CN102716223B - 一种治疗上呼吸道感染的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种治疗上呼吸道感染的中药组合物及其制备方法。所述的中药组合物由由黄芩20-30重量份、金银花30-50重量份、麻黄20-30重量份、杏仁40-60重量份、甘草20-30重量份和石膏200-250重量份制成。该中药组合物具有副作用小、活性成分含量高的特点，可用于治疗上呼吸道感染。

Description

一种治疗上呼吸道感染的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种治疗上呼吸道感染的中药组合物，特别是涉及一种以中药为原料药制备的治疗上呼吸道感染的中药组合物。本发明还涉及该中药组合物的制备方法。
背景技术
上呼吸道感染是外鼻孔至环状软骨下缘包括鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称。主要病原体是病毒，少数是细菌。发病不分年龄、性别、职业和地区，免疫功能低下者易感。通常，上呼吸道感染的病情较轻、病程短、可自愈。但是，由于发病率高，不仅影响工作和生活，有时还可伴有严重的并发症，并且具有一定的传染性，因此应积极预防和治疗。
古方《伤寒论》记载了麻杏石甘汤，其原料为麻黄、杏仁、石膏和甘草，用于辛凉宣泄，清肺平喘，主治肺热喘咳、甚则气急、鼻翼启扇、有汗或无汗、身热不解、口渴、脉滑数、苔薄黄等。后人在麻杏石甘汤的基础之上对其处方和疗效做了进一步的研究，其加减方在上呼吸道感染方面有广泛的应用。例如杜氏退热饮在原方之上加入了防风、蝉蜕等治疗上呼吸道感染；王氏用麻杏石甘汤合止该散加减治疗上感等病；有人对300例流行性哮喘型肺炎以本方加减治疗；杨氏通过对麻杏石甘汤加减治疗空调感冒。
虽然现有技术中已经对麻杏石甘汤的加减方进行了大量研究，但是，由于不同中药之间的相互作用复杂，制备工艺对于中成药有效成分的组成影响大，不同人群对药物的敏感性和耐药性不同，因此仍然有需要研究新的治疗上呼吸道感染的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种以中药为原料药制备的治疗上呼吸道感染的中药组合物及其制备方法，该中药组合物对上呼吸道感染具有显著的治疗效果，并且副作用小、活性成分含量高。
本发明是通过以下的技术方案来实现的：
一方面，本发明提供了一种治疗上呼吸道感染的中药组合物，其特征在于所述的中药组合物由黄芩、金银花、麻黄、杏仁、甘草和石膏制成。
优选地，所述治疗上呼吸道感染的中药组合物由黄芩10-200重量份、金银花20-450重量份、麻黄10-200重量份、杏仁30-250重量份、甘草10-200重量份和石膏100-450重量份制成。
更优选地，所述治疗上呼吸道感染的中药组合物由黄芩20-100重量份、金银花30-150重量份、麻黄20-100重量份、杏仁40-200重量份、甘草20-100重量份和石膏200-400重量份制成。
更优选地，所述治疗上呼吸道感染的中药组合物由黄芩20-30重量份、金银花30-50重量份、麻黄20-30重量份、杏仁40-60重量份、甘草20-30重量份和石膏200-250重量份制成。
最优选地，所述治疗上呼吸道感染的中药组合物由黄芩20重量份、金银花35重量份、麻黄30重量份、杏仁50重量份、甘草23重量份和石膏220重量份制成。
上述治疗上呼吸道感染的中药组合物的剂型可为口服液。
另一方面，本发明还涉及上述治疗上呼吸道感染的中药组合物的制备方法，其特征在于制备步骤如下：
(1)称取干燥的黄芩，超微粉碎成200-300目的粉末，加2-3倍体积的水超声提取1-3次，超声功率为250-800W，超声时间为25-40分钟，将提取液浓缩至1/3-1/2体积，并用3.5-5.0重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄和金银花，加2-4倍体积的水浸泡2-3小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁、石膏和甘草，与步骤(2)中的药渣合并后加2-3倍体积的水煎煮2-3次，每次2-2.5小时，合并煎煮液，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入1.5-2.0倍体积的乙醇，沉淀24-48小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以2500-6000转/分的速率离心5-10分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入药学上可接受的辅料制成口服液。
在上述的制备方法中，步骤(5)优选将步骤(4)所得的浓缩液以2500-6000转/分的速率离心5-10分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入蔗糖至含糖量为3-6％，调pH至5-7，加水至全量，过滤，滤液分装，封口，100℃灭菌30分钟，得到口服液。
在本发明的中药组合物中，从黄芩中提取分离出来一种黄酮类化合物——黄芩苷，其具有显著的生物活性，对多种炎症动物模型有较好的抗炎效果。黄芩苷还对白三烯B4，白三烯C4的合成均有较强的抑制作用，提示黄芩苷对5-脂氧酶(5-LO)有抑制作用。5-LO正常存在于细胞浆中，在细胞活化时，借助于Ca2+转移至细胞膜上活化，提示5-LO的活性和细胞内Ca2+水平紧密关联。黄芩苷可显著抑制人工三肽刺激引起的细胞内钙增加，因而，也可通过此途径抑制5-LO的活性。另外，黄芩苷可使PMNL细胞内cAMP水平显著提高，而cAMP升高可抑制腹腔巨噬细胞花生四烯酸代谢的更新。综上所述，黄芩苷可在多个环节影响白细胞的功能和5-LO的活性，进而影响花生四烯酸的代谢，这可能与其抗炎作用机理密切相关。
另一主要成分金银花，自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等证，均效果显著。其主要有效成分绿原酸，具有广泛的生物活性，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。
本发明通过对黄芩、麻黄、杏仁、甘草、金银花和石膏等中草药进行合理搭配，再通过煎煮、提取、过滤、灭菌等步骤，得到一种治疗上呼吸道感染的药物组合。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细的说明。
实施例1：
按照下述方法制备本发明治疗上呼吸道感染的中药组合物：
(1)称取干燥的黄芩20g，超微粉碎成200-300目的粉末，加2倍体积的水超声提取2次，超声功率为500W，超声时间为30分钟，将提取液浓缩至1/2体积，并用5.0重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄30g和金银花35g，加3倍体积的水浸泡2小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁50g、石膏220g和甘草23g，与步骤(2)中的药渣合并后加2倍体积的水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，浓缩至2/3体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入1.5倍体积的乙醇，沉淀24小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至2/3体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以3000转/分的速率离心10分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入蔗糖至含糖量为3.5％，调pH至6，加水至全量，过滤，滤液分装，封口，100℃灭菌30分钟，得到口服液。
实施例2：
按照下述方法制备本发明治疗上呼吸道感染的中药组合物：
(1)称取干燥的黄芩30g，超微粉碎成300目的粉末，加3倍体积的水超声提取3次，超声功率为300W，超声时间为40分钟，将提取液浓缩至1/2体积，并用3.5重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄25g和金银花40g，加4倍体积的水浸泡2小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁50g、石膏250g和甘草25g，与步骤(2)中的药渣合并后加2倍体积的水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，浓缩至1/2体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入2.0倍体积的乙醇，沉淀48小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至1/2体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以4000转/分的速率离心6分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入蔗糖至含糖量为6％，调pH至7，加水至全量，过滤，滤液分装，封口，100℃灭菌30分钟，得到口服液。
实施例3：
按照下述方法制备本发明治疗上呼吸道感染的中药组合物：
