CN110777089A - 一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法 - Google Patents

一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物工程技术领域，提供了一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法，所涉及的高产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY19‑09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402。将该菌株应用于纳豆的生产中，可获得纳豆激酶含量为4000‑5000IU/g的纳豆，高于市售纳豆激酶含量。

Description

一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，提供了一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法。
背景技术
纳豆是将大豆煮熟后，接种纳豆菌后发酵形成的食品，纳豆具有很高的营养价值，其蛋白质、纤维素、钙、铁、维生素B、维生素PP、维生素E的含量均高于蒸煮大豆，特别是维生素B的含量比蒸煮大豆高6倍以上。纳豆中还含有较高的活性物质，如纳豆激酶(Nattokinase，NK)、异黄酮、大豆磷脂、糖化酶、超氧化物歧化酶、皂甙素、生育酚、吡啶二羧酸、维生素K2等。自古以来，纳豆在民间一直作为药食兼用食品。大量研究表明纳豆具有多种药理保健功能，经常食用可起到强身健体、预防疾病的作用。
纳豆作为一种功能性食品，纳豆激酶是其最具代表性的功效成分。纳豆激酶不仅具有纤溶酶原激活物活性，而且还能直接消化利用蛋白质纤维。纳豆激酶的体内外溶栓性质通过实验也已得到确定，在体内作用迅速，持续时间长，还能激活体内的纤维蛋白酶，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性。因此纳豆激酶通常作为优化纳豆生产工艺的重要指标，然而目前市售纳豆酶活普遍较低。李宏梁在文章《国产与进口鲜纳豆活菌数、感官品质及酶活的分析比较》中检测5种国产鲜纳豆和5种日本鲜纳豆激酶活力，酶活在400～2500IU/g之间。
如何提供纳豆的酶活成为本领域亟待解决的问题，而筛选具有高活力纳豆激酶生产能力的菌株是解决这一问题的关键。
发明内容
本发明针对上述技术存在的不足，提供一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法，所涉及的高产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，菌株代码为YJY19-09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402。将该菌株应用于纳豆的生产中，可获得纳豆激酶含量为4000-5000IU/g的纳豆，高于市售纳豆激酶含量。
本发明提供的具体技术方案是：
一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，菌株命名为YJY19-09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402，形态特征为：革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛；该菌株在普通营养琼脂上形成表面粗糙、白色、有褶皱的菌落。
该菌株YJY19-09的来源：发明人采集滨州地区自制农家豆豉(黄豆先浸泡蒸煮再自然发酵)样品分离纯化单菌落，经过酪素培养基初筛、发酵纳豆检测纳豆激酶活性复筛，并对其生理生化特性、遗传稳定性深入研究后，最终筛选出一株高产纳豆激酶、利用该菌株生产获得高纳豆激酶活性纳豆、易培养且具有遗传稳定性的菌株。发明人对该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心进行了生物保藏，保藏编号为CGMCC NO.18402，经检测其为存活状态。
发明人同时对菌株YJY19-09进行了16SrDNA测序，其序列如Seq ID No：1所示，该序列为菌株的16SrDNA的全序列。
将所测得的16SrDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株YJY19-09的16SrDNA的核苷酸序列与芽孢杆菌属(Bacillussp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性，与其中明确标记为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的菌株有100％的同源性；鉴定其为一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。
利用该菌株进行高纳豆激酶活性纳豆的生产，具体步骤包括：
(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；
(2)制备纳豆：大豆浸泡、蒸煮、发酵、冷藏。
其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；
所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，将活化的试管斜面菌种用10mL/每管灭菌后的蒸馏水制成菌体悬浮液，冲洗入100mL培养基中，振荡培养12～18h，得到种子液；
上述液体种子培养基组成及培养条件如下：
种子培养基组成，按重量百分比计为：蛋白胨0.8％～1.2％，牛肉膏0.3％～0.5％，氯化钠0.3％～0.5％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
种子制备过程的培养条件为：培养温度32℃～37℃，摇床转速150r/min～180r/min，培养时间为18～24h，检测OD660＝1.5～2.0时停止培养；
所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％～10％(v/w)的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，进行深层发酵，获得液体芽孢；
液体深层发酵培养基组成和发酵条件如下：
液体深层发酵培养基组成，按重量百分比计为：麦芽糖2％～4％、蛋白胨0.5％～0.8％、氯化铵0.05％～0.25％、硫酸镁0.06％～0.12％、硫酸氢二钾0.08％～0.13％、硫酸二氢钾0.1％～0.3％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
