随机分为4组，每组6只。分别为完整皮肤中药组、完整皮肤不用药对照组、破损皮肤中药组和破损皮肤不用药对照组。各组在实验前24 h，用10%的硫化钠给家兔背部脊柱两侧脱毛，面积 5×6 cm2，约为体表面积的10%左右 。破损组是用手术刀在皮肤上划一“#”字形伤口，以皮肤出现渗血为度。中药组（完整皮肤组和破损皮肤组）分别在脱毛区域涂抹受试中药灌注剂2 ml；在对照组（完整皮肤组和破损皮肤组）脱毛区域涂抹生理盐水2ml。外用两层无刺激性纱布覆盖，半封闭敷料固定，分笼饲养。给药24 h后，用温水将残留药物洗掉。去除药物后1，24，48 h至第7天，观察动物皮毛光泽、黏膜、饮食、自主活动及体重等情况。若遇动物死亡，及时尸检和进行肉眼观察，必要时进行病理组织学检测。
1.2.1.2 皮肤用药刺激性试验
将预备饲养的12只家兔随机分为 2 组，即完整皮肤组和破损皮肤组，每组6只。实验前24 h，用10%的硫化钠给家兔背部脊柱两侧对称脱毛，每侧面积 5×6 cm2。采用自身对照法，分别考察乳池灌注剂对完整皮肤和破损皮肤的影响。破损组是用手术刀在皮肤上划一“#”字形伤口，以皮肤出现渗血为度。各组家兔在右侧脱毛区涂抹受试中药灌注剂1ml，左侧涂抹生理盐水1 ml。外用两层无刺激性纱布覆盖，半封闭敷料固定，分笼饲养。给药6h后，用温水将残留药物洗掉。去除药物后0.5，1，24，48，72 h，观察动物脱毛皮肤红斑、水肿程度并按表1、2中的《皮肤刺激性反应分值标准》、《皮肤刺激性强度评价标准》进行评分，记录各组在不同时间的评分值及恢复情况。
表1 皮肤刺激反应评分标准
表2皮肤刺激强度分级
1.2.1.3 皮肤用药过敏性试验
将预备饲养的18只獭兔随机分为3组，每组6只。分别为中药灌注液组、空白对照组和阳性对照组。给药前24 h，将18只獭兔脊柱两侧背部皮肤脱毛处理，左、右各5×6cm2。灌注剂组取1ml药液涂于獭兔脱毛区皮肤上，无刺激敷料覆盖，再以胶布固定，进行致敏接触。动物单笼放置，包裹固定 6 h 后，用温水擦去皮肤上残留药液。以同样方法在第7天和第14天各重复1次，共计3次。阳性对照组用 1% DNCB(2，4-二硝基氯苯)进行首次致敏，并于第7天和第14天用0.1% DNCB激发致敏；空白对照组用生理盐水涂抹，方法同阳性对照组。末次给药后，包裹固定 6 h 后，温水擦去受试物，即刻观察，然后于24，48，72 h 再次观察皮肤过敏反应情况。按照表3、4中的《皮肤过敏反应程度的评分标准》、《皮肤致敏性评价标准》对皮肤红斑和水肿进行评分。记录各组的平均值。同时注意观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性过敏反应。
表3 皮肤过敏反应评分标准
反应平均值=（红斑形成总分+水肿形成总分）/动物总数×100%
致敏率=阳性反应动物数/受试动物总数×100%
阳性反应：皮肤出现红斑或水肿（不论程度轻重）。
表4     皮肤过敏反应强度分级
1.2.2 中药灌注液对奶山羊乳房炎模型的治疗效果观察
1.2.2.1菌液的制备　
将从奶牛临床型乳房炎中分得的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌菌种分别接种于TBS肉汤培养基中进行复壮培养，37℃培养18 h，运用活菌平板计数法调整菌液浓度，大肠杆菌菌液3×103 cfu/ml，金黄色葡萄球菌菌液3×102 cfu/ml，无乳链球菌菌液3×103 cfu/ml ，4℃保存供2 d内使用。 
1.2.2.2临床型山羊乳房炎模型的建立　
选取品种、体重、年龄相近的泌乳奶山羊30只，造模前3 d对奶山羊进行全面检查(精神、饮食、大小便、T、P、R等)。对于精神状况良好，各项生理指标正常，LMT检测及细菌培养均阴性的奶山羊方可进行正式人工感染试验。攻菌前先将乳池中的奶挤完，温水擦洗羊乳房，酒精棉消毒。用灭菌的小号通乳针插入乳头管，将余奶放净，分别吸取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌悬液 2ml从通乳针注入每只奶山羊乳房中，轻轻按摩乳房数秒。
1.2.2.3　临床型乳房炎模型的判定标准
