CN107142214A - 一种安全节能的农用微生物发酵方法 - Google Patents

一种安全节能的农用微生物发酵方法 Download PDF

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种安全节能的农用微生物发酵方法，包括:A1、根据需求制得所需菌种，保存备用；A2、活化菌株，将保存的菌种转接到培养基平板中，置于培养室25‑35℃培养4‑6天；A3、制备种子液，将制备的菌种接种到培养液中，在25‑35℃，120‑180rpm振荡培养48‑96h，调节接种体浓度至1×107cfu/mL，得到种子液；A4、固体发酵，将制备的种子液与基质混合均匀，25‑35℃在发酵盘发酵培养8‑10天后，测定接种体含量并阴凉干燥，即得所需微生物及其代谢产物。本发明是一种节能、安全、环保的微生物菌剂生产方法，所需设备简单，原料易得，生产成本低，发酵方法为半下潜式玻璃温室固体发酵法，适合多种真菌和细菌。

Description

一种安全节能的农用微生物发酵方法
技术领域
本发明涉及一种微生物发酵方法，具体为一种安全节能的农用微生物发酵方法，属于农用发酵应用技术领域。
背景技术
微生物菌剂或微生物菌肥，是由有益微生物与有机载体等组成的；微生物菌肥具有综合生态效应；可以抑制病原菌的侵染；可以充分利用各种有机物，发挥有机、无机和微生物的作用；具备有效改善土壤团粒结构、刺激植物生长、增强植株抗逆性，特别是抗病性、提高作物产量和改善品质、解磷促钾提高化肥利用率、降解农药残留、降低农业面源污染等多种功效；产品应用前景广泛。
目前，大多数企业采用大型发酵罐液体密闭式发酵，特别在医药和食品领域，优点是杂菌率低，批量大；缺点是一旦污染或温度控制不好、或者基质养分不足，容易整批污染，造成巨大损失；同时，加热采用电加热或蒸汽，温度不好控制，耗能大，生产成本高；且生产中易产生大量气泡，使用消泡剂后，发酵中产生的有用物质含量降低；液体发酵的配套设备要求技术参数高，一次性投资大；因此，针对上述问题提出一种安全节能的农用微生物发酵方法。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种安全节能的农用微生物发酵方法。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的，一种安全节能的农用微生物发酵方法，包括：
A1、根据需求制得所需菌种，保存备用；
A2、活化菌株，将保存的菌种转接到培养基平板中，置于培养室25～35℃恒温培养4～6天；
A3、制备种子液，将制备的菌种接种到培养液中，在25～35℃，120～180rpm振荡培养48～96h，调节接种体浓度至1×107cfu/mL，得到种子液；
A4、固体发酵，将制备的种子液，以种子液体积数与基质质量比为15～30％接种量与基质混合均匀，25～35℃，基质含水量20～30％，在发酵盘发酵培养8～10天后，测定接种体含量并阴凉干燥，即得所需微生物及其代谢产物。
优选的，所述A2中的培养室采用半下潜式的玻璃培养室，且培养室为一种利用地热和太阳能在低温季节加热、利用遮阳网和循环水在高温季节降温的恒温培养室。
优选的，所述A3中液体培养基是由可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，自来水补足至1000mL，pH调至7.2-7.4，在1.05kg/cm2蒸气压力下，灭菌20min制备而成。
优选的，所述A4中的基质由30％谷壳、55％大米粉、12％玉米秸秆、3％小米粉，在常压下蒸气灭菌2小时制备而成。
优选的，所述A4中的发酵盘采用盘状容器，且发酵盘为一种采用包布覆盖的发酵盘。
本发明的有益效果是：该种安全节能的农用微生物发酵方法外壳，是一种节能、安全、环保的微生物菌剂生产方法，所需设备简单，原料易得，生产成本低，发酵方法为半下潜式玻璃温室固体发酵法，适合多种真菌和细菌，利用太阳能和地热资源，温度很容易控制在25-35℃，节能环保，另外发酵基质容易获得，多种农副产品均可被利用，发酵原料成本较低，发酵基质前处理简单，不需特殊处理，简单易行，另外发酵基质不需要高温高压处理，采用普通常压灭菌后即可用于发酵，适合农业领域广泛使用，采用盘状容器作为发酵盘，发酵盘上采用包布覆盖，透气保湿，分散培养发酵，隔离空间杂菌，降低大批量污染的几率；适合于发酵淡紫拟青霉、木霉菌、放线菌、镰刀菌、芽孢杆菌等多种真菌和细菌；有良好的经济效益和社会效益，适合推广使用。
附图说明
图1为本发明制作方法的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1所示，一种安全节能的农用微生物发酵方法，包括
A1、根据需求制得所需菌种，保存备用；
A2、活化菌株，将保存的菌种转接到培养基平板中，置于培养室25-35℃培养4-6天；
A3、制备种子液，将制备的菌种接种到培养液中，在25-35℃，120-180rpm振荡培养48-96h，调节接种体浓度至1×107cfu/mL，得到种子液；
A4、固体发酵，将制备的种子液，以种子液体积数与基质质量比为15-30％接种量与基质混合均匀，25-35℃，基质含水量20-30％，在发酵盘发酵培养8-10天后，测定接种体含量并阴凉干燥，即得所需微生物及其代谢产物。
作为本发明的一种技术优化方案，所述A2中的培养室采用半下潜式的玻璃培养室，且培养室为一种利用地热和太阳能在低温季节加热、利用遮阳网和循环水在高温季节降温的恒温培养室。
作为本发明的一种技术优化方案，所述A3中液体培养基是由可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，自来水补足至1000mL，pH调至7.2-7.4，在1.05kg/cm2蒸气压力下，灭菌20min制备而成。
作为本发明的一种技术优化方案，所述A4中的基质由30％谷壳、55％大米粉、12％玉米秸秆、3％小米粉，在常压下蒸气灭菌2小时制备而成。
作为本发明的一种技术优化方案，所述A4中的发酵盘采用盘状容器，且发酵盘为一种采用包布覆盖的发酵盘。
本发明在使用时，该种安全节能的农用微生物发酵方法，实施例(一)：淡紫紫孢菌固体发酵
1.1、制作PDA培养基1000mL，在0.1Mpa和121℃条件下灭菌30min；制作无菌水1000mL；
1.2、用100mL培养基制作5个平皿，冷却后接种淡紫紫孢菌菌悬液，涂布均匀后于25-28℃下培养4天，中途观察、剔除被污染的平板；
1.3、按照蔗糖15.0g，甘油15.0g，蛋白胨40g，K2HPO40.5g，CaCO30.5g，NaCl0.5g，MgSO40.5g，蒸馏水1000mL的配方配制菌株液体发酵繁殖用的营养液2000mL，装瓶、灭菌；
1.4、根据培养条件，通常装液量应当为100mL/250mL或230mL/500mL；在0.1Mpa和121℃条件下灭菌30min；用打孔器在培养好的平板上均匀打孔取菌饼，或者用手术刀均等划取菌块，每个三角瓶中接种5-10个菌饼，于25-28℃条件下震荡培养4天，期间每日观察种子液生长状况，并剔除可能污染的三角瓶；
1.5、按照80％麦麸、8％玉米粉、10％小米粉的配方配制母菌固体发酵用的基质2.5kg(1.5-2kg/盘)，初始含水量(含0.5％石灰的自来水)为30％；
1.6、在±100℃条件下灭菌120min；用培养96h的种子液按照20％的接种量在无菌条件下接种、装盘、覆盖棉布，在培养柜内于25-28℃条件下定植发酵；每日观察菌丝生长状况，随时剔除可能污染的培养盘；淡紫紫孢菌菌株菌量在216h时达到最大，以此作为发酵的终点。
实施例(二)：非致病尖镰孢固体发酵
1.1、制作PDA培养基1000mL，在0.1Mpa和121℃条件下灭菌30min；再制作无菌水1000mL；
1.2、用100mL培养基制作5个平皿，冷却后接种非致病尖镰孢菌悬液，涂布均匀后于25℃下培养4天；中途观察、剔除被污染的平板；
1.3、按照NaNO32g,K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO40.01g，蔗糖30g，酵母粉5g，H2O1000mL的配方配制菌株液体发酵繁殖用的营养液2000mL，装瓶、灭菌；
1.4、根据培养条件，通常装液量应当为120mL/250mL或230mL/500mL；在0.1Mpa和121℃条件下灭菌30min；用打孔器或手术刀在培养好的平板上均匀打孔或切块取菌饼，每个三角瓶中接种5-10个菌饼，于26℃、150rpm条件下震荡培养4天，期间每日观察种子液生长状况，并剔除可能污染的三角瓶；
1.5、基质(每公斤含)：麸皮450g、玉米粉350g、小米粉100g、米糠30g、黄豆粉20g、棉籽壳36g、NaNO32g、K2HPO41g、MgSO40.5g、FeSO40.01g，pH为6.0、初始含水量为30％；
1.6、在±100℃条件下灭菌120min；用培养96小时的种子液按照20％的接种量在无菌条件下接种、装盘、覆盖棉布，在培养柜内于25℃条件下定植发酵。期间每日观察菌丝生长状况，并随时剔除可能污染的培养盘，制成非致病尖镰孢固体菌粉。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (5)

