CN101851121A - 高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents
高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101851121A CN101851121A CN201010174274A CN201010174274A CN101851121A CN 101851121 A CN101851121 A CN 101851121A CN 201010174274 A CN201010174274 A CN 201010174274A CN 201010174274 A CN201010174274 A CN 201010174274A CN 101851121 A CN101851121 A CN 101851121A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powder
- fungi
- composite
- suspension
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/20—Fertilizers of biological origin, e.g. guano or fertilizers made from animal corpses
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种高效转化猪排泄物的复合菌剂，制备方法如下：(1)将枯草芽孢杆菌粉和植物乳杆菌粉分别进行活化、扩大培养后获两种菌悬液，然后将两种菌悬液按体积比1∶1接种于细菌发酵培养基中进行复合发酵共培养，继后将发酵液过滤、对所获滤液添加保护剂并经喷雾干燥制备成复合细菌粉；(2)将总状毛霉菌粉、黑曲霉菌粉、米曲霉菌粉、黑根霉菌粉和产朊假丝酵母菌粉分别进行活化、扩大培养后获五种菌悬液，然后将五中菌悬液按体积比1∶1∶1∶1∶1接种于真菌发酵培养基中进行通风复合共培养，继后将发酵液过滤、对所获滤液添加保护剂并经喷雾干燥制备成复合真菌粉；(3)将复合细菌粉与复合真菌粉按质量比1∶1计量并混合均匀。
Description
技术领域
本发明涉及用于转化猪排泄物的复合微生物菌剂及其制备方法，复合菌剂在制备转化猪排泄物的发酵床中的应用。
背景技术
猪肉是我国民众最为喜爱的肉类之一，占国内肉类消费量的比重超过6成。作为世界最大的猪肉生产国，2009年猪肉产量达5970万吨，猪肉产品占世界总量的一半以上，规模养殖发展迅速，散户养殖稳定增长。与此同时，生猪养殖所产生的猪排泄物对周围环境造成的污染也日益严峻，并且随着人们环保意识的增强，此问题越发显得突出。
利用微生物分解、转化猪排泄物是降低污染、保护环境的一种有效措施，而要实现微生物对猪排泄物分解、转化，微生物菌剂是关键。现有用于发酵床养猪的各种复合微生物菌剂，一类是通过自然接种、自然增殖的方式形成(例如公开号为CN 101445312A的发明专利申请)，接种量和微生物菌系组成不稳定，杂菌数量多，难以避免有害菌、致病菌滋生而且由于自然接种的接种量小，生长缓慢，转换效率低；另一类是分别制作各种单一菌粉，按比例混合制成复合菌剂(例如公开号为CN 101463335A的发明专利申请)，其缺点是：接入发酵床后，各种微生物之间需要经过一个较长的时期相互竞争和作用，才能重新形成相对稳定的共生体系，也就是需要较长的适应期才能开始大量增殖和发酵，延滞期较长，转化效率不高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种能高效转化猪排泄物的微生物复合菌剂及其制备方法，用本发明所述微生物复合菌剂制备的转化猪排泄物的发酵床，不仅能显著改善猪舍环境卫生，降低污染，减少疾病，而且能节约饲料。
本发明所述转化猪排泄物的复合菌剂，由复合细菌粉和复合真菌粉混合而成，复合细菌粉与复合真菌粉的质量比为1∶1；所述复合细菌粉主要由枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的共培养物及多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮组成，所述复合真菌粉主要由总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉和产朊假丝酵母的共培养物及多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮组成。
上述复合细菌粉中的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的共培养物为经复合发酵共培养的枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌及其两种细菌的代谢产物和细菌发酵培养基中的剩余可溶物。上述复合真菌粉中的总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉和产朊假丝酵母的共培养物为经通风复合共培养的总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉、产朊假丝酵母及其五种真菌的代谢产物和真菌发酵培养基中的剩余可溶物。
本发明所述转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，工艺步骤如下：
(1)制备复合细菌粉
①将冻干的枯草芽孢杆菌粉和冻干的植物乳杆菌粉分别进行活化、扩大培养后获枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液，然后将枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液按体积比1∶1接种于细菌发酵培养基中形成细菌共培养系统，所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)至少为2％，细菌发酵培养基的体积百分数≤98％，用NaOH或HCL调节细菌共培养系统的初始pH值为6～6.3，在常压、30℃～33℃进行复合发酵共培养，复合发酵共培养的时间至少为65小时，