攻毒后24h，观察奶山羊的精神状态，采食情况；做临床检查，触诊奶山羊乳房，观察肿胀程度、有无乳房硬块；采集乳样，观察乳汁的颜色、粘稠度、乳汁中有无絮状物和结块；用LMT检测液检测乳汁中的体细胞数目。
1.2.2.4 中药灌注剂对山羊乳房炎模型的治疗试验
将造模成功的乳房炎奶山羊25只，随机分为5组，每组5只。按照表7的剂量给各组奶山羊患病乳区灌注相关药物或生理盐水，早晚各一次，连用7天。
表5     治疗试验分组及给药情况
组别 药物 给药量
高剂量中药组（ZG） 受试中药灌注剂 20ml/乳头
中剂量中药组（ZZ） 受试中药灌注剂 10ml/乳头
低剂量中药组（ZD） 受试中药灌注剂 5ml/乳头
抗生素对照组 (KD) 头孢噻呋钠 10ml/乳头
不用药对照组（BD） 生理盐水 10ml/乳头
治疗过程中要无菌操作，挤净余奶，在灌注前，患病乳区用75%洒精棉球消毒，灌注结束后，按摩乳区片刻，使药物在乳池被充分吸收。连续给药7d，每次治疗结束后的24h，依据表1对每只奶山羊进行评分。最后一次给药后，在连续观察1周，并评分。
表6  乳房炎的疗效评分标准
指标 0 1 2 3
外观 无红肿 轻微发红 轻微红肿 红肿
手感 柔软 稍硬 较硬 整体发硬
乳汁性状 乳汁均匀，无结块 乳汁稀 乳汁稀，略有结块 乳汁稀，有结块
LMT 无凝结 似有凝结，摇晃可消失 轻微凝结 凝结，可晃动
评判方法：从攻毒当天开始，给每只奶山羊进行打分，每组取平均值。
中药灌注剂治疗乳房炎对血液中氧化性指标的影响
各组在造模接菌的前3天、造模后治疗前，以及应用中药灌注剂治疗后的第3d、5d、7d，分别从静脉采血10 mL，37℃水浴锅静置1 h，3500 r/min离心 15 min，取上层血清-80℃冰箱中保存。采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛( MDA)含量、NO含量。
数据处理
试验数据采用均值±标准差(x±s)表示，用spss11.5软件进行统计学分析。
试验结果
2.1中药灌注剂安全性试验结果
2.1.1皮肤急性毒性试验
完整皮肤及破损皮肤组受试家兔在试验期间全部存活，且自主活动、饮食、皮毛光泽、黏膜、体质量等均未见异常，给药前后试验组和对照组家兔的体重均无显著差异 (P＞0.05)。
              表7 皮肤急性毒性试验体重（n=6）                单位/kg
组别 完整皮肤用药组 完整皮肤对照组 破损皮肤用药组 破损皮肤对照组
试验前 2.05±0.07 2.01±0.05 2.00±0.07 2.02±0.05
第1d 2.07±0.05 2.03±0.04 2.00±0.07 2.01±0.04
第2d 2.07±0.06 2.03±0.04 2.00±0.07 2.01±0.04
第3d 2.07±0.06 2.04±0.04 2.00±0.07 2.01±0.04
第4d 2.07±0.06 2.04±0.04 2.02±0.05 2.01±0.04
第5d 2.07±0.06 2.04±0.04 2.02±0.05 2.02±0.04
第6d 2.07±0.06 2.04±0.04 2.02±0.05 2.02±0.04
第7d 2.07±0.06 2.04±0.04 2.02±0.05 2.02±0.04
注：同一列不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著
P＜0.05
2.1.2 皮肤刺激性试验
中药灌注剂对皮肤的刺激性试验结果显示。中药涂抹于獭兔皮肤时，獭兔完整皮肤及破损皮肤均未出现明显红斑和水肿反应，刺激平均值小于 0.5，属于无刺激物质。
表8中药灌注剂对兔皮肤的刺激性试验结果
2.1.3 皮肤过敏性试验
试验过程中，试验组和空白组獭兔未出现红斑、水肿、哮喘、站立不稳或休克等过敏症状，致敏率为0％，表明中药灌注剂属于弱致敏物。而用2，4-二硝基氯苯的阳性组獭兔皮肤局部出现重度红斑，并有水肿出现，触碰其涂药部位时獭兔有躲避等疼痛反应，致敏率为 100％，属于极强度致敏物。上述结果表明受试中药灌注剂对獭兔皮肤无致敏性。表10为试验结果
表9中药灌注剂对兔皮肤过敏反应的试验结果
时间 6h 24h 48h 72h
试验组 0 0 0 0
空白对照 0 0 0 0
阳性对照 2.33 3.33 6.17 5.0
