CN111908969A - 一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制备方法和使用方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制备方法和使用方法,它属于农业微生物领域,具体涉及一种预防水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制备方法和使用方法。本发明的目的是要解决现有使用浓硫酸用于预防寒地水稻育苗根腐病存在使用过程中容易造成人员烧伤,使用不当会又会造成烧苗现象的问题。一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,以复合微生物发酵剂作为菌种,接种于固体发酵培养基中。备方法:一、配置固体发酵培养基;二、发酵,得到用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料;使用方法:先将用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土混合均匀,再装盘。本发明主要用于制备微生物发酵肥料。

Description

一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制 备方法和使用方法
技术领域
本发明属于农业微生物领域,具体涉及一种预防水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制备方法和使用方法。
背景技术
东北地区为我国重要商品粮基地,尤其是寒地水稻种植面积位居全国首位。寒地水稻种植因环境影响,需要提前在温室大棚中育苗抢积温,但由于春季经常发生低温冻害,水稻育苗时常发生大面积根腐病,严重地区整棚水稻秧苗病死,给稻农造成巨大损失。导致寒地水稻育苗根腐病的病菌多属于真菌,最适生长pH程弱碱性,育苗前期,常发生低温冻害,秧苗弱,病菌极易侵入秧苗根部,从近地表外开始腐烂,有灰色或紫色霉状物,传染性强,先由点到片发病,逐渐向四周蔓延扩展,若防治不及时,两三天内就可扩展到整栋育秧棚,而将育苗土的pH值控制在酸性条件下,真菌类病害就没有滋生的适宜土壤环境条件,其发病几率大大降低。为抑制根腐病发生,稻农常采用调整土壤酸度来抑制病菌,常用的是浓硫酸,因浓硫酸为易制毒化学品,不易购买,且使用过程中容易造成人员烧伤,使用不当会又会造成烧苗现象。
中国已公开专利《一种防治水稻根腐病有机肥的制备方法》(申请号:201711235696.6)中公开一种水稻有机肥,以包括酵母菌、放线菌、枯草杆菌和根霉菌中二种或以上作为混合菌种,使用辐照强度20-30雷姆的γ射线和光照强度210-230lux紫外光交替照射,获取具有较高抗生素代谢能力的变异菌种,以豆粕、大豆秸秆、西瓜藤、稻壳、葡萄叶和鸡粪等有机原料制备蒸煮有机料,再利用变异菌种对蒸煮有机料进行发酵,得到发酵有机料,发酵有机料经过制粒和包衣,得到水稻有机肥,但是专利中明确给出水稻有机肥使用方法为:先将水稻田水排干,晾晒3-4天至土壤水分含量在50%-60%,然后按照每亩300-400kg均匀施撒水稻有机肥,晾晒2天后向稻田中浇灌水;而大田水稻根腐病产生的原因是根部长期浸渍在水中、土壤中氧气含量降低,为真菌滋生提供了生长繁殖条件;虽然大田水稻根腐病与寒地水稻育苗根腐病都属于水稻根腐病,但发病原因不同;所以该水稻有机肥只能用于预防大田水稻根腐病,而无法代替浓硫酸用于预防寒地水稻育苗根腐病。
发明内容
本发明的目的是要解决现有使用浓硫酸用于预防寒地水稻育苗根腐病存在使用过程中容易造成人员烧伤,使用不当会又会造成烧苗现象的问题,而提供一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料及其制备方法和使用方法。
一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,以复合微生物发酵剂作为菌种,接种于固体发酵培养基中,且用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述复合微生物发酵剂中的活性微生物包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和哈茨木霉;所述固体发酵培养基按照重量份数由20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉混合而成。
一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的制备方法,具体是按以下按步骤完成的:
一、配置固体发酵培养基:按照重量份数称取20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉并混合均匀,然后将含水量调至55~65%,得到固体发酵培养基;
二、发酵:将复合微生物发酵剂和固体发酵培养基装入带呼吸阀的发酵袋中,在温度为25~35℃下发酵20d~30d,得到用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;
所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2~3份植物乳杆菌发酵液、1~2份嗜酸乳杆菌发酵液、1~2份巨大芽孢杆菌发酵液、2~3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1~2份哈茨木霉发酵液组成;
所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取5kg~10kg动物蛋白胨、5kg~10kg玉米糖化醪、1kg~2kg氯化钠、0.1kg~0.4kg氢氧化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为180r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取10kg~20kg糖蜜、5kg~10kg120目的豆粕粉、1kg~2kg七水硫酸镁、0.5kg~1kg磷酸二氢钾和0.5kg~1kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为160r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取10kg~20kg可溶性淀粉、2.5kg~5kg酵母膏、0.5kg~1kg七水硫酸亚铁、0.5kg~1kg七水硫酸镁和0.5kg~1kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为23~28℃下发酵时间3d~5d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为150r/min~250r/min;发酵过程中通风比为1:(1~2);所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数不低于1×108CFU/mL。
一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的使用方法,具体是按以下步骤完成的:先将用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土混合均匀,再装盘;所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为(1~5):(95~99)。
本发明原理及优点:
一、本发明采用植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌联合发酵豆粕类基质,产生大量有机酸,可使育苗基质pH值稳定在4.5-5.5之间,并添加糠醛渣等酸性基质调节,整个育苗期都可保持稳定酸性土壤条件,缓冲性好于无机酸,不烧苗;二、哈茨木霉是一种广谱抗菌作用的农用生防菌,对造成根腐病的各种病原菌均具有抑制作用,可有效预防育秧过程中各种真菌类病害的侵袭。本发明添加哈茨木霉菌对产生根腐病的病菌存在明显的抑制作用;三、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌对秧苗根系促进作用明显,根据微生物占位原理,也可防治真菌对秧苗根系的侵害。两种芽孢杆菌也能促进秧苗对营养元素的吸收,促根壮苗,从而增强秧苗抗性,起到防病作用。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式是一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,它以复合微生物发酵剂作为菌种,接种于固体发酵培养基中,且用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述复合微生物发酵剂中的活性微生物包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和哈茨木霉;所述固体发酵培养基按照重量份数由20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉混合而成。
本实施方式中所述植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No.14111。
本实施方式中所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌DH213,保藏编号CGMCC No.11228。
本实施方式中所述巨大芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.8866。
本实施方式中所述胶冻样芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.6766。
本实施方式中所述哈茨木霉的保藏编号为CGMCC NO.10924。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2~3份植物乳杆菌发酵液、1~2份嗜酸乳杆菌发酵液、1~2份巨大芽孢杆菌发酵液、2~3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1~2份哈茨木霉发酵液组成;且植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL,嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL,巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL,所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL,哈茨木霉发酵液中活孢子数不小于1×108CFU/mL。其他与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式二的不同点是:所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL。
其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式二的不同点是:所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL。
其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式二的不同点是:所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取5kg~10kg动物蛋白胨、5kg~10kg玉米糖化醪、1kg~2kg氯化钠、0.1kg~0.4kg氢氧化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为180r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL。
其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式六:本实施方式与具体实施方式二的不同点是:所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取10kg~20kg糖蜜、5kg~10kg120目的豆粕粉、1kg~2kg七水硫酸镁、0.5kg~1kg磷酸二氢钾和0.5kg~1kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为160r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL。
其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式七:本实施方式与具体实施方式二的不同点是:所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数应不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取10kg~20kg可溶性淀粉、2.5kg~5kg酵母膏、0.5kg~1kg七水硫酸亚铁、0.5kg~1kg七水硫酸镁和0.5kg~1kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为23~28℃下发酵时间3d~5d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为150r/min~250r/min;发酵过程中通风比为1:(1~2);所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数应不低于1×108CFU/mL。
其他与具体实施方式二相同。
具体实施方式八:本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是:所述豆粕粉的粒径为80~120目;所述玉米粉的粒径为80~120目;所述糠醛渣的粒径为80~120目;所述稻壳粉的粒径为80~120目。其他与具体实施方式一至七相同。
具体实施方式九:本实施方式是一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的制备方法,具体是按以下按步骤完成的:
一、配置固体发酵培养基:按照重量份数称取20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉并混合均匀,然后将含水量调至55~65%,得到固体发酵培养基;
二、发酵:将复合微生物发酵剂和固体发酵培养基装入带呼吸阀的发酵袋中,在温度为25~35℃下发酵20d~30d,得到用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;
所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2~3份植物乳杆菌发酵液、1~2份嗜酸乳杆菌发酵液、1~2份巨大芽孢杆菌发酵液、2~3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1~2份哈茨木霉发酵液组成;
