CN117752736A

CN117752736A - 一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN117752736A
Application number: CN202311831279.3A
Authority: CN
Inventors: 苏奕婧; 舒刚; 王雨; 吴泓霏; 李秋水; 田梓加; 张文瑄; 邓黎黎; 孟源博; 何沛杰; 孙弟芬; 曹永彬; 赵小玲
Original assignee: Sichuan Supply And Marketing Old Courtyard Black Chicken Industry Development Co ltd; Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Supply And Marketing Old Courtyard Black Chicken Industry Development Co ltd; Sichuan Agricultural University
Priority date: 2023-12-28
Filing date: 2023-12-28
Publication date: 2024-03-26

Abstract

本发明公开了一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物及其制备方法和应用。一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，包括以下重量份的原料药：一点红15‑20份，天文草15‑20份，一枝黄花10‑15份，吉祥草10‑15份，白蔹5‑12份，佛手5‑12份，桔梗5‑10份。本发明中药组合物，采用一点红、天文草、一枝黄花、吉祥草、白蔹、佛手和桔梗进行合理配伍，具有清热凉血、止咳平喘的效果，可以有效治疗鸡波氏杆菌病。本发明七味药混合后进行口服液的制备，制备过程中七味药之间发生协同作用，有效发挥各中药的功效，进一步增强清热解毒、清热凉血、止咳平喘的作用。本发明组方配伍科学，无明显的毒副反应和药物耐受性，能够为解决抗生素的耐药性问题提供思路。

Description

一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

鸡波氏杆菌病是一种在畜禽养殖中出现的细菌性传染病，首次报道于20世纪60年代的加拿大，然后各国都有发生。波氏杆菌作为一种环境致病菌，在蛋鸡、肉鸡养殖中，祖代、父母代、商品代体内都有，检出率高达 20%～60%，该病可在鸡群抵抗力降低下或与其它疾病继发感染，一旦发生严重阻碍养禽业的发展。

鸡波氏杆菌属于产碱杆菌科、波氏杆菌属，革兰氏染色呈阴性，镜下观察为细小的球杆状，两端钝圆，大小为（0.2～0.5）μm×（0.5～2.0）μm。多数为单个分散存在，不产生芽孢，周身有鞭毛。体外培养对营养要求不高，普通营养琼脂上都能生长，在含血清的培养基中生长更快，最佳培养温度为35～38℃。对外界不良因素的抵抗力较差，常用消毒剂和常规消毒方法都能将其杀灭。不耐高温，在60℃的环境中不到15min即可被杀灭，但是在低温环境中能存活较长时间。

该病对各阶段的鸡都有感染力，日龄越小越易感，刚出壳不久的雏鸡最易感，青年鸡及性成熟后的鸡感染后基本不发病。感染鸡主要表现出呼吸道症状，如经常咳嗽、打呼噜、气喘和呼吸困难，鼻腔有黏液性分泌物，张口、伸颈呼吸，眼结膜发绀、流泪，鸡冠和肉髯发紫，多数鸡最终因氧气不足成为低血氧症而死亡。该病主要经密切接触而水平传播，也能经种蛋垂直传播。种鸡感染后，种蛋的孵化率显著降低，死胎率高达60%以上，弱雏也会增多，被感染的雏鸡常发生急性死亡。除了呼吸道症状和全身症状外，很多感染鸡还会出现眼炎，最后化脓，失明等，严重影响采食和饮水，死亡率可以达10%～20%。

通过病鸡的临床表现可进行初步诊断，确诊还需借助实验室检测。用无菌棉拭子采集病禽的鼻腔分泌物、气管分泌物或病变的肺组织，在改良麦康凯琼脂平板或绵羊血琼脂平板上划线分离，置于37℃的恒温培养箱中培养48h，挑取可疑菌落进行染色镜检，同时对可疑菌落进行生化鉴定，如果符合波氏杆菌特征即可确诊。除了微生物分离法外，该病还可以通过血清型检测确诊：将鸡波氏杆菌平板凝集抗原进行血清抗体检测，或以鸡波氏杆菌阳性血清进行分离菌平板凝集试验，如果结果为阳性就能确诊。

