CN110684693A - 枯草芽孢杆菌的发酵方法及其菌剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌的发酵方法及其菌剂的制备方法，枯草芽孢杆菌的发酵方法的步骤中包含：将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。本发明的枯草芽孢杆菌的发酵方法可以通过二级种子液直接进入大生产阶段，发酵密度高，生产效率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种枯草芽孢杆菌的发酵方法及其菌剂的制备方法。
背景技术
芽孢杆菌(Bacillus spp.)是内生芽孢的革兰氏阳性细菌，是目前生防细菌中研究较多的一类，因其能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，是理想的生防菌筛选对象。研究表明，目前应用于防治植物病害的芽孢杆菌属细菌有枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)等。植物根际土壤作为受植物活根影响的土壤微区，含有大量的微生物，包括真菌、细菌、放线菌、藻类、原生动物等。在植物根际微生物中，细菌生长快，也最常见，并且种类繁多，在土壤营养元素循环、有机物质的形成和分解、肥力的保持和提高、生态环境的改善、植物的生长发育等方面均起着极其重要的作用，被认为是良好的有益微生物资源库。近些年来，利用土壤中的有益细菌及其代谢产物防治植物病害更是成为国内外研究的热点。
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种,广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖而得名。该菌单个细胞为(0.7-0.8)μm×(2-3)μm，着色均匀。无荚膜，有鞭毛，能活动，革兰氏染色为阳性，芽孢(0.6-0.9)μm×(1.0-1.5)μm，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时常形成皱壁，为需氧型细菌。可以利用蛋白质、多种糖，分解色氨酸。其中枯草芽孢杆菌在生物防治上很具有潜力，在温度和通气等适宜条件下，幼龄细胞中大量形成芽孢。另外，枯草杆菌生长速度快，对营养要求比较低，能高效分泌许多蛋白及代谢产物，且其不会产生毒素，是一种无致病性的安全微生物。在医药卫生食品等方面用途很广。
就目前枯草芽孢杆菌的液体发酵技术而言，通常需要经过三级种子扩大培养后才能进入大生产阶段，发酵密度低，生产效率低，且保存时间短。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，它可以通过二级种子液直接进入大生产阶段，发酵密度高，生产效率高。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，方法步骤中包含：
将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；
将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；
调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；
将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；
将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。
进一步，在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。
进一步，振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；
和/或一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵12～18h，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌；
和/或二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养36～44h，发酵温度30～32℃，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m3/h，12h后，通气量为30m3/h。
进一步，一级种子液按接种量为5～10％接种于发酵培养基；
和/或二级种子液按接种量为5～10％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。
进一步，种子液培养基置于培养器中；
和/或发酵培养基置于发酵罐A中；
和/或产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。
进一步，利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为109个细胞/mL。
进一步，种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；
和/或产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.15～0.2％的米糠、1.2～1.5％的花生饼粉、0.015～0.025％的NaCl、0.020～0.025％的MnSO4和余量的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。
为了便于储备及使用枯草芽孢杆菌，本发明还提供了一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，制得的菌剂能长时间保存枯草芽孢杆菌的休眠体，保存时间可达24个月以上，达到增加产品货架期的目的，方法步骤中包含：
步骤S1：以硅藻土为载体，加入采用如权利要求1～7任一项所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的20～25％；
步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的2.5～3％，氯化钙的体积为发酵液体积的1.5～2％；
步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，使其含水量低于10％，则制得菌剂。
进一步，步骤S1中包含：
将采用枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的20～25％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置1～2h，得到吸附发酵液；
和/或步骤S2中包含：
将体积为发酵液体积的2.5～3％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的1.5～2％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置30～60min，得到絮凝发酵液；
和/或步骤S3中包含：
将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，使得絮凝发酵液干燥至含水量低于10％，则制得菌剂。
采用上述技术方案后，枯草芽孢杆菌的发酵方法可以通过二级种子液直接进入大生产阶段，发酵密度高，生产效率高，制得的发酵液中枯草芽孢杆菌含量达到300亿CFU/mL以上；得到的发酵液用硅藻土为载体，并增加氯化钙和磷酸氢二钠进行吸附，板框过滤、干燥后得到菌剂，制得的菌剂的枯草芽孢杆菌的含量达到1000亿CFU/g以上，易于储存，菌剂制作能长时间保存枯草芽孢杆菌的休眠体，保存时间可达到24个月以上，达到增加产品货架期的目的。
具体实施方式
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例，对本发明作进一步详细的说明。
实施例一
一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，方法步骤中包含：
将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；
将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；
调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；
将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；
将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。
在本实施例中，在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。
在本实施例中，振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；
一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵12h，并在发酵培养过程中以140r/min的搅拌速度搅拌；
二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养36h，发酵温度30℃，并在发酵培养过程中以140r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m3/h，12h后，通气量为30m3/h。
在本实施例中，一级种子液按接种量为5％接种于发酵培养基；
二级种子液按接种量为5％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。
在本实施例中，种子液培养基置于培养器中；
发酵培养基置于发酵罐A中；
产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。
在本实施例中，利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为109个细胞/mL。
在本实施例中，种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；
产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.15％的米糠、1.2％的花生饼粉、0.015％的NaCl、0.020％的MnSO4和98.615％的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。
在本实施例中，PDA培养基和发酵培养基均为市售的常规培养基，不做详细介绍。
实施例二
一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，方法步骤中包含：
将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；
将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；
调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；
将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；
将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。
在本实施例中，在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。
在本实施例中，振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；
一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵15h，并在发酵培养过程中以160r/min的搅拌速度搅拌；
二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养40h，发酵温度31℃，并在发酵培养过程中以160r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m3/h，12h后，通气量为30m3/h。
在本实施例中，一级种子液按接种量为7.5％接种于发酵培养基；
二级种子液按接种量为7.5％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。
在本实施例中，种子液培养基置于培养器中；
发酵培养基置于发酵罐A中；
产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。
在本实施例中，利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为109个细胞/mL。
在本实施例中，种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；
产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.175％的米糠、1.35％的花生饼粉、0.020％的NaCl、0.023％的MnSO4和98.432％的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。
在本实施例中，PDA培养基和发酵培养基均为市售的常规培养基，不做详细介绍。
实施例三
一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，方法步骤中包含：
将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；
将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；
调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；
将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；
将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。
在本实施例中，在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。
在本实施例中，振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；
一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵18h，并在发酵培养过程中以180r/min的搅拌速度搅拌；
二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养44h，发酵温度32℃，并在发酵培养过程中以180r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m3/h，12h后，通气量为30m3/h。
在本实施例中，一级种子液按接种量为10％接种于发酵培养基；
二级种子液按接种量为10％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。
在本实施例中，种子液培养基置于培养器中；
发酵培养基置于发酵罐A中；
产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。
在本实施例中，利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为109个细胞/mL。
在本实施例中，种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；
产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.2％的米糠、1.5％的花生饼粉、0.025％的NaCl、0.025％的MnSO4和98.25％的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。
在本实施例中，PDA培养基和发酵培养基均为市售的常规培养基，不做详细介绍。
实施例四
一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，方法步骤中包含：
步骤S1：以硅藻土为载体，加入实施例一所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的20％；
步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的2.5％，氯化钙的体积为发酵液体积的1.5％；
步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，其含水量为8％，制得菌剂。
在本实施例中，步骤S1中包含：
将实施例一所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的20％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置1h，得到吸附发酵液；
步骤S2中包含：
将体积为发酵液体积的2.5％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的1.5％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置30min，得到絮凝发酵液；
步骤S3中包含：
将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，絮凝发酵液干燥至含水量为8％，制得菌剂。
实施例五
一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，方法步骤中包含：
步骤S1：以硅藻土为载体，加入实施例二所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的22％；
步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的2.75％，氯化钙的体积为发酵液体积的1.75％；
步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，其含水量为6％，制得菌剂。
在本实施例中，步骤S1中包含：
将实施例二所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的22％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置1.5h，得到吸附发酵液；
步骤S2中包含：
将体积为发酵液体积的2.75％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的1.75％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置45min，得到絮凝发酵液；
步骤S3中包含：
将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，絮凝发酵液干燥至含水量为6％，制得菌剂。
实施例六
一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，方法步骤中包含：
步骤S1：以硅藻土为载体，加入实施例三所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的25％；
步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的3％，氯化钙的体积为发酵液体积的2％；
步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，其含水量为4％，制得菌剂。
在本实施例中，步骤S1中包含：
将实施例三所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的25％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置2h，得到吸附发酵液；
步骤S2中包含：
将体积为发酵液体积的3％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的2％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置60min，得到絮凝发酵液；
步骤S3中包含：
将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，絮凝发酵液干燥至含水量为4％，则制得菌剂。
其中，实施例一、实施例二和实施例三所制得的发酵液中枯草芽孢杆菌含量均达到300亿CFU/mL以上；实施例四、实施例五和实施例六所制得的菌剂的枯草芽孢杆菌的含量均达到1000亿CFU/g以上，保存时间可达到24个月以上。
将所得实施例四所制得的菌剂进行热储实验，即在45℃-50℃的温度下连续检测菌剂中的枯草芽孢杆菌含量变化，以此来判断菌剂的耐储藏能力和芽孢的活力。
经过3个月的热储实验后，每15天取样检测一次，得出以下数据：
| 时间/d | 活菌含量(CFU/g) |
| 0 | 1000亿 |
| 15 | 965亿 |
| 30 | 948亿 |
| 45 | 936亿 |
| 60 | 929亿 |
| 75 | 925亿 |
| 90 | 905亿 |
从表中的数据可以看出，经过3个月的热储实验后，菌剂中的枯草芽孢杆菌含量依然可以达到905亿，存活率可以达到90.5％，效果明显。
以上所述的具体实施例，对本发明解决的技术问题、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
方法步骤中包含：
将枯草芽孢杆菌菌株接种到PDA培养基上活化培养；
将PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株移至种子液培养基振荡培养；
调整种子液培养基中的菌液浓度至109个细胞/mL，作发酵用一级种子液；
将一级种子液接种于发酵培养基发酵培养，得二级种子液；
将二级种子液接种于产芽孢发酵培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气，得到发酵液。
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
在无菌条件下用接种环挑取PDA培养基上的枯草芽孢杆菌菌株至种子液培养基进行振荡培养。
3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
振荡培养的条件为，28℃下以180r/min振荡培养；
和/或一级种子液接种于发酵培养基发酵培养的培养条件为，发酵12～18h，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌；
和/或二级种子液接种于产芽孢杆菌培养基发酵培养，并在培养过程中通入空气的培养条件为，发酵培养36～44h，发酵温度30～32℃，并在发酵培养过程中以140～180r/min的搅拌速度搅拌，其中，0～12h内，通气量为14m3/h，12h后，通气量为30m3/h。
4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
一级种子液按接种量为5～10％接种于发酵培养基；
和/或二级种子液按接种量为5～10％接种于产芽孢发酵培养基发酵培养。
5.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
种子液培养基置于培养器中；
和/或发酵培养基置于发酵罐A中；
和/或产芽孢杆菌培养基置于发酵罐B中。
6.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
利用比浊管往种子液培养基中添加灭菌生理盐水以将种子液培养基中的菌液浓度调整为109个细胞/mL。
7.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，
种子液培养基的制备方法中包含，往每升水内加入20g葡糖糖和200g马铃薯，则制得种子液培养基；
和/或产芽孢杆菌培养基的制备方法中包含，以质量百分比计，将0.15～0.2％的米糠、1.2～1.5％的花生饼粉、0.015～0.025％的NaCl、0.020～0.025％的MnSO4和余量的水混合均匀，则制得产芽孢杆菌培养基，产芽孢杆菌培养基的PH为中性。
8.一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，
方法步骤中包含：
步骤S1：以硅藻土为载体，加入采用如权利要求1～7任一项所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液中，混合均匀，静置，得到吸附发酵液，其中，硅藻土的质量为发酵液质量的20～25％；
步骤S2：将磷酸氢二钠和氯化钙分别用热水溶解，得到两种溶液，将两种溶液分别加入吸附发酵液中，混合均匀，静置，得到絮凝发酵液，其中，磷酸氢二钠的体积为发酵液体积的2.5～3％，氯化钙的体积为发酵液体积的1.5～2％；
步骤S3：将絮凝发酵液压缩进筛布中，调整絮凝发酵液的含水量，使其含水量低于10％，则制得菌剂。
9.根据权利要求8所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，
步骤S1中包含：
将采用如权利要求1～7任一项所述的枯草芽孢杆菌的发酵方法所制得的发酵液降温至20℃以下；将质量为发酵液质量的20～25％的硅藻土缓慢加入降温后的发酵液中，加入硅藻土的过程中以150r/min的速度搅拌，加完硅藻土后继续搅拌30min，然后静置1～2h，得到吸附发酵液；
和/或步骤S2中包含：
将体积为发酵液体积的2.5～3％的磷酸氢二钠及体积为发酵液体积的1.5～2％的氯化钙分别用热水完全溶解，得到两种溶液，待两种溶液的温度分别降至40℃后，分别加入吸附发酵剂中，然后以150r/min的搅拌速度搅拌20min，然后静置30～60min，得到絮凝发酵液；
和/或步骤S3中包含：
将絮凝发酵液转入板框压滤机中，利用板框压滤机的压力将絮凝发酵液压缩进300目的筛布中，挤出絮凝发酵液中的水分，再通过空气压缩机往板框压滤机中吹入空气，使得板框压滤机的板框内部压力达到0.3MPa，连续吹10min，使得絮凝发酵液干燥至含水量低于10％，则制得菌剂。
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