CN102397331A - 一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法 - Google Patents

Abstract

一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法，步骤如下：1、取黄芩适量，加水煎煮2至4次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.35；2、用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；3、沉淀物加水搅匀，用30-40％氢氧化钠调节pH值至6.5-7.5；4、加等量乙醇，搅拌溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；5、沉淀依次用适量水及不同浓度乙醇洗至pH值至6.5-7.5；6、挥尽乙醇，减压干燥，即黄芩提取物；7、取金银花适量，加水煎煮1至3次，合并煎煮液，滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(50-70℃)的清膏；8、加乙醇使含醇量达80-90％，静置24小时，过滤；9、滤渣加乙醇使含醇量达75-95％，静置18-30小时，过滤；10、合并两次滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度1.15-1.30；11、喷雾干燥，得金银花提取物；12、合并黄芩提取物及金银花提取物，加碳酸氢钠定量，后加葡萄糖至定量，混合均匀，即得银黄可溶性粉。

Description

一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种高纯度银黄可溶性粉，以及高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法。

背景技术

银黄制剂主要由金银花、黄芩组成，具有清热解毒、抗菌消炎等功效，是我国历史悠久的传统药物之一，在国内外的研究和应用中，发现了它的多方面药理作用和临床功能，兽医主要用于畜禽外感发热，肺炎气喘和由多种细菌引起的混合感染。另外，也有一些资料证明其抗菌、消炎作用显著，对变形杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型链球菌、乙型链球菌有明显的抑菌作用；对细菌内毒素也有显著的抑制作用。黄芩能泻实火，除湿热，止血，安胎；治壮热烦渴，肺热咳嗽，湿热泻痢，黄痘，热淋，吐、衄、崩、漏，目赤肿痛，胎动不安，痈肿疔疮。金银花能清热，解毒；治温病发热，热毒血痢，痈疡。肿毒，瘰疬，痔漏。两味药相辅相成，用于主治壮热烦渴，肺热咳嗽，湿热泻痢，黄痘，热淋，吐、衄、崩、漏，目赤肿痛，胎动不安，痈肿疔疮等。中华人民共和国药典收录有银黄口服液即主要用于外感风热、咽喉肿痛、发热等证。

我们根据上面的理论为依据，组方制得银黄可溶性粉，长期的临床实践证明，该方具有良好的清热解毒，宣肺化痰，止咳平喘，燥湿止痢作用，同时有广谱抗菌和抗病毒作用，能阻止毒素吸收，增强免疫功能，减轻或消除应激反应，提高毛细血管抵抗力，保护黏膜上皮和肝细胞功能。

虽然涉及银黄制剂制备方法的报道很多，但是方法比较复杂，成本高，不利于推广、开发和应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法。

目的之一，提供一种高纯度银黄可溶性粉的制备方法，包括如下步骤：

取黄芩适量，加水煎煮2至4次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.35；

用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；

沉淀物加适量水搅匀，用30-40％氢氧化钠调节pH值至6.5-7.5；

加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；

沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至6.5-7.5；

挥尽乙醇，减压干燥，即黄芩提取物；

取金银花适量，加水煎煮1至3次，合并煎煮液，滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(50-70℃)的清膏；

加乙醇使含醇量达80-90％，静置24小时，过滤；

滤渣加乙醇使含醇量达75-95％，静置18-30小时，过滤；

合并两次的滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30(50-70℃)；

喷雾干燥，即得金银花提取物；

合并黄芩提取物及金银花提取物，加碳酸氢钠定量，而后加葡萄糖至定量，混合均匀，即得银黄可溶性粉。

本发明中的银黄可溶性粉为一种新型的中兽药制剂，经过充分水提生药中的有效成分，浓缩、干燥所得，有效成分提取完全，水溶性好；

经提取后显著提高了药物的生物利用度，增强了疗效；

本药饮水给药，用药简单方便，药量容易控制；

以提取物制成粉剂，体积小，保存运输方便，易为广大养殖户和经销商所接受；

由于中药本身无残留，大力推广银黄可溶性粉后，可明显减少抗生素和化学药物的应用，提高肉蛋品质，保障人类健康，社会效益显著。

目的之二，提供一种高纯度银黄可溶性粉的质量检测方法，包括如下步骤：

1、鉴别，(1)取银黄可溶性粉定量，加75％乙醇定量，摇匀，作为供试品溶液；(2)另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75％乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；(3)照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各定量，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视；(4)供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、检查，(1)水分，照水分测定法测定，不得超过5.0％；(2)其他，除含量均匀度外，应符合可溶性粉项下的各项规定。