目前对该病的防治主要加强环境消毒和预防性投药来完成；许多抗生素都可用于该病的治疗。临床常用的有复方阿莫西林、氟苯尼考、替米考星、多西环素、利高霉素、磺胺嘧啶钠及复方新诺明等。但是，学者发现临床分离的波氏杆菌对10大类22种抗生素的耐药率为48.57%～85.71%，其中对替加环素、氟苯尼考、妥布霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素较为敏感，而对头孢匹罗、头孢噻肟、头孢拉定、恩诺沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、青霉素、氨苄西林、阿莫西林、林可霉素、克林霉素、红霉素、麦迪霉素、磷霉素存在较高的耐药率，耐药率为48.57%～85.71%。抗生素的大量使用会导致耐药性外而药物残留和人畜共患也使该病具有重要的公共卫生意义。中草药及中药复方制剂对鸡大肠杆菌病具有较好的防治效果，并且有残留低、不易产生耐药性等优点，且使用后也不会影响畜禽产品的食用安全性与食用品质要求，符合当今社会倡导的绿色养殖主题，有着广阔的发展前景。

中兽医学虽然具有悠久的历史，但是对鸡病的辨证较少。因为在古代鸡主要是散养，数量少、规模小和疾病少，给辨证论治带来了一定地困难。针对鸡的临床症状，结合视诊和问诊，多方收集资料，是进行辨证论治的基础。波氏杆菌感染鸡主要表现出呼吸道症状，如经常咳嗽、打呼噜、气喘和呼吸困难，鼻腔有黏液性分泌物，张口、伸颈呼吸，眼结膜发绀、流泪，鸡冠和肉髯发紫，多数鸡最终因氧气不足成为低血氧症而死亡。该病在中兽医中属于瘟疫的范畴。根据中兽医理论，当鸡群受到应激、饲料营养不足或感染其他疾病时，引起自身正气不足、营卫不固，使外邪有机可乘，造成疫毒入侵，引起鸡体温升高、食欲下降、精神沉郁、羽毛松乱。而外因如环境改变、饲料变换和免疫实施更能够促进该病的发生。病初，阵发性咳嗽，咳则连声，日轻夜重，鼻液中有气泡。病势急速发展，很快波及全群，咳嗽、摇头、甩鼻，尤以采食时多咳，口腔内有粘液，呼吸困难，喉中有痰鸣音，肉髯发绀，常因窒息而死。肺主气，司呼吸，开窍于鼻。主皮毛，主肃降，与大肠相表里，肺气通畅，则可将水谷精微输布至皮毛，使肌表固密，羽毛光泽，外邪不易侵犯。肺气虚弱，则卫外不固，易受外邪侵袭而致感冒，进而犯肺，引起缩颈似睡，羽毛松乱。外邪侵袭肺经，肺气受伤，气机失调，宣降失职，不能通调水道，津液失节，水液内聚而成痰饮，从而导致短气、咳嗽、气喘等水液分布障碍的病变。一旦感染该病，死亡率可以达10%～20%。因此，急需研发一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物及其制备方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一个方面，本发明提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，包括以下原料药：

一点红、天文草、一枝黄花、白蔹、吉祥草、佛手、桔梗。

进一步地，包括以下重量份的原料药：

一点红15-20份，天文草15-20份，一枝黄花10-15份，白蔹5-12份，吉祥草10-15份，佛手5-12份，桔梗5-10份。

优选地，包括以下重量份的原料药：一点红20份，天文草20份，一枝黄花15份，白蔹12份，吉祥草15份，佛手12份，桔梗6份。

第二个方面，本发明提供上述第一个方面所述中药组合物在制备预防和/或治疗鸡波氏杆菌药物中的应用。

第三个方面，本发明提供一种防治鸡波氏杆菌的药物，包括上述第一个方面所述的中药组合物和医学上可接受的辅料；所述药物的剂型为口服液、丸剂、散剂、膏剂、片剂、颗粒剂、锭剂、胶囊剂、酒剂或酊剂。

第四个方面，本发明提供上述第三个方面所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，所述药物的剂型为口服液，包括以下步骤：

①先使用药材质量8-14倍的水对药材进行浸泡；

②100℃恒温加热器加热沸腾后提取1-3ｈ，至测定器中油量不再增加，静置分层后收集挥发油，加入精油质量的20%-40%的无水硫酸钠除去水分后备用；

③向药渣加药渣质量10-12倍的水，煎煮1-3次，每次1-2 h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度0.8-1.5g/mL，相对密度0.8-1.5g/cm³时加乙醇使含醇量达到60-90%，然后4℃冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min；澄清度最好；过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

