CN110974878B - 一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备方法 - Google Patents

一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备方法，该中药喷雾剂按照重量份包括以下组分：桑白皮15‑20份、紫苏叶15‑20份、升麻10‑15份、茜草5‑12份。该制备方法如下：将上述各组分混合加注射用水，进行三次蒸馏提取，得到第三芳香水，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，得到调制好的第三芳香水；对药渣再加8倍量注射用水，煎煮过滤，合并煎液与调制好的第三芳香水，加乙醇，浓缩，得到浓缩液，调节pH；在调节pH后的浓缩液中加入调制好的第三芳香水、苯甲酸与尼泊金，加注射用水定容，灭菌，制备得到喷雾剂。本发明的喷雾剂对治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病效果明显。

Description

一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备 方法
技术领域
本发明属于家禽用兽药制品领域，具体地说，涉及一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备方法。
背景技术
养鸡业的规模化发展，导致肉鸡和蛋鸡在饲养过程中呈现规模化和集约化发展，采用的是立体层笼架饲养，呈现高密度饲养方式。绿壳蛋鸡，因产绿壳蛋而得名，其特征是所产蛋的外壳颜色呈绿色，是中国特有禽种，被农业部列为“全国特种资源保护项目”。该鸡种抗病力强，适应性广，喜食青草菜叶，饲养管理与其它鸡类似。绿壳蛋鸡含有大量有极高滋补保健价值的黑色素以及人体必需的17种氨基酸、多种维生素和抗癌元素硒、铁等矿物质，其肉质乌黑结实、味香鲜美、口感极好；鸡肉中各种氨基酸明显高于其它鸡种，具有滋补肝肾、大补气血、调经止带等功效，且药效卓越神奇，被誉为“药鸡”。为满足消费者日益增长的需求，绿壳蛋鸡近年来也从传统的散养模式转变为多层笼养模式，鸡舍环境主要采用人工控制为主。为此，一些不曾发生的疾病也出现在绿壳蛋鸡养殖过程中，如天气骤然变化或冬春季节气温较低时往往换气时间延长，导致舍内浊气多，有害气体诱发鸡发生多种呼吸道疾病；同时绿壳蛋鸡野性较大，笼养后活动空间有限，相互挤压，时常处于应激转态，也导致其抵抗力下降，也容易发生呼吸道疾病。鼻气管鸟杆菌病（Ornithobacteriumrhinotracheale, ORT）是由鼻气管鸟杆菌引起的主要感染家禽的一种急性、高度接触性呼吸道传染病，临床上以呼吸道症状、生长障碍、死亡率增加为特征，病理上以严重的单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、气囊炎为特征，从而引起急性死亡，危害很大。近年来笼养绿壳蛋鸡发生鼻气管鸟杆菌病频繁，给养殖户造成严重的经济损失，是一种值得重视的疾病。当前对该病的预防主要采用疫苗为主，但是我国还没有相关疫苗；同时，该细菌已经对多种抗生素产生耐药性，在绿壳蛋鸡上不能使用抗生素来进行预防或治疗，因此，研发高效低毒、无药物残留的新型抗鼻气管鸟杆菌病迫在眉睫。
发明内容
有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂，按照重量份包括以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份。
可选地，该喷雾剂喷雾剂还包括吐温80、苯甲酸与尼泊金。
本发明还公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；
步骤2、将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，进行第一次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第一芳香水，然后对药渣进行第二次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第二芳香水，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤3、采用与步骤2相同的方法制备调制好的第三芳香水，备用；
步骤4、收集第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮三层纱布滤过，合并2次煎液与步骤2得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度为1.00-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70%，静置，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，得到浓缩液，用10%NaOH溶液调节pH，得到调节pH后的浓缩液；