3、含量测定，金银花照高效液相色谱法测定。(1)色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000；(2)对照品溶液的制备，取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50％甲醇适量，制成每1ml含50μg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备，精密称取本品定量，置于容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密吸取该溶液定量，置棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各定量，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于1.7mg。

4、含量测定，黄芩照高效液相色谱法测定。(1)色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2)为流动相；检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；(2)对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品定量，精密称定，置于量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取定量，置于量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷50μg)；(3)供试品溶液的制备，精密量取本品定量，置于容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密量取该溶液定量，置于量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取定量，置于量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各定量，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1g含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于18.0mg。

本发明药物提取工艺简便、产品纯度高、质量控制方法可靠、产品质量稳定。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步阐述：

基于本方法制备高纯度银黄可溶性粉的实施例：

实施例1

取黄芩375g，加水煎煮四次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.10；用盐酸调节pH值至1.7，60℃保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅匀，用40％氢氧化钠调节pH值至6.5；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.7，70℃保温，静置，滤过；沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至7.0；挥尽乙醇，减压干燥，得黄芩提取物29.6g；取金银花500g，加水煎煮一次；合并煎煮液，滤液减压浓缩至相对密度为1.10(70℃)的清膏；加乙醇使含醇量达95％，静置24小时，过滤；滤渣加乙醇使含醇量达95％，静置18小时，过滤；合并两次的滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.15(50℃)；喷雾干燥，得金银花提取物102.4g；合并上述两种提取物，加碳酸氢钠55g，而后加葡萄糖813g，混合均匀，即得银黄可溶性粉1000g。

对银黄可溶性粉进行质量检测的实施例：

实施例2

1、鉴别，取银黄可溶性粉1g，加75％乙醇9ml，摇匀，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75％乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、检查，水分，照水分测定法测定，不得超过5.0％；其他，除含量均匀度外，应符合可溶性粉项下的各项规定。

3、含量测定，金银花，照高效液相色谱法测定。(1)色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)为流动相；检测波长为327nm，理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。(2)对照品溶液的制备，取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50％甲醇适量，制成每1ml含50μg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备，精密称取本品1g，置于10ml的容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密吸取该溶液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于1.7mg。

4、含量测定，黄芩照高效液相色谱法测定。(1)色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2)为流动相；检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500；(2)对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷50μg)；(3)供试品溶液的制备，精密量取本品1g，置于10ml的容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密量取该溶液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1g含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于18.0mg。

实施例3：关于银黄可溶性粉的制备及质量检测方法的研究和实验银黄可溶性粉中黄芩提取工艺的研究

黄芩(Sctellaria Baicalensis Georgi)是一种常用的中药，其主要成分是黄酮类化合物，其中黄芩甙(Baicalin)的含量最高，有很好的提取利用价值。药理上已证实其具有抑菌、清热、利尿、利胆、抗炎、抗变态、解毒等功能。

本试验利用黄芩苷在酸性溶液中易析出的性质，可方便的将其提取和纯化。

1仪器与试药

1.1仪器SHIMADZU L VP C-10AT高效液相色谱仪；SPD-10A VP紫外可见监测器；色谱柱：SHIMADZU ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)。

1.2药材黄芩，符合《中华人民共和国兽药典》2000版第二部的相关规定，购于河北省安国市；黄芩苷标准品，中国药品生物制品检定所提供；乙醇、磷酸(分析醇)磷酸二氢钾(分析醇)、甲醇(色谱醇)，购于北京市化学试剂公司。

2试验方法

为了便于研究，将整个工艺路线研究分为二步进行：①黄芩苷提取工艺的优选，研究从“黄芩药材”到“煎煮液”；②黄芩苷结晶工艺的优选，研究从“煎煮液”到“黄芩苷”。采用高效液相色谱法，以黄芩苷的含量为考察指标，进行因素水平的分析。

2.1黄芩苷的测定方法

2.1.1色谱条件

色谱柱：ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.5％磷酸二氢钾，0.5％磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值为2.6，检测波长：316nm；柱温：40℃；流速：1ml/min。