⑤加入体积分数1-2%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合，可使挥发油完全溶解；

⑥添加一定量的纯化水后，调节pH后，得到棕色澄明的含生药浓度为0.8-1.5g/mL的口服液。

优选地，包括以下步骤：

①先使用药材质量12倍的水对药材进行浸泡；

②100℃恒温加热器加热沸腾后提取1.5ｈ，至测定器中油量不再增加，静置分层后收集挥发油，加入精油质量的20%的无水硫酸钠除去水分后备用；

③药渣加药渣质量12倍的水，煎煮2次，每次1h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL，相对密度1.05g/cm³时加乙醇使含醇量达到60%的乙醇冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min，

⑤加入体积分数1.5%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合,可使挥发油完全溶解；

⑥调节pH后得到棕色澄明的浓度为1g/ mL的口服液。

进一步地，所述步骤⑥还包括过滤步骤，所述过滤步骤采用G2垂熔漏斗进行过滤，过滤后得到澄明的口服液溶液。

进一步地，所述步骤⑥采用柠檬酸钠调节pH值为5.5-7.0。

进一步地，包括步骤⑦：装瓶，灭菌15分钟后取出，冷却即得口服液含生药浓度1g/mL。

本发明所具有的优点和有益效果是：

波氏杆菌感染鸡主要表现出呼吸道症状，如经常咳嗽、打呼噜、气喘和呼吸困难，鼻腔有黏液性分泌物，张口、伸颈呼吸，眼结膜发绀、流泪，鸡冠和肉髯发紫，多数鸡最终因氧气不足成为低血氧症而死亡。该病在中兽医中属于瘟疫的范畴。根据中兽医理论，当鸡群受到应激、饲料营养不足或感染其他疾病时，引起自身正气不足、营卫不固，使外邪有机可乘，造成疫毒入侵，引起鸡体温升高、食欲下降、精神沉郁、羽毛松乱。而外因如环境改变、饲料变换和免疫实施更能够促进该病的发生。病初，阵发性咳嗽，咳则连声，日轻夜重，鼻液中有气泡。病势急速发展，很快波及全群，咳嗽、摇头、甩鼻，尤以采食时多咳，口腔内有粘液，呼吸困难，喉中有痰鸣音，肉髯发绀，常因窒息而死。肺主气，司呼吸，开窍于鼻。主皮毛，主肃降，与大肠相表里，肺气通畅，则可将水谷精微输布至皮毛，使肌表固密，羽毛光泽，外邪不易侵犯。肺气虚弱，则卫外不固，易受外邪侵袭而致感冒，进而犯肺，引起缩颈似睡，羽毛松乱。外邪侵袭肺经，肺气受伤，气机失调，宣降失职，不能通调水道，津液失节，水液内聚而成痰饮，从而导致短气、咳嗽、气喘等水液分布障碍的病变。本发明组合物从清热凉血、止咳平喘这两个方面发挥功效通过整体调节机体，故在治疗试验中收到了良好的疗效。

本发明中药组合物中，将一点红、天文草、一枝黄花、白蔹、吉祥草、佛手和桔梗进行合理配伍，一点红与天文草、一枝黄花、白蔹配伍加强清热解毒、凉血功效；而吉祥草、佛手和桔梗配伍加强止咳平喘、化痰理气的效果，实验证明，本发明组合物可以有效治疗鸡波氏杆菌病，有效率达到90%以上。

本发明组方合理，七味药混合后共同进行口服液的制备，制备过程中七味药之间发生协同作用，进一步增强了清热解毒、清热凉血、止咳平喘的作用，采用本发明方法制备的口服液保存了挥发油成分，同时口服液方便鸡饮水，避免其它剂型的不方便，药效发挥更快，可以有效治疗鸡波氏杆菌病，有效率达到90%以上，无药物耐受性，能够为解决抗生素的耐药性问题提供思路。

具体实施方式

一点红、天文草、一枝黄花、白蔹、吉祥草、佛手、桔梗。

优选地，包括以下重量份的原料药：

在一种优选的实施方式中，本发明的药物采用有效的中草药（一点红20克，天文草20克，一枝黄花15克，白蔹12克，吉祥草15克，佛手12克，桔梗6克）/剂。

一、原料(组分)