所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取5kg~10kg动物蛋白胨、5kg~10kg玉米糖化醪、1kg~2kg氯化钠、0.1kg~0.4kg氢氧化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为180r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取10kg~20kg糖蜜、5kg~10kg120目的豆粕粉、1kg~2kg七水硫酸镁、0.5kg~1kg磷酸二氢钾和0.5kg~1kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为160r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取10kg~20kg可溶性淀粉、2.5kg~5kg酵母膏、0.5kg~1kg七水硫酸亚铁、0.5kg~1kg七水硫酸镁和0.5kg~1kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为23~28℃下发酵时间3d~5d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为150r/min~250r/min;发酵过程中通风比为1:(1~2);所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数不低于1×108CFU/mL。
具体实施方式十:本实施方式是一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的使用方法,具体是按以下步骤完成的:先将用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土混合均匀,再装盘;所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为(1~5):(95~99)。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容,其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
采用下述试验验证本发明效果
实施例1:一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的制备方法,具体是按以下按步骤完成的:
一、配置固体发酵培养基:按照重量份数称取40份豆粕粉、10份玉米粉、10份糠醛渣、20份过磷酸钙和10份稻壳粉并混合均匀,然后将含水量调至60%,得到固体发酵培养基;所述豆粕粉的粒径为80目;所述玉米粉的粒径为80目;所述糠醛渣的粒径为80目;所述稻壳粉的粒径为80目;
二、发酵:将复合微生物发酵剂和固体发酵培养基装入带呼吸阀的发酵袋中,在温度为25℃下发酵30d,得到用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比5:95;所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;
所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、2份嗜酸乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液、2份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1份哈茨木霉发酵液组成;
所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床700r/min和温度为37℃下培养30h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取15kg大豆蛋白粉、15kg葡萄糖、1.5kg乳糖、0.7kg氯化钠、1kg磷酸氢二钠和0.4kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间30h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为70r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气8min,且通风比为1:0.6;所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床70r/min和温度为37℃下培养30h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取15kg大豆蛋白粉、15kg葡萄糖、1.5kg乳糖、0.7kg氯化钠、1kg磷酸氢二钠和0.4kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为70r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气8min,且通风比为1:0.6;所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床180r/min和温度为37±2℃下培养21h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取8kg动物蛋白胨、8kg玉米糖化醪、1.5kg氯化钠、0.25kg氢氧化钠、1kg磷酸氢二钠和0.35kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间21h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为200r/min;发酵过程中通风比为1:0.6;所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床170r/min和温度为37±2℃下培养20h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取15kg糖蜜、7.5kg120目的豆粕粉、1.5kg七水硫酸镁、0.75kg磷酸二氢钾和0.75kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间20h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为190r/min;发酵过程中通风比为1:0.7;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取15kg可溶性淀粉、4kg酵母膏、0.75kg七水硫酸亚铁、0.75kg七水硫酸镁和0.75kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为26℃下发酵时间4d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为200r/min;发酵过程中通风比为1:1.5;所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数不低于1×108CFU/mL。
实施例2:本实施与实施例1的不同点是:步骤一中按照重量份数称取30份豆粕粉、20份玉米粉、15份糠醛渣、15份过磷酸钙和15份稻壳粉并混合均匀;所述豆粕粉的粒径为100目;所述玉米粉的粒径为100目;所述糠醛渣的粒径为100目;所述稻壳粉的粒径为100目;步骤二中在温度为30℃下发酵25d,所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比10:90;所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2份植物乳杆菌发酵液、1份嗜酸乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液、3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和2份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
