CN104694424B - 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 - Google Patents
一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104694424B CN104694424B CN201510073251.7A CN201510073251A CN104694424B CN 104694424 B CN104694424 B CN 104694424B CN 201510073251 A CN201510073251 A CN 201510073251A CN 104694424 B CN104694424 B CN 104694424B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus amyloliquefaciens
- protease
- soya bean
- culture
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公布了一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株,属生物工程技术领域。该菌是从传统豆豉中分离纯化技术分离获得,经微生物分类学鉴定命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),已于2014年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号:CCTCC M 2014639。本发明的产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株容易培养,生产安全性高,筛选所得菌株液体发酵培养酶活达到148~2231U/mL,遗传稳定性好,其代谢产物蛋白酶容易分离纯化,且其代谢产物蛋白酶的酶活性较高,为传统豆豉工业实现科学化和的纯种培养奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,特别是涉及一种从传统豆豉中分离纯化的解淀粉芽孢杆菌菌株,该菌株对于本传统豆豉工业实现科学化和的纯种培养有着重要的意义。
背景技术
豆豉距今已有两千多年历史,具有很高营养价值和驱寒健食等功效。过去西方学者认为,枯草杆菌是一种危害甚大的腐败菌。我国先民却能化腐朽为神奇,最先用于食品酿造,由于细菌豆豉大都由家庭制作食用,古代文献少有记载,近代学者也少有涉猎,反而国外研究较多。据近代研究枯草杆菌能形成大量淀粉酶和蛋白酶,已在工业生产上广泛应用。然而,在我国由于细菌型豆豉的工业发酵沿用传统自然发酵方法,一直没有实现纯种发酵,传统自然发酵过程中的微生物主要来自于空气中和器具上的微生物,导致水豆豉产品的质量不稳定,产品的运输和保藏也受到限制很难实现大规模生产通常情况下,自然环境中存在的野生菌株发酵能力参差不齐、安全性较低;虽然在发酵过程主要产生有益菌,但在开放的不可控的发酵体系中很可能存在一些有害菌,如何避免有害菌污染是一个至关重要的公共卫生课题。为实现传统豆豉的工业化生产,必须用纯种发酵代替自然发酵。
基于以上原因,对自然发酵豆豉中有益微生物进行分离和鉴定,组合对豆豉品质起到至关重要的有益微生物,为豆豉工业化、可控化和标准化生产打下坚实基础。
发明内容
本发明的目的是提供一株从传统豆豉中分离纯化产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株,可通过液态发酵生产蛋白酶。
本发明的从传统豆豉中分离纯化产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株,其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),从传统豆豉中分离纯化技术分离获得,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期为2014年12月10日,保藏号为:CCTCC M2014639,保藏地址是中国武汉大学。
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)固体培养特征为:
固体培养为肉汤培养基,37±1℃培养24h,菌落直径8~12mm。呈白色不透明菌落,表面粗糙,菌落边缘不规则,在多种培养基上均不产色素。
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌的显微形态特征为:
菌体呈短杆状,染色均匀,具运动性,兼性厌氧,可形成内生芽孢,芽孢囊膨大,呈椭圆形,游离芽孢表面着色弱,革兰氏染色阳性。
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌的液体培养条件为:
培养基为酪素发酵培养基,摇瓶培养3天,培养温度37±1℃,摇床转速为170r/min。
发酵培养特征:培养第1天,发酵液变浑浊,培养第3天,发酵液颜色变深,数量变多,直径变大。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)液体发酵3天后,对发酵液进行化学提取、分离可得到中性蛋白酶。
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株的基因登录号为KP419723,16S rDNA碱基序列为:
GGCAATGGCGGGCGTTCTATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGAACAGATTG。
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌菌株,经发酵可得中性蛋白酶,其工艺包括菌种活化、发酵培养、发酵产物的相对分子质量的测定这三个步骤。
其中,菌种活化采用平板培养,培养基为肉汤培养基,培养原料为:牛肉膏0.3%,1%蛋白胨,0.5%NaCl,pH为7.0~7.2;培养时间:1天;培养温度:37±1℃。
发酵培养:发酵培养基为酪素发酵培养基;发酵原料为0.5%干酪素,0.1%葡萄糖,0.1%酵母浸粉,0.4%K2HPO4,0.05%KH2PO4,0.01%MgSO4;培养时间:2天;培养温度:37±1℃。
发酵产物的相对分子质量的测定:发酵完毕,转速10000r/min下离心5min,获得粗酶提取液,再进行硫酸铵盐析、脱盐、真空冷冻干燥后将所得的蛋白酶进行SDS-PAGE电泳用以测定该蛋白酶的相对分子质量。