（1）一点红，味苦，性凉。归肝、肺、膀胱经。有清热解毒、散瘀消肿的功能。适用于上呼吸道感染、口腔溃疡、肺炎、乳腺炎、肠炎、菌痢、尿路感染、疮疖痈肿、湿疹、跌打损伤。一点红中含有克氏千里光碱、金丝桃苷、槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇和棕榈酸等化学物质。药理研究显示有一定抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和伤寒杆菌的作用。现代临床用于治疗上呼吸道感染、肺炎、乳腺炎、肠炎、细菌性痢疾、尿路感染、疮疖痈肿和湿疹等。一点红的量可以为15-20份，优选为20份。

（2）天文草，菊科金纽扣属植物天文草Spilanthes acmella (L.)Murr.,以全草入药。全年可采，鲜用或晒干。性味:辛,温。功能主治:解毒利湿,止咳定喘,消肿止痛。可以用于感冒、咳嗽、哮喘、百日咳、结核，也可以用于消化道疾病，能治疗痢疾、肠炎，它也用于疔疮肿毒。另外，风湿性的关节炎、牙疼、跌打损伤也可以治疗。抗肿瘤作用：天文草全株乙醇提取物的氯仿溶解成分和氯仿不溶成分对结肠癌Colo-205细胞、鼻咽癌KB细胞、子宫颈癌HeLa细胞、肝细胞瘤HA22T细胞、喉表皮瘤Hep-2细胞、神经胶质瘤GBM8401/TSGH细胞和黑素瘤H1477细胞有一定的细胞毒性。天文草提取物还具有明显的镇痛效果。天文草的量可以为15-20份，优选为20份。

（3）一枝黄花，菊科植物一枝黄花Solidago decurrens Lour.的全草。性凉，味辛、苦。归肺经、肝经。全草含芸香甙（rutin）、山柰酚-3-芸香糖甙（kaemferol-3-3rutinoside）、一枝黄花酚甙（leiocarposide）、2，6-二甲氧基苯甲酸苄酯（benzyl-2,6-dimethoxybenzoate）、当归酸-3，5-二甲氧基-4-乙酰氧基肉桂酯（3，5-dimethoxy-4-acetoxycinnamylangelate）及2-顺、8-顺-母菊酯（matricariaester）。疏风清热，抗菌消炎。用于风热感冒；头痛；咽喉肿痛；肺热咳嗽；黄疸；泄泻；热淋；痈肿疮疖；毒蛇咬伤。一枝黄花的量可以为10-15份，优选为15份。

（4）吉祥草，常绿多年生草本，根状茎匍匐于地下及地上，绿色，叶丛生于根状茎顶端或节部，全年可采。吉祥草的功效与作用：清肺、止咳、理血、补肾、解毒、接骨。吉祥草具有抗炎、抗氧化、止咳、平喘、化痰等药理作用，可运用于化痰止咳平喘药、清肝胆湿热药中，如咳速停糖浆、咳清胶囊、咳速停胶囊、肝复颗粒、宜肝乐颗粒等。吉祥草的量可以为10-15份，优选为15份。

（5）白蔹，为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹Ampelopsis japonica（Thunb.）Makino的干燥块根。味苦、辛，性微寒；归心、胃。具有清热解毒，消痈散结，敛疮生肌的功效。主治疮痈肿毒，瘰疬痰核，水火烫伤，手足皲裂。白蔹有很强的抑菌作用，并有很强的抗真菌效果。所含多种多酚化合物具有较强的抗肝毒素作用及很强的抗脂质过氧化活性。白蔹的量可以为5-12份，优选为12份。

（6）佛手，为芸香科柑橘属植物佛手Citrus medica L.var.sarcodactylisSwingle的干燥果实。该药味辛、苦、酸，性温；归肝。具有疏肝解郁，理气和中，燥湿化痰的功效。主要用于肝郁气滞及肝胃不和之胸胁胀痛、脘腹痞满，脾胃气滞之脘腹胀痛、呕恶食少，咳嗽日久痰多，胸膺作痛。对中枢神经系统的影响：佛手醇提取物给小鼠腹腔注射，自发活动明显减少，还可显著延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间，延长小鼠士的宁惊厥的死亡时间。此外，佛手尚有一定的抗炎、抗病毒、抗凝血和止血作用。佛手的量可以为5-12份，优选为12份。