所述细菌发酵培养基由细菌复合培养料和水配制而成，细菌复合培养料与水的质量比为1∶400～550；
②将复合发酵共培养形成的发酵液进行过滤，然后在所获滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉；
(2)制备复合真菌粉
①将冻干的总状毛霉菌粉、冻干的黑曲霉菌粉、冻干的米曲霉菌粉、冻干的黑根霉菌粉和冻干的产朊假丝酵母菌粉分别进行活化、扩大培养后获总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液，然后将总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液按体积比1∶1∶1∶1∶1接种于真菌发酵培养基中形成真菌共培养系统，所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)至少为2％，真菌发酵培养基的体积百分数≤98％，用NaOH或HCL调节真菌共培养系统的初始pH值为5.2～5.8，在常压、28℃～30℃进行通风复合共培养，通风复合共培养的时间至少为65小时，
所述真菌发酵培养基由真菌复合培养料和水配制而成，真菌复合培养料与水的质量比为1∶400～550；
②将通风复合共培养形成的发酵液进行过滤，然后在所获滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合真菌粉；
(3)制备复合菌剂
将步骤(1)制备的复合细菌粉和步骤(2)制备的复合真菌粉按质量比1∶1计量并混合均匀即为转化猪排泄物的复合菌剂。复合菌剂真空包装后保存，在室温(室内自然温度)下保存8个月，活菌数可达初始数目的85％左右，使用效果几乎不受影响；在冰箱内冷藏(4℃)保存18个月，活菌数可达初始数目的85％左右，使用效果几乎不受影响。
上述方法优选以下工艺参数：
1、所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数优选2～10％，细菌发酵培养基的体积百分数90～98％；制备复合细菌粉时，复合发酵共培养的时间为65小时～72小时；
所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数2～10％，真菌发酵培养基的体积百分数为90～98％；制备复合真菌粉时，通风复合共培养的时间为65小时～72小时。
2、所述细菌复合培养料由麸皮、稻壳、玉米粉、豆饼粉、蔗糖、蛋白胨、硫酸铵、KH2PO4-Na2HPO4和硫酸镁组成，各组分的质量百分数为：麸皮60～80％、稻壳10～22％、玉米粉4～10％、豆饼粉3～5％、蔗糖0.5～1.5％、蛋白胨0.5～0.75％、硫酸铵0.2～0.4％、KH2PO4-Na2HPO4 0.1～0.3％、硫酸镁0.05～0.1％；
所述真菌复合培养料由麸皮、豆饼粉、NaNO3、硫酸镁、硫胺素、CaCl2和柠檬酸三铵组成，各组分的质量百分数为：麸皮60～70％、豆饼粉29～39％、NaNO3 0.1～0.4％、硫酸镁0.05～0.3％、硫胺素0.01～0.02％、CaCl20.1～0.2％、柠檬酸三铵0.05～0.1％。
3、制备复合细菌粉和复合真菌粉时，多孔淀粉的添加量均为所述滤液质量的12～18％，麦芽糊精的添加量均为所述滤液质量的12～18％，硫脲的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％，聚乙烯吡咯酮的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％。
上述方法中，细菌菌种和真菌菌种的活化按常规方法操作，即分别将生理盐水装于不同的试管内，经灭菌后冷却至30℃，然后在无菌条件下将不同的细菌冻干菌粉和真菌冻干菌粉分别加入各支试管中(每只试管中一种菌粉)，经震荡溶解后置于30℃恒温培养箱中活化30分钟～40分钟备用，各种细菌冻干菌粉和真菌冻干菌粉与生理盐水的配比为：冻干菌粉质量∶生理盐水体积＝1～2∶10，所述冻干菌粉的质量单位为克，生理盐水的体积单位为毫升。
上述方法中，细菌的扩大培养操作如下：
1、将活化后的枯草芽孢杆菌菌液在无菌条件下接入第一扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值为7.2，于30℃摇床(100r/min)培养21小时～24小时，所述枯草芽孢杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第一扩大培养基的体积百分数为99％；扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠和0.5g牛肉膏。
2、将活化后的植物乳杆菌菌液在无菌条件下接入第二扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值为6.4，于33℃摇床(100r/min)培养21小时～24小时，所述植物乳杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第二扩大培养基的体积百分数为99％；第二扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入蔗糖10g、蛋白胨20g、酵母粉10g、NaCl5g、K2HPO45g、KH2PO44g和吐温-80 1ml。
上述方法中，真菌的扩大培养操作如下：