本发明从传统豆豉中获得一株生长快、产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),通过菌体液体发酵能够产生蛋白酶,该菌株容易培养,生产安全性高,筛选所得菌株液体发酵培养酶活达到148~2231U/mL,遗传稳定性好,其代谢产物蛋白酶容易分离纯化,且其代谢产物蛋白酶的酶活性较高。为传统豆豉工业实现科学化和的纯种培养奠定了基础。
附图说明:
图1为本发明所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的菌落形态;
图2为本发明所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)用番红和孔雀绿染色后在100倍显微镜下观察到的芽孢形态;
图3为本发明所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)革兰氏染色后再400倍显微镜下观察到的菌体形态;
图4是本发明所述的菌株Jxnuwy-1依据16S rDNA序列建立的遗传进化树示意图;
图5为本发明所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)产生的蛋白酶的SDS-PAGE电泳图。
具体实施方式:
以下结合实施例对本发明进行细说明。
实施例1:本发明解淀粉芽孢杆菌株的制备或筛选
步骤一、样品采集:在豆豉制作工厂内采集制曲过程中的豆豉,然后用样品袋封装,低温保藏。
步骤二、富集培养:取样品1g放入装有10mL试管中,用漩涡振荡器振荡5min,吸取1mL菌液置于装有50mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,再放置在37±0.1℃,170r/min的摇床中72h。
步骤三、菌株初筛:采用平板稀释法,取富集培养出来的菌液200μL涂布在酪素筛选培养基上,在37±0.1℃培养48h,挑出能后产生透明圈的菌株,其中,产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌的酪素筛选培养基为:干酪素1%,牛肉浸粉0.3%,磷酸氢二钾0.2%,溴百里香酚兰0.005%,琼脂粉2%,pH为7.4±0.1左右。
步骤四、菌株复筛:将初筛平板上有产生透明圈的单菌落用接种针点到酪素培养基中,选择透明圈直径与菌落直径比值(HC值)较大的菌落。
步骤四,菌株分离纯化:将复筛出来的菌株,接种于酪素培养基上平板上划线,在置于37℃的恒温培养箱中培养24h,重复划线三次以上,连续多次在显微镜下观察到形态单一的菌体说明菌株已经分离纯化。
实施例2:本发明解淀粉芽孢杆菌株的显微形态和分子生物学鉴定
取所得透明圈最高的菌株进行显微形态和分子生物学方法鉴定,具体过程如下:
(1) 采用固体平板培养法:固体培养为肉汤培养基,37±1℃培养24h,菌落直径8~12mm。呈白色不透明菌落,表面粗糙,菌落边缘不规则,在多种培养基上均不产色素。
解淀粉芽孢杆菌的显微形态特征为:菌体呈短杆状,染色均匀,具运动性,兼性厌氧,可形成内生芽孢,芽孢囊膨大,呈椭圆形,游离芽孢表面着色弱,革兰氏染色阳性。解淀粉芽孢杆菌菌落形态见附图1,用番红和孔雀绿染色后在100倍显微镜下观察到的芽孢形态和革兰氏染色后再400倍显微镜下观察到的菌体形态的显微图片见说明书附图2和附图3。
(2) 分子生物学采用16S rDNA鉴定,取培养1天的发酵液,离心收集菌体,把所得的菌体用试剂盒提取总DNA,利用细菌16S rDNA 通用引物通过扩增保守序列,将所得的序列胶回收、纯化、克隆,再送到上海生工测序,所得16S rDNA 碱基序列如下:
GGCAATGGCGGGCGTTCTATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGAACAGATTG
实施例3:本发明所述的用于产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株16S rDNA序列分析实施过程如下:
依据细菌16S rDNA中最保守的序列设计引物,其中正向引物为F:5’-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’,反向引物为R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA- 3’。PCR反应体系20μL。热循环参数94℃预变性5min,94℃变性30s,55℃退火40s,72℃延伸1.5min,循环35次,72℃延伸7min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,扩增产物是一条大小约1.4kb的特异性条带。扩增获得的序列经测序,菌株Jxnuwy-1的16S rDNA核苷酸序列大小为1457bp,将序列同GenBank数据库中的10个菌株的16S rDNA核苷酸序列进行比较,采用MEGA6软件对菌株的测序结果进行了系统发育分析,采用Nerghbour-joining方法构建系统发育树,并进行Bootstrap分析,重复次数为1000次。构建的系统发育树如图3。结果显示菌株Jxnuwy-1的16S rDNA核苷酸序列与Bacillus amyloliquefaciens(登记号为KP419723)的16S rDNA核苷酸序列同源性最高,最大相似性(max ident)达到98%。综合Jxnuwy-1菌株的形态学特征、生理生化特征及同源性和系统发育分析,将菌株Jxnuwy-1鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。解淀粉芽孢杆菌依据16S rDNA序列建立的遗传进化树示意图见附图4。
将分离纯化的菌株保藏在中国典型培养物保藏中心,地址:湖北省武汉市,洪山区八一路,武汉大学 中国典型培养物保藏中心,保藏日期:2014年12月10日,保藏号为:CCTCCM 2014639。
实施例4:本发明所述的用于产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株的蛋白酶酶活性检测的实施过程如下:
将发酵液在10000r/min离心10min,保留上清液。酶活性用福林酚法测得:取1mL发酵液与1mL浓度为10g/mL的酪素溶液在40±0.1℃的水浴锅内反应10min,用三氯乙酸溶液终止反应,对照组则是发酵液先和三氯乙酸反应,再加酪素溶液。反应产生的沉淀用10000r/min离心,保留上清液,取上清液1mL,并加入5mL0.4mol/L的碳酸钠溶液、1mL福林酚试剂,对照组也是一样。在40℃的水浴锅内显色20min,然后用分光光度计在680nm条件下测其光度值。在此条件下,酶活单位定义为:1g(或者1mL液体酶)在一定温度和pH值得条件下,1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活单位,以μ/g(μ/mL)表示。通过该方法测得酶活为148~2231U/mL。
实施例5:本发明解淀粉芽孢杆菌株发酵所得的蛋白酶进行相对分子质量的测定
(1) 取本发明的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),在无菌条件下,用接种环挑取少量菌落,接入已灭菌的肉汤培养基平板,于37±1℃活化培养24小时;
(2) 取活化培养后的菌种,无菌条件下,转接入已灭菌的种子培养基-肉汤培养基中,37±1℃下170r/min摇床培养24h;
(3)将种子培养基中的菌液按2%的接种量接种到发酵培养基中,37±1℃下170r/min摇床培养48h。
(4)发酵完毕,转速10000r/min下离心5min,获得粗酶提取液,再进行硫酸铵盐析、脱盐、真空冷冻干燥后将所得的蛋白酶进行SDS-PAGE电泳用以测定该蛋白酶的相对分子质量。解淀粉芽孢杆菌产生的蛋白酶的SDS-PAGE电泳图见附图5。
Claims (2)
1.一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌,其分类命名解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),已于2014年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为:CCTCC M 2014639;所述解淀粉芽孢杆菌菌株在肉汤培养基上形态特征为:呈白色不透明菌落,表面粗糙,菌落边缘不规则,在多种培养基上均不产色素;所述解淀粉芽孢杆菌菌株显微形态特征为:菌体呈短杆状,染色均匀,具运动性,兼性厌氧,可形成内生芽孢,芽孢囊膨大,呈椭圆形,游离芽孢表面着色弱,革兰氏染色阳性,可通过液态发酵生产蛋白酶。
2.利用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株生产蛋白酶的方法,其特征在于:
①取权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株,在无菌条件下,用接种环挑取少量菌落,接入已灭菌的肉汤培养基平板,于36~37℃活化培养1天;
②取活化培养后的菌种,无菌条件下,转接入已灭菌的肉汤培养基中,在36~37℃,170r/min下振荡培养1天,将培养好的菌液于酪素培养基的250mL的三角瓶中,菌液的装液量为30mL,在36~37℃下振荡培养2天;
③发酵完毕,转速10000r/min下离心10min,获得粗酶提取液,再进行硫酸铵盐析、脱盐、真空冷冻干燥后将所得的蛋白酶进行SDS-PAGE电泳用以测定该蛋白酶的相对分子质量。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510073251.7A CN104694424B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510073251.7A CN104694424B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104694424A CN104694424A (zh) | 2015-06-10 |
CN104694424B true CN104694424B (zh) | 2017-12-01 |
Family
ID=53341984
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510073251.7A Expired - Fee Related CN104694424B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104694424B (zh) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101745784B1 (ko) * | 2015-09-03 | 2017-06-20 | 씨제이제일제당 (주) | 전통 메주에서 분리한 신균주와 이를 이용한 콩곡자 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 콩곡자 |
CN109593669B (zh) * | 2018-11-30 | 2022-04-26 | 江苏大学 | 一株提高鱼酱发酵品质的中度嗜盐菌菌株沉泥喜盐芽孢杆菌 |
CN109456922B (zh) * | 2018-11-30 | 2021-09-10 | 江苏大学 | 一株提高鱼酱发酵品质的中度嗜盐菌菌株花津滩芽孢杆菌 |
CN109706095A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-03 | 贵州大学 | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
CN110643549A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-01-03 | 江苏海洋大学 | 一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用 |
CN113122470B (zh) * | 2021-03-26 | 2022-10-28 | 江西师范大学 | 一种高产苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸甲酯的菌株筛选和应用 |
CN114107127B (zh) * | 2021-12-14 | 2022-07-29 | 华南农业大学 | 一株能降解脂多糖并高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌d1及其应用 |
