CN101993846A - 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 - Google Patents
一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101993846A CN101993846A CN 201010504167 CN201010504167A CN101993846A CN 101993846 A CN101993846 A CN 101993846A CN 201010504167 CN201010504167 CN 201010504167 CN 201010504167 A CN201010504167 A CN 201010504167A CN 101993846 A CN101993846 A CN 101993846A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- strain
- culture
- chymosin
- production
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 33
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 33
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 title abstract description 25
- 229940080701 chymosin Drugs 0.000 title abstract description 23
- GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N n,n,5,7-tetramethyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-amine Chemical compound C1=C(C)C=C2C(N(C)C)CCCC2=C1C GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 38
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 10
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000012204 lemonade/lime carbonate Nutrition 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 abstract description 19
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 abstract description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 9
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 8
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 8
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 210000003165 abomasum Anatomy 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000021249 α-casein Nutrition 0.000 description 2
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 2
- 235000021246 κ-casein Nutrition 0.000 description 2
- 244000099147 Ananas comosus Species 0.000 description 1
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- -1 Firstly Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 1
- 241000235525 Rhizomucor pusillus Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法，属于微生物发酵技术领域。本发明公开了一株产凝乳酶的菌株，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2010259。应用该菌株通过液体发酵生产凝乳酶，步骤为(1)斜面培养；(2)种子培养；(3)液体发酵培养：将培养好的种子接入发酵培养基中，接种量为0.1%~0.2%，在32~36℃培养96~136h，摇床转速150rpm。本发明的优点在于：枯草芽孢杆菌是常见的非致病菌，适合凝乳酶的生产；利用枯草芽孢杆菌CCTCCNO：M2010259液体发酵生产凝乳酶具有产酶水平高，生产周期短，生产成本低，易于控制生长条件，酶提取方便等诸多优点，完全具有工业化生产的潜力。
Description
技术领域
一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法，具体的说是一种枯草芽孢杆菌株，以及利用该菌株发酵生产凝乳酶的方法。本发明属于微生物发酵技术领域。
背景技术
凝乳酶是乳酪生产中的关键酶，它使原奶凝固分为两个阶段：酪蛋白微胶粒中α-酪蛋白和β-酪蛋白在κ-酪蛋白作用下不会发生自发凝结，首先凝乳酶专一性的将κ-酪蛋白分解为p-κ-酪蛋白和一种巨肽，使酪蛋白的微胶粒失去稳定性；然后在Ca2+作用下p-κ-酪蛋白及α-酪蛋白和β-酪蛋白之间形成化学键从而形成沉淀。
凝乳酶传统上利用牛犊第四胃(皱胃)提取制作，随着乳酪产业不断扩大，单纯靠宰杀幼畜的方法来生产凝乳酶已经不能满足现代工业对凝乳酶的需求。上世纪五十年代以来，研究者一直努力寻求新的凝乳酶来源，目前除动物凝乳酶外，还有植物凝乳酶(无花果树液和菠萝果实)和微生物凝乳酶(主要来源于真菌)。微生物的生长特性使得微生物凝乳酶具有广阔的发展前景，关于微生物凝乳酶的研究主要集中在霉菌如米黑毛霉(Mucor miehei)和微小毛霉(Mucor pusillus)的固态发酵产酶方面，而关于细菌液态发酵的研究报道较少。
与霉菌固体发酵相比，细菌液体发酵生产凝乳酶具有生长周期短、生产成本低、易于控制生长条件等诸多优点，近几年得到研究者更多的关注。但是，细菌生产的凝乳酶活性和霉菌相比，还具有一定的差距。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有高产凝乳酶活性的枯草芽孢杆菌菌株，以及利用该菌株液体发酵生产凝乳酶的方法。
本发明的技术方案：一株产凝乳酶的菌株，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2010259。