1.一种安全节能的农用微生物发酵方法，包括：
A1、根据需求制得所需菌种，保存备用；
A2、活化菌株，将保存的菌种转接到培养基平板中，置于培养室25-35℃培养4-6天；
A3、制备种子液，将制备的菌种接种到培养液中，在25-35℃，120-180rpm振荡培养48-96h，调节接种体浓度至1×107cfu/mL，得到种子液；
A4、固体发酵，将制备的种子液，以种子液体积数与基质质量比为15-30％接种量与基质混合均匀，25-35℃，基质含水量20-30％，在发酵盘发酵培养8-10天后，测定接种体含量并阴凉干燥，即得所需微生物及其代谢产物。
2.根据权利要求1所述的一种安全节能的农用微生物发酵方法，其特征在于：所述A2中的培养室采用半下潜式的玻璃培养室，且培养室为一种利用地热和太阳能在低温季节加热、利用遮阳网和循环水在高温季节降温的恒温培养室。
3.根据权利要求1所述的一种安全节能的农用微生物发酵方法，其特征在于：所述A3中液体培养基是由可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，NaCl0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，自来水补足至1000mL，pH调至7.2-7.4，在1.05kg/cm2蒸气压力下，灭菌20min制备而成。
4.根据权利要求3所述的一种安全节能的农用微生物发酵方法，其特征在于：所述A4中的基质由30％谷壳、55％大米粉、12％玉米秸秆、3％小米粉，在常压下蒸气灭菌2小时制备而成。
5.根据权利要求1所述的一种安全节能的农用微生物发酵方法，其特征在于：所述A4中的发酵盘采用盘状容器，且发酵盘为一种采用包布覆盖的发酵盘。
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