CN111808764A - 用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法 - Google Patents

用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法及相关应用。制备步骤包括：A、制作复合菌群原料；B、制作一级液体菌种：（1）配置培养液；（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1‑2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10‑50ml；混匀菌种，然后培养1‑2.5天，得一级液体菌种；C、制作二级液体菌种，得到复合液体益生菌剂。本发明以高校研究课题成果为依据，所制备的复合菌液当中含有特定的益生菌群，通过在禽畜养殖场所喷洒所述复合液体益生菌剂，可进行禽畜疫病的防治。

Description

用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法
技术领域
本发明涉及禽畜养殖技术领域，尤其是一种用于禽畜生态环境改善的复合菌液的制备和应用。
背景技术
目前，禽畜人工养殖行业中，禽畜饲养环境的改良处理是一个难题，禽蓄粪便及各种有害病菌的滋生也是导致禽畜疫病的重要来源。现有技术中，主要通过化学工业品进行定期消毒处理，效果不持久，且容易对禽畜本身造成伤害。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法及相关应用。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。
用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，该方法包括如下制备步骤：
A、制作复合菌群原料：
（1）取枯草芽胞杆菌原液在碳源充足的温暖溶液中充分扩繁活化，备用；
（2）同时进行产朊假丝酵母的母种培养，将产朊假丝酵母菌丝块接入到PDA培养基上，25℃黑暗培养直至菌丝长满斜面，备用；
B、制作一级液体菌种：
（1）配置培养液；所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯18-20，红糖1-1.5，葡萄糖1.5-2，麦麸4-5，蛋白胨0.3-0.5，磷酸二氢钾0.01-0.03，硫酸镁0.1-0.2，清水78-80，pH值自然；再向培养液中加入维生素B1；
（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1-2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10-50ml；混匀菌种，然后培养1-2.5天，得一级液体菌种；
C、制作二级液体菌种：
（1）将9-11重量份的土豆加90-100重量份的水煮至酥而不烂后加入3.4-3.8重量份的大片麦麸，用6-8层纱布过滤后，向滤液中加入2.5-3重量份的辅料和0.025-0.03体积份的消泡剂，作为培养料；
（2）将350-370体积份的培养料注入培养罐内，124℃灭菌35分钟后，降温至30℃以下；将0.8-1.2体积份的一级液体菌种在无菌条件下接入到培养罐内；培养72-96小时，培养温度25℃，空气流量1.2m³/h以上；培养结束后得二级液体菌种，即为复合液体益生菌剂；
所述重量份的单位为g或kg，对应的体积份单位为mL或L。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤A中，所述枯草芽胞杆菌经活化扩繁后的活菌数量不低于50亿UFC/mL。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯20，红糖1.2-1.5，葡萄糖1.5，麦麸4-5，蛋白胨0.3，磷酸二氢钾0.02，硫酸镁0.1，清水70-75。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，维生素B1的含量为5mg/L。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（2）中，菌种混匀后，摇床振荡培养，振荡频率为180转/分钟，摇床温度控制在24-26℃。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤C-（1）中，所述辅料包括如下重量份的组分：红糖1.35，葡萄糖0.9，蛋白胨0.18，磷酸二氢钾0.18，硫酸镁0.09。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤C-（2）中，培养过程中控制动态罐压介于0.02-0.04MPa。
上述方法制备的复合液体益生菌剂也在本发明技术方案的涵盖范围之内。
复合液体益生菌剂在禽畜养殖环境改良方面的用途，通过在禽畜养殖场所喷洒所述复合液体益生菌剂进行禽畜疫病的防治。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明以高校研究课题成果为依据，所制备的复合菌液当中含有特定的益生菌群，通过在禽畜养殖场所喷洒所述复合液体益生菌剂，即可进行禽畜疫病的防治；与现有技术中通过化学工业品进行定期消毒处理相比，首先杜绝了对禽畜本身造成伤害，同时益生菌群通过生态占位效应能够长期抑制杂菌、病菌的滋生，疫病防治效果十分明显。在我公司的藁城直属饲养场、太行山试验站、河南新乡养殖场的施用试验均获得极大的成功，疫病发病率为零，具有十分突出的技术优势和实用效果。
从工艺上看，本发明还具有至少如下优势：①液体菌种没有级别之分，也就是说液体菌种既可以做为母种接原种，简化了生产工艺；②液体菌种生产需经过筛选、提纯，属纯菌种，在生产过程中设备封闭运行，是一个选优复壮的过程，属纯培养；③采用液体菌种从制种到获得成品耗时一周之内，生产周期短，效率高；④采用液体菌种接种后24小时萌发，能够杜绝杂菌的滋生；⑤液体菌种整个生产过程都是在一个罐体内完成，操作便捷，大幅降低了生产、管理费用和人工成本。
具体实施方式
以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得。其中，产朊假丝酵母购自苏州北纳创联生物技术有限公司，枯草芽胞杆菌原液购自市场，如北京百丰天下公司，亦可采用日本进口原液。下述的重量份的单位为g或kg，对应的体积份单位为mL或L。
实施例1、制作复合菌群原料。
取枯草芽胞杆菌原液在碳源充足的温暖溶液中充分扩繁活化，枯草芽胞杆菌经活化扩繁后的活菌数量不低于50亿UFC/mL；同时进行产朊假丝酵母的母种培养，将产朊假丝酵母菌丝块接入到PDA培养基上，25℃黑暗培养直至菌丝长满斜面。
实施例2、制作一级液体菌种。
配置培养液；培养液包括如下重量份的组分：马铃薯20，红糖1.2-1.5，葡萄糖1.5，麦麸4-5，蛋白胨0.3，磷酸二氢钾0.02，硫酸镁0.1，清水70-75，pH值自然；再向培养液中加入维生素B1，维生素B1的含量为5mg/L； 将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1-2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10-50ml；混匀菌种，摇床振荡培养，振荡频率为180转/分钟，摇床温度控制在24-26℃，然后培养1.5天，得一级液体菌种。
实施例3、制作二级液体菌种。
将9-11重量份的土豆加90-100重量份的水煮至酥而不烂后加入3.4-3.8重量份的大片麦麸，用6-8层纱布过滤后，向滤液中加入2.5-3重量份的辅料和0.025-0.03体积份的消泡剂，作为培养料；辅料包括如下重量份的组分：红糖1.35，葡萄糖0.9，蛋白胨0.18，磷酸二氢钾0.18，硫酸镁0.09；将350-370体积份的培养料注入培养罐内，124℃灭菌35分钟后，降温至30℃以下；将0.8-1.2体积份的一级液体菌种在无菌条件下接入到培养罐内；培养72-96小时，培养温度25℃，空气流量1.2m³/h以上，培养过程中控制动态罐压介于0.02-0.04MPa之间；培养结束即得复合液体益生菌剂。
实施例4、复合液体益生菌剂的用途。
在具体使用时，在禽畜养殖场所定期（一般1月一次即可）喷洒复合液体益生菌剂，即可实现对禽畜养殖环境改良；在禽畜疫病的防治方面，由于益生菌群的生态占位效应，能够有效抑制杂菌、病菌的滋生，实现疫病的防治。与现有技术中通过化学工业品进行定期消毒处理相比，杜绝了对禽畜本身造成伤害，同时能够长期抑制杂菌、病菌的滋生，疫病防治效果十分明显。在我公司的藁城直属饲养场、太行山试验站、河南新乡养殖场的施用试验均获得极大的成功，疫病发病率为零，具有十分突出的技术优势和实用效果。
上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。

Claims (10)

1.用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：该方法包括如下制备步骤：
A、制作复合菌群原料：
（1）取枯草芽胞杆菌原液在碳源充足的温暖溶液中充分扩繁活化，备用；
（2）同时进行产朊假丝酵母的母种培养，将产朊假丝酵母菌丝块接入到PDA培养基上，25℃黑暗培养直至菌丝长满斜面，备用；
B、制作一级液体菌种：
（1）配置培养液；所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯18-20，红糖1-1.5，葡萄糖1.5-2，麦麸4-5，蛋白胨0.3-0.5，磷酸二氢钾0.01-0.03，硫酸镁0.1-0.2，清水78-80，pH值自然；再向培养液中加入维生素B1；
（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1-2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10-50ml；混匀菌种，然后培养1-2.5天，得一级液体菌种；
C、制作二级液体菌种：
（1）将9-11重量份的土豆加90-100重量份的水煮至酥而不烂后加入3.4-3.8重量份的大片麦麸，用6-8层纱布过滤后，向滤液中加入2.5-3重量份的辅料和0.025-0.03体积份的消泡剂，作为培养料；
（2）将350-370体积份的培养料注入培养罐内，124℃灭菌35分钟后，降温至30℃以下；将0.8-1.2体积份的一级液体菌种在无菌条件下接入到培养罐内；培养72-96小时，培养温度25℃，空气流量1.2m³/h以上；培养结束后得二级液体菌种，即为复合液体益生菌剂；
所述重量份的单位为g或kg，对应的体积份单位为mL或L。
2.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤A中，所述枯草芽胞杆菌经活化扩繁后的活菌数量不低于50亿UFC/mL。
3.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤B-（1）中，所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯20，红糖1.2-1.5，葡萄糖1.5，麦麸4-5，蛋白胨0.3，磷酸二氢钾0.02，硫酸镁0.1，清水70-75。
4.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤B-（1）中，维生素B1的含量为5mg/L。
5.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤B-（2）中，菌种混匀后，摇床振荡培养，振荡频率为180转/分钟，摇床温度控制在24-26℃。
6.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤C-（1）中，所述辅料包括如下重量份的组分：红糖1.35，葡萄糖0.9，蛋白胨0.18，磷酸二氢钾0.18，硫酸镁0.09。
7.根据权利要求1所述的用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，其特征在于：步骤C-（2）中，培养过程中控制动态罐压介于0.02-0.04MPa。
8.权利要求1-7任一项所述的方法制备的复合液体益生菌剂。
9.权利要求1-7任一项所述的方法制备的复合液体益生菌剂在禽畜养殖环境改良方面的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：通过在禽畜养殖场所喷洒所述复合液体益生菌剂进行禽畜疫病的防治。
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