（7）桔梗，为桔梗科桔梗属植物桔梗Platycodon grandiflorus（Jacq.）A. DC.的干燥根。味苦、辛，性平；归肺经。具有宣肺，祛痰，利咽，排脓的功效。主治咳嗽痰多，胸闷不畅，咽喉肿痛，失音，肺痈吐脓。所含的桔梗皂苷对口腔、咽喉部位、胃黏膜的直接刺激，反射性地增加支气管黏膜分泌亢进从而使痰液稀释，易于排出；桔梗有镇咳作用，有增强抗炎和免疫作用，其抗炎强度与阿司匹林相似；水提物能增强巨噬细胞的吞噬功能，增强中性白细胞的杀菌力，提高溶菌酶活性；对应激性溃疡有预防作用。桔梗粗皂苷有镇静、镇痛、解热作用，又能降血糖、降胆固醇，松弛平滑肌。桔梗皂苷有很强的溶血作用，但口服能在消化道中分解破坏而失去溶血作用。桔梗的量为5-10份，优选为6份。

二、应用

三、形式和剂型

第三个方面，本发明提供一种防治鸡波氏杆菌的药物，包括上述第一个方面所述的中药组合物和医学上可接受的辅料；上述原料可以商购，也可以根据本领域的常规方法制备。

在一种实施方式中，本发明的中药组合物可以做成中成药的形式。中成药的剂型包括但不限于口服液、丸剂、散剂、膏剂、片剂、颗粒剂(冲剂)、锭剂、胶囊剂、酒剂、酊剂。优选地，型剂为口服液。

四、制备方法

①将药材和药材质量8-14倍的水装入挥发油提取器中对药材进行浸泡1h；

③药渣加10-12倍水，煎煮1-3次，每次1-2 h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度0.8-1.5g/mL，相对密度0.8-1.5g/cm³时加乙醇使含醇量达到60-90%，然后4℃冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min，澄清度最好；过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

⑤加入体积分数1-2%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合,可使挥发油完全溶解；

⑥添加一定量的纯化水后，调节pH后，得到棕色澄明的浓度为0.8-1.5 g/ mL的口服液。

在一种优选的实施方式中，本发明用于防治鸡波氏杆菌的口服液的制备方法，包括以下步骤：

①将药材和药材质量12倍的水装入挥发油提取器中对药材进行浸泡1h；

③向药渣加12倍水，煎煮2次，每次1h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL，相对密度1.05g/cm³时加乙醇使含醇量达到60%的乙醇冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min；

⑥调节pH后得到棕色澄明的浓度为1g/ mL的口服液。

优选地，所述步骤⑥还包括过滤步骤，所述过滤步骤采用G2垂熔漏斗进行过滤，过滤后得到澄明的口服液溶液。

优选地，所述步骤⑥采用柠檬酸钠调节pH值为5.5-7.0。

优选地，包括步骤⑦装瓶再经过湿热灭菌柜采用流通饱和蒸汽温度100℃，0.8MP压力下灭菌15分钟后取出冷却即得口服液含生药浓度1g/mL。

下面对本申请实施例中的技术方案进行清楚地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实验例1

中药组合物处方工艺筛选

1、蒸馏水用量的筛选：

选用一点红20克、天文草20克、一枝黄花15克、白蔹12克、吉祥草15克、佛手12克、桔梗6克，分别采用药材质量的8倍、10倍、12倍、14倍水进行蒸馏：

将药材装入挥发油提取器中，分别加入8-14倍量蒸馏水，100℃恒温加热器加热沸腾后提取1ｈ，得到的结果是8、10、12、14倍水得到的挥发油分别是103.5毫升、106.3毫升、121.4毫升、123.1毫升。所以从节约能耗的角度选取药材质量的12倍水最合适。

2、提取时间的筛选：

将蒸馏水的用量固定在药材质量的12倍，100℃恒温加热器加热沸腾后提取1ｈ、1.5ｈ、2ｈ、2.5ｈ、3ｈ进行蒸馏，得到挥发油的量分别为122.3毫升、124.5毫升、124.1毫升、124.2毫升123.9毫升，时间过长，得到挥发油并没有显著增加，选用提取1.5小时最佳。

3、无水硫酸钠用量的筛选：

加入挥发油质量的20%、30%、40%的无水硫酸钠除水分，除掉挥发油的水分分别为原体积的7.03%、7.06%、7.07%，故采用20%无水硫酸钠除水最佳。

4、含醇量的筛选：

过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL，相对密度1.05g/cm³时加乙醇使含醇量达到60%、70%、80%、90%，然后4℃冷藏静置12 h,以4 000 r/min离心15 min，过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；测定总黄酮，发现含醇量达到60%、70%、80%、90%的乙醇的含黄酮量分别是60%、55%，43%，40%，所以选取含醇量为60%最适宜。