液体深层发酵条件为：培养温度32℃～37℃，摇床转速150r/min～180r/min，培养时间为20～28h，检测芽孢含量达到1～3×109CFU/mL停止发酵；
所述步骤(2)中纳豆制备过程如下：
所述的浸泡大豆具体过程为：将大豆充分洗净后，按重量比大豆：自来水＝1：3～5，在20～25℃下浸泡12～15h；
所述的蒸煮大豆具体过程为：将浸泡的大豆沥干水分，控制蒸灌的温度不低于100℃，蒸煮浸泡的大豆40～60分钟；
所述的发酵纳豆具体过程为：将蒸煮好的大豆冷却至70～80℃，按重量比蒸煮大豆：液体芽孢＝1000：2～4接种液体种子，分装至30～50g/盒，接触空气，36～40℃发酵16～24h；
所述的冷藏纳豆具体过程为：将发酵好的纳豆密封放入4～6℃的冷藏柜，冷藏20～28h，完成后熟；
利用本发明所获得的菌株发酵大豆，利用纤维蛋白平板法进行检测，结果显示能获得纳豆激酶含量为4000-5000IU/g的纳豆。
利用上述枯草芽孢杆菌发酵纳豆具有如下优势：
(1)液体种子采用芽孢接种，增加了种子的环境适应力；
(2)纳豆制备采用高温(70～80℃)接种，只保留了芽孢种子的活力，保证了纯种发酵；
(3)利用该菌株发酵大豆，发酵时间由现有技术的36～48h缩短至16～24h，提高了发酵效率，节约了发酵成本；
(4)利用该菌株发酵大豆，能获得纳豆激酶含量为4000-5000IU/g的纳豆，高于市售纳豆激酶含量。
保藏信息，
保藏时间：2019年8月20日
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心
保藏编号：CGMCC NO.18402
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所
分类命名:枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围，除特殊说明外，下述实施例中均采用常规现有技术完成，下述实施例中所采用的菌种均为保藏号CGMCC NO.18402的菌种。
实施例1
一种高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，具体步骤包括：
(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；
(2)制备纳豆：大豆浸泡、蒸煮、发酵、冷藏；
其中其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；
所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，将活化的试管斜面菌种用10mL/每管灭菌后的蒸馏水制成菌体悬浮液，冲洗入100mL培养基中，振荡培养12～18h，得到种子液；
种子培养基组成，按重量百分比计为：蛋白胨0.8％，牛肉膏0.5％，氯化钠0.4％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
种子制备过程的培养条件为：培养温度35℃，摇床转速180r/min，培养时间为18h，检测OD660＝1.5时停止培养；
所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％～10％(v/w)的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，进行深层发酵，获得液体芽孢；
液体深层发酵培养基组成，按重量百分比计为：麦芽糖2％、蛋白胨0.7％、氯化铵0.05％、硫酸镁0.10％、硫酸氢二钾0.13％、硫酸二氢钾0.2％，加水至1000mL，pH7.2；
液体深层发酵条件为：培养温度35℃，摇床转速150r/min，培养时间为20h，检测芽孢含量达到1×109CFU/mL停止发酵；
所述的浸泡大豆具体过程为：将大豆充分洗净后，按重量比大豆：自来水＝1：3，加水在20～25℃浸泡13h；
所述的蒸煮大豆具体过程为：将浸泡的大豆沥干水分，控制蒸灌的温度100℃左右，蒸煮浸泡的大豆40分钟；
所述的发酵纳豆具体过程为：将蒸煮好的大豆冷却至70～80℃，按重量比蒸煮大豆：液体芽孢＝1000：4接种液体种子，分装至30～50g/盒，接触空气，36℃发酵24h；
所述的冷藏纳豆具体过程为：将发酵好的纳豆放入4～6℃的冷藏柜，冷藏24h，完成后熟；
获得纳豆激酶含量为4000IU/g的纳豆。
实施例2
一种高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，具体步骤包括：
(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；
(2)制备纳豆：大豆浸泡、蒸煮、发酵、冷藏；
其中其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；
所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，将活化的试管斜面菌种用10mL/每管灭菌后的蒸馏水制成菌体悬浮液，冲洗入100mL培养基中，振荡培养12～18h，得到种子液；
种子培养基组成，按重量百分比计为：蛋白胨1.2％，牛肉膏0.4％，氯化钠0.3，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
种子制备过程的培养条件为：培养温度32℃，摇床转速160r/min，培养时间为24h，检测OD660＝1.8时停止培养；
所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％～10％(v/w)的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，进行深层发酵，获得液体芽孢；
液体深层发酵培养基组成，按重量百分比计为：麦芽糖3％、蛋白胨0.5％、氯化铵0.25％、硫酸镁0.12％、硫酸氢二钾0.10％、硫酸二氢钾0.1％，加水至1000mL，pH7.4；
液体深层发酵条件为：培养温度32℃，摇床转速180r/min，培养时间为24h，检测芽孢含量达到3×109CFU/mL停止发酵；
所述的浸泡大豆具体过程为：将大豆充分洗净后，按重量比大豆：自来水＝1：5，加水在20～25℃浸泡15h；
所述的蒸煮大豆具体过程为：将浸泡的大豆沥干水分，控制蒸灌的温度100℃左右，蒸煮浸泡的大豆50分钟；
所述的发酵纳豆具体过程为：将蒸煮好的大豆冷却至70～80℃，按重量比蒸煮大豆：液体芽孢＝1000：2接种液体种子，分装至30～50g/盒，接触空气，40℃发酵22h；