将活化后的五种真菌菌液：总状毛霉菌液、黑曲霉菌液、米曲霉菌液、黑根霉菌液和产朊假丝酵母菌液分别接入第三扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值至6.5～7.1，于28℃摇床(100r/min)培养21小时～24小时，在五种真菌的各自扩大培养系统中，所述真菌菌液的体积百分数为1％，第三扩大培养基的体积百分数为99％；第三扩大培养基由3～7°Bé麦芽汁和3～7°Bé米曲汁组成，3～7°Bé麦芽汁的体积百分数为35～65％，3～7°Bé米曲汁的体积百分数为65～35％。
上述方法中，制备复合细菌粉和复合真菌粉喷雾干燥的技术参数为：喷雾干燥进风温度为175℃～185℃，塔内温度在95℃左右，排风温度在60℃左右，物料平均停留时间≤4.5秒。
本发明所述复合菌剂可用于制备转化猪排泄物的发酵床。将本发明所述复合菌剂与支撑物按质量比1～4∶500计量并混合均匀后铺设于猪舍内，然后喷洒上活化液即成为转化猪排泄物的发酵床，活化液的喷洒量为40～60mL/m2；所述支撑物由稻壳和锯末按质量比1∶1计量并混合均匀形成的混合物及食用菌菌糠(又称“食用菌栽培培养基残基”)组成，稻壳和锯末的混合物与食用菌菌糠的质量比为100∶1～3；所述活化液由质量浓度1～2.5％的葡萄糖水溶液和食用醋组成，所述葡萄糖水溶液与食用醋的体积比为1.5～2∶100。所述发酵床的厚度优选30cm～40cm。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明所述方法采用微生物共培养技术，将两种细菌混合共培养、五种真菌混合共培养，在细菌复合粉、真菌复合粉的制作过程中，微生物之间已经彼此相互作用，按照各自的生长规律，自然形成了一定的比例和协作、共生关系，因而用本发明所述复合菌剂制作的转化猪排泄物的发酵床，能够在较短时间内开始大量增殖微生物，实现猪排泄物的高效转化。
2、本发明所述方法使用喷雾干燥制备复合细菌粉和复合真菌粉，虽然活细胞数量有一定损失，但由于选择了合适的保护剂，活细胞比例可达到80％以上，足以满足实际使用，相较于冷冻干燥制备菌粉，成本降低了数十倍，而且可规模化生产。
3、实验结果表明(见实施例3)，使用本发明所述复合菌剂制作的发酵床养猪，可显著改善猪舍环境卫生，降低污染，减少猪的疾病，平均节约饲料15％左右，剩余排泄物减少25％左右，提高出栏猪重量20％左右，具有明显的社会效益和经济效益。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明所述转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用作进一步说明。下述各实施例中，所用菌种及其来源为：
枯草芽孢杆菌(CICC 10088)，植物乳杆菌(CICC 6026)，总状毛霉(CICC 3039)，黑曲霉(CICC 40575)，米曲霉(CICC 2013)，黑根霉(CICC 40757)，产朊假丝酵母(CICC1422)，均购自中国工业微生物菌种保藏中心。
实施例1
本实施例的步骤如下：
(1)制备复合细菌粉
①细菌菌种活化
在2支试管内分别装入质量浓度0.9％的生理盐水10mL，经121℃灭菌20分钟后冷却至30℃，将枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的冻干菌粉各1g在无菌条件下分别加入2支试管中，经震荡溶解后置于30℃恒温培养箱中活化30分钟备用；
②细菌扩大培养
将活化后的枯草芽孢杆菌菌液在无菌条件下接入第一扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值为7.2，于30℃摇床(100r/min)培养22h，所述枯草芽孢杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第一扩大培养基的体积百分数为99％；扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠和0.5g牛肉膏；
将活化后的植物乳杆菌菌液在无菌条件下接入第二扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值为6.4，于33℃摇床(100r/min)培养22小时，所述植物乳杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第二扩大培养基的体积百分数为99％；第二扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入蔗糖10g、蛋白胨20g、酵母粉10g、NaCl5g、K2HPO45g、KH2PO44g和吐温-80 1ml；
③细菌复合发酵共培养
将上述扩大培养后的枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液按体积比1∶1接种于装有细菌发酵培养基的发酵罐中形成细菌共培养系统，所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)为5％，细菌发酵培养基的体积百分数为95％，用NaOH或HCL调节细菌共培养系统的初始pH值为6.1，在常压、33℃进行复合发酵共培养，复合发酵共培养的时间为65小时；
所述细菌发酵培养基由细菌复合培养料和水配制而成，细菌复合培养料与水的质量比为1∶500；所述细菌复合培养料由麸皮、稻壳、玉米粉、豆饼粉、蔗糖、蛋白胨、硫酸铵、KH2PO4-Na2HPO4和硫酸镁组成，各组分的质量百分数为：麸皮75％、稻壳14％、玉米粉5％、豆饼粉4％、蔗糖1％、蛋白胨0.5％、硫酸铵0.3％、KH2PO4-Na2HPO40.15％、硫酸镁0.05％；
④过滤与制粉
复合发酵共培养结束后，将发酵液经80目过滤器过滤，然后在所滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉，所述喷雾干燥的技术参数：喷雾干燥进风温度为175℃～185℃，塔内温度在95℃左右，排风温度在60℃左右，物料平均停留时间≤4.5秒；