2.2中药灌注剂对山羊乳房炎模型治疗试验结果
中药灌注剂的试验结果如表11。抗生素治疗组从第二天开始，乳房肿胀减退，变软，乳汁性状好转，平均值＜3；中药高、中、低治疗组的治疗效果较慢，高剂量组和中剂量组从第4d开始乳汁症状好转，乳房肿胀减弱，LMT检测体细胞数减少，但综合评分与对照组无显著差异（P>0.05）。从第5d开始，中药高中剂量组的但综合评分较对照组显著较低（P<0.01）。低剂量组和空白对照组没有明显好转。
                    表10各组的治疗效果表                     (n=5)
组别 ZG ZZ ZD KD BD
用药前 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0
第1d 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0
第2d 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0
第3d 3.0±0.0 3.0±0.0 3.0±0.0 2.6±0.5 3.0±0.0
第4d 2.6±0.5Bab 2.4±0.6ABb 3.0±0.0Ba 1.8±0.5Ac 3.0±0.0Ba
第5d 2.2±0.5ABb 2.4±0.6BCb 30.±0.0Cc 1.6±0.6Aa 3.0±0.0Cc
第6d 2.0±0.7Aa 2.0±0.7Aa 3.0±0.0Bb 1.4±0.6Aa 3.0±0.0Bb
第7d 1.8±0.8Ab 1.6±0.6Aab 3.0±0.0Bc 1.0±0.7Aa 3.0±0.0Bc
第8d 1.2±0.5Aa 1.2±0.5Aa 2.8±0.5Bb 1.0±0.7Aa 3.0±0.0B.b
第9d 0.8±0.45Aa 1.0±0.7Aa 2.8±0.5Bb 1.0±0.7Aa 3.0±0.0Bb
注：同一行的不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著，P＜0.05
2.3 中药灌注剂对血液中氧化性指标的影响
2.3.1中药灌注剂对乳房炎奶羊血清中MDA含量的影响
表11 用药前后奶山羊血清中MDA含量的变化(n=5)   单位：nmol/ml
组别 造模前 造模后治疗前 治疗3d后 治疗5d后 治疗7d后
ZG 2.78±0.42 3.37±0.30 3.27±0.25 2.32±0.27a 2.12±0.42a
ZZ 2.77±0.59 3.74±0.78 3.52±0.43 2.19±0.30a 2.10±0.39a
ZD 3.03±0.30 3.46±0.41 3.27±0.43 3.37±0.16b 3.03±0.58b
KD 2.87±0.61 3.43±0.49 3.21±0.69 2.16±0.21a 2.12±0.85b
BD 2.97±0.19 3.57±0.68 3.54±0.41 3.57±0.83b 3.64±0.30b
注：同一列不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著，P＜0.05
造模后，奶山羊的血清中MDA含量显著高于正常值，应用中药灌注剂和抗生素（注射用头孢噻呋钠）进行治疗3d后，各组羊血清中MDA含量无显著变化（P＞0.05），但治疗5d和7d后，各治疗组的MDA含量与空白对照组相比，除中药低剂量组外，均显著减低（P<0.05）。详见表11。
2.3.2中药灌注剂对乳房炎奶羊血清中NO含量的影响
造模后，奶山羊的血清中NO含量显著高于正常值，应用中药灌注剂和抗生素（注射用头孢噻呋钠）进行治疗后，抗生素组的血清NO含量逐渐降低；而各中药治疗组在治疗后NO逐渐升高，但NO升高程度低于空白对照组；治疗3d，抗生素组、中药高剂量组和中药中剂量组同空白对照组相比，差异显著（P＜0.05）；治疗5d，各治疗组与空白对照组相比，差异极显著（P＜0.01）；治疗7d，抗生素组、中药高剂量组和中药中剂量组与空白对照组相比较，差异极显著（P＜0.01）。见表12。
           表12用药前后奶山羊血清中NO含量的变化(n=5)        单位：μmol/L