用所述的枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259发酵生产凝乳酶的方法，通过以下步骤实现： (1)斜面培养：将枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259接种于斜面培养基上，在33℃下培养24小时；(2)种子培养：将斜面长好的菌种接入种子培养基中，在33℃培养18小时，摇床转速150转/分钟；(3)液体发酵培养：将培养好的种子接入发酵培养基中，接种量为体积百分比0.1％～0.2％，在32～36℃培养96～136小时，摇床转速150转/分钟；发酵培养基组成，单位为克/升：葡萄糖0～20，麸皮15～30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，用自来水配制，pH自然，121℃灭菌30min。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC NO：M 2010259筛选、分离与鉴定详见实施例1。
上述技术方案中所述的斜面培养基为(单位为克/升)：葡萄糖20，酵母膏10，琼脂20，用自来水配制，pH自然，115℃灭菌20min。
上述技术方案中所述的种子培养基为(单位为克/升)：麸皮30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，用自来水配制，pH自然，121℃灭菌30min。
凝乳酶活力的测定：用0.01mol/L氯化钙溶液配制质量浓度12％脱脂奶粉溶液，室温放置40min后使用，当天配制。取5mL 12％的脱脂奶粉溶液在35℃水浴锅中保温10min，加适量35℃预热10min的酶液(发酵液5000rpm离心5min获得之清液)，立即摇匀，开始计时，把试管倾斜45°，旋转试管，观察壁上出现絮状沉淀时为凝乳终点，记录凝乳时间。40min凝固1mL脱脂乳的酶量定义为一个索氏单位(Soxhlet Unit，SU)。 
本发明的有益效果：枯草芽孢杆菌是常见的非致病菌，适合凝乳酶的生产；利用枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶具有产酶水平高，生产周期短，生产成本低，易于控制生长条件，酶提取方便等诸多优点，完全具有工业化生产的潜力。
生物材料样品保藏：一株产凝乳酶的菌株，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T，该菌株已在中国典型培养物保藏中心保藏，简称CCTCC，保藏日期 2010年9月30日，保藏编号为CCTCC NO：M 2010259。
具体实施方式
在下面所述的所有具体实施例中，如无特殊说明，均为本领域常用方法。
实施例1枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC NO：M 2010259筛选分离与鉴定一、枯草芽孢杆菌T(Bacillus subtilis T)筛选分离枯草芽孢杆菌T菌株是从无锡市三里桥粮油市场购买的麸皮中分离筛选得到的。取6克麸皮到含有10粒小玻璃珠的250毫升灭菌三角瓶中，加入100毫升无菌生理盐水，在摇床上150转/分钟振荡培养20分钟，静置2小时；然后再将10毫升的上述混合液转入装有90毫升的营养肉汤培养基(蛋白胨5g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L)的三角瓶中，在33℃、150转/分钟的条件下培养12小时；取上述培养液，将其稀释成10-6、10-7、10-8倍稀释液，各浓度稀释液取100微升涂布在牛奶培养基平板(脱脂奶粉25g/L，琼脂16g/L)上，每个浓度三次重复，33℃培养24小时。
产凝乳酶菌株可水解培养基形成透明圈。挑选透明圈较大的单个菌落多次纯化，将纯化后的菌株接种到斜面培养基(葡萄糖20g/L，酵母浸出液10g/L，琼脂20g/L)上，33℃培养24小时后放于4℃冰箱保存待用。将4℃冰箱保存待用的菌株接种到营养肉汤培养基中，33℃培养144小时，并检测培养过程中凝乳酶活的变化，从结果中筛选出一株产凝乳酶活性最高的菌株，定名为T。
二、枯草芽孢杆菌T(Bacillus subtilis T)鉴定(1)形态特征在牛奶培养基平板上培养菌体成杆状，芽孢中生，椭圆形，包囊不膨大。35℃培养36小时，菌落表面干燥有褶皱，直径2～5毫米，不透明，无光泽，边缘不整齐有伞状皱褶，可扩散生长，微黄色，无伴孢晶体。
(2)16S rDNA测定利用PCR技术扩增该菌的16S rDNA序列，其寡核苷酸引物为：5’-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(上游引物)和5’-CGGTTACC TTGTTACGACTT-3’(下游引物)。
通过DNA自动测序仪(美国Applied Biosystems公司，型号ABI 3130) 测定扩增的16S rDNA序列，其序列如SEQ ID NO：1。
将测序结果与GeneBank中已知的16S rDNA序列进行同源性比较，发现与Bacillus subtilis strain BG-B38(登入号为EU869257.1)的同源性最高，为99％。
(3)生理生化特征根据《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠、蔡妙英编，科学出版社，2001)对菌株T进行生理生化鉴定(如下表)，其生理生化特征与枯草芽孢杆菌相吻合。 
根据菌体革兰氏染色、菌落形态观察、生理生化测试及16S rDNA序列的比对结果，该菌株与枯草芽孢杆菌相吻合，因此将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
实施例2枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶(1)斜面培养：将枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259接种于斜面培养基上，在33℃下培养24小时。所用斜面培养基为(单位为克/升)：葡萄糖20，酵母膏10，琼脂条20，pH自然，115℃灭菌20分钟。
(2)种子培养：将斜面长好的菌种用接种环取一环接入种子培养基中， 在33℃培养18小时，摇床转速150转/分钟。所用种子培养基为(单位为克/升)：麸皮30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然；每250毫升三角瓶装30毫升种子培养基，121℃灭菌30分钟。
(3)液体发酵培养：所用发酵培养基为(单位为克每升)：麸皮30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为50微升，摇床转速150转/分钟，在32℃培养136小时。培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为880SU/毫升。
实施例3枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为100微升，在32℃培养96小时，摇床转速150转/分钟。所用发酵培养基为(单位为克/升)：葡萄糖20麸皮15，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。其他条件同实施例2，培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为841SU/毫升。