多孔淀粉的添加量为所述滤液质量的15％，麦芽糊精的添加量为所述滤液质量的15％，硫脲的添加量为所述滤液质量的0.1％，聚乙烯吡咯酮(PVP)的添加量为所述滤液质量的0.1％；
采用稀释平板法对复合细菌粉活菌数进行检测，检测结果：复合细菌粉的活菌数为2.57×109个/g，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的比例为67.3∶32.7；
(2)制备复合真菌粉
①真菌菌种活化
在5支试管内分别装入质量浓度0.9％的生理盐水10mL，经121℃灭菌20分钟后冷却至30℃，将总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉和产朊假丝酵母的冻干菌粉各1g在无菌条件下分别加入5支试管中，经震荡溶解后置于30℃恒温培养箱中活化30分钟备用；
②真菌扩大培养
将活化后的五种真菌菌液分别接入第三扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值至6.8，于28℃摇床(100r/min)培养22小时，在五种真菌的各自扩大培养系统中，所述真菌菌液的体积百分数为1％，第三扩大培养基的体积百分数为99％；第三扩大培养基由3～7°Bé麦芽汁和3～7°Bé米曲汁组成，3～7°Bé麦芽汁的体积百分数为50％，3～7°Bé米曲汁的体积百分数为50％；
③真菌复合发酵共培养
将上述扩大培养后的总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液按体积比1∶1∶1∶1∶1接种于真菌发酵培养基中形成共真菌培养系统，所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)为5％，真菌发酵培养基的体积百分数为95％，用NaOH或HCL调节真菌共培养系统的初始pH值为5.5，在常压、28℃进行通风复合共培养，通风复合共培养的时间为72小时；
所述真菌发酵培养基由真菌复合培养料和水配制而成，真菌复合培养料与水的质量比为1∶500，所述真菌复合培养料由麸皮、豆饼粉、NaNO3、硫酸镁、硫胺素、CaCl2和柠檬酸三铵组成，各组分的质量百分数为：麸皮65％、豆饼粉34.5％、NaNO30.24％、硫酸镁0.1％、硫胺素0.01％、CaCl20.1％、柠檬酸三铵0.05％；
④过滤与制粉
通风复合共培养结束后，将发酵液经80目过滤器过滤，然后在所滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉，所述喷雾干燥的技术参数：喷雾干燥进风温度为175℃～185℃，塔内温度在95℃左右，排风温度在60℃左右，物料平均停留时间≤4.5秒；
多孔淀粉的添加量为所述滤液质量的15％，麦芽糊精的添加量为所述滤液质量的15％，硫脲的添加量为所述滤液质量的0.1％，聚乙烯吡咯酮(PVP)的添加量为所述滤液质量的0.1％；
采用稀释平板法对复合真菌粉活菌数进行检测，检测结果：复合真菌粉中的活菌数为3.14×109个/g；
(3)制备复合菌剂
将步骤(1)制备的复合细菌粉和步骤(2)制备的复合真菌粉按质量比1∶1计量并混合均匀即为转化猪排泄物的复合菌剂，真空包装保存。
实施例2
本实施例的步骤如下：
(1)制备复合细菌粉
①细菌菌种活化
在2支试管内分别装入质量浓度0.9％的生理盐水10mL，经121℃灭菌20分钟后冷却至30℃，将枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的冻干菌粉各2g在无菌条件下分别加入2支试管中，经震荡溶解后置于30℃恒温培养箱中活化40分钟备用；
②细菌扩大培养
将活化后的枯草芽孢杆菌菌液在无菌条件下接入第一扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值为7.2，于30℃摇床(100r/min)培养24h，所述枯草芽孢杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第一扩大培养基的体积百分数为99％；扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠和0.5g牛肉膏；
将活化后的植物乳杆菌菌液在无菌条件下接入第二扩大培养基中，用NaOH或HCL调调pH值为6.4，于33℃摇床(100r/min)培养24小时，所述植物乳杆菌菌液的体积百分数为1％，所述第二扩大培养基的体积百分数为99％；第二扩大培养基的配方为：1L蒸馏水中加入蔗糖10g、蛋白胨20g、酵母粉10g、NaCl5g、K2HPO45g、KH2PO44g和吐温-80 1ml；
③细菌复合发酵共培养
将上述扩大培养后的枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液按体积比1∶1接种于装有细菌发酵培养基的发酵罐中形成细菌共培养系统，所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)为2％，细菌发酵培养基的体积百分数为98％，用NaOH或HCL调节细菌共培养系统的初始pH值为6.3，在常压、30℃进行复合发酵共培养，复合发酵共培养的时间为72小时；
所述细菌发酵培养基由细菌复合培养料和水配制而成，细菌复合培养料与水的质量比为1∶500；所述细菌复合培养料由麸皮、稻壳、玉米粉、豆饼粉、蔗糖、蛋白胨、硫酸铵、KH2PO4-Na2HPO4和硫酸镁组成，各组分的质量百分数为：麸皮65％、稻壳22％、玉米粉8％、豆饼粉3％、蔗糖0.8％、蛋白胨0.7％、硫酸铵0.2％、KH2PO4-Na2HPO4 0.2％、硫酸镁0.1％；
④过滤与制粉
复合发酵共培养结束后，将发酵液经80目过滤器过滤，然后在所滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉，所述喷雾干燥的技术参数：喷雾干燥进风温度为175℃～185℃，塔内温度在95℃左右，排风温度在60℃左右，物料平均停留时间≤4.5秒；