组别 造模前 造模后治疗前 治疗3d后 治疗5d后 治疗7d后
ZG 23.58±7.76 66.91±18.01 54.18±13.25ab 76.0±12.09Aab 84.0±12.75ABabc
ZZ 24.36±11.18 53.82±24.18 43.84±16.84a 72.13±27.01Aab 70.91±16.65ABab
ZD 27.74±8.40 55.62±16.62 67.51±15.15b 94.58±9.96ABbc 109.09±25.36Bc
KD 29.61±10.45 71.64±18.56 56.18±16.05ab 62.93±5.19Aa 56.02±14.77Aa
BD 22.15±11.48 53.27±11.49 73.64±15.05b 114.00±22.45Bc 107.27±46.96Bbc
注：同一列不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著，P＜0.05
2.3.3中药灌注剂对乳房炎奶羊血清中SOD活性的影响
造模后，奶山羊的血清中SOD活性显著低于正常值（p<0.05），应用中药灌注剂和抗生素（注射用头孢噻呋钠）治疗3d后，各组羊血清中SOD活性无显著变化（P＞0.05），但治疗5d和7d后，各治疗组的SOD活性与空白对照组相比，除中药低剂量组在治疗后的5d外，均显著增强（P<0.05或P<0.01）。详见表13。
              表13 用药前后奶山羊血清中SOD活性的变化(n=5)        单位：U/ml
组别 造模前 造模后治疗前 治疗3d后 治疗5d后 治疗7d后
ZG 150.63±11.59 120.57±17.94 122.46±14.67 155.60±14.54a 167.83±10.11Aa
ZZ 140.76±13.02 128.08±13.46 121.48±23.75 153.77±7.77a 166.46±11.02Aa
ZD 144.48±15.50 117.94±8.37 122.19±11.19 134.40±6.57b 140.91±3.25b
KD 137.33±11.57 119.95±28.07 126.4±10.83 153.71±14.90a 163.48±11.50A
BD 141.59±11.31 117.14±15.70 108.64±15.36 113.37±15.44b 111.03±11.52Bc
注：同一列不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著，P＜0.05
2.2.4中药灌注剂对乳房炎奶羊血清中GSH-Px活性的影响
造模后，奶山羊的血清中GSH-Px活性显著低于正常值（P<0.05），应用中药灌注剂和抗生素（注射用头孢噻呋钠）治疗3d后，各组羊血清中GSH-Px活性无显著变化（P＞0.05），但治疗5d和7d后，各治疗组的GSH-Px活性与空白对照组相比，除中药低剂量组在治疗后的5d外，均显著增强（P<0.05或P<0.01）。详见表14
 表14用药前后奶山羊血清中GSH-Px活性的变化(n=5)       单位：活力 
组别 造模前 造模后治疗前 治疗3d后 治疗5d后 治疗7d后
ZG 236.14±13.47 197.44±35.46 200.92±11.21 239.44±16.22ac 254.54±19.33Aa
ZZ 235.49±18.69 192.41±11.75 219.38±18.26 235.26±14.22ac 262.21±17.83Aa
ZD 246.59±18.51 194.14±27.43 205.49±18.65 217.99±38.10bc 234.25±22.15ACb
KD 233.20±11.93 192.34±28.53 198.23±22.34 249.88±15.76a 255.33±15.42Aa
BD 246.41±38.07 201.70±24.63 206.55±20.05 198.73±22.03b 201.44±19.53BCc
注：同一列不同大写英文字母代表差异极显著，P＜0.01；不同小写英文字母代表差异显著，P＜0.05
通过试验结果得到如下结论：