所述的冷藏纳豆具体过程为：将发酵好的纳豆放入4～6℃的冷藏柜，冷藏20h，完成后熟；
获得纳豆激酶含量为5000IU/g的纳豆。
实施例3
一种高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，具体步骤包括：
(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；
(2)制备纳豆：大豆浸泡、蒸煮、发酵、冷藏；
其中其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；
所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，将活化的试管斜面菌种用10mL/每管灭菌后的蒸馏水制成菌体悬浮液，冲洗入100mL培养基中，振荡培养12～18h，得到种子液；
种子培养基组成，按重量百分比计为：蛋白胨1.0％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
种子制备过程的培养条件为：培养温度37℃，摇床转速150r/min，培养时间为20h，检测OD660＝2.0时停止培养；
所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照5％～10％(v/w)的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，进行深层发酵，获得液体芽孢；
液体深层发酵培养基组成，按重量百分比计为：麦芽糖4％、蛋白胨0.8％、氯化铵0.15％、硫酸镁0.06％、硫酸氢二钾0.08％、硫酸二氢钾0.3％，加水至1000mL，pH7.3；
液体深层发酵条件为：培养温度37℃，摇床转速160r/min，培养时间为28h，检测芽孢含量达到2×109CFU/mL停止发酵；
所述的浸泡大豆具体过程为：将大豆充分洗净后，按重量比大豆：自来水＝1：4加水在20～25℃浸泡12h；
所述的蒸煮大豆具体过程为：将浸泡的大豆沥干水分，控制蒸灌的温度100℃左右，蒸煮浸泡的大豆60分钟；
所述的发酵纳豆具体过程为：将蒸煮好的大豆冷却至70～80℃，按重量比蒸煮大豆：液体芽孢＝1000：3接种液体种子，分装至30～50g/盒，接触空气，38℃发酵16h；
所述的冷藏纳豆具体过程为：将发酵好的纳豆放入4～6℃的冷藏柜，冷藏28h，完成后熟；
获得纳豆激酶含量为4500IU/g的纳豆。
比较例
以实施例1中的纳豆制备方法与文献《纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良》纳豆制备方法进行各个阶段的对比，结果如下：
表1实施例1中的纳豆制备方法优缺点比较
Figure BDA0002231034650000051
通过上述对比可以看出，采用本发明的高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆与文献《纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良》相比优势明显，液体种子芽孢含量高、纳豆发酵时间短、成本低、成品纳豆激酶含量高。
序列表
<110> 黄河三角洲京博化工研究院有限公司
<120> 一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1416
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
<400> 1
tgcaagtcga gcggacagat gggagcttgc tccctgatgt tagcggcgga cgggtgagta 60
acacgtgggt aacctgcctg taagactggg ataactccgg gaaaccgggg ctaataccgg 120
atggttgttt gaaccgcatg gttcaaacat aaaaggtggc ttcggctacc acttacagat 180
ggacccgcgg cgcattagct agttggtgag gtaacggctc accaaggcaa cgatgcgtag 240
ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga 300
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tttcttaagt ctgatgtgaa agcccccggc tcaaccgggg agggtcattg gaaactgggg 600
aacttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag cggtgaaatg cgtagagatg 660
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agtgttaggg ggtttccgcc ccttagtgct gcagctaacg cattaagcac tccgcctggg 840
gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 900
catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cctctgacaa 960
tcctagagat aggacgtccc cttcgggggc agagtgacag gtggtgcatg gttgtcgtca 1020
gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg atcttagttg 1080
ccagcattca gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga 1140
tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggacagaa 1200
caaagggcag cgaaaccgcg aggttaagcc aatcccacaa atctgttctc agttcggatc 1260
gcagtctgca actcgactgc gtgaagctgg aatcgctagt aatcgcggat cagcatgccg 1320
cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccacgaga gtttgtaaca 1380
cccgaagtcg gtgaggtaac cttttaggag ccagcc 1416