(1)称取干燥的黄芩30g，超微粉碎成200-300目的粉末，加3倍体积的水超声提取3次，超声功率为700W，超声时间为40分钟，将提取液浓缩至1/3体积，并用4.0重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄30g和金银花40g，加3倍体积的水浸泡2小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁50g、石膏250g和甘草25g，与步骤(2)中的药渣合并后加3倍体积的水煎煮3次，每次2.5小时，合并煎煮液，浓缩至1/2体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入2.0倍体积的乙醇，沉淀36小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至1/2体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以5000转/分的速率离心8分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入蔗糖至含糖量为5％，调pH至5，加水至全量，过滤，滤液分装，封口，100℃灭菌30分钟，得到口服液。
试验例：
A、本发明中药组合物对小鼠上呼吸道SIgA调节作用的药效学研究
1、材料
1.1、动物
昆明小鼠，雌雄各半，质量18-22g。
1.2、本发明组药物
按照实施例1制备得到的本发明中药组合物。
1.3、试剂
液体硫乙醇酸盐培养基、生化鉴定管、NS、羊血培养基、小鼠SlgA试剂盒、革兰氏染液、注射用青霉素钠等。
1.4、仪器
SPX-250B-Z型生化培养箱，YXQ-LS-75SII型立式压力蒸气灭菌器，生物安全柜等。
2、方法
2.1、分组与给药
将小鼠随机分为4组，每组10只。①阴性对照组：不造模，以同种方式给予同体积的生理盐水；②模型对照组：用青霉素腹腔注射(每10g小鼠体重给药0.0073g/d)，连续3d，第4天起每天灌胃生理盐水0.5ml，连续7d；③不同剂量的本发明中药组合物：造模方法同前，第4天起每天灌胃给药0.5ml(中剂量为临床等效剂量0.13g生药/20g小鼠体重，高剂量为临床等效剂量的1倍0.26生药/20g小鼠体重)，连续7d。每组分别于第1天、第11天采集样本用小鼠SIgA试剂盒(ELISA法)检测小鼠唾液中SIgA含量。
2.2、统计学处理
所有实验数据均采用SPSS软件处理分析，结果用表示。
3、结果
3.1、青霉素建立小鼠上呼吸道菌群失调模型的评价方法
检测小鼠口咽部优势菌甲型链球菌构成比和菌群总密集度，以青霉素模型组甲型链球菌基本消失，菌群数量和种类明显减少为评价模型成功的标准。实验结果表明，青霉素腹腔注射3d后，小鼠口咽部菌群总密集度明显下降，甲型链球菌的构成比明显降低，甲型链球菌未能检出。
3.2、各组给药前后SIgA含量的比较
分别测定各组给药前后的SIgA含量，结果见表1。表1显示，阴性对照组给予生理盐水后SIgA含量明显下降，差异有显著意义(P＜0.05)；模型对照组造模给予生理盐水后SIgA含量有所下降，差异无显著意义(P＞0.05)；本发明中药组合物高剂量组给药后SIgA含量略有下降差异无显著意义(P＞0.05)；本发明中药组合物中剂量组给药后SIgA含量显著增加，差异有显著意义(P＜0.05)。
本发明中药组合物中剂量组给药后SIgA含量显著高于阴性对照组、模型对照组和高剂量组，差异有显著意义(P＜0.05)。
与阴性对照组给NS前比较，P＜0.05；与模型对照组造模前比较，P＞0.05；与高剂量组给药前比较，P＞0.05；与中剂量组给药前比较，P＜0.05；n＝10。
表1各组前后SIgA含量比较
Figure BSA00000743041600061
μg·ml-1
  组别   SIgA
  阴性对照组给NS前   0.151±0.013
  阴性对照组给NS后   0.136±0.015
  模型对照组造模前   0.147±0.017
  模型对照组造模后   0.137±0.014
  本发明高剂量组给药前   0.145±0.015
  本发明高剂量组给药后   0.131±0.013
  本发明中剂量组给药前   0.144±0.011
  本发明中剂量组给药后   0.153±0.015
4、结论
实验结果表明，本发明中剂量组对上呼吸道SIgA有较为明显的促进作用，SIgA可保护呼吸道粘膜，有效地防止呼吸道疾病，这可能是本发明中药组合物防治上呼吸道感染的作用机制之一。
B、本发明中药组合物对于引起上呼吸道感染的细菌抑制作用的药效学研究
1、材料
1.1、动物
昆明小鼠，雌雄各半，质量18-20g；SD雄性大鼠，雌雄各半，质量120-150g；家兔，雌雄各半，体重约2kg。