通过体外急性毒性试验，刺激性试验和过敏性试验研究表明，该中药灌注剂无毒，无刺激性和致过敏性；该中药灌注剂对奶山羊临床乳房炎模型具有较好的治疗效果，且以每个乳区灌注10mL为最佳；该中药灌注剂可显著增强病羊血清中SOD和GSH-Px的活性，降低NO、MDA的含量。
具体实施方式
本发明一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂的制备工艺，其步骤如下：
A.原料准备：按重量百分比取以下药物组分：黄芩20-60%，山银花10-40%，益母草10-40%；
B.黄芩的提取:
a.水提：第一次先将水加热至80℃以上，再加入黄芩，煎煮2小时，第二、三次各1小时，黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过；
该工艺是在中国兽药典与中国药典黄芩苷水提取工艺基础进行了优化，按中国兽药典与中国药典水提取工艺，在没有注明温度的情况下，是指常温条件，先浸渍45min-1hr，再加热，当升温至70℃时浸渍、加热累计时间约90min，由于黄芩植物中存在黄芩苷酶，在浸渍、加热90min时间里，从黄芩药材中溶出的黄芩苷很快在黄芩苷酶的作用下水解成黄芩苷元，影响黄芩苷提取，因此，我们就黄芩入水温度进行了单因素影响研究，
黄芩入水温度对提取黄芩苷的影响研究
我们就黄芩入水温度设置了25℃、70℃、80℃、90℃四个水平组，第一次煎煮2小时，第二、三次各1小时，黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过；后面提取工艺一致。每组黄芩入水温度连续考察6批。通过测定产品中黄芩苷含量，计算黄芩苷的转移率，验证黄芩苷提取效率，结果见表a
表a    黄芩入水温度对提取黄芩苷的影响
表a结果显示：70℃组、80℃组、90℃组与25℃组比较，黄芩苷转移率差异极显著（P＜0.01）；80℃组、90℃组与70℃组比较，黄芩苷转移率差异极显著（P＜0.01），提示：80℃组、90℃组黄芩苷提取效率优于70℃组；80℃组与90℃组比较，黄芩苷转移率差异不显著（P＞0.05）。故选择80℃以上。
b.浓缩：滤液加热至80℃,真空度控制在0.06-0.07Mpa浓缩，浓缩至相对密度1.10-1.20；
c.酸析：在80℃加入2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水；
d.碱溶：用40%的氢氧化钠溶液调PH值为7.0,再加等量乙醇，搅拌至溶解，滤过；
e.酸析：滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过；
f.醇洗：沉淀用乙醇洗至PH值为7.0；
g. 回收乙醇，得黄芩提取物备用;
C. 山银花、益母草的提取：
a.水提：山银花、益母草加10倍水，煎煮3次，第一次煎煮2小时，第2、3次每次煎煮1小时，合并煎液，煎液滤过；
b.浓缩：在70-80℃，滤液真空减压浓缩至相对密度为1.15～1.20的浸膏；
c.纯化：浸膏放冷至40℃以下，加入1%的明胶溶液，1%的明胶溶液与浸膏的体积比为1:1，搅拌均匀，滤过，滤液加乙醇至醇浓度75%，搅匀，净置12小时；
d.回收乙醇，得山银花、益母草浓缩液；
由于水提取工艺提取成分较为复杂，一些无效成分也随之煎出。如：单宁（鞣质、鞣酸）是一种广泛存在于植物界的化合物，分为可水解鞣质和缩合鞣质，易溶于水和醇，缩合鞣质稳定性不好，加热或久置容易产生沉淀，影响产品质量；再者鞣质与蛋白易结合生成鞣质蛋白沉淀，临床应用存在不良反应的风险，杂质鞣质与乳汁中蛋白易结合生成鞣质蛋白沉淀，形成硬块或堵塞腺泡开口与输乳管。因此，我们在工艺研究中选择用药用明胶去除产品中的鞣质，再用醇沉方法除去过量的明胶与其他醇不溶性杂质。
D.在浓缩液中分别加入纯化水、黄芩提取物及0.3%的苯甲酸钠，加水调至每mL灌注剂相当于1g原生药材，搅拌，滤过，灌装，即得成品。
所述的步骤A中，原料按重量百分比为：黄芩40%，山银花30%，益母草30%。

Claims (2)

1.一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺，其特征在于，其步骤如下：