实施例4枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为65微升，在35℃培养120小时，摇床转速150转/分钟。所用发酵培养基为(单位为克/升)：葡萄糖16麸皮20，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。其他条件同实施例2，培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为1229SU/毫升。
实施例5枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为70微升，在36℃培养96小时，摇床转速150转/分钟。所用发酵培养基为(单位为克/升)：葡萄糖20麸皮25，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。其他条件同实施例2，培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为1054SU/毫升。
实施例6枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为100微升，在36℃培养136小时，摇床转速150转/分钟。所用发酵培养基为(单 位为克/升)：葡萄糖20麸皮30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。其他条件同实施例2，培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为955SU/毫升。
实施例7枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259液体发酵生产凝乳酶将培养好的种子接入500毫升三角瓶中，其中发酵培养基为50毫升，接种量为50微升，在33℃培养124小时，摇床转速150转/分钟。所用发酵培养基为(单位为克/升)：麸皮15，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30min。其他条件同实施例2，培养结束，发酵液的凝乳酶酶活为895SU/毫升以上已详细描述了本发明的实施方案，对本领域技术人员来说很显然可以做很多改进和变化而不会背离本发明的基本精神。所有这些变化和改进都在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一株产凝乳酶的菌株，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）T，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2010259。
2.用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M 2010259发酵生产凝乳酶的方法，其特征在于通过以下步骤实现：
（1）斜面培养：将枯草芽孢杆菌 CCTCC NO：M 2010259接种于斜面培养基上，在33℃下培养24小时；
（2）种子培养：将斜面长好的菌种接入种子培养基中，在33℃培养18小时，摇床转速150转/分钟；
（3）液体发酵培养：将培养好的种子接入发酵培养基中，接种量为体积百分比0.1%~0.2%，在32~36℃培养96~136小时，摇床转速150转/分钟；
发酵培养基组成，单位为克/升：葡萄糖 0~20，麸皮 15~30，氯化钠5，七水硫酸镁5，磷酸二氢钾2，碳酸钙3，pH自然，121℃灭菌30 min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010105041673A CN101993846B (zh) | 2010-10-12 | 2010-10-12 | 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010105041673A CN101993846B (zh) | 2010-10-12 | 2010-10-12 | 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101993846A true CN101993846A (zh) | 2011-03-30 |
| CN101993846B CN101993846B (zh) | 2012-07-11 |
Family
ID=43784601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010105041673A Active CN101993846B (zh) | 2010-10-12 | 2010-10-12 | 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101993846B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013835A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-04-03 | 山东轻工业学院 | 一种高产凝乳酶的蓝色刺孢霉菌株 |
| CN103211035A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-07-24 | 江南大学 | 一种液态型凝乳酶制剂的制备方法 |
| CN110432324A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-11-12 | 江南大学 | 一种具有抗血栓功能的枯草芽孢杆菌及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101434927A (zh) * | 2008-04-14 | 2009-05-20 | 李红玉 | 一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌 |
| CN101665779A (zh) * | 2009-05-12 | 2010-03-10 | 李红玉 | 一株诱变得到的高产稳定产凝乳酶的枯草芽孢杆菌及应用 |
-
2010
- 2010-10-12 CN CN2010105041673A patent/CN101993846B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101434927A (zh) * | 2008-04-14 | 2009-05-20 | 李红玉 | 一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌 |
| CN101665779A (zh) * | 2009-05-12 | 2010-03-10 | 李红玉 | 一株诱变得到的高产稳定产凝乳酶的枯草芽孢杆菌及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 《中国酿造》 20100531 胡永金等 一株产凝乳酶细菌的分离与鉴定 81-84 1-2 , 第5期 2 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013835A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-04-03 | 山东轻工业学院 | 一种高产凝乳酶的蓝色刺孢霉菌株 |
| CN103013835B (zh) * | 2011-12-05 | 2014-09-24 | 山东轻工业学院 | 一种高产凝乳酶的蓝色刺孢霉菌株 |
| CN103211035A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-07-24 | 江南大学 | 一种液态型凝乳酶制剂的制备方法 |
| CN103211035B (zh) * | 2013-04-12 | 2014-11-05 | 江南大学 | 一种液态型凝乳酶制剂的制备方法 |
| CN110432324A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-11-12 | 江南大学 | 一种具有抗血栓功能的枯草芽孢杆菌及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101993846B (zh) | 2012-07-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102517235B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌 | |
| CN104694424B (zh) | 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 | |
| CN101665779B (zh) | 一株诱变得到的高产稳定产凝乳酶的枯草芽孢杆菌及应用 | |
| CN110106090B (zh) | 一种粗糙脉孢菌株及其应用 | |
| CN103627662A (zh) | 一种花生慢生根瘤菌及其用途 | |
| CN102191203A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 | |
| CN109439601A (zh) | 一株产蛋白酶的菌株及其制备碱性蛋白酶的方法 | |
| CN104911169B (zh) | 一种培制蛹虫草菌丝体和纤溶酶的方法 | |
| CN110777089A (zh) | 一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法 | |
| CN116024114A (zh) | 一种肠源枯草芽孢杆菌株及其制备方法和应用 | |
| CN102334606B (zh) | 一种产乳酸枯草芽孢杆菌微生物制剂的制备方法 | |
| CN107541477A (zh) | 一种利用乳酸菌发酵液培养光合细菌的方法 | |
| CN101993846B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 | |
| CN105802892B (zh) | 一种产角蛋白酶的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 | |
| CN102417890A (zh) | 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法 | |
| CN102986536B (zh) | 一种毛柄金钱菌菌株及制备方法 | |
| CN117603889B (zh) | 饲用产酸性蛋白酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105296392A (zh) | 防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法 | |
| CN110903994B (zh) | 产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105002123B (zh) | 一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂的制备方法 | |
| CN118360203A (zh) | 一株高产蛋白酶的耐盐型高地芽孢杆菌及其应用 | |
| CN101434927A (zh) | 一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌 | |
| CN107245451A (zh) | 裂殖壶菌wzyu011及其生产凝乳酶的方法 | |
| CN104762295A (zh) | 一种耐酸耐盐兼性厌氧芽孢杆菌的制备方法 | |
| CN112592854B (zh) | 高密度保加利亚乳杆菌的发酵培养基及发酵方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200518 Address after: 271000 North Tianmen street, hi tech Zone, Shandong, Tai'an Co-patentee after: Sichuan Shengliyuan Bioengineering Co.,Ltd. Patentee after: Shandong Taishan Shengliyuan Group Co.,Ltd. Address before: Lihu Avenue Binhu District 214122 in Jiangsu province Wuxi City, No. 1800, Jiangnan University Institute of biological engineering Patentee before: Jiangnan University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230419 Address after: 611530 No.4, Kewang Road, Linqiong Town, Qionglai City, Chengdu City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Shengliyuan Bioengineering Co.,Ltd. Address before: 271000 Tai'an high tech Zone North Tianmen street, Shandong Province Patentee before: Shandong Taishan Shengliyuan Group Co.,Ltd. Patentee before: Sichuan Shengliyuan Bioengineering Co.,Ltd. |