CN103849592A

CN103849592A - 一种链霉菌孢子的生产方法

Info

Publication number: CN103849592A
Application number: CN201410058407.XA
Authority: CN
Inventors: 梁晓辉; 常志州; 邵孝侯; 黄红英; 徐阳春; 何建桥; 陈立华; 徐丽萍; 梅成兵; 薛平; 刘良峰; 欧阳以勇
Original assignee: NANJING NINGLIANG BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: NANJING NINGLIANG BIOLOGICAL ENGINEERING Co Ltd
Priority date: 2014-02-20
Filing date: 2014-02-20
Publication date: 2014-06-11

Abstract

本发明提供一种链霉菌孢子的生产方法，其步骤为：(1)液体种子的培养将斜面菌种接入高氏一号液体培养基，30～37℃、170r/min振荡培养1～2d，得到链霉菌种子液；(2)固体发酵种子的培养将所得种子液按质量比10%接入装有固体培养基的三角瓶中，30～37℃条件下培养4～5d，得到固体发酵种子；(3)产孢发酵用灭过菌的不锈钢铲将灭过菌的产孢培养基分装至浅盘，将步骤(2)中所得固体发酵种子按一定比例接入到浅盘，混合均匀后盖上灭菌纱布，30～37℃发酵4～5d，结束后低温烘干，即得到链霉菌孢子产品。本方法发酵链霉菌产孢率高，孢子含量可达90亿/g，同时涉及的设备简单廉价，有效降低了生产成本，特别适用于和链霉菌有关的农用微生物菌剂的生产。

Description

一种链霉菌孢子的生产方法

技术领域

本发明涉及农用微生物技术领域，尤其是涉及一种链霉菌孢子的生产方法。

背景技术

链霉菌是一类在农业生产中有着广泛实际用途的微生物类群，如可以产生种类繁多的农用抗生素，用于防治真菌、细菌、线虫病害以及一些重要的害虫，有的还具有除草活性。另外，链霉菌中有些品种具有很强的降解纤维素、木质素以及角蛋白等复杂有机物的能力，这类链霉菌在自然界尤其是农业生态环境的物质循环中起着重要的作用。将链霉菌制成的活细胞菌剂用于农业生产，具有无毒无残留、环境友好、防病持效期长等优点。

在固体培养基上链霉菌产生丰富的基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝顶端分化形成孢子丝，孢子丝最终可产生大量孢子，在液体培养基中链霉菌主要以营养态菌丝存在，不易产孢，虽然菌丝也有增殖功能，但相比之下，孢子具有更强的抗逆性和存活能力，因此在相关微生物菌剂的生产中以添加孢子为宜，这就要对链霉菌进行固态发酵，然而目前固态发酵设备昂贵，且发酵规模较小，综合生产成本高，难以满足大规模生产的需要。

发明内容

为解决上述现有固态发酵设备昂贵，发酵规模较小等问题，本发明提供了一种操作简单、成本较低并且产孢量高的链霉菌孢子的生产方法。以满足链霉菌菌剂的生产需求，降低生产成本。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种链霉菌孢子的生产方法，其具体实施步骤如下：

1.液体种子的培养将试管孢子接入高氏一号液体培养基中，30～37℃、170r/min振荡培养1～2d，得到液体种子；

2.固体种子培养基的配制及灭菌：将麸皮、新鲜草木灰按一定比例混匀，添加适量自来水调节含水量，将培养基装入三角瓶中，121℃湿热灭菌1h。

3.固体发酵种子的制备按质量比为10%的比例将液体种子接入固体种子培养基中，于30～37℃下培养4～5d，得到固体发酵种子；

4.产孢培养基的配制及灭菌：将食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰按一定比例混匀，用熟石灰调节pH，添加适量自来水调节含水量，将配制好的产孢培养基进行常压湿热灭菌4～6h。

5.产孢发酵：用灭过菌的不锈钢铲将产孢培养基分装入浅盘，物料厚度不超过3cm，将步骤3中所得固体发酵种子按3～5%的质量比接入到产孢培养基中，混合均匀后盖上灭菌纱布，30～37℃培养4～5d，发酵完毕后于＜50℃的条件下烘至水分＜10%即得到链霉菌孢子产品，该产品可用于农用微生物菌剂的生产。

进一步的，步骤2中所述的固体种子培养基中麸皮、新鲜草木灰的质量比为5～6:1，培养基中水分的质量分数为45～55%。

进一步的，步骤2中三角瓶内固体培养基的量为100～150g/1000mL。

进一步的，步骤4中所述的产孢培养基中食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰的质量比为4～5:4～5:1，pH为7.0～8.0，培养基中水分的质量分数为45～55%。