多孔淀粉的添加量为所述滤液质量的18％，麦芽糊精的添加量为所述滤液质量的12％，硫脲的添加量为所述滤液质量的0.15％，聚乙烯吡咯酮(PVP)的添加量为所述滤液质量的0.05％；
采用稀释平板法对复合细菌粉活菌数进行检测，检测结果：复合细菌粉的活菌数为3.14×109个/g，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的比例为68.17∶31.83；
(2)制备复合真菌粉
①真菌菌种活化
在5支试管内分别装入质量浓度0.9％的生理盐水10mL，经121℃灭菌20分钟后冷却至30℃，将总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉和产朊假丝酵母的冻干菌粉各2g在无菌条件下分别加入5支试管中，经震荡溶解后置于30℃恒温培养箱中活化40分钟备用；
②真菌扩大培养
将活化后的五种真菌菌液分别接入第三扩大培养基中，用NaOH或HCL调pH值至6.5，于28℃摇床(100r/min)培养24小时，在五种真菌的各自扩大培养系统中，所述真菌菌液的体积百分数为1％，第三扩大培养基的体积百分数为99％；第三扩大培养基由3～7°Bé麦芽汁和3～7°Bé米曲汁组成，3～7°Bé麦芽汁的体积百分数为40％，3～7°Bé米曲汁的体积百分数为60％；
③真菌复合发酵共培养
将上述扩大培养后的总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液按体积比1∶1∶1∶1∶1接种于真菌发酵培养基中形成共真菌培养系统，所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数(又称“接种量”)为2％，真菌发酵培养基的体积百分数为98％，用NaOH或HCL调节真菌共培养系统的初始pH值为5.2，在常压、30℃进行通风复合共培养，通风复合共培养的时间为65小时；
所述真菌发酵培养基由真菌复合培养料和水配制而成，真菌复合培养料与水的质量比为1∶500，所述真菌复合培养料由麸皮、豆饼粉、NaNO3、硫酸镁、硫胺素、CaCl2和柠檬酸三铵组成，各组分的质量百分数为：麸皮69％、豆饼粉30％、NaNO30.4％、硫酸镁0.3％、硫胺素0.02％、CaCl20.18％、柠檬酸三铵0.1％；
④过滤与制粉
通风复合共培养结束后，将发酵液经80目过滤器过滤，然后在所滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉，所述喷雾干燥的技术参数：喷雾干燥进风温度为175℃～185℃，塔内温度在95℃左右，排风温度在60℃左右，物料平均停留时间≤4.5秒；
多孔淀粉的添加量为所述滤液质量的18％，麦芽糊精的添加量为所述滤液质量的12％，硫脲的添加量为所述滤液质量的0.15％，聚乙烯吡咯酮(PVP)的添加量为所述滤液质量的0.05％；
采用稀释平板法对复合真菌粉活菌数进行检测，检测结果：复合真菌粉中的活菌数为4.687×109个/g；
(3)制备复合菌剂
将步骤(1)制备的复合细菌粉和步骤(2)制备的复合真菌粉按质量比1∶1计量并混合均匀即为转化猪排泄物的复合菌剂，真空包装保存。
实施例3
选择断乳仔猪100头，随机分成5组，每组20头，分别饲养在不同猪舍中，其中四组为实验组，一组为空白对照组。将实施例1制备的复合菌剂与支撑物分别按质量比1∶500、2∶500、3∶500、4∶500计量并混合均匀后分别铺设于四个实验组的猪舍内，铺设厚度为40cm，然后以50mL/m2的喷洒量喷洒上活化液即成为转化猪排泄物的发酵床(喷洒活化液后即可使用)。所述支撑物由稻壳和锯末按质量比1∶1计量并混合均匀形成的混合物及食用菌菌糠(又称“食用菌栽培培养基残基”)组成，稻壳和锯末的混合物与食用菌菌糠的质量比为100∶2；所述活化液由质量浓度2.5％的葡萄糖水溶液和食用醋组成，所述葡萄糖水溶液与食用醋的体积比为2∶100。在空白对照组的猪舍内铺设40cm厚度的稻壳和锯末按质量比1∶1计量并混合均匀形成的支撑物。保持五组猪舍的其它所有条件相同，饲养120天，观察并记录各组猪舍的卫生状况、猪生长情况、猪生病情况、饲料消耗量和出栏时的重量以及出栏后猪舍内的排泄物总量(含铺设的支撑物)见下表：
| 实验组别 | 复合菌剂接种量 | 猪舍卫生状况 | 生病次数 | 生长情况 | 饲料费用(人民币：元) | 剩余排泄物总量(T) | 出栏猪平均重量(kg) |
| 空白对照组 | 0 | 50m左右有恶臭，圈舍内大量滋生蚊蝇 | 11 | 毛色暗淡，躯体较脏 | 6996 | 3.26 | 123 |
| 实验 | 1∶500 | 5m以外无 | 2 | 毛色光 | 5975 | 2.58 | 150 |
| Ⅰ组 | 明显臭味，圈舍内无蚊蝇滋生 | 亮，躯体干净 |
| 实验组别 | 复合菌剂接种量 | 猪舍卫生状况 | 生病次数 | 生长情况 | 饲料费用(人民币：元) | 剩余排泄物总量(T) | 出栏猪平均重量(kg) |
| 实验Ⅱ组 | 2∶500 | 5m以外无丝毫臭味，圈舍内无蚊蝇滋生 | 0 | 毛色光亮，躯体干净 | 5877 | 2.45 | 156 |
| 实验Ⅲ组 | 3∶500 | 5m以外无丝毫臭味，圈舍内无蚊蝇滋生 | 1 | 毛色光亮，躯体干净 | 5842 | 2.48 | 152 |
| 实验Ⅳ组 | 4∶500 | 5m以外无丝毫臭味，圈舍内无蚊蝇滋生 | 0 | 毛色光亮，躯体干净 | 5947 | 2.40 | 159 |
实验结果表明：使用本发明复合菌剂制作的发酵床养猪，可显著改善猪舍环境卫生，降低污染，减少疾病，平均节约饲料15％左右，剩余排泄物减少25％左右，提高出栏猪重量20％左右。以上实验同时表明，复合菌剂接种量在1～4∶500之间，转化猪排泄物的效果无明显差异。
进一步实验表明，实验组猪舍剩余排泄物的肥效比空白对照组猪舍排泄物的肥效提高30％左右，可作为蔬菜和花卉的高级肥料，因此本发明无论从经济效益还是环保效益上都具有极其显著的积极意义。