步骤5、在步骤4得到的调节pH后的浓缩液中加入步骤3制备得到的调制好的第三芳香水、苯甲酸与尼泊金，加注射用水定容，搅匀，静置，滤过，分装，灭菌锅灭菌，制备得到喷雾剂。
可选地，所述步骤2中的第一次蒸馏提取和第二次蒸馏提取的温度为90℃-100℃，时间为1.5小时-2.5小时。
可选地，所述步骤2中的第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350。
可选地，所述步骤4中的煎煮次数为1-3次，每次煎煮时间为45分钟-60分钟；加入的乙醇体积浓度为95%，静置时间为30小时-36小时。
可选地，所述步骤4中的浓缩液与第三芳香水的体积比为60:35，调节后的pH为6.0-6.5。
可选地，所述步骤5中的定容后的溶液，除了步骤4得到的调节pH后的浓缩液外，每1000ml中含有2-3g苯甲酸、0.5-1.5g尼泊金，350ml调制好的芳香水，余量为注射用水。
可选地，所述步骤5中的灭菌温度为120℃，时间为30分钟。
本发明还公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂的使用方法，包括以下步骤：加4倍量的生理盐水稀释后，通过超声波雾化机对鸡舍进行雾化给药或者手持喷雾器对生病鸡头部喷雾给药，每只鸡给药量在0.5ml，给药次数1日2-3次，持续5-7天。
与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
本发明的喷雾剂对治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病效果明显，主要发挥抗菌、消炎、平喘等综合作用；直接喷雾给药，让病鸡主动吸入，避免因患病带来的不吃料、不饮水，保证了药物浓度；药物组成为纯中药，在农业部规定的115种直接使用的中药目录中选取，价廉易得，同时对鸡安全可靠，无毒副作用，无耐药性、无残留，不会存在鸡蛋或肌肉休药期问题。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂，所选药材以重量计，组成如下：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份。
进一步地，该喷雾剂还包括吐温80、苯甲酸与尼泊金。
本发明还包括一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；
步骤2、将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，在90℃-100℃温度条件下进行第一次蒸馏提取1.5小时-2.5小时，收集蒸馏液，即为第一芳香水，其中，第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，然后在90℃-100℃条件下对药渣进行第二次蒸馏提取1小时-1.5小时，收集蒸馏液，即为第二芳香水，其中，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，其中，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，其中，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤3、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，在90℃-100℃温度条件下进行第一次蒸馏提取1.5小时-2.5小时，收集蒸馏液，即为第一芳香水，其中，第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，然后在90℃-100℃条件下对药渣进行第二次蒸馏提取1小时-1.5小时，收集蒸馏液，即为第二芳香水，其中，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，其中，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，其中，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350，充分混匀，得到调制好的第三芳香水，备用；
步骤4、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮1-3次，每次45分钟-60分钟，三层纱布滤过，合并2次煎液与步骤2得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度为1.00-1.10的清膏，加体积浓度为95%乙醇使含醇量达70%，静置30小时-36小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，得到浓缩液，其中，浓缩液与步骤2中的第三芳香水的体积比为60:35，用10%NaOH溶液调节PH至6.0 -6.5，得到调节PH后的浓缩液；