进一步的，步骤5中所述的烘干温度为40～50℃。

一种链霉菌孢子的生产方法在农用微生物菌剂生产中的应用。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

1.本方法中所用到的设备均为常见设备，培养基中食用菌菌渣和草木灰均属生产废料，价格低廉，有效降低了生产投入；

2.本方法操作步骤简单，在进行一批生产的过程中可进行下一批生产的准备，安排得当即可实现连续生产，生产效率高；

3.链霉菌经该方法发酵后产孢量大，经检测烘干后所得物料中孢子含量达60～90亿/g，有效的满足了相关微生物菌剂的生产需求。

具体实施方式

实施例一：

一种链霉菌孢子的生产方法，其具体实施步骤如下：

1.液体种子的培养将斜面菌种接入高氏一号液体培养基中，35℃、170r/min振荡培养36h得到液体种子；

2.三角瓶固体发酵培养基的制备将麸皮、新鲜草木灰按质量比5:1的比例混合，麸皮含水量约为7%、新鲜草木灰含水量约为1%，添加适量自来水，使物料含水量为45%，将物料装入1L三角瓶中，每瓶150g，121℃灭菌60min；

3.固体发酵种子的培养将液体种子按质量比10%的比例接入步骤2所得固体培养基中，35℃培养4d，得到固体发酵种子；

4.产孢培养基的制备将食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰按照质量比4:5:1的比例混合均匀，食用菌菌渣含水量约为45～50%，麸皮含水量约为7%、新鲜草木灰含水量约为1%，用适量熟石灰调节pH至7.5，添加一定量自来水使总含水量为50%，常压蒸汽灭菌6h。

5.产孢发酵用灭过菌的不锈钢铲将步骤4中所得培养基分装至浅盘，每盘厚度3cm，将步骤3中所得的固体发酵种子按质量比5%的比例接入到产孢培养基中，混合均匀，于35℃条件下发酵培养4d，结束后40℃烘干至水分低于10%，经检测物料中孢子含量约为90.1亿/g。

实施例二：

一种链霉菌孢子的生产方法，其具体实施步骤如下：

2.三角瓶固体发酵培养基的制备将麸皮、新鲜草木灰按质量比6:1的比例混合，添加适量自来水，使物料总含水量为55%，将物料装入1L三角瓶中，每瓶150g，121℃灭菌60min；

3.固体发酵种子的培养将液体种子按质量比10%的比例接入步骤2所得固体培养基中，30℃培养5d，得到固体发酵种子；

4.产孢培养基的制备将食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰按照质量比5:4:1的比例混合均匀，用适量熟石灰调节pH至7.5，添加一定量自来水使总含水量为50～55%，常压蒸汽灭菌6h。

5.产孢发酵将灭过菌的物料分装至浅盘，厚度≤3cm，将步骤3中所得固体发酵种子按质量比3%的比例接入到产孢培养基中，混合均匀后盖上灭菌纱布，置于30℃环境中发酵5d，结束后40℃低温烘干至水分＜10%，即得链霉菌孢子产品，经检测该产品中孢子含量为60.9亿/g。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims

1.一种链霉菌孢子的生产方法，其特征在于，所述链霉菌孢子的生产方法是按以下步骤进行的：

(1)液体种子的培养：将斜面菌种接入高氏一号液体培养基，30～37℃、170r/min振荡培养1～2d，得到链霉菌种子液；

(2)固体发酵种子培养基的配制及灭菌：将麸皮、新鲜草木灰按一定比例混匀，添加适量自来水调节含水量，将培养基装入三角瓶中，121℃湿热灭菌1h；

(3)固体发酵种子的制备：按种子液与固体培养基的质量比为10%的比例将步骤(1)所得种子液接入步骤(2)所得固体培养基中，于30～37℃下培养4～5d，得到固体发酵种子；

(4)产孢培养基的配制及灭菌：将食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰按一定比例混匀，用熟石灰调节pH，添加适量自来水调节含水量，将配制好的产孢培养基进行常压湿热灭菌4～6h；

(5)产孢发酵：用灭过菌的不锈钢铲将灭过菌的产孢培养基分装至浅盘，将步骤(3)中所得固体发酵种子按质量比3～5%比例接入到产孢培养基中，混合均匀后盖上灭菌纱布，30～37℃发酵4～5d，发酵结束后低温烘干至水分＜10%，即得到链霉菌孢子产品。

2.根据权利要求1所述链霉菌孢子的生产方法，其特征在于，步骤(2)中所述的固体种子培养基中麸皮、新鲜草木灰的质量比为5～6:1，培养基中水分的质量分数为45～55%。

3.根据权利要求1所述链霉菌孢子的生产方法，其特征在于，步骤(2)中三角瓶内固体培养基的量为100～150g/1000mL。

4.根据权利要求1所述链霉菌孢子的生产方法，其特征在于，步骤(4)中所述的产孢培养基中食用菌菌渣、麸皮、新鲜草木灰的质量比为4～5:4～5:1，pH为7.0～8.0，培养基中水分的质量分数为45～55%。

5.根据权利要求1所述的链霉菌孢子的生产方法，其特征在于，步骤(5)中所述的烘干温度为40～50℃。

6.一种链霉菌孢子的生产方法在农用微生物菌剂生产中的应用。