Claims (9)
1.一种高效转化猪排泄物的复合菌剂，其特征在于由复合细菌粉和复合真菌粉混合而成，复合细菌粉与复合真菌粉的质量比为1∶1，
所述复合细菌粉主要由枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的共培养物及多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮组成，所述复合真菌粉主要由总状毛霉、黑曲霉、米曲霉、黑根霉和产朊假丝酵母的共培养物及多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮组成。
2.一种高效转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，其特征在于工艺步骤如下：
(1)制备复合细菌粉
①将冻干的枯草芽孢杆菌粉和冻干的植物乳杆菌粉分别进行活化、扩大培养后获枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液，然后将枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液按体积比1∶1接种于细菌发酵培养基中形成细菌共培养系统，所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数至少为2％，细菌发酵培养基的体积百分数≤98％，调节细菌共培养系统的初始pH值为6～6.3，在常压、30℃～33℃进行复合发酵共培养，复合发酵共培养的时间至少为65小时，
所述细菌发酵培养基由细菌复合培养料和水配制而成，细菌复合培养料与水的质量比为1∶400～550；
②将复合发酵共培养形成的发酵液进行过滤，然后在所获滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合细菌粉；
(2)制备复合真菌粉
①将冻干的总状毛霉菌粉、冻干的黑曲霉菌粉、冻干的米曲霉菌粉、冻干的黑根霉菌粉和冻干的产朊假丝酵母菌粉分别进行活化、扩大培养后获总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液，然后将总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液按体积比1∶1∶1∶1∶1接种于真菌发酵培养基中形成真菌共培养系统，所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数至少为2％，真菌发酵培养基的体积百分数≤98％，调节真菌共培养系统的初始pH值为5.2～5.8，在常压、28℃～30℃进行通风复合共培养，通风复合共培养的时间至少为65小时，
所述真菌发酵培养基由真菌复合培养料和水配制而成，真菌复合培养料与水的质量比为1∶400～550：
②将通风复合共培养形成的发酵液进行过滤，然后在所获滤液中添加多孔淀粉、麦芽糊精、硫脲和聚乙烯吡咯酮并混合均匀，经喷雾干燥即获复合真菌粉；
(3)制备复合菌剂
将步骤(1)制备的复合细菌粉和步骤(2)制备的复合真菌粉按质量比1∶1计量并混合均匀即为转化猪排泄物的复合菌剂。
3.根据权利要求2所述的高效转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，其特征在于所述细菌共培养系统中，枯草芽孢杆菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液的总体积百分数为2～10％，细菌发酵培养基的体积百分数90～98％；
所述真菌共培养系统中，总状毛霉菌悬液、黑曲霉菌悬液、米曲霉菌悬液、黑根霉菌悬液和产朊假丝酵母菌悬液的总体积百分数2～10％，真菌发酵培养基的体积百分数为90～98％。
4.根据权利要求2或3所述的高效转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，其特征在于所述细菌复合培养料由麸皮、稻壳、玉米粉、豆饼粉、蔗糖、蛋白胨、硫酸铵、KH2PO4-Na2HPO4和硫酸镁组成，各组分的质量百分数为：麸皮60～80％、稻壳10～22％、玉米粉4～10％、豆饼粉3～5％、蔗糖0.5～1.5％、蛋白胨0.5～0.75％、硫酸铵0.2～0.4％、KH2PO4-Na2HPO40.1～0.3％、硫酸镁0.05～0.1％；
所述真菌复合培养料由麸皮、豆饼粉、NaNO3、硫酸镁、硫胺素、CaCl2和柠檬酸三铵组成，各组分的质量百分数为：麸皮60～70％、豆饼粉29～39％、NaNO3 0.1～0.4％、硫酸镁0.05～0.3％、硫胺素0.01～0.02％、CaCl2 0.1～0.2％、柠檬酸三铵0.05～0.1％。
5.根据权利要求2或3所述的高效转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，其特征在于制备复合细菌粉和复合真菌粉时，多孔淀粉的添加量均为所述滤液质量的12～18％，麦芽糊精的添加量均为所述滤液质量的12～18％，硫脲的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％，聚乙烯吡咯酮的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％。
6.根据权利要求4所述的高效转化猪排泄物的复合菌剂的制备方法，其特征在于制备复合细菌粉和复合真菌粉时，多孔淀粉的添加量均为所述滤液质量的12～18％，麦芽糊精的添加量均为所述滤液质量的12～18％，硫脲的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％，聚乙烯吡咯酮的添加量均为所述滤液质量的0.05～0.15％。
7.权利要求1所述复合菌剂在制备转化猪排泄物的发酵床中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于将复合菌剂与支撑物按质量比1～4∶500计量并混合均匀后铺设于猪舍内，然后喷洒上活化液即成为转化猪排泄物的发酵床，活化液的喷洒量为40～60mL/m2，