实施例3:本实施与实施例1的不同点是:步骤一中按照重量份数称取20份豆粕粉、30份玉米粉、20份糠醛渣、10份过磷酸钙和5份稻壳粉并混合均匀;所述豆粕粉的粒径为120目;所述玉米粉的粒径为120目;所述糠醛渣的粒径为120目;所述稻壳粉的粒径为120目;步骤二中在温度为35℃下发酵20d,所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比15:85;所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、1份嗜酸乳杆菌发酵液、1份巨大芽孢杆菌发酵液、3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和2份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例1:本实施与实施例1的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液、2份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例2:本实施与实施例1的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2份嗜酸乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液、2份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例3:本实施与实施例1的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、2份嗜酸乳杆菌发酵液、2份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例4:本实施与实施例1的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、2份嗜酸乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液和1份哈茨木霉发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例5:本实施与实施例1的不同点是:所述复合微生物发酵剂按照重量份数由3份植物乳杆菌发酵液、2份嗜酸乳杆菌发酵液、2份巨大芽孢杆菌发酵液和2份胶冻样芽孢杆菌发酵液组成。其他与实施例1相同。
对比例6:本实施与实施例1的不同点是:步骤一中按照重量份数称取40份豆粕粉、10份玉米粉、20份过磷酸钙和10份稻壳粉并混合均匀。其他与实施例1相同。
实施例4:一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的使用方法,具体是按以下步骤完成的:先将用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土混合均匀,再装盘;所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为1:99。所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例1制备。
实施例5:本实施与实施例4的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为2.5:97.5。其他与实施例4相同。
实施例6:本实施与实施例4的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为5:95。其他与实施例4相同。
实施例7:本实施与实施例4的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例2制备。其他与实施例4相同。
实施例8:本实施与实施例5的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例2制备。其他与实施例5相同。
实施例9:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例2制备。其他与实施例6相同。
实施例10:本实施与实施例4的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例3制备。其他与实施例4相同。
实施例11:本实施与实施例5的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例3制备。其他与实施例5相同。
实施例12:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由实施例3制备。其他与实施例6相同。
对比例7:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例1制备。其他与实施例6相同。
对比例8:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例2制备。其他与实施例6相同。
对比例9:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例3制备。其他与实施例6相同。
对比例10:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例4制备。其他与实施例6相同。
对比例11:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例5制备。其他与实施例6相同。
对比例12:本实施与实施例6的不同点是:所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料由对比例6制备。其他与实施例6相同。
对比例13:本实施与实施例6的不同点是:采用中国已公开专利《一种防治水稻根腐病有机肥的制备方法》(申请号:201711235696.6)实施例1制备的水稻有机肥代替用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料。其他与实施例6相同。
对比例14:本实施与实施例6的不同点是:育秧土中不添加用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料。其他与实施例6相同。
对实施例4-12和对比例7-14在相同外界环境下进行寒地水稻育苗,统计水稻根腐病率,如表1所示。
表1
项目 根腐病率% 项目 根腐病率%
实施例4 1.27 对比例7 2.13
实施例5 0.73 对比例8 2.27
实施例6 0.57 对比例9 1.52
实施例7 1.34 对比例10 1.68
实施例8 0.79 对比例11 2.57
实施例9 0.61 对比例12 1.37
实施例10 1.31 对比例13 4.31
实施例11 0.77 对比例14 4.48
实施例12 0.59
通过表1可知,增加本发明用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料在育秧土中用量,可以显著提高预防根腐病的效果,当用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比达到2.5:97.5以上时,根腐病率控制在1%以下。
通过表1可知对比例7中省略嗜酸乳杆菌,单独使用植物乳杆菌发酵豆粕类基质时,仍然可以产生有机酸,但育苗基质pH值控制在6.5左右,进而导致预防寒地水稻育苗根腐病的效果下降,而对比例8中省略植物乳杆菌,单独嗜酸乳杆菌使用发酵豆粕类基质时,仍然可以产生有机酸,但育苗基质也是pH值控制在6.5左右,所以导致预防寒地水稻育苗根腐病的效果下降,且对比例7和对比例8的根腐病率接近,分别为2.13%和2.27%;但是当植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌联合发酵豆粕类基质,产生大量有机酸,可使育苗基质pH值稳定在4.5-5.5之间,根腐病率为0.57%;所以植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌联合使用存在协同效果。