步骤5、在调节PH后的浓缩液中加入步骤3制备得到的调制好的第三芳香水、苯甲酸与尼泊金，加注射用水定容（相当于1ml含有原药材1.5g），定容后的溶液每1000ml中含有2-3g苯甲酸、0.5-1.5g尼泊金，350ml调制好的芳香水，余量为注射用水，搅匀，静置，滤过，分装，120℃灭菌锅灭菌30分钟即得。
本发明制备得到的喷雾剂为红棕色液体，气味芳香。
本发明的中药的组分桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份，这样的比例符合中药组方君臣佐使原则，高于或低于这个比列会导致组方的药效发生改变；加8倍于药材质量的注射用水保证让中药充分浸润，利于蒸馏，太多煎煮时间会延长，太少药材不能充分浸润和收集挥发油；在90℃-100℃温度条件下进行蒸馏保证挥发油可以提出来，温度低提不出来，温度过高会导致杂质增多和有效物质分解；第一次提取1.5小时-2.5小时保证挥发油提出来；第二次蒸馏提取1小时-1.5小时可节约能源；第三次蒸馏充分的保证芳香水的浓度体积为35：100，为后面混合，浓度高不容易混合均匀；浓度过低无法有效果。第三芳香水中加入助溶剂吐温80，其中，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350，主要保证主要成分挥发油能充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
收集第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮1-3次，每次45分钟-60分钟，三层纱布滤过，合并2次煎液主要是保证把药渣中的水溶性有效成分能充分提取出来。滤液浓缩至相对密度为1.00-1.10的清膏，加体积浓度为95%乙醇使含醇量达70%，静置30小时-36小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，得到浓缩液，其中，浓缩液与第三芳香水的体积比为60:35，用10%NaOH溶液调节PH至6.0 -6.5，得到调节PH后的浓缩液，主要是保证药液中的杂质能充分清除掉，使药物浓度含量提高，保证药液的纯度。
在定容后的溶液每1000ml中含有2-3g苯甲酸、0.5-1.5g尼泊金主要是起到防腐的作用，太多会导致增加成本和对鸡健康不利，太少起不到防腐的作用，120℃灭菌锅灭菌30分钟保证本发明无菌，对鸡使用时健康。
本发明还公开了一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂的使用方法，包括以下步骤：加4倍量的生理盐水稀释后，通过超声波雾化机对鸡舍进行雾化给药或者手持喷雾器对生病鸡头部喷雾给药，每只鸡给药量在0.5ml，给药次数1日2-3次，持续5-7天至痊愈。
本发明的所用中药材及主要作用机制分析、剂型优势分析：
根据绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病临床表现及发病季节，发病鸡主要在寒冷冬春季节多发。病鸡精神萎靡，垂头缩颈，食欲、饮欲明显降低，产蛋鸡的产蛋率严重下降、肉鸡停止生长。最初看到自鼻孔流出水样汁液，继而带血分泌物，鸡只有时甩头，打喷嚏，眼结膜发炎，眼睑肿胀，有的流泪，一侧或两则颜面肿胀，同时气喘、咳嗽、呼吸困难，逐渐衰竭死亡。上述发病症状主要是由于鸡舍为了保温，封闭格，换气次数不足，导致鸡外感风寒邪，寒邪郁闭肺卫，肺开窍于鼻，司呼吸，主宣发肃降，外合皮毛。由于舍内空气污浊，风寒之邪犯表，肺卫不固、失宣降，寒邪不能消除，气机淤积，内有蕴热，热鼓于上，则见颜面肿胀，导致外寒里热，从而导致了肺脏的功能出现病理表现，从而引发了上述的类似的外感风寒的感冒症状。在治疗上应辛温解表、清热解毒、活血化瘀之剂来治疗。只有通过这样的治疗，使内侵之风寒邪气发散、风寒化热瘀毒散发出去才能恢复正常的肺脏功能，从而达到驱邪治病的效果。所以本病主要治则为解表清里，宣肺平喘，解毒，行气化瘀。
本发明的组方方解：肌表伤于风寒，毛窍闭塞，肺气不宣，卫气不得外达，营气涩而不畅，所以外见恶寒发热、精神萎顿，垂头缩颈，食欲明显降低，鼻孔流清涕，甩头，打喷嚏。郁热内结导致眼结膜发红，眼睑肿胀，流泪，一侧或两则颜面肿胀。此时，当解表，宣肺平喘，使肺气宣，毛窍开，营卫通畅，同时清除里热，解毒，行气化瘀，使气机恢复如常，风寒、里热得解，诸证悉除。桑白皮性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利尿消肿之功，主治肺热喘咳、水肿胀满、是方中的君药。紫苏叶，散寒解表；宣肺化痰；行气和中；主风寒表证；咳嗽痰多；腹胀满为臣，加强解表而散表寒。