所述支撑物由稻壳和锯末按质量比1∶1计量并混合均匀形成的混合物及食用菌菌糠组成，稻壳和锯末的混合物与食用菌菌糠的质量比为100∶1～3，
所述活化液由质量浓度1～2.5％的葡萄糖水溶液和食用醋组成，所述葡萄糖水溶液与食用醋的体积比为1.5～2∶100。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于所述发酵床的厚度为30cm～40cm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010174274A CN101851121B (zh) | 2010-05-18 | 2010-05-18 | 高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010174274A CN101851121B (zh) | 2010-05-18 | 2010-05-18 | 高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101851121A true CN101851121A (zh) | 2010-10-06 |
| CN101851121B CN101851121B (zh) | 2012-10-10 |
Family
ID=42802836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010174274A Expired - Fee Related CN101851121B (zh) | 2010-05-18 | 2010-05-18 | 高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101851121B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013890A (zh) * | 2012-12-27 | 2013-04-03 | 山东大学 | 一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法 |
| CN103461149A (zh) * | 2013-08-20 | 2013-12-25 | 陕西省环境科学研究院 | 一种生物发酵床垫料及其应用 |
| CN103739320A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种新型微生态肥 |
| CN103739319A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种微生物肥料 |
| CN103739323A (zh) * | 2013-12-28 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种高效复合生物肥料的制备方法 |
| CN103739318A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种微生物复合肥料的制备方法 |
| CN111808764A (zh) * | 2019-04-11 | 2020-10-23 | 河北维尔利动物药业集团有限公司 | 用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1232873A (zh) * | 1998-04-20 | 1999-10-27 | 天津轻工业学院 | 芽孢乳酸菌粉剂的生产方法 |
| CN1594538A (zh) * | 2004-07-08 | 2005-03-16 | 中国海洋大学 | 一种微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN101356950A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-04 | 东北农业大学 | 一种复合菌剂发酵床的制备方法 |
| CN101463335A (zh) * | 2009-01-16 | 2009-06-24 | 黑龙江泽农寒地生物工程有限公司 | 一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法 |
-
2010
- 2010-05-18 CN CN201010174274A patent/CN101851121B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1232873A (zh) * | 1998-04-20 | 1999-10-27 | 天津轻工业学院 | 芽孢乳酸菌粉剂的生产方法 |
| CN1594538A (zh) * | 2004-07-08 | 2005-03-16 | 中国海洋大学 | 一种微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN101356950A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-04 | 东北农业大学 | 一种复合菌剂发酵床的制备方法 |
| CN101463335A (zh) * | 2009-01-16 | 2009-06-24 | 黑龙江泽农寒地生物工程有限公司 | 一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 《中国酿造》 20080515 徐颖宣等 微生物混菌发酵应用研究进展 第4页 1-9 , 第9期 2 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013890B (zh) * | 2012-12-27 | 2014-08-13 | 山东大学 | 一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法 |