通过表1可知对比例9中省略巨大芽孢杆菌,单独使用胶冻样芽孢杆菌时,根腐病率为1.52%;而对比例10中省略胶冻样芽孢杆菌,单独使用巨大芽孢杆菌时,根腐病率为1.68%;但是当同时使用巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌,根腐病率为0.57%;说明在相同的酸性条件下,秧苗根系发育情况也影响根腐病的发生,虽然单独使用巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌中一种也可以产生促进秧苗根系发育,但是巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌联合使用存在协同效果,能有效促进秧苗对营养元素的吸收,促根壮苗,从而增强秧苗抗性,起到防病作用。
通过表1可知对比例11中不添加哈茨木霉时,根腐病率达到2.57%;说明添加哈茨木霉菌对产生根腐病的病菌存在明显的抑制作用。
通过表1可知对比例12中固体发酵培养基中不添加糠醛渣时,根腐病率为1.37%;说明添加糠醛渣等酸性基质调节时必要的,能有效稳定酸性环境,提高预防根腐病效果。
通过表1可知对比例13中使用现有水稻有机肥代替用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料使用,其根腐病率为4.31%;而对比例14中育秧土中不添加用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其根腐病率为4.48%;两者效果接近,说明现有水稻有机肥无法用于预防寒地水稻育苗根腐病。

Claims (10)

1.一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于它以复合微生物发酵剂作为菌种,接种于固体发酵培养基中,且用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述复合微生物发酵剂中的活性微生物包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和哈茨木霉;所述固体发酵培养基按照重量份数由20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉混合而成。
2.根据权利要求1所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2~3份植物乳杆菌发酵液、1~2份嗜酸乳杆菌发酵液、1~2份巨大芽孢杆菌发酵液、2~3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1~2份哈茨木霉发酵液组成;且植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL,嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL,巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL,所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL,哈茨木霉发酵液中活孢子数不小于1×108CFU/mL。
3.根据权利要求2所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL。
4.根据权利要求2所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL。
5.根据权利要求2所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取5kg~10kg动物蛋白胨、5kg~10kg玉米糖化醪、1kg~2kg氯化钠、0.1kg~0.4kg氢氧化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为180r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL。
6.根据权利要求2所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取10kg~20kg糖蜜、5kg~10kg120目的豆粕粉、1kg~2kg七水硫酸镁、0.5kg~1kg磷酸二氢钾和0.5kg~1kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为160r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL。
7.根据权利要求2所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数应不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取10kg~20kg可溶性淀粉、2.5kg~5kg酵母膏、0.5kg~1kg七水硫酸亚铁、0.5kg~1kg七水硫酸镁和0.5kg~1kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为23~28℃下发酵时间3d~5d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为150r/min~250r/min;发酵过程中通风比为1:(1~2);所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数应不低于1×108CFU/mL。
8.根据权利要求1所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料,其特征在于所述豆粕粉的粒径为80~120目;所述玉米粉的粒径为80~120目;所述糠醛渣的粒径为80~120目;所述稻壳粉的粒径为80~120目。
9.如权利要求1所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的制备方法,其特征在于它是按以下按步骤完成的:
一、配置固体发酵培养基:按照重量份数称取20~40份豆粕粉、10~30份玉米粉、10~20份糠醛渣、10~20份过磷酸钙和5~15份稻壳粉并混合均匀,然后将含水量调至55~65%,得到固体发酵培养基;
二、发酵:将复合微生物发酵剂和固体发酵培养基装入带呼吸阀的发酵袋中,在温度为25~35℃下发酵20d~30d,得到用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料;所述复合微生物发酵剂与固体发酵培养基的质量比(5~15):(85~95);所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的生物活性不低于1×108CFU/g;
所述复合微生物发酵剂按照重量份数由2~3份植物乳杆菌发酵液、1~2份嗜酸乳杆菌发酵液、1~2份巨大芽孢杆菌发酵液、2~3份胶冻样芽孢杆菌发酵液和1~2份哈茨木霉发酵液组成;
所述植物乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备植物乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到植物乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环植物乳杆菌接种于植物乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到植物乳杆菌液体种子;所述植物乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备植物乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到植物乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将植物乳杆菌液体种子和植物乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到植物乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述植物乳杆菌液体种子与植物乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述植物乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述嗜酸乳杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备嗜酸乳杆菌种子培养基:取20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、1g磷酸氢二钾、2g柠檬酸三胺、1ml吐温80、5g乙酸钠、0.5g七水硫酸镁和0.25g一水硫酸锰加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为5.5~5.8,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到嗜酸乳杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环嗜酸乳杆菌接种于嗜酸乳杆菌种子培养基中,在空气浴摇床50r/min~100r/min和温度为37℃下培养24h~36h,得到嗜酸乳杆菌液体种子;所述嗜酸乳杆菌液体种子中活菌数不小于1×107CFU/mL;
③、制备嗜酸乳杆菌发酵培养基:取10kg~20kg大豆蛋白粉、10kg~20kg葡萄糖、1kg~2kg乳糖、0.5kg~1kg氯化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为5.5~6.0,得到嗜酸乳杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将嗜酸乳杆菌液体种子和嗜酸乳杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间24h~36h,得到嗜酸乳杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为50r/min~100r/min;发酵过程中每小时通入无菌空气5min~10min,且通风比为1:(0.5~1);所述嗜酸乳杆菌液体种子与嗜酸乳杆菌发酵培养基的质量比1:30;所述嗜酸乳杆菌发酵液中活菌数不小于1×108CFU/mL;
所述巨大芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备巨大芽孢杆菌种子培养基:取5g牛肉膏、10g蛋白胨和3g氯化钠加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到巨大芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环巨大芽孢杆菌接种于巨大芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到巨大芽孢杆菌液体种子;所述巨大芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备巨大芽孢杆菌发酵培养基:取5kg~10kg动物蛋白胨、5kg~10kg玉米糖化醪、1kg~2kg氯化钠、0.1kg~0.4kg氢氧化钠、0.5kg~1.5kg磷酸氢二钠和0.2kg~0.5kg消泡剂加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到巨大芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将巨大芽孢杆菌液体种子和巨大芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到巨大芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为180r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述巨大芽孢杆菌液体种子与巨大芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述巨大芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述胶冻样芽孢杆菌发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备胶冻样芽孢杆菌种子培养基:取10g蔗糖、0.5g磷酸氢二钾、0.4g酵母提取物、0.2g七水硫酸镁和0.2g氯化镁加入水中并混匀,然后加入水定容至1L,将pH控制为7.0~7.5,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到胶冻样芽孢杆菌种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上取一接种环胶冻样芽孢杆菌接种于胶冻样芽孢杆菌种子培养基中,在空气浴摇床150r/min~200r/min和温度为37±2℃下培养18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌液体种子;所述胶冻样芽孢杆菌液体种子中活菌数不小于1×108CFU/mL;
③、制备胶冻样芽孢杆菌发酵培养基:取10kg~20kg糖蜜、5kg~10kg120目的豆粕粉、1kg~2kg七水硫酸镁、0.5kg~1kg磷酸二氢钾和0.5kg~1kg碳酸钙加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,将pH控制为7.0~7.5,得到胶冻样芽孢杆菌发酵培养基;
④、发酵培养:将胶冻样芽孢杆菌液体种子和胶冻样芽孢杆菌发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为37±2℃下发酵时间18h~24h,得到胶冻样芽孢杆菌发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为160r/min~220r/min;发酵过程中通风比为1:(0.5~1);所述胶冻样芽孢杆菌液体种子与胶冻样芽孢杆菌发酵培养基的质量比1:50;所述胶冻样芽孢杆菌发酵液中活菌数不小于1×1010CFU/mL;
所述哈茨木霉发酵液是按以下步骤制备的:
①、制备哈茨木霉种子培养基:取200g土豆,切碎后加入水中蒸煮40min,用纱布过滤,得到土豆蒸煮液,向土豆蒸煮液中加入20g葡萄糖并混匀,加入水定容至1L,然后采用121℃蒸汽灭菌20min,冷却至室温后,得到哈茨木霉种子培养基;
②、活化:在无菌操作台上,将PDA平板培养基中洗脱的哈茨木霉孢子接种于哈茨木霉种子培养基中,在空气浴摇床200r/min和温度为26℃下培养3d,得到哈茨木霉液体种子;所述哈茨木霉液体种子中活孢子数不低于1×106CFU/mL;
③、制备哈茨木霉发酵培养基:取10kg~20kg可溶性淀粉、2.5kg~5kg酵母膏、0.5kg~1kg七水硫酸亚铁、0.5kg~1kg七水硫酸镁和0.5kg~1kg磷酸二氢钾加入水中并混匀,然后加入水定容至1000L,得到哈茨木霉发酵培养基;
④、发酵培养:将哈茨木霉液体种子和哈茨木霉发酵培养基放入机械搅拌通风发酵罐中,在温度为23~28℃下发酵时间3d~5d,得到哈茨木霉发酵液,发酵过程中搅拌速度控制为150r/min~250r/min;发酵过程中通风比为1:(1~2);所述哈茨木霉液体种子与哈茨木霉发酵培养基的质量比1:10;所述哈茨木霉发酵液中活孢子数不低于1×108CFU/mL。
10.如权利要求1所述的一种用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料的使用方法,其特征在于它是按以下步骤完成的:先将用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土混合均匀,再装盘;所述用于预防寒地水稻育苗根腐病的微生物发酵肥料与育秧土的质量比为(1~5):(95~99)。
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