颜面肿胀是由肺气郁而生热上逆所致，桑白皮、紫苏叶又都上行而散，所以再配升麻为佐药，升阳，发表，透疹，解毒，增强解郁散热之功。茜草性寒入血分，能凉血止血，且能化瘀，凡血热妄行之出血证均可选用，对离经之血得以抑制，同时血行则气行。诸药合用则达解表清里，宣肺平喘，解毒，行气化瘀之功。现代药理证实桑白皮为桑科植物桑的干燥根皮，是临床常用中药,其性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利尿消肿之功，主治肺热喘咳、水肿胀满、尿少、面目肌肤浮肿等证，临床上主要用于呼吸系统、泌尿系统感染以及糖尿病的治疗。近年来，桑白皮的药理作用研究取得较大进展。该文检索并查阅了近些年来桑白皮在药理作用方面的文献，并对其进行总结和归纳。目前的研究表明，桑白皮除传统功效所对应的镇咳、祛痰、平喘、利尿等药理作用外，还具有镇痛、抗炎、降血糖、舒张心血管、抗病毒、抗癌、免疫调节、抗氧化、抗过敏等多种药理作用。紫苏叶，散寒解表；宣肺化痰；行气和中；主风寒表证，咳嗽痰多，腹胀满，恶心呕吐。现代药理证明紫苏叶能解热：用紫苏叶煎剂及浸剂2g／kg经口服伤寒混合菌苗发热的家兔，有微弱的解热作用；抑菌作用：紫苏叶在试管内能抑制葡萄球菌生长。紫苏叶浸膏对6种真菌琼脂培养物最低抑菌浓度为200-1600mg／ml；浸膏中的紫苏醛起主要抑菌作用；升血糖作用：紫苏油0.35ml／kg给予家兔口服；可使血糖上升；油中的主要成分紫苏醛制成肟后，升血糖作用较紫苏油更强；促进肠蠕动：从紫苏叶中分离出的Perilla ketone，对大鼠有促进肠蠕动作用，使肠内物质运动加速，这是由于Perill ketone对肠扩约肌有刺激作用；镇静作用：从紫苏叶中分离出的紫苏醛、Stigmasterol、Dill apiole均有镇静作用，可延长苯巴比妥减少的大鼠的睡眠时间，其中 Dill apiole 的半数有效量=1.57mg／kg。紫苏水煎剂1：20浓度，对病毒ECHO11株有抑制作用。升麻现代药理证明能解热降温：本品提取物阿魏酸、异阿魏酸、升麻苷等对大鼠的正常体温和发热有解热降温作用；抗炎镇痛：升麻提取物对大鼠实验性足跖肿胀有消炎作用，能使肛门溃疡的面积缩小，对小鼠实验性疼痛有镇痛功效，并有镇静和抗惊厥作用；对平滑肌：能对抗乙酰胆碱，对肠痉挛有抑制功效。补中益气汤能使子宫张力显著增强，去了升麻、柴胡作用减弱，但单用升麻、柴胡，也没有增强肌力的作用；升麻尚有抗过敏作用，雌激素样作用，还有减慢心率、降血压、降血脂、保肝、抗癌、抗氧化、抗菌等作用。茜草药理作用有止血作用：家兔口服适量茜草温浸液2-4小时内，或腹腔注射同种剂量之茜草液后30-60分钟均有明显的促进血液凝固作用；抗血小板聚集作用：在试管内，大叶茜草素对花生四烯酸和胶原诱导的家兔血小板聚集有很强的抑制作用，IC50约为86.6mmol／L，对血小板激活因子诱导的聚集也有一定的抑制性；升高白细胞作用：茜草的粗提取物具有升高白细胞作用；镇咳法痰作用：氨水喷雾引咳法及酚红排泌法，分别证明小鼠口服茜草根煎剂75g/kg，有明显的镇咳和祛痰作用；抗菌作用：体外试验表明，茜草根水提取液对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，对肺炎链球菌、流感杆菌和部分皮肤真菌也有抑制作用；对金黄色葡萄球菌也有抑制作用。
剂型优势：中药喷雾剂是在传统医药和现代科技相结合的基础上，同时借助手动泵压力将中药材提取物以雾状等形态喷出的制剂。按照内容物的组成可分为溶液型、乳状液型、混悬型,可用于口腔吸入、皮肤、黏膜或者腔道给药，同时避免胃肠道反应，起效较快。中药喷雾剂是在传统中医理论的指导下，以中药为原料，并结合现代科技，将中药有效成分提取加工而成的。与传统中药的剂型相比，中药喷雾剂在某些方面有独到的优势，比如避免胃肠道的首过效应，药物吸收较快，不良反应少，携带方便，药物直达患处。中药喷雾剂中的中药提取物一般采用水提法、醇提法或水提醇沉法等工艺，进一步根据药物性质制成溶液、混悬液、乳浊液等不同类型的喷雾剂。本发明采用水提醇沉法，并最后高压灭菌制得中药喷雾剂，改变传统鸡用中药采用拌料、饮水的给药剂型；更重要的是鸡患鼻气管鸟疫杆菌病后，出现鼻炎症状、流水样黏液、颜面还会发生肿胀，鸡往往饮食废绝，无法采用传统的给药方式，而采用喷雾方法给药可以直达患处，让病鸡呼吸时就能把药物吸入鼻腔，对局部进行治疗。
本发明所选药材制成的中药喷雾剂安全可靠，性质稳定，与其他药物无配伍禁忌。
实施例1
步骤1、取桑白皮45kg、紫苏叶40kg、升麻35kg、茜草30kg，加8倍中药质量的注射用水，在100℃温度条件下进行第一次蒸馏提取2小时，收集蒸馏液100L，即为第一芳香水，在100℃温度条件下对药渣进行第二次蒸馏提取1.5小时，收集蒸馏液50L，即为第二芳香水，两次芳香水合并150L进行第三次蒸馏至35L，加入助溶剂吐温80 300ml，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤2、采用上述相同的方法制备调制好的第三芳香水，备用；
步骤3、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮2次，每次45分钟，三层纱布滤过，合并2次煎液与步骤1得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度1.00-1.10的清膏，加95%乙醇使含醇量达70%，静置36h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至约60L，用10%NaOH溶液调节PH至6.0，得到调节pH后的浓缩液；
步骤4、在调节PH后的浓缩液中加入调制好的第三芳香水350ml、250g的苯甲酸与100g的尼泊金，加注射用水定容至100L（相当于1ml含有原药材1.5g），搅匀，静置，滤过，分装，120℃灭菌锅灭菌30分钟即得。
将分离鼻气管鸟疫杆菌接种于普通营养肉汤中，37℃摇床培养24h。吸取105cfu/ml的菌液200μL均匀涂抹于普通营养琼脂，在平板上放置4个牛津杯，3个杯中加入200μL本实施例1制备得到的喷雾剂作为3个平行，剩下1个杯中加入200μL注射用水，倒置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h，测量抑菌圈大小，发现本发明的中药喷雾剂抑菌圈达到22.3mm，属于对鼻气管鸟疫杆菌高敏。
选取10日龄健康绿壳蛋鸡雏鸡300只，随机分成3组，对照组、模型组、中药喷雾剂治疗组（本实施例1，下同）。首先对对照组注射生理盐水，模型组和中药喷雾剂组分别通过气管注射接种鼻气管鸟疫杆菌液1ml/羽(菌液浓度为1015cfu/ml)。3天后，模型组和中药喷雾组出现为嗜睡、采食下降，咳嗽，鼻流出透明粘液，对照组一切正常。对照组和模型组采用生理盐水进行喷雾治疗；中药喷雾剂组采用4倍生理盐水喷雾治疗，每天2次，每次持续15分钟。给药5天后，对照组一切正常；模型组鸡症状加重，食欲饮欲废绝，颜面肿胀，鸡鼻子粘液增多，个别带血，呼吸困难，同时出现死亡21只，死亡率21%，解剖发现鼻腔和肺部都有红肿、出血。中药喷雾剂治疗组症状缓解，精神有好转，开始主动吃料饮水，达到原来的2/3左右，发生死亡8只，死亡率8%。
选取泸州某绿壳蛋鸡场300日龄的产蛋的自然发病绿壳蛋鸡2000只，通过临床诊断，符合鼻气管鸟疫杆菌的特征具有典型呼吸道症状、鼻流粘液、死亡率增加为特征。取发病活鸡气管、支气管，进行细菌分离鉴定，发现圆形、表面突起、不溶血、有丁酸样气味的圆形灰白色菌落。取单个菌落革兰染色，可见染成红色的革兰阴性短杆菌；并通过DNA抽提后，进行PCR鉴定为鼻气管鸟疫杆菌感染导致。随通过使用超声波雾化机对全群按照4倍生理盐水稀释后进行喷雾给药，严重的病鸡口腔和鼻腔喷雾给药，每天上下午各1次，连用5天。5天后，全群呼吸道症状显著减少，鸡采食量恢复80%，产蛋量从发病时的65%上升到85%，死亡率由治疗时的每天35只，下降到4只，鸡群恢复良好，对个别严重鸡群继续喷雾给药，给药10天后，全群恢复正常。
采用10只豚鼠进行呼吸道刺激试验，在密闭空间内，按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释雾化给药方法，观察本实施例1制备得到的喷雾剂对豚鼠呼吸道刺激的影响。结果发现，本实施例1制备得到的喷雾剂对豚鼠眼睛粘膜、口腔、鼻腔黏膜都无刺激性，表明本发明安全。同时，对10日龄蛋雏鸡进行喷雾给药按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释，观察本发明吸入安全性，发现试验鸡呼吸道无不良反应，呼吸道粘膜正常。两个试验证实本发明无吸入毒性，临床可以使用。
实施例2
步骤1、取桑白皮37.5kg、紫苏叶50kg、升麻25kg、茜草30kg，加8倍中药质量的注射用水，在90℃温度条件下进行第一次蒸馏提取2.5小时，收集蒸馏液100L，即为第一芳香水，在90℃温度条件下对药渣进行第二次蒸馏提取2.5小时，收集蒸馏液50L，即为第二芳香水，两次芳香水合并150L进行第三次蒸馏至35L，加入助溶剂吐温80 200ml，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤2、采用上述相同的方法制备调制好的第三芳香水，备用；
步骤3、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的的注射用水，煎煮2次，每次60分钟，三层纱布滤过，合并2次煎液与步骤1得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度1.00-1.10的清膏，加95%乙醇使含醇量达70%，静置30h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至约60L，用10%NaOH溶液调节PH至6.5，得到调节pH后的浓缩液；