5、吐温-80用量的筛选：

对于加入体积分数1%、1.5%、2%吐温-80与挥发油先乳化，发现1.5%的吐温加入后挥发油溶液澄清度最好，故选择1.5%的吐温-80浓度。

实施例1（散剂）

本实施例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，包括以下质量的原料药：

一点红15克、天文草15克、一枝黄花10克、吉祥草10克、白蔹5克、佛手5克、桔梗10克。

本实施例的制备方法是：将上述原料药混合后，粉碎，过80目筛，即得防治鸡波氏杆菌的中药组合物散剂。

实施例2（散剂）

一点红20克、天文草20克、一枝黄花15克、白蔹12克、吉祥草15克、佛手12克、桔梗6克。

本实施例的制备方法同实施例1。

实施例3（口服液）

本实施例提供一种防治鸡波氏杆菌的口服液，包括以下质量的原料药：

一点红20克、天文草20克、一枝黄花15克、吉祥草15克、白蔹12克、佛手12克、桔梗6克。

本实施例一种防治鸡波氏杆菌的口服液的制备方法，包括以下步骤：

① 将上述药材和药材质量12倍的水装入挥发油提取器中对上述药材进行浸泡1h；

②100℃恒温加热器加热沸腾后提取1.5ｈ，至测定器中油量不再增加，静置分层后收集挥发油，加入挥发油质量的20%的无水硫酸钠除去水分后备用；

③药渣加药渣质量12倍的水，煎煮2次，每次1 h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL，相对密度1.05g/cm³时加乙醇使含醇量达到60%，然后4℃冷藏静置12h,以4 000 r/min离心15 min，过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

⑤加入体积分数1.5%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合，使挥发油完全溶解；

⑥采用G2垂熔漏斗过滤得到澄明的口服液溶液，采用柠檬酸钠调节pH值为7.0后得到棕色澄明的口服液，口服液浓度为1g/ mL；

⑦装瓶再经过湿热灭菌柜采用流通饱和蒸汽温度100℃，0.8MP压力下灭菌15分钟后取出冷却即得口服液含生药浓度1g/mL。

实施例4（口服液）

①将上述药材和药材质量8倍的水装入挥发油提取器中对上述药材进行浸泡1h；

②100℃恒温加热器加热沸腾后提取1.5ｈ，至测定器中油量不再增加，静置分层后收集挥发油，加入挥发油质量的40%的无水硫酸钠除去水分后备用；

③药渣加8倍水，煎煮2次，每次1 h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL，相对密度1.05g/cm³时加乙醇使含醇量达到90%，然后4℃冷藏静置12 h,以4 000 r/min离心15 min，过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

对比例1（散剂）

本对比例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，本对比例与实施例2的区别仅仅在于：一点红的用量为10克，天文草的用量为10克，其余同实施例2。

对比例2（散剂）

本对比例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，本对比例与实施例2的区别仅仅在于：一点红的用量为30克，天文草的用量为30克，其余同实施例2。

对比例3（散剂）

本对比例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，本对比例与实施例2的区别仅仅在于：一枝黄花的用量为150克，白蔹的用量为120克，吉祥草的用量为150克，佛手的用量为120克，桔梗的用量为60克。

对比例4（散剂）

本对比例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，本对比例与实施例2的区别仅仅在于：采用黄芩代替一点红，采用金银花代替天文草，其余同实施例2。

对比例5（散剂）

本对比例提供一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，本对比例与实施例2的区别仅仅在于：采用板蓝根代替一枝黄花，采用鱼腥草代替白蔹，其余同实施例2。

实验例2体外抑制鸡波氏杆菌

1、实验试剂：

胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）为制备培养鸡波氏杆菌培养基的原料；

胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）为培养鸡波氏杆菌的肉汤，按照说明书配制；

胰蛋白胨大豆琼脂平板为培养鸡波氏杆菌的培养基，按照说明书配制。

上述均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

2、实验菌株：

对临床分离的鸡波氏杆菌（在四川某鸡场分离，采用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定，鉴定为鸡波氏杆菌，保存在四川农业大学药学系实验室）进行药物敏感性试验。

4、实验药物：

实施例1-2和对比例1-5制备的中药组合物、实施例3-4制备的中药口服液。

5、试验方法：

首先，将实施例1-2和对比例1-5制备的中药组合物散剂，采用药材质量12倍的水进行煎煮，煎煮两次，每次1h，过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL备用。

然后用灭菌水将实施例1-2和对比例1-5制备的煎液、实施例3-4制备的中药口服液进行对倍稀释，分别稀释成 1000、500、250、125 mg/mL。

杯碟法抑菌试验

菌悬液的制备：

开启超低温冰箱中冻存管保存的鸡波氏杆菌，用移液枪分别吸取 0.02 mL 接种到胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）管中，置 37℃恒温培养箱培养 18~20 h，纯化后接种1铂耳到胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）斜面上，置 37℃恒温培养箱培养 16~18 h，取出后置 4 ℃冰箱保存备用。

抑菌试验前取菌株，用接种环分别接种1铂耳到胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）管中，置37℃恒温培养箱培养 16~18 h，取出后用灭菌生理盐水将菌悬液进行连续 10 倍的稀释到1x10⁶cfu/mL。取预实验测定的最佳稀释比浊浓度的波氏杆菌悬液0.1 mL，分别加到胰蛋白胨大豆琼脂平板上，立即用 L 型涂抹棒将菌液均匀涂抹于琼脂表面，待菌液完全吸干后，将牛津杯在酒精灯上微微烧灼后，等距离立于琼脂表面，然后将不同稀释倍数的药液分别加到牛津杯中，以加入无菌生理盐水的牛津杯作为空白对照，药液要刚刚加满不能溢出，做2 个平行重复，盖上陶瓦盖，平置于7℃恒温培养箱培养 20~24 h，取出后用游标卡尺在光线明亮的地方测定抑菌圈大小（直径 mm），取二次重复试验的平均值。

抑菌效果判定标准根据《中药药理学标准》，抑菌圈直径≥20 mm 为极其敏感，≥15 mm ~＜20 mm 为高度敏感，≥10 mm ~＜15 mm 为中度敏感，＜10 mm 为无抑菌活性。试验结果如表1所示。

表1管碟法抑菌结果 cm

从表1可以看出，实施例3、4均具有较佳的抑菌效果，但以实施例3的抑菌效果最佳，125 mg/mL浓度时依然是中度敏感。实施例1、2的抑菌效果优于对比例1-5，但与实施例3、4相比有差距，这是由于散剂挥发油成分少，因此抑菌效果有所下降。对比例1由于一点红、天文草剂量降低，因此抑菌效果不如实施例2，对比例2由于一点红、天文草剂量增大，因此抑菌效果不如实施例2，对比例3由于没有一点红、天文草，因此抑菌效果不如实施例2，对比例4由于采用黄芩和金银花取代了一点红和天文草，配伍不佳，因此抑菌效果不如实施例2，对比例5由于采用板蓝根代替一枝黄花，采用鱼腥草代替白蔹，配伍效果也不理想，因此抑菌效果不如实施例2。

实验例3对患鸡波氏杆菌病鸡的治疗效果观察

实验动物：

选用四川丰岩牧野农业发展有限公司笼养320日龄乌骨鸡在临床生产中出现精神萎靡，食欲不振，不断地打喷嚏，眼睛、鼻流出无色透明的液体，气管萎陷，颌下水肿，鼻孔有大量的分泌物，甚至出现鼻腔、气管阻塞的鸡群。通过初步诊断和采用用棉拭子采取鸡鼻粘液直接涂抹麦康凯培养基或加有 0.1%水合氯醛的血琼脂平板，37℃培养过夜后，出现直径1mm 左右，呈露珠状、边缘光滑整齐、表面闪光的菌落，再通过诺禾致源生物科技有限公司采用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定，得到了乌骨鸡群患病为鸡波氏杆菌病。

选取患病的四川丰岩牧野农业发展有限公司笼养320日龄产蛋乌骨鸡鸡群1320只，体重2.2±0.3千克体重的鸡只平均分成11个组，每组120只，1组为空白组不给药；2组为氟苯尼考对照组，按照每千克体重15mg/kg·d一次性给药，3组为实施例1组，4组为实施例2组,5组为实施例3组，6组为实施例4组，7组为对比例1组，8组为对比例2组，9组为对比例3组，10组为对比例4组，11组为对比例5组，3-11组根据120只鸡全天饮水量按照1g药液兑水1L给药。各组连续给药5天，然后统计治疗情况。结果见表2。

死亡率=死亡数÷总数*100%;治愈率=治愈只数/发病只数*100%；显效率=存活数÷总数*100%。

表2 治疗效果观察

从表2中可以看出，不给予治疗，死亡率高达35.83%，实施例1、2组由于采用本发明药物散剂进行治疗，死亡率较低。实施例3、4组采用本发明药物口服液进行治疗，由于口服液保存了挥发油成分，药效发挥更快，因此，死亡率远远低于其它组。其中，尤其以实施例3组的治疗效果最好，死亡率仅为9.17%，治愈率和显效率都是最好的，优于氟苯尼考组，这可能与实施例3能够抗菌和抗毒素有一定关系。

对比例1由于一点红、天文草剂量降低，因此相对于实施例2，死亡率高。对比例2由于一点红、天文草剂量增大，因此，相对于实施例2死亡率高。对比例3由于没有一点红、天文草，因此，相对于实施例2死亡率高。对比例4由于采用黄芩和金银花取代了一点红和天文草，配伍不佳，因此，相对于实施例2死亡率高，对比例5由于采用板蓝根和鱼腥草代替一枝黄花和白蔹，配伍不佳，因此，相对于实施例2死亡率高。

上面对本申请的实施例进行了描述，但是本申请并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本申请的启示下，在不脱离本申请宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，均属于本申请的保护之内。

Claims

1.一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，其特征在于，包括以下原料药：

一点红、天文草、一枝黄花、吉祥草、白蔹、佛手、桔梗。

2.根据权利要求1所述的一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料药：

一点红15-20份，天文草15-20份，一枝黄花10-15份，吉祥草10-15份，白蔹5-12份，佛手5-12份，桔梗5-10份。

3.根据权利要求2所述的一种防治鸡波氏杆菌的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料药：

一点红20份，天文草20份，一枝黄花15份，吉祥草15份，白蔹12份，佛手12份，桔梗6份。

4.权利要求1-3任一项所述中药组合物在制备预防和/或治疗鸡波氏杆菌药物中的应用。

5.一种防治鸡波氏杆菌的药物，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的中药组合物和医学上可接受的辅料；所述药物的剂型为口服液、丸剂、散剂、膏剂、片剂、颗粒剂、锭剂、胶囊剂、酒剂或酊剂。

6.权利要求5所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，其特征在于，所述药物的剂型为口服液，包括以下步骤：

①先使用药材质量8-14倍的水对药材进行浸泡；

②100℃恒温加热器加热沸腾后提取1-3ｈ，至测定器中油量不再增加，静置分层后收集挥发油，加入挥发油质量的20%-40%的无水硫酸钠除去水分后备用；

③向药渣加药渣质量10-12倍的水，煎煮1-3次，每次1-2 h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度0.8-1.5g/mL、相对密度0.8-1.5g/cm³时加乙醇使含醇量达到60-90%，然后4℃冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min；过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

⑤加入体积分数1-2%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合，使挥发油完全溶解；

⑥添加纯化水，调节pH，得到棕色澄明的含生药浓度为0.8-1.5g/ mL的口服液。

7.根据权利要求6所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①先使用药材质量12倍的水对药材进行浸泡；

③药渣加药渣质量12的倍水，煎煮2次，每次1h；

④过滤后混合的药液浓缩到密度1g/mL、相对密度1.05g/cm³时加乙醇，使含醇量达到60%，再4℃冷藏静置8-12 h,以4 000 r/min离心15 min；过滤沉淀后再旋转蒸发回收乙醇；

⑤加入体积分数1.5%吐温-80与挥发油先乳化，再与药液混合；

⑥添加纯化水，调节pH，得到棕色澄明的浓度为含生药1g/ mL的口服液。

8.根据权利要求6或7所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，其特征在于：所述步骤⑥还包括过滤步骤，所述过滤步骤采用G2垂熔漏斗进行过滤，过滤后得到澄明的口服液溶液。

9.根据权利要求6或7所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，其特征在于：所述步骤⑥采用柠檬酸钠调节pH值为5.5-7.0。

10.根据权利要求6或7所述的一种用于防治鸡波氏杆菌的药物的制备方法，其特征在于，包括步骤⑦：装瓶，灭菌15分钟后取出，冷却。