1.2、本发明组药物
按照实施例1制备得到的本发明中药组合物。
1.3、实验菌株
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等4种致病菌共100株，其中质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株。
1.4、仪器
毛细管放大测量装置，BS210S天平，80-1离心机，712分光光度计，电子温度计。
2、方法与结果
2.1、体外抑菌实验
采用MH培养基培养细菌。所有培养基经配制和灭菌后置于37℃培养24h检菌，无菌生长者方能使用。接种细菌后于37℃培养18-24h。细菌质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株对盐酸左氧氟沙星的MIC100分别为1μg/ml和2μg/ml，均在NCCLS规定的范围内。采用试管倍比稀释法，使本发明中药组合物在试管中的终浓度分别为40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312mg/ml。加入菌株均配制成2×106cfu/ml的细菌悬液，使细菌终浓度为1×105cfu/ml。于37℃培养24h后观察结果，以细菌菌株未生长的药物最高稀释度为其MIC值。实验中以接种等量细菌的PBS作为阴性对照组。结果见表2。
表2本发明中药组合物的体外抑菌(MIC)结果
  菌种(株数)   MIC   阴性对照组
  金黄色葡萄球菌(30)   5mg/ml   均生长
  鲍曼不动杆菌(20)   5mg/ml   均生长
  大肠杆菌(30)   --   均生长
  铜绿假单胞菌(20)   --   均生长
表2的结果表明，本发明中药组合物对金黄葡萄球菌和鲍曼不动菌的MIC均为5mg/ml；对大肠杆菌和铜绿假单胞菌无作用。
2.2、对小鼠毛细血管通透性的影响
昆明小鼠，体重18-20g，雌雄各半，共40只，将小鼠随机分为本发明中药组合物高、中、低剂量组，阳性药对照组(醋酸泼尼松)及空白对照组(生理盐水组)各10只。本发明中药组合物组(高、中、低)，分别灌服试验药物20ml/kg、10ml/kg、2ml/kg体重。阳性药对照组，剂量为0.05ml/kg。空白组灌服蒸馏水0.4ml/20g体重。每日灌胃给药1次，连续5d，于末次给药后半小时各组小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，并立即每只腹腔注射0.6％乙酸0.2ml/只，半小时后脱颈椎处死小鼠，剪开腹部，用生理盐水每次2ml清洗腹腔3次，吸取腹腔冲洗液后合并至试管中，以3000r/min，离心10min，取上清液于590nm处比色。数据进行统计学处理。结果见表3。
表3本发明中药组合物对小鼠毛细血管通透性的影响(n＝10)
  组别   剂量(ml/kg)   吸光度(OD)   抑制率(％)
  本发明高剂量组   20   0.155±0.041°   34.5
  本发明中剂量组   10   0.189±0.075°   19.9
  本发明低剂量组   2   0.212±0.094°   10.2
  醋酸泼尼松   0.05   0.140±0.056°   40.7
  空白对照组   -   0.236±0.043°   -
注：与空白对照组比较，*P＜0.05。
由表3结果显示，本发明中药组合物高剂量组与阳性对照组显示对醋酸引起的毛细血管通透性增加有一定的抑制作用。
2.3、本发明中药组合物家兔解热实验
取健康家兔，每天测体温(肛温)1次，连续3d，使兔子适应测温操作，选择体温在38-39.6℃，且体温波动在0.2℃以下的兔子作为合格兔。取合格兔40只，间隔30min连续测体温2次，以每兔平均体温作为该兔基础体温，按基础体温分层随机分为4组，每组10只，雌雄各半。分别为本发明中药组合物高、低剂量组，阳性药物对照组(阿司匹林组)和空白对照组。各组兔子按本发明中药组合物高、低剂量组16.50ml/kg、3.69ml/kg；阿司匹林阳性对照组给药100mg/kg；空白对照组给等量的生理盐水灌胃一次。0.5h后按照内毒素致热法复制兔子发热模型(即各组家兔耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素10EU/kg)，记录内毒素注射后1h、2h、3h、4h、5h家兔肛门温度。数据进行统计学处理。结果见表4。
表4本发明中药组合物对内毒素致家兔体温的影响(
Figure BSA00000743041600082
n＝10)
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，同时间点t检验或校正t检验.