Claims (6)

1.一株高产纳豆激酶的菌株，保藏编号为CGMCC NO.18402，命名为YJY19-09，属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
2.根据权利要求1所述的高产纳豆激酶的菌株，其特征在于：其16S rDNA的核苷酸序列如Seq ID No:1所示。
3.一种高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，其特征在于：具体步骤包括：
(1)制备液体种子：包括菌种活化、种子制备、液体深层发酵；
(2)制备纳豆：大豆浸泡、蒸煮、发酵、冷藏；
其中步骤(1)中所述的菌种活化具体为：将4℃条件下保存在营养琼脂培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h～8h；
所述的种子制备具体过程为：在无菌操作台上，将活化的试管斜面菌种用10mL/每管灭菌后的蒸馏水制成菌体悬浮液，冲洗入100mL培养基中，振荡培养12～18h，得到种子液；
所述的液体深层发酵具体过程为：取制备好的种子液，按照v/w 5％～10％的接种量接种于灭菌的发酵培养基中，进行深层发酵，获得液体芽孢。
4.根据权利要求3所述的高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，其特征在于：
所述的浸泡大豆具体过程为：将大豆充分洗净后，按重量比大豆：自来水＝1：3～5加水，在20～25℃下浸泡12～15h；
所述的蒸煮大豆具体过程为：将浸泡的大豆沥干水分，控制蒸灌的温度不低于100℃，蒸煮浸泡的大豆40～60分钟；
所述的发酵纳豆具体过程为：将蒸煮好的大豆冷却至70～80℃，按重量比蒸煮大豆：液体芽孢＝1000：2～4接种液体种子，分装至30～50g/盒，接触空气，36～40℃发酵16～24h；
所述的冷藏纳豆具体过程为：将发酵好的纳豆密封放入4～6℃的冷藏柜，冷藏20～28h，完成后熟。
5.根据权利要求3所述的高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，其特征在于：
所述液体种子培养基组成及培养条件如下：
种子培养基组成，按重量百分比计为：蛋白胨0.8％～1.2％，牛肉膏0.3％～0.5％，氯化钠0.3％～0.5％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
种子制备过程的培养条件为：培养温度32℃～37℃，摇床转速150r/min～180r/min，培养时间为18～24h，检测OD660＝1.5～2.0时停止培养。
6.根据权利要求3所述的高纳豆激酶活性纳豆的生产方法，其特征在于：
所述液体深层发酵培养基组成和发酵条件如下：
液体深层发酵培养基组成，按重量百分比计为：麦芽糖2％～4％、蛋白胨0.5％～0.8％、氯化铵0.05％～0.25％、硫酸镁0.06％～0.12％、硫酸氢二钾0.08％～0.13％、硫酸二氢钾0.1％～0.3％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；
液体深层发酵条件为：培养温度32℃～37℃，摇床转速150r/min～180r/min，培养时间为20～28h，检测芽孢含量达到1～3×109CFU/mL停止发酵。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111748502A (zh) * 2020-07-31 2020-10-09 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法
CN112812986A (zh) * 2020-12-21 2021-05-18 苏州微克生活科技有限公司 一种高产纳豆激酶和维生素k2的枯草芽孢杆菌xtk1001及其应用
CN113142494A (zh) * 2021-04-26 2021-07-23 中国科学院合肥物质科学研究院 一种纳豆及其制备方法与应用
CN115181684A (zh) * 2022-04-08 2022-10-14 浙江珲达生物科技有限公司 一种mk-7的发酵培养基

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001172192A (ja) * 1999-12-21 2001-06-26 Yasuhiko Fujisaki 治療食
CN103695359A (zh) * 2014-01-09 2014-04-02 湖北工业大学 一种产纳豆激酶枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN108029972A (zh) * 2017-12-19 2018-05-15 山西农业大学 一种无氨味纳豆发酵的制备工艺

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001172192A (ja) * 1999-12-21 2001-06-26 Yasuhiko Fujisaki 治療食
CN103695359A (zh) * 2014-01-09 2014-04-02 湖北工业大学 一种产纳豆激酶枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN108029972A (zh) * 2017-12-19 2018-05-15 山西农业大学 一种无氨味纳豆发酵的制备工艺

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王正刚等: "纳豆激酶的发酵工艺研究", 《氨基酸和生物资源》 *
祖国仁等: "纳豆菌固体发酵条件及产品成分分析", 《食品工业科技》 *
韩烨等: "纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良", 《山西农业科学》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111748502A (zh) * 2020-07-31 2020-10-09 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法
CN112812986A (zh) * 2020-12-21 2021-05-18 苏州微克生活科技有限公司 一种高产纳豆激酶和维生素k2的枯草芽孢杆菌xtk1001及其应用
CN113142494A (zh) * 2021-04-26 2021-07-23 中国科学院合肥物质科学研究院 一种纳豆及其制备方法与应用
CN115181684A (zh) * 2022-04-08 2022-10-14 浙江珲达生物科技有限公司 一种mk-7的发酵培养基
CN115181684B (zh) * 2022-04-08 2024-03-01 浙江珲达生物科技有限公司 一种mk-7的发酵培养基

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