A.原料准备：按重量百分比取以下药物组分：黄芩20-60%，山银花10-40%，益母草10-40%；
B.黄芩的提取:
a.水提：第一次先将水加热至80℃以上，再加入黄芩，煎煮2小时，第二、三次各1小时，黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过；
b.浓缩：滤液加热至80℃,真空度控制在0.06-0.07Mpa浓缩，浓缩至相对密度1.10-1.20；
c.酸析：在80℃加入2mol/L盐酸溶液调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水；
d.碱溶：用40%的氢氧化钠溶液调PH值为7.0,再加等量乙醇，搅拌至溶解，滤过；
e.酸析：滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过；
f.醇洗：沉淀用乙醇洗至PH值为7.0；
g. 回收乙醇，得黄芩提取物备用;
C. 山银花、益母草的提取：
a.水提：山银花、益母草加10倍水，煎煮3次，第一次煎煮2小时，第2、3次每次煎煮1小时，合并煎液，煎液滤过；
b.浓缩：滤液真空浓缩至相对密度为1.15～1.20(70-80℃测)的浸膏；
c.纯化：浸膏放冷至40℃以下，加入1%的明胶溶液，1%的明胶溶液与浸膏的体积比为1:1，搅拌均匀，滤过，滤液加乙醇至醇浓度75%，搅匀，净置12小时；
d.回收乙醇，得山银花、益母草浓缩液；
D.在浓缩液中分别加入纯化水、黄芩提取物及0.3%的苯甲酸钠，加水调至每mL灌注剂相当于1g原生药材，搅拌，滤过，灌装，即得成品。
2.如权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎的灌注剂制备工艺，其特征在于：所述的步骤A中，原料按重量百分比为：黄芩40%，山银花30%，益母草30%。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160082040A1 (en) * 2014-08-18 2016-03-24 Bovicor Pharmatech Inc. Nitric oxide treatment of mammary tissue

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102397331A (zh) * 2010-09-17 2012-04-04 北京生泰尔生物科技有限公司 一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法
CN102764297A (zh) * 2011-04-30 2012-11-07 顾建光 银黄口服液及其制备方法
CN102813699A (zh) * 2012-08-31 2012-12-12 张明强 一种具有清热、解毒、消炎作用的药物组合物及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102397331A (zh) * 2010-09-17 2012-04-04 北京生泰尔生物科技有限公司 一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法
CN102764297A (zh) * 2011-04-30 2012-11-07 顾建光 银黄口服液及其制备方法
CN102813699A (zh) * 2012-08-31 2012-12-12 张明强 一种具有清热、解毒、消炎作用的药物组合物及其制备方法

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
.&lt *
.2012, *
侯晓礁.《 银黄可溶性粉预防奶牛乳房炎的试验研究 》.《中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册) 》.2009, *
孙成根 *
孟和 *
朱海明 *
李海玲.&lt *
甘肃畜牧兽医&gt *
益母草的药理作用与临床应用&gt *
郗伟斌 *
陆凤琪 *

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