步骤4、在调节PH后的浓缩液中加入调制好的第三芳香水350ml、200g的苯甲酸与150g的尼泊金，加注射用水定容至100L，搅匀，静置，滤过，分装，120℃灭菌锅灭菌30分钟即得。
采用10只豚鼠进行呼吸道刺激试验，在密闭空间内，按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释雾化给药方法，观察本实施例2制备得到的喷雾剂对豚鼠呼吸道刺激的影响。结果发现，本实施例2制备得到的喷雾剂对豚鼠眼睛粘膜、口腔、鼻腔黏膜都无刺激性，表明本发明安全。同时，对10日龄蛋雏鸡进行喷雾给药按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释，观察本发明吸入安全性，发现试验鸡呼吸道无不良反应，呼吸道粘膜正常。两个试验证实本发明无吸入毒性，临床可以使用。
实施例3
步骤1、取桑白皮50kg、紫苏叶37.5kg、升麻37.5kg、茜草25.5kg，加8倍中药质量的注射用水，在95℃温度条件下进行第一次蒸馏提取2小时，收集蒸馏液100L，即为第一芳香水，在95℃温度条件下对药渣进行第二次蒸馏提取2小时，收集蒸馏液50L，即为第二芳香水，两次芳香水合并150L进行第三次蒸馏至35L，加入助溶剂吐温80 400ml，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤2、采用上述相同的方法制备调制好的第三芳香水，备用；
步骤3、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮2次，每次50分钟，三层纱布滤过，合并2次煎液与步骤1得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度1.00-1.10的清膏，加95%乙醇使含醇量达70%，静置32h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至约60L，用10%NaOH溶液调节PH至6.2，得到调节pH后的浓缩液；
步骤4、在调节PH后的浓缩液中加入调制好的第三芳香水350ml、300g的苯甲酸与50g的尼泊金，加注射用水定容至100L，搅匀，静置，滤过，分装，120℃灭菌锅灭菌30分钟即得。
采用10只豚鼠进行呼吸道刺激试验，在密闭空间内，按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释雾化给药方法，观察本实施例3制备得到的喷雾剂对豚鼠呼吸道刺激的影响。结果发现，本实施例3制备得到的喷雾剂对豚鼠眼睛粘膜、口腔、鼻腔黏膜都无刺激性，表明本发明安全。同时，对10日龄蛋雏鸡进行喷雾给药按照1倍量稀释、2倍量稀释、4倍量稀释，观察本发明吸入安全性，发现试验鸡呼吸道无不良反应，呼吸道粘膜正常。两个试验证实本发明无吸入毒性，临床可以使用。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (6)

1.一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂，其特征在于，
所述的中药喷雾剂通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；
步骤2、将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，进行第一次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第一芳香水，然后对药渣进行第二次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第二芳香水，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤3、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，在90℃-100℃温度条件下进行第一次蒸馏提取1.5小时-2.5小时，收集蒸馏液，即为第一芳香水，其中，第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，然后在90℃-100℃条件下对药渣进行第二次蒸馏提取1小时-1.5小时，收集蒸馏液，即为第二芳香水，其中，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，其中，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，其中，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350，充分混匀，得到调制好的第三芳香水，备用；