由表4可知，静脉注射内毒素后体，模型组体温1h后上升达最高将近1℃，之后呈逐渐下降趋势。低剂量组体温较同时间点模型组比较偏低，但无统计学意义。高低剂量给药组，阿司匹林组与同时间点模型组相比有较好的解热作用，有统计学意义(P＜0.05)。结果表明本发明中药组合物对家兔内毒素致热有一定的解热作用。
C、本发明药物组合口服液对小鼠进行灌胃给药急性毒性试验
1、试验目的
观察小鼠一次性给予药物所产生的急性毒性反应和死亡情况。
2、动物
清洁级ICR小鼠，体重18g-22g，雌雄各半。
3、试验方法
试验前将小鼠禁食12小时，自由饮水。按急性毒性试验方法，动物一次灌胃给药后，观察7天，未见死亡。另取20只小鼠，雌雄各半，以最大体积0.4ml/10g体重灌胃给药，观察并记录给药7天内动物所出现的毒副反应及死亡。
4、试验结果
本发明中药组合物以0.4ml/10g体重一次灌胃给药20只小鼠，经7天观察，小鼠口服药物后均无中毒现象，进食正常，皮毛光滑，无一例死亡，故小鼠灌胃给药的最大耐受量为40g生药/kg(即LD50＞40g生药/kg)。结果见表5。
表5小鼠口服药物最大耐受量观察结果
Figure BSA00000743041600091
5、试验结论
经小鼠灌胃给药LD50试验，结果表明，本发明中药组合物LD50＞40g生药/kg，小鼠用量为人用量的80倍。

Claims (2)

1.一种治疗上呼吸道感染的中药组合物的制备方法，其特征在于所述的组合物由黄芩20-30重量份、金银花30-50重量份、麻黄20-30重量份、杏仁40-60重量份、甘草20-30重量份和石膏200-250重量份制成；其制备步骤如下：
(1)称取干燥的黄芩，超微粉碎成200-300目的粉末，加2-3倍体积的水超声提取1-3次，超声功率为250-800W，超声时间为25-40分钟，将提取液浓缩至1/3-1/2体积，并用3.5-5.0重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄和金银花，加2-4倍体积的水浸泡2-3小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁、石膏和甘草，与步骤(2)中的药渣合并后加2-3倍体积的水煎煮2-3次，每次2-2.5小时，合并煎煮液，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入1.5-2.0倍体积的乙醇，沉淀24-48小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以2500-6000转/分的速率离心5-10分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入药学上可接受的辅料制成口服液。
2.如权利要求1所述的一种治疗上呼吸道感染的中药组合物的制备方法，其特征在于制备步骤如下：
(1)称取干燥的黄芩，超微粉碎成200-300目的粉末，加2-3倍体积的水超声提取1-3次，超声功率为250-800W，超声时间为25-40分钟，将提取液浓缩至1/3-1/2体积，并用3.5-5.0重量％的活性炭吸附脱色，然后用乙酸乙酯萃取，萃取得到的水相用氯仿萃取，萃取得到的水相再用正丁醇萃取，回收正丁醇部分并挥发得到黄芩苷，备用；
(2)称取麻黄和金银花，加2-4倍体积的水浸泡2-3小时，加热回流提取，收集蒸馏液和药渣备用；
(3)称取杏仁、石膏和甘草，与步骤(2)中的药渣合并后加2-3倍体积的水煎煮2-3次，每次2-2.5小时，合并煎煮液，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(4)合并步骤(1)的黄芩苷和步骤(3)的浓缩液，加入1.5-2.0倍体积的乙醇，沉淀24-48小时，取上清液并挥尽乙醇，浓缩至1/2-2/3体积，所得浓缩液备用；
(5)将步骤(4)所得的浓缩液以2500-6000转/分的速率离心5-10分钟，取上清液，加入步骤(2)中的蒸馏液，再加入蔗糖至含糖量为3-6％，调pH至5-7，加水至全量，过滤，滤液分装，封口，100℃灭菌30分钟，得到口服液。
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