| CN103013890A (zh) * | 2012-12-27 | 2013-04-03 | 山东大学 | 一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法 |
| CN103461149B (zh) * | 2013-08-20 | 2015-09-30 | 陕西省环境科学研究院 | 一种生物发酵床垫料及其应用 |
| CN103461149A (zh) * | 2013-08-20 | 2013-12-25 | 陕西省环境科学研究院 | 一种生物发酵床垫料及其应用 |
| CN103739323A (zh) * | 2013-12-28 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种高效复合生物肥料的制备方法 |
| CN103739323B (zh) * | 2013-12-28 | 2016-03-09 | 邵素英 | 一种复合生物肥料的制备方法 |
| CN103739319A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种微生物肥料 |
| CN103739318A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种微生物复合肥料的制备方法 |
| CN103739320A (zh) * | 2013-12-30 | 2014-04-23 | 邵素英 | 一种新型微生态肥 |
| CN103739318B (zh) * | 2013-12-30 | 2015-07-01 | 邵素英 | 一种微生物复合肥料的制备方法 |
| CN103739320B (zh) * | 2013-12-30 | 2015-09-02 | 邵素英 | 一种新型微生态肥 |
| CN103739319B (zh) * | 2013-12-30 | 2015-12-09 | 山东丰迈生物科技有限公司 | 一种微生物肥料 |
| CN111808764A (zh) * | 2019-04-11 | 2020-10-23 | 河北维尔利动物药业集团有限公司 | 用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101851121B (zh) | 2012-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104293694B (zh) | 一种污泥好氧堆肥复合菌剂的制备方法 | |
| CN102160595B (zh) | 一种复合微生物发酵活性饲料的制备工艺 | |
| CN101851121B (zh) | 高效转化猪排泄物的复合菌剂及其制备方法与应用 | |
| CN102409007B (zh) | 一种芽孢杆菌微生态制剂及其液固结合发酵制备工艺 | |
| CN104388363A (zh) | 一种有机垃圾除臭、减量复合菌及其制备方法 | |
| CN102286417B (zh) | 高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺 | |
| CN101914445B (zh) | 土著益生微生物固体菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN103820350B (zh) | 餐厨垃圾资源化生产解淀粉芽孢杆菌微生物肥料 | |
| CN105567740A (zh) | 农用芽孢杆菌的高密度固体发酵方法 | |
| CN101463325A (zh) | 北冬虫夏草的工厂化栽培方法 | |
| CN102093958B (zh) | 一种超薄发酵床菌剂的生产方法 | |
| CN103289937B (zh) | 一种高密度固体发酵生产侧孢芽孢杆菌活菌的方法 | |
| CN104522299A (zh) | 一种湿基生物活性制品的制备方法 | |
| CN102533553A (zh) | 一种快速降解稻草秸秆的有机物料腐熟组合菌剂及其应用方法 | |
| CN103497914B (zh) | 枯草芽孢杆菌菌株及利用该菌株生产γ-PGA的方法 | |
| CN104293719B (zh) | 一种发酵床陈化垫料的快腐菌剂、有机肥及其生产方法 | |
| CN103184174A (zh) | 培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产 | |
| CN100571531C (zh) | 一种活性蛋白饲料及其制备方法 | |
| CN101857469A (zh) | 三次连续发酵生产高尔夫球场草坪缓释生物有机肥制备工艺 | |
| CN104673728B (zh) | 一种农用芽孢杆菌菌剂的原位固体发酵方法 | |
| KR101134324B1 (ko) | 미생물 대량 생산을 위한 분말 배지 | |
| CN105925495A (zh) | 一种高活性粉状毕赤酵母菌粉及其制备方法 | |
| CN107779416A (zh) | 一种高效发酵床用复合微生物菌剂 | |
| CN103205388B (zh) | 一种高密度固体发酵生产地衣芽孢杆菌活菌的方法 | |
| CN108991244A (zh) | 一种可提高动物机体消化性能的饲用添加剂及生产工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121010 Termination date: 20150518 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |