CN113813306B - 一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物 - Google Patents

一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，由以下质量份数的药材制成：苍耳子3份‑6份，辛夷3份‑6份，古羊藤10份‑20份，可在鸡产蛋期代替抗生素使用，无药残要求、制备简单，治愈率高、安全无毒副作用、使用方便。

Description

一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，本发明涉及一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物。
背景技术
鸡传染性鼻炎是在家禽养殖过程中的常见病之一，是由副鸡嗜血杆菌引起的一种急性呼吸道性传染病，造成鸡生长停滞、淘汰率增加、产蛋量显著下降，近年的发病率越来越高，造成养殖业很大的经济损失。
副鸡嗜血杆菌呈多形性，一般为革兰氏阴性小球杆菌；不形成芽胞，无鞭毛，不能运动；抵抗力弱且兼性厌氧，在真空冻干条件下可以保存10年，在自然环境中数小时即死；对热及消毒药也很敏感，在45℃存活不过6min。
鸡传染性鼻炎临床症状表现为，发病鸡只精神沉郁，食少或不食，饮水减少；呼吸道症状较为严重，主要表现是鼻炎、鼻窦炎、鼻黏膜和眼黏膜发炎、鼻孔不时流出白色浆液性或黏液性分泌物或黄色干酪物，呼吸困难，打喷嚏，甩头欲将呼吸道内的黏液排出，并有啰音；颜面部肿胀，肉髯及下颌肿胀，眶下窦肿胀；下痢，体重减轻；产蛋鸡表现为未开产的开产推后，已开产的产蛋高峰上不去，并严重影响其产蛋率。鸡群整体死亡率相对较低，淘汰率偏高。
流行病学：本病多发生于育成鸡群和产蛋鸡群，育雏鸡较少发生；病鸡及隐性带菌鸡是传染源，而慢性病鸡及隐性带菌鸡是鸡群中发生本病的重要原因；本病以秋、冬季多见。其传播途径主要以飞沫及尘埃经呼吸传染，但也可通过污染的饲料和饮水经消化道传染。本病的发生与一些能使机体抵抗力下降的诱因密切有关，如鸡群拥挤，不同年龄的鸡混群饲养，通风不良，鸡舍内闷热，氨气浓度大，或鸡舍寒冷潮湿，缺乏维生素A，受寄生虫侵袭等都能促使鸡群严重发病。
本病危害及损失：鸡传染性鼻炎传播迅速，发病率高，5～7天波及全群，发病率可高达70％～90％，易继发大肠杆菌或慢性呼吸道病，死淘5％以上；造成育成鸡生长不良和产蛋鸡产蛋下降，产蛋高峰期鸡群发病时，产蛋率可急剧下降50％左右，如不及时控制，将对肉蛋鸡养殖业造成严重的经济损失。
副鸡嗜血杆菌对磺胺类药物非常敏感，故磺胺类药物是国内外治疗传染性鼻炎的首选药物，但由于磺胺类药物易在鸡体内残留且影响鸡群的采食量和产蛋率，所以临床已经禁止产蛋期使用。
中草药是我国特有的中医药理论和实践的产物，具有天然性、多能性，且价格低廉、药源广泛，具有极深的发展潜力。利用中草药预防和治疗相关疾病取得了明显进展，中药作为替代化学药物解决药残和抗药性的重要途径，越来越受到重视。但是目前的中兽药在治疗鸡传染性鼻炎的改进并不明显。CN109331126A公开了用于治疗鸡传染性鼻炎的中药组合物，包括辛夷5-20份，知母4-18份，黄柏7-15份，沙参10-18份，木香5-12份，明矾2-10份，蔓荆子1-10份，羌活等16味中药材组成的中药，并公开中兽医辩症当属肺脾气虚，卫外不固，加之调摄不慎，反复感受风寒或风热之邪，内外相合而成。病久疾病深入于里，络脉不通，气滞血瘀，更鼻窍窒塞，顽固难愈。临床辨症主要分为风寒、风热两个症型。然而该中药组方过大，对于小型的禽类，其难以采食足够量的中药，因而，在实际中难以发挥有效作用。CN104825544B公开了一种用于防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，包括炒制苍耳子20份，辛夷20份，白芷11份，细辛5份，菊花11份，薄荷6份，金银花11份，黄芪11份，甘草5份，但该方案主要关注对传染性鼻炎防治，对于严重影响养殖业的育成鸡生长不良和产蛋鸡产蛋率等并发症问题并未提出有效解决方案。
古羊藤多产于我国云南、贵州、广西等地，其在当地多用于治疗跌打损伤、痢疾、慢性胃炎、湿热腹泻、感冒发热及心胃气痛等症状，临床和民间多单用古羊藤或用其复方制剂来治疗消化系统疾病，如痢疾腹泻、胃炎、慢性结肠炎、消化性溃疡等疾病。梁红在“古羊藤提取物抗急性胃肠炎作用的研究”报道古羊藤高剂量水提取物和醇提取物能显著减轻二甲苯导致的炎性物质渗出，表明古羊藤水提取物和醇提取物具有较好的抗炎作用，在小鼠扭体法也显示古羊藤提取物有一定的镇痛效果。但目前并未报道古羊藤能用于禽类的上呼吸道传染病，尤其是在抑制副鸡嗜血杆菌方面的作用。发明人在将不同功效中药和苍耳子、辛夷配伍后，发现古羊藤和苍耳子、辛夷配伍后的效果有显著的协同作用，对鸡传染性鼻炎疾病各种症状有比较明显的改善。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，可在鸡产蛋期代替抗生素使用，无药残要求、制备简单，治愈率高、安全无毒副作用、使用方便。
本发明通过下述的技术方案实现的：
一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，由以下质量分数的药材制成：苍耳子3份-6份，辛夷3份-6份，古羊藤10份-20份。
优选的，由以下质量分数的药材制成：苍耳子4份-5份，辛夷4份-5份，古羊藤13份-16份。
优选的，由以下质量分数的药材制成：苍耳子5份，辛夷5份，古羊藤15份。
上述中药组合物的剂型为其剂型为合剂、散剂、颗粒剂或汤剂。
本发明还进一步提供一种上述中药组合物制备方法，将各药材粉碎、混匀制成散剂。或者将各药材用水或乙醇溶液提取制备而成。
本发明还提供一种制药用途，优选本发明中药组合物在制备防治鸡传染性鼻炎药物中的应用。
本发明的各药材功效如下：
苍耳子：药性为辛、苦、温。有小毒。归肺经；功效为发散风寒，通鼻窍，祛风湿止痛；主治风寒感冒，鼻渊，风湿痹痛。
辛夷：药性为辛、温。归肺、胃经；功效为发散风寒，通鼻窍；主治风寒感冒，鼻渊。
古羊藤：药性为味苦微甘，性凉。功能主治为：清热解毒。治泄泻，痢疾，疟疾，感冒，胃痛，淋浊。
苍耳子、辛夷为发散风寒药，通鼻窍，在治疗鼻炎病中应用广泛，在临床使用中，两个发散风寒药物去治疗鸡传染性鼻炎，效果不如磺胺药物。本发明人通过大量的药材筛选，发现了多个能体外抗副鸡嗜血杆菌的药材，通过体内试验发现，古羊藤和苍耳子、辛夷联合使用时，能显著的提升治疗鸡传染性鼻炎的效果，减少并发症状。
本案发明人通过研究发现，有体外抗菌效果的药材，并不一定能在体内实验中起到效果，发明人通过筛选、研究工作，发现古羊藤不但有体外抗嗜血杆菌效果，而且在体内实验时，也有很好疗效，而且和苍耳子、辛夷配合应用时，会有更显著的疗效。
附图说明：
图1本发明鸡传染性鼻炎临床症状观察图
图2本发明鸡传染性鼻炎剖检图
图3本发明病原检测结果图
图4本发明的治疗效果图
具体实施方式
实施例1：取300g苍耳子、300g辛夷，粉碎，过100目筛网，混匀即得。
实施例2：取1000g古羊藤，粉碎，过100目筛网，即得。
实施例3：取300g苍耳子、300g辛夷、1000g古羊藤，粉碎，过100目筛网，混匀即得。
实施例4：取500g苍耳子、500g辛夷、1000g古羊藤，粉碎，过100目筛网，混匀即得。
实施例5：取300g苍耳子、300g辛夷、2000g古羊藤，粉碎，过100目筛网，混匀即得。
实施例6：取400g苍耳子、400g辛夷、1500g古羊藤，粉碎，过100目筛网，混匀即得。
实施例7：取300g苍耳子、300g辛夷，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例8：取1000g古羊藤，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例9：取300g苍耳子、300g辛夷、1000g古羊藤，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例10：取500g苍耳子、500g辛夷、1000g古羊藤，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例11：取300g苍耳子、300g辛夷、2000g古羊藤，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例12：取400g苍耳子、400g辛夷、1500g古羊藤，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实施例13：取400g苍耳子、400g辛夷、1500g博落回，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至含生药量1g/mL，即得。
实验例1
观察实施例7、8、9的体外抗嗜血杆菌效果。
本试验将不同浓度的药物混合溶解于液体培养基中，然后接种细菌，通过细菌的生长与否，确定药物抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度(Minimal InhibitoryConcentration，MIC)。
实验材料：药物提取液，磺胺二甲氧嘧啶，副鸡嗜血杆菌B型株；TSB培养基；稀释液；吸管；试管；37℃培养箱。
实验方法
制备副鸡嗜血杆菌菌液。菌种培养基配制：TSB培养基，称取胰蛋白大豆肉汤(Tryptic Soy Broth,TSB)培养基30g，酵母浸粉10g，加纯化水945ml，充分摇匀溶解，121℃高压灭菌15min，冷却后加入50ml灭活后的新生牛血清、5ml过滤除菌的1％NAD溶液，充分摇匀即得。挑取单个副鸡嗜血杆菌菌落，加入到培养基中，37℃培养24h。
含药物培养基配制：将药物用生理盐水做倍比稀释成不同浓度的受试液，取各稀释度受试液2.5ml加入到含2.5ml双倍浓度TSB培养基的试管中，稀释至1:256倍。
取20微升的菌悬液接种于含药物的培养基的试管中，作为试验组样本。
以同样方法接种不含药物的试管中，作为阳性对照组样本。
取2支含培养基的试管，用生理盐水代替药物处理，作为阴性对照组样本。
将试验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置37℃培养箱中，培养24h，观察结果，阳性对照组出现明显浑浊，停止培养，观察结果。
评判规定
当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无菌生长(透明)，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的香连溶液浓度，为该样品对受试菌的MIC。
实验结果
表1.不同药物对副鸡嗜血杆菌的最小抑菌浓度(MIC)
Figure BDA0003286183990000051
辛夷和苍耳子提取液(生药量含量1g/mL)1:4稀释没有观察到体外抗嗜血杆菌效果，古羊藤提取液(生药量含量为1g/kg)稀释16倍有体外抗副鸡嗜血杆菌效果；实施例9是辛夷、苍耳子、古羊藤联用，含古羊藤的生药量为0.6g/mL，说明辛夷、苍耳子联用古羊藤的体外抗菌效果不明显，本发明抗菌作用主要是古羊藤起抗菌作用。阳性药物使用磺胺二甲氧嘧啶，也具有体外抗嗜血杆菌效果。
实验例2
防治鸡传染性鼻炎的效果
试验动物房清理消毒：甲醛熏蒸消毒，250g高锰酸钾、500ml甲醛，混合熏蒸24h消毒；消毒后通风24h。
SPF鸡称重分组：30日龄以上的SPF鸡260只，剔除体重差异大的和弱雏，分成8组，每组30只；称重分组，将各组体重调配至差异3％以下，数据记录。
菌种培养基配制
TSA平板称取胰蛋白大豆琼脂(Tryptic Soy Agar,TSA)培养基40g，加纯化水845ml，充分摇匀后加热至充分溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至60℃左右，加入50ml健康无菌的新生牛血清、100ml酵母浸出液、5ml过滤除菌的1％NAD溶液，充分摇匀，倒入无菌平皿中制作平板。
TSB培养基称取胰蛋白大豆肉汤(Tryptic Soy Broth,TSB)培养基30g，酵母浸粉10g，加纯化水945ml，充分摇匀溶解，121℃高压灭菌15min，冷却后加入50ml灭活后的新生牛血清、5ml过滤除菌的1％NAD溶液，充分摇匀即得。
强毒制备及控制标准
强毒制备取冻干的副鸡禽杆菌B型基础种子，划线接种TSA平板，37℃恒温培养箱培养16～24小时，挑取数个典型菌落，接种于100～200mlTSB培养基中，37℃培养12～24小时收获；用无菌生理盐水稀释50倍攻毒备用。
保存及使用期：-70℃以下放置，使用期不超过7日。
中药试验样品制备
1)分拣：去除各原料药中的杂质
2)按照重量比例分别称取各药材
3)浸泡煎煮提取：将称取好的药粉用10倍药物重量的清水常温下浸泡2小时，而后以水煮沸后煎煮2小时提取。
4)二次浸泡煎煮提取：将第一次浸泡提取后分离出的药物残渣再用10倍原药粉重量的清水常温下浸泡1小时，然后以水煮沸后煎煮2小时提取。
5)合并药液：将两次的煎煮液与药物残渣分离后，将煎煮液合并。
6)将合并的药液浓缩、离心、定容成1g/mL的浓缩液。
7)1L瓶分装中药组合物，4℃冷藏备用。
模型建立与分组：阳性(磺胺二甲嘧啶钠)对照；按实施例1、2、6、12、13的处方配比，采用上述“中药试验样品制备”方法配制；模型对照组；空白对照组，除空白对照组外，各组攻毒剂量为1×107cfu/0.2mL/只，攻毒部位为眶下窦内注射。空白对照组注射生理盐水。
发病判定标准：满足下列其中1项即判为发病，①鼻孔流出清液至浆液粘性分泌物、流泪，②面部一侧或两侧眶下窦及周围肿胀。
攻毒后开始对应灌喂给药5天，保证各组灌喂药液量一致。
攻毒给药后各组采食开始定量添加(方便测量每日采食量即可)，饮水保证充足；每日采食量统计记录。
试验结果：
表2.防治实验性鸡传染性鼻炎的效果
Figure BDA0003286183990000061
Figure BDA0003286183990000071
注：表格数字的肩标字母相同代表差异不显著(P≥0.05)，肩标字母不同代表差异显著(P＜0.05)
以上结果说明，使用5天药物后，使用辛夷、苍耳子、古羊藤的组合物治疗鸡传染性鼻炎，比使用辛夷、苍耳子的组合物效果好，比单独使用古羊藤临床效果也有显著提高。与本发明实施6、12组比较，辛夷、苍耳子和具有抗菌作用的博落回组合应用时，两者有显著性差异，相对于本发明的方案，采用博落回组合并没有显现出更好的效果，可见具有体外抗菌效果的药材比并不一定能起到内服有效治疗鸡传染性鼻炎的效果。
实验例3
通过以下案例验证实施例7、8、11的防治鸡传染性鼻炎的效果
为了验证本发明对鸡传染性鼻炎的治疗效果，在感染鸡传染性鼻炎的养殖厂内进行本次中药组方对鸡传染性鼻炎效果验证实验；因为产蛋鸡不能使用敏感抗生素，所以实验分为实施例7、实施例8、实施例11、阴性对照组，实验结束后进行对比。
材料和方法
试验动物：某个发生鸡传染性鼻炎的鸡场。
试验药物：实施例7、实施例8、实施例11。
试验方法：根据鸡传染性鼻炎病例的临床症状，剖检变化及细菌分离鉴定等方法进行确诊；由实验人员将病鸡随机分组。
鸡传染性鼻炎的诊断标准
临床症状：
病鸡最初症状是发热，食欲减退，流稀薄鼻液，嗜睡，精神沉郁，发病3－5天后，鼻液粘稠，在鼻孔处形成黄色结，堵塞鼻孔后，在口腔内出现粘稠状的液体，呼吸困难，出现呼噜声和奇怪的咳嗽声，同时出现拉白、黄、绿色的稀便，部分发病鸡只出现该病典型的病症脸部单侧性浮肿，如附图1所示。
剖检变化：
鼻窦内观察到干酪样渗出，气管蓄积黏液或脓液，部分鸡有轻微肺炎，挑开肿胀的眼睑表面，有白色脓液流出，颜面严重肿胀的病鸡面部皮肤下有淡黄色胶冻样浸出，消化道内没有食物蓄积，尸体极度消瘦。肝脏、心脏、肾脏、法氏囊和消化道等器官没有明显病变，如附图2所示。
细菌分离鉴定：
取病鸡眼、鼻腔、眶下窦分泌物，涂片，革兰氏染色后镜检，发现有革兰氏阴性球杆菌，且呈多形性存在，偶尔呈纤丝状，菌体周围有夹膜。
病原检测：采用RT-PCR/PCR法检测病原
检测结果见表3以及附图3：
表3：病原检测结果
检测项目 检测方法 检测结果
NDV(新城疫) RT-PCR -
H9(禽流感) RT-PCR -
A1 RT-PCR -
A2 RT-PCR -
APV(偏肺病毒) RT-PCR -
HPG(传鼻) PCR +
HPG-A PCR +
HPG-B PCR -
HPG-C PCR -
注：“+”为阳性；“-”为阴性
其中附图3中，M：Marker
1：NDV结果 2：NDV阳性对照 3：H9结果 4：H9阳性对照
5：APV结果 6：APV阳性对照 7：HPG结果 8：HPG阳性对照
9：HPG-A结果 10：HPG-A阳性对照 11：HPG-B结果 12：HPG-B阳性对照
13：HPG-C结果 14：HPG-C阳性对照 15：A1结果 16：A1阳性对照
17：A2结果 18：A2阳性对照
结果表明病原检测结果为HPG-A型阳性
试验动物分组与处理
在鸡场中选取具有鸡传染性鼻炎临床症状的病鸡，并随机分为4组，每组两个平行组；实施例7、8、11按1：500的比例给鸡饮水进行治疗，连用5天。因为产蛋期无法使用敏感抗生素，所以阴性对照组不用任何药物。
治疗效果判定方法：采食量、产蛋鸡产蛋率、发病率以及治疗后临床观察。
发病的判定标准为：鸡只面部有明显肿胀或鼻孔有粘稠状液体流出。判定鸡只是否发病由同一个人完成，避免主观因素的影响。
实验结果：
表4.实施例7、8、11对鸡传染性鼻炎的大区临床效果
Figure BDA0003286183990000091
注：表格数字后的字母相同代表差异不显著(P≥0.05)，字母不同代表差异显著(P＜0.05)
表3结果表明，实施例11的效果明显优于实施例7和实施例8，表明同等剂量下，辛夷、苍耳子联合古羊藤具有明显的增效作用。同时经实施例11组合物治疗后，鸡食欲增加，流稀薄鼻液明显减轻，无嗜睡，精神沉郁症状，无堵塞鼻孔症状以及呼吸困难，出现呼噜声和奇怪的咳嗽声的情况，部分发病鸡只出现典型的病症脸部单侧性浮肿后，症状明显减轻，如附图3所示部分鸡只的情况。
相对于现临床防治鸡传染性鼻炎的常用手段是使用抗生素，但敏感抗生素产蛋期禁用。本发明是使用纯中药制剂，代替抗生素，可以在鸡的产蛋期使用。相比使用传统的鼻炎药物有显著的提高。填补了蛋鸡在产蛋期发生鸡传染性鼻炎时无药可用的空白。

Claims (8)

1.一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，其特征在于，由以下质量份数的药材制成：苍耳子4份-5份，辛夷4份-5份，古羊藤13份-16份。
2.根据权利要求1所述的一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，其特征在于，由以下质量份数的药材制成：苍耳子5份，辛夷5份，古羊藤15份。
3.根据权利要求1-2任意一项所述的一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物，其特征在于：其剂型为合剂、散剂、颗粒或汤剂。
4.根据权利要求1-2任意一项所述的一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物的制备方法，其特征在于：将各药材粉碎、混匀制成散剂。
5.根据权利要求1-2任意一项所述的一种防治鸡传染性鼻炎的中药组合物的制备方法，其特征在于：将各药材用水或乙醇溶液提取制备而成。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述乙醇溶液为30-90％乙醇溶液。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述乙醇溶液为50％乙醇、60％乙醇或75％乙醇。
8.根据权利要求1-2任意一项所述的中药组合物在制备防治鸡传染性鼻炎药物中的应用。
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