2.1.2标准品溶液的制备

精密称取黄芩苷标准品2.5mg，置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超声溶解15分钟，制成浓度为50μg/ml的溶液，过滤备用。

2.1.3样品溶液的制备

精密称取黄芩提取物2.5mg，置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超声溶解15分钟，制成浓度为50μg/ml的溶液，过滤备用。

2.1.4样品测定

分别精密吸取标准品溶液和样品溶液各10μl注入色谱仪，测定即得。

2.2黄芩苷提取工艺的优选

2.2.1试验方法

称取黄芩粉400g，分四份，加水量分别是中药量的10、15、25倍，每份加水煎煮2次、3次、4次，煎煮时间分别为30min、60min和90min，提取液过滤后离心分离，40℃下加盐酸调pH 1-2，并在80℃保温60分钟，静置3小时离心分离，干燥，得黄芩苷粗品。

2.2.2正交设计

本试验重点考察加水量、煎煮时间和煎煮次数三个因素，每个因素选择三个水平进行分析。因素水平表见表1

表1黄芩提取物正交因素水平表

2.3黄芩苷结晶工艺的优选

2.3.1实验方法

称取黄芩药材1000g，每次加水15倍量，煎煮3次，每次各60min，合并煎液，滤过。量定滤液总体积，将滤液均分为10份。每份相当于黄芩药材100g。取其中5份按照因素水平表(见表2)和正交实验设计表(见表4)进行实验。

2.3.2正交设计

以黄芩苷沉淀收得量为考察指标，对滤液浓缩至投料量的倍数、调酸度的pH值、保温温度、保温时间、静置沉淀时间5因素进行优选，每个因素设2个水平(见表4)。以黄芩苷的含量作为考察指标，用正交实验的直观分析法进行分析。

表2黄芩苷结晶工艺因素水平表

3试验结果

3.1黄芩提取工艺优选的试验结果见表2

表3黄芩提取工艺正交试验结果表

3.2黄芩苷结晶工艺优选的结果

表4黄芩苷结晶工艺优选L8(2⁷)正交试验结果表

4分析与讨论

4.1从提取工艺优选的试验结果表(表3)中R值的大小可知，因素的主次顺序为C＞A＞B。即煎煮次数为主要因素，在生产工艺中应严格控制。其次为加水量和煎煮时间。

4.2从结晶工艺优选的试验结果表(表4)中R值的大小可知，在实验范围内黄芩结晶工艺的影响规律为A＞B＞E＞D＞C。即浓缩倍数为主要因素，其次是pH值，静置时间，保温时间，保温温度。因此，在生产过程中应严格控制浓缩倍数。

4.3黄芩提取方法报道较多，就提取溶剂而言，有水提醇提之分，就提取方法而讲，有回流、超声、冷浸、索氏提取等。考虑到生产成本和生产效率，我们选用水回流提取法。

4.4黄芩为根茎类木质药材，煎煮前充分浸泡，可缩短第1次煎煮时间，本实验黄芩煎煮前浸泡5h，可见木质已充分溶胀浸透。由正交实验结果知：经浸泡后，第1次仅煎煮1h即可。

5结论

5.1提取工艺优选的试验结果证明：最佳提取工艺为A2B2C1，即加15倍的水，煎煮3次，每次60min。

5.2结晶工艺试验的结果证明：最佳结晶工艺为A1B2C1D1E1，即将煎煮过滤后的滤液浓缩至投料量的5倍，调pH 1-2，80℃保温1h，静置24h。

银黄可溶性粉中金银花提取工艺的研究

金银花含有绿原酸，异绿原酸、三萜皂苷、黄酮类成分包括木犀草素7-O-8-D-半乳糖苷和木犀草素7-O-a-D-葡萄糖苷等，并含有肌醇。抗菌有效成分以绿原酸和异绿原酸为主。因绿原酸和异绿原酸在醇中具有可溶性，因此，在金银花的提取工艺探讨过程中，采取醇提法。为了保证抗菌有效成分的提取完全，我们对醇的浓度、加醇量、回流时间及回流次数通过正交设计进行优化。为金银花及本发明银黄可溶性粉的制备工艺提供科学依据。

1仪器与试药

1.1仪器SHIMADZU L VP C-10AT高效液相色谱仪；SPD-10A VP紫外可见监测器；色谱柱：SHIMADZU ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)。

1.2药材金银花，符合《中华人民共和国兽药典》2000版第二部的相关规定，购于河北省安国市；绿原酸标准品，中国药品生物制品检定所提供；乙醇、磷酸(分析醇)磷酸二氢钾(分析醇)、甲醇(色谱醇)，购于北京市化学试剂公司。

2方法

2.1考察因素及水平

根据文献报道及中药材的传统提取经验，确定考察因素为乙醇的浓度(A)、加醇量(B)，据文献报道有75％、85％和95％的醇提浓度、回流时间(C)、回流次数(D)。考察因素及水平见表1。

表1金银花醇提工艺考察因素水平

2.2实验方法

取样品9份，每份称取金银花20g。按表2安排试验，共进行三次重复实验。采用高效液相色谱法测定提取物中绿原酸的含量。

2.2.1色谱条件

色谱柱：ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)为流动相，检测波长：327nm；柱温：40℃；流速：1ml/min。

2.2.2标准品溶液的制备

精密称取绿原酸标准品2.5mg，置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超声溶解15分钟，制成浓度为50μg/ml的溶液，过滤备用。

2.2.3样品溶液的制备

精密称取金银花提取物2.5mg，置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超声溶解15分钟，制成浓度为50μg/ml的溶液，过滤备用。

2.2.4样品测定

分别精密吸取标准品溶液和样品溶液各10μl注入色谱仪，测定即得。

3结果

3.1采用直观分析法对试验数据进行综合比较，得金银花最佳提取工艺，结果见表2

表2正交试验设计数据和结果L9(34)

4讨论

4.1由表2可知，在实验范围内金银花醇提取工艺的影响规律为D＞C＞B＞A。即乙醇的浓度为主要因素，在生产工艺中应严格控制。其次为回流时间、加醇量和回流次数。

4.2采用HPLC法测定绿原酸含量，无需经多步提取分离处理，方法简单，具有较高的准确性及精密度。

5结论

金银花提取工艺的最佳条件为A2B2C3D2，即最佳提取工艺为85％的乙醇、加醇量为药材10倍量、回流时间为2.5h、回流次数为2次。

银黄可溶性粉的质量标准研究

银黄可溶性粉的主要成分为黄芩苷、绿原酸，为纯中药制剂，具有清热解毒、抗菌消炎的功能。黄芩中的主要生物活性成分是黄芩苷，其最主要的药理作用是抗炎；金银花中的主要生物活性成分是绿原酸，对多种致病菌均有一定的抑制作用，同时金银花还有明显的抗炎解热作用。因此，以黄芩苷、绿原酸作为指标成分对银黄可溶性粉进行了含量测定。

1仪器与试药

仪器：SHIMADZU LC-10ATVP高效液相色谱仪；SPD-10AVP紫外可见检测器；色谱柱：SHIMADZU ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)

试药：银黄可溶性粉(本厂)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸(分析纯)；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；流动相用水为双蒸水；其余试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1金银花照高效液相色谱法测定。

2.1.1色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90)为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。

2.1.2对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50％甲醇制成50μg/ml的溶液，过滤备用。

2.1.3供试品溶液的制备精密量取本品1g，置于10ml的容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密吸取该溶液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4样品的测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下记录色谱图，以外标法计算样品含量。见图2、图3。

2.1.5标准曲线的制备及线性关系的考察

绿原酸标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件测定。以时间为横坐标，强度为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为Y＝3.277258e^-005X+5.522471(r＝0.9992727)，表明绿原酸的进样量在20-60μg范围内呈良好的线性关系。

2.1.6精密度实验

精密吸取浓度为50μg/ml的绿原酸对照品溶液重复进样5次，其RSD为0.79％，结果见表1。

2.1.7重复性实验

取同一批次银黄可溶性粉5袋，按照上述样品溶液的制备方法进行制备，并在上述色谱条件下测定。结果见表2。

2.1.8加样回收实验

分别取已知含量的银黄可溶性粉5份，每份10g，加入绿原酸对照品，按含量测定项下的方法进行测定，其平均回收率为99.86％，RSD＝1.07％，结果见表3。实验表明，本法准确性较好。

表1绿原酸精密度结果(n＝5)

表2银黄可溶性粉中绿原酸重现性测定结果(n＝5)

表3银黄可溶性粉中绿原酸加样回收率测定结果(n＝5)

2.1.9样品含量测定

分别取不同批号的银黄可溶性粉，精密称量，按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定，每一批次重复测定三次，取平均值，由标准曲线计算含量，结果见表4。

表4银黄可溶性粉中绿原酸含量测定结果(n＝5)

2.2黄芩照高效液相色谱法测定。

2.2.1色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

2.2.2对照品溶液的制备取黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷50μg)。

2.2.3供试品溶液的制备供试品溶液的制备精密量取本品1g，置于10ml的容量瓶中，加水至刻度，使溶解，摇匀，精密量取该溶液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4样品的测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下记录色谱图，以外标法计算样品含量。见图4、图5。

2.2.5标准曲线的制备及线性关系的考察

黄芩苷标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件测定。以时间为横坐标，强度为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为Y＝3.016381e-005X-1.584303(r＝0.9980298)，黄芩苷在20-60μg范围内有良好的线性关系。

2.2.6精密度实验

精密吸取浓度为50μg/ml的黄芩苷对照品溶液重复进样5次，其RSD为0.96％，结果见表5。

表5黄芩苷精密度测定结果(n＝5)

2.2.7重复性实验

取同一批次银黄可溶性粉5袋，按照上述样品溶液的制备方法进行制备，并在上述色谱条件下测定。结果见表6。

表6银黄可溶性粉中黄芩苷重现性测定结果(n＝5)

2.2.8加样回收实验

分别取已知含量的银黄可溶性粉5份，每份5g，加入黄芩苷对照品，按含量测定项下的方法进行测定，其平均回收率为99.35％，RSD＝1.72％，结果见表7。实验表明，本法准确性较好。

表7银黄可溶性粉中黄芩苷加样回收率测定结果(n＝5)

2.2.9样品含量测定

分别取不同批号的银黄可溶性粉，精密称量，按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定，每一批次重复测定三次，取平均值，由标准曲线计算含量，结果见表8。

表8银黄可溶性粉中黄芩苷含量测定结果(n＝5)

2.3含量限度

根据本品实际测定的结果制定。检测了10批样品，数据见表9。

表9银黄可溶性粉含量测定结果

中药提取质量受多方面的影响，如在原药材方面受药材基源、产地、采收季节、药材质量、炮制的影响；在提取方面受提取温度、提取时间、药材的粉碎度、提取的溶剂等影响。基于以上原因，我们在不影响临床疗效的前提下，制定含量限度时适当的降低黄芩苷和绿原酸的含量，规定本品每克含金银花以绿原酸(C16H1809)计，不得少于1.7mg；含黄芩以黄芩苷(C21H18011)计，不得少于18.0mg。

银黄可溶性粉的稳定性研究

银黄可溶性粉为金银花、黄芩经提取精制而成。具有清热解毒，宣肺化痰，止咳平喘，燥湿止痢等功能。本文旨在研究银黄可溶性粉的稳定性，考察产品质量及为临床用药提供依据。

1仪器与药品

1.1仪器

SHIMADZU LC-10ATVP高效液相色谱仪；SPD-10AVP紫外可见检测器；色谱柱：SHIMADZU ODSC18柱(150×4.6mm，5μm)；雷磁PHS-25型数显pH计(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2试剂

黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钾(分析纯)；磷酸(分析纯)；甲醇(色谱纯)；流动相用水为双蒸水；氢氧化钠(分析纯)；硝酸铝(分析纯)；三氯化铁(分析纯)；硝酸钠(分析纯)；银黄可溶性粉由本厂提供。

2实验方法

2.1加速实验

按药典规定的加速试验法，三批样品在40±2℃，相对湿度75±5％的条件下放置六个月，每个月定期取样一次，然后测定银黄可溶性粉中绿原酸和黄芩苷的含量、并观察性状、混合均匀度等指标，根据结果预测有效期。

2.2光照加速实验

取供试样品三批，置于光厨中，在照度4500±500Lx的条件下放置10天，于第5、10天定时取样，然后测定银黄可溶性粉中绿原酸和黄芩苷的含量，并观察外观、色泽、混合均匀度等，根据结果预测有效期。

2.3留样观察法

2.3.1供试品三批，按市售包装，在温度25±2℃，相对湿度60±10％的条件下放置12个月。每3个月取样一次，分别于0、3、6、9、12个月，然后对银黄可溶性粉中绿原酸和黄芩苷的含量、性状等进行检测。

2.3.212个月以后继续观察，分别于18、24个月取样进行检测。将结果与0个月比较，确定药品的有效期。由于实测数据的分散性，按95％可信限进行统计分析，得出合理的有效期。如三批统计分析结果差别较小，则取其平均值为有效期限；若差别较大，则取其最短的为有效期。数据表明很稳定的药品，不作统计分析。

2.4鉴别实验

取本品1g，加75％乙醇9ml，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg、0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下(365nm)下检视。观察供试品色谱种，在与对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。

3实验结果

3.1银黄可溶性粉加速试验结果

银黄可溶性粉在40±2℃，相对湿度75±5％的条件下放置六个月，其外观性状无变化，银黄可溶性粉中黄芩苷和绿原酸的含量变化差异不显著。依据美国食品药物管理局(FDA)的要求标准，可初步确定其稳定性为二年。结果见表1。

表1不同批次银黄可溶性粉加速试验结果

注：绿原酸含量绿含(mg/ml)黄芩苷含量黄含(mg/ml)混合均匀的棕黄色粉末+3.2银黄可溶性粉光加速试验结果

银黄可溶性粉在照度4500±500Lx的条件下放置10天，于第5、10天定时取样，其外观性状变化不明显，银黄可溶性粉中黄芩苷、绿原酸的含量变化差异不显著。结果见表2。

表2不同批次银黄可溶性粉光加速试验结果

注：绿原酸含量绿含(mg/ml)黄芩苷含量黄含(mg/ml)混合均匀的棕黄色粉末+

3.3留样观察结果

3.3.1银黄可溶性粉在接近实际贮存条件下留置12个月，其外观及色泽无显著变化，黄芩苷、绿原酸含量的变化差异不显著，质量指标差别很小，可确定有效期为两年。结果见表3。

表3不同批次银黄可溶性粉留样观察结果

注：绿原酸含量绿含(mg/ml)黄芩苷含量黄含(mg/ml)混合均匀的棕黄色粉末+

3.3.2银黄可溶性粉在常温下留置两年，其外观及色泽无显著变化，黄芩苷、绿原酸含量的变化差异不显著，质量指标差别很小，有效期可达两年。结果见表4。

表4银黄可溶性粉常温贮存24个月的结果

注：绿原酸含量绿含(mg/ml)黄芩苷含量黄含(mg/ml)混合均匀的标黄色粉末+3.4做鉴别试验时，供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显一相同的暗绿色斑点。

4结论

研究结果表明，银黄可溶性粉在温度加速试验和光加速条件下性状变化不明显；绿原酸和黄芩苷的含量稳定，依据美国食品药物管理局(FDA)的要求标准，可初步确定其稳定性为两年。通过留样观察法考察银黄可溶性粉的稳定性，放置两年，各指标变化很小，所以其有很好的稳定性。

本技术领域中的相关技术人员应当熟悉到，以上所述实施例仅是用来说明本发明的目的，而并非用作对本发明的限定，只要在本发明的实质范围内，对上述实施例所做的变化、变型(如对时间、温度、浓度等所做的类似调整)都将落在本发明的权利要求保护范围内。

Claims (2)

1.一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法，包括如下步骤：取黄芩适量，加水煎煮2至4次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.35；用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅匀，用30-40％氢氧化钠调节pH值至6.5-7.5；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0-2.0，60-80℃保温，静置，滤过；沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至6.5-7.5；挥尽乙醇，减压干燥，即黄芩提取物；取金银花适量，加水煎煮1至3次，合并煎煮液，滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(50-70℃)的清膏；加乙醇使含醇量达80-90％，静置24小时，过滤；滤渣加乙醇使含醇量达75-95％，静置18-30小时，过滤；合并两次的滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30(50-70℃)；喷雾干燥，即得金银花提取物；合并黄芩提取物及金银花提取物，加碳酸氢钠定量，而后加葡萄糖至定量，混合均匀，即得银黄可溶性粉。其特征在于：该制剂由黄芩、金银花分别经提取之后组合而成。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度银黄可溶性粉的制备及质量检测方法，其特征在于：每100g本品相当于原生药70-90g。