步骤4、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮1-3次，每次煎煮时间为45分钟-60分钟，三层纱布滤过，合并煎液与步骤2得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度为1.00-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70%，静置，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，得到浓缩液，用10%NaOH溶液调节pH，得到调节pH后的浓缩液；其中，浓缩液与步骤2中的第三芳香水的体积比为60:35，调节后的pH为6.0 -6.5；
步骤5、在步骤4得到的调节pH后的浓缩液中加入步骤3制备得到的调制好的第三芳香水、苯甲酸与尼泊金，加注射用水定容，搅匀，静置，滤过，分装，灭菌锅灭菌，制备得到喷雾剂；
所述步骤5中的定容后的溶液，除了含有步骤4得到的调节pH后的浓缩液外，每1000ml中含有2-3g苯甲酸、0.5-1.5g尼泊金，350ml调制好的第三芳香水，余量为注射用水。
2.一种治疗绿壳蛋鸡鼻气管鸟疫杆菌病的中药喷雾剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；
步骤2、将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，进行第一次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第一芳香水，然后对药渣进行第二次蒸馏提取，收集蒸馏液，即为第二芳香水，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，充分混匀，得到调制好的第三芳香水；
步骤3、称量：以重量计，称量以下组分：桑白皮15-20份、紫苏叶15-20份、升麻10-15份、茜草5-12份；将称量好的各组分混合，加8倍于药材质量的注射用水，在90℃-100℃温度条件下进行第一次蒸馏提取1.5小时-2.5小时，收集蒸馏液，即为第一芳香水，其中，第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，然后在90℃-100℃条件下对药渣进行第二次蒸馏提取1小时-1.5小时，收集蒸馏液，即为第二芳香水，其中，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，将第一芳香水与第二芳香水合并后对两次收集的芳香水进行第三次蒸馏，收集蒸馏液，即为第三芳香水，其中，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，在第三芳香水中加入助溶剂吐温80，其中，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350，充分混匀，得到调制好的第三芳香水，备用；
步骤4、收集步骤2中的第三芳香水后，药渣再加8倍量的注射用水，煎煮1-3次，每次煎煮时间为45分钟-60分钟，三层纱布滤过，合并煎液与步骤2得到的调制好的第三芳香水，浓缩至相对密度为1.00-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70%，静置，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，得到浓缩液，用10%NaOH溶液调节pH，得到调节pH后的浓缩液；所述步骤4中的浓缩液与第三芳香水的体积比为60:35，调节后的pH为6.0 -6.5；
步骤5、在步骤4得到的调节pH后的浓缩液中加入步骤3制备得到的调制好的第三芳香水、苯甲酸与尼泊金，加注射用水定容，搅匀，静置，滤过，分装，灭菌锅灭菌，制备得到喷雾剂；
所述步骤5中的定容后的溶液，除了含有步骤4得到的调节pH后的浓缩液外，每1000ml中含有2-3g苯甲酸、0.5-1.5g尼泊金，350ml调制好的第三芳香水，余量为注射用水。
3.根据权利要求2所述的中药喷雾剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的第一次蒸馏提取和第二次蒸馏提取的温度为90℃-100℃，时间为1.5小时-2.5小时。
4.根据权利要求2所述的中药喷雾剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的第一芳香水与桑白皮的体积质量比（ml/g）为100:375-100:500，第二芳香水与第一芳香水的体积为1:2，第三芳香水与第一芳香水的体积为35：100，吐温80与第三芳香水的体积比为2:350-4:350。
5.根据权利要求2所述的中药喷雾剂的制备方法，其特征在于，加入的乙醇体积浓度为95%，静置时间为30小时-36小时。
6.根据权利要求3所述的中药喷雾剂的制备方法，其特征在于，所述步骤5中的灭菌温度为120℃，时间为30分钟。
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