CN114350553B (zh) * | 2021-12-28 | 2023-08-22 | 中国计量大学 | 一株高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
CN116855414B (zh) * | 2023-07-10 | 2024-04-26 | 贵州大学 | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其在发酵豆制品中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102041237A (zh) * | 2010-01-15 | 2011-05-04 | 甘肃农业大学 | 解淀粉芽孢杆菌d4及用该菌发酵生产凝乳酶的方法 |
-
2015
- 2015-02-12 CN CN201510073251.7A patent/CN104694424B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102041237A (zh) * | 2010-01-15 | 2011-05-04 | 甘肃农业大学 | 解淀粉芽孢杆菌d4及用该菌发酵生产凝乳酶的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced by Bacillus amyloliquefaciens DC-4 screened from douchi, a traditional Chinese soybean food;Yong Peng et al.;《Comparative Biochemistry and Physiology Part B》;20030107;第134卷(第1期);摘要,第47页右栏第5段至第7段,第50页左栏最后一段 * |
一株产凝乳酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及酶学性质;张卫兵等;《食品工业科技》;20121231;摘要,第173页左栏第2段至右栏第2段,第174页左栏第3段至176页左栏第1段 * |
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)DC-4产豆豉溶栓酶发酵条件的优化;彭勇,张义正;《食品与发酵工业》;20020520;第28卷(第4期);摘要,第19页左栏倒数第1段至第20页左栏第1段 * |
豆豉溶栓酶产生菌的筛选及其酶学性质的初步研究;彭勇,张义正;《高技术通讯》;20020228;摘要,第31页左栏倒数第1段至右栏最后1段 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104694424A (zh) | 2015-06-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104694424B (zh) | 一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 | |
CN108707556B (zh) | 一种横梗霉菌菌株及其在生产纤维素酶中的应用 | |
US20220033762A1 (en) | Penicillium oxalicum SDF-25 strain and application thereof | |
CN113151123B (zh) | 一种低温产纤维素酶和木聚糖酶的蜡样芽孢杆菌 | |
CN104877936A (zh) | 一株从传统豆豉中分离得到产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌菌株 | |
CN109439601A (zh) | 一株产蛋白酶的菌株及其制备碱性蛋白酶的方法 | |
CN102191203B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 | |
CN103865833A (zh) | 一种嗜热的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法 | |
CN102634460B (zh) | 米根霉rh1-5及其分离培养方法 | |
CN105802892B (zh) | 一种产角蛋白酶的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用 | |
CN104450571B (zh) | 一种高效降解蝇蛆蛋白的苏云金芽孢杆菌菌株 | |
CN107475145B (zh) | 产耐中高温纤维素酶菌株及其筛选方法 | |
CN109321500A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治油茶炭疽病害中的应用 | |
CN108865938A (zh) | 一种高产芽孢的嗜热脂肪芽孢杆菌 | |
CN102986536B (zh) | 一种毛柄金钱菌菌株及制备方法 | |
CN101993846B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法 | |
CN108841743A (zh) | 寒地秸秆腐熟细菌菌株及其制备方法和应用 | |
CN108192848A (zh) | 一种产乳糖酶的嗜冷杆菌菌株及使用该菌株制备低温乳糖酶的方法 | |
CN108728370A (zh) | 一株高效产壳聚糖酶的鲑亚科肾杆菌菌株qd-01及其发酵方法和应用 | |
CN113502282A (zh) | 一株青霉固态发酵产果胶酶制剂的方法 | |
CN104762295A (zh) | 一种耐酸耐盐兼性厌氧芽孢杆菌的制备方法 | |
CN105018389B (zh) | 一种芽孢杆菌Bacillus sp. CAMT22370及其应用 | |
CN109609399A (zh) | 一种苏云金芽孢杆菌DavⅣ及其应用 | |
CN117384799B (zh) | 一株鲁戈斯芽孢杆菌A78.1、菌剂、产β-葡萄糖苷酶的方法和应用 | |
CN116286557B (zh) | 一株产纤维素酶的耐盐贝莱斯芽孢杆菌及其培养方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171201 Termination date: 20200212 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |