CN110283752B - 地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法和制品 - Google Patents

地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法和制品 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法和制品，涉及菌种生产技术领域。该地衣芽孢杆菌的培养基，包括特定用量的碳源、氮源、锰源、镁盐、钾盐和高温淀粉酶等组分，该培养基可促进地衣芽孢杆菌菌种的快速生长，使得地衣芽孢杆菌的产量大幅增加，收率提升，同时所得到的地衣芽孢杆菌的产品活力高；本发明还提供了地衣芽孢杆菌的生产方法，采用上述地衣芽孢杆菌的培养基对地衣芽孢杆菌菌种进行培养，鉴于培养基所具有的优势，使得地衣芽孢杆菌的产量大为增加，收率提升，同时产品也具有较高的活力。本发明还提供了地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法以及含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品。

Description

地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的 生产方法和制品
技术领域
本发明涉及菌种生产技术领域，尤其是涉及一种地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法和制品。
背景技术
地衣芽孢杆菌为芽孢杆菌属的一种，其细胞形态和排列呈杆状、单生。地衣芽孢杆菌所具有的芽孢多、抗逆环境强等微生物学特性，使得其对外界有害因子抵抗力强，分布广，可存在于土壤、水、空气以及动物肠道内，已经成为人们重点关注的菌种之一。
地衣芽孢杆菌的生产方法有多种。但是目前的生产方法多存在产量低、收率低的问题，且生产得到的地衣芽孢杆菌产品活力也较低，大大限制了其进一步工业化应用。
有鉴于此，特提出本发明以解决上述技术问题中的至少一个。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种地衣芽孢杆菌的培养基，该培养基可促进地衣芽孢杆菌菌种的快速生长，使得地衣芽孢杆菌的产量大幅增加，收率提升，同时所得到的地衣芽孢杆菌的产品活力高。
本发明的第二个目的在于提供一种地衣芽孢杆菌的生产方法，以改善现有生产方法产量低、收率低以及地衣芽孢杆菌活力低的特性。
本发明的第三个目的在于提供一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法。
本发明的第四个目的在于提供一种含有地衣芽孢杆菌的制品，包含上述地衣芽孢杆菌原菌粉。
本发明提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
碳源12-18％，氮源9-12％，锰源0.02-0.05％，镁盐0.05-0.20％，钾盐 0.02-0.10％，高温淀粉酶0.02-0.05％，余量为水。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，所述碳源包括葡萄糖、水溶淀粉、玉米淀粉、玉米面粉或有机酸中的任意一种或者至少两种的组合，优选包括玉米淀粉和葡萄糖；
优选地，所述氮源包括蛋白胨、豆粕粉或酵母膏中的任意一种或者至少两种的组合，优选包括豆粕粉；
优选地，所述锰源包括氯化锰和/或硫酸锰，优选包括硫酸锰；
优选地，所述高温淀粉酶为耐高温a淀粉酶，所述高温淀粉酶的活力为1.5-2.5万u/mL；
优选地，所述镁盐包括硫酸镁；
优选地，所述钾盐包括磷酸二氢钾。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，所述地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11-14％，豆粕粉9-12％，葡萄糖1-4％，硫酸锰0.02-0.05％，硫酸镁0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，高温淀粉酶0.02-0.05％，余量为水；
优选地，所述地衣芽孢杆菌的培养基包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11.5-13.0％，豆粕粉9.5-11.5％，葡萄糖1.5-3.5％，硫酸锰 0.03-0.04％，硫酸镁0.08-0.10％，磷酸二氢钾0.05-0.08％，高温淀粉酶 0.03-0.04％，余量为水。
本发明还提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，采用上述地衣芽孢杆菌的培养基对地衣芽孢杆菌菌种进行培养；
优选地，所述地衣芽孢杆菌的生产方法包括以下步骤：
(a)将经过活化的地衣芽孢杆菌菌种接入到摇瓶中培养，得到摇瓶菌种；
(b)将摇瓶菌种接入到种子罐中培养，得到一级种子；
(c)将一级种子接入到发酵罐进行培养，得到发酵成熟醪；
步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)中培养所采用的培养基各自独立的为上述地衣芽孢杆菌的培养基。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，步骤(a)中，摇瓶培养的温度为30-40℃，培养的时间为20-40h，摇床的转速为140-150r/min；
优选地，步骤(a)中，所述活化包括将冷冻保存的地衣芽孢杆菌菌种取出并进行培养的步骤；
优选地，所述活化时的培养温度为30-40℃，培养时间为20-30h。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，步骤(b)中，将摇瓶菌种接入到种子罐中的接种量为0.5-2％；
优选地，步骤(b)中，种子罐中培养的温度为30-40℃，培养的时间为18-24h；
优选地，步骤(b)中，种子罐的罐压为0.3-1MPa，通风量为30-80m3/h。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，步骤(c)中，将一级种子接入到发酵罐中的接种量为3-5％；
优选地，步骤(c)中，发酵罐中培养的温度为36-38℃，培养的时间为18-24h。
本发明还提供了一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，包括以下步骤：
对上述地衣芽孢杆菌的生产方法制得的发酵成熟醪进行干燥，分离，得到衣芽孢杆菌原菌粉。
进一步的，在上述技术方案的基础之上，所述干燥为喷雾干燥；
优选地，所述喷雾干燥的进风温度为150-170℃，出风温度为75-79℃；
优选地，所述分离为旋风分离。
本发明还提供了一种含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品，包含上述地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法制得的地衣芽孢杆菌原菌粉；
优选地，所述含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品包括畜禽养殖饲料、水产养殖饲料或肥料。
本发明提供的地衣芽孢杆菌的培养基和生产方法、地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法和制品具有以下优势：
(1)本发明提供的地衣芽孢杆菌的培养基，包括特定用量的碳源、氮源、锰源、镁盐、钾盐和高温淀粉酶等组分，通过各组分以及用量的配合，使得该培养基可促进地衣芽孢杆菌菌种的快速生长，使得地衣芽孢杆菌的产量大幅增加，收率提升，同时所得到的地衣芽孢杆菌的产品活力较高。
(2)本发明提供的地衣芽孢杆菌的生产方法，在地衣芽孢杆菌的生产过程中，采用上述地衣芽孢杆菌的培养基对地衣芽孢杆菌菌种进行培养，鉴于培养基所具有的优势，使得地衣芽孢杆菌的产量大为增加，收率提升，同时产品也具有较高的活力。
(3)本发明提供的地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，通过对地衣芽孢杆菌的生产方法制得的发酵成熟醪进行干燥，分离，得到衣芽孢杆菌原菌粉，该生产方法操作简单，工艺稳定，适合于工业化规模生产；且通过该生产方法制得的地衣芽孢杆菌原菌粉具有繁殖能力快、形成芽孢多、产品活力高的特点。
(4)本发明还提供了含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品，鉴于上述地衣芽孢杆菌原菌粉所具有的优势，使得含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品也有具有同样的优势。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的第一个方面，提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
碳源12-18％，氮源9-12％，锰源0.02-0.05％，镁盐0.05-0.20％，钾盐 0.02-0.10％，高温淀粉酶0.02-0.05％，余量为水。
本发明提供的地衣芽孢杆菌的培养基，包括特定用量的碳源、氮源、锰源、镁盐、钾盐和高温淀粉酶等组分，通过各组分以及用量的配合，使得该培养基可促进地衣芽孢杆菌菌种的快速生长，使得地衣芽孢杆菌的产量大幅增加，收率提升，同时所得到的地衣芽孢杆菌的产品活力较高。
碳源为菌种的生长繁殖提供所需的碳素成分。用于培养基的碳源有很多，典型但非限制性的例如葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉、甘露醇、有机酸等。在本发明中，碳源典型但非限制性的质量分数为12％、13％、14％、15％、 16％、17％或18％。
氮源为菌种的生长繁殖提供所需的氮素成分。用于培养基的氮源有很多，典型但非限制性的例如蛋白胨、豆粕粉、酵母膏、鱼粉等。在本发明中，氮源典型但非限制性的质量分数为9％、9.5％、10％、10.5％、11％、11.5％、或12％。
培养基中的锰源可促进地衣芽孢杆菌芽孢的形成，促进地衣芽孢杆菌的快速生长。锰源典型但非限制性的质量分数为0.02％、0.025％、0.03％、 0.035％、0.04％、0.045％或0.05％。
镁盐、钾盐可以为生长提供生长元素，典型但非限制性的镁盐的质量分数为0.05％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.14％、0.15％、0.16％、 0.18％或0.20％，典型但非限制性的钾盐的质量分数为0.02％、0.04％、0.05％、 0.06％、0.08％或0.10％。
高温淀粉酶，能够促进糖分吸收，对普通淀粉进行液化，提高消化率和吸收率、降低成本；高温淀粉酶典型但非限制性的质量分数为0.02％、 0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％或0.05％。
本发明所述的“包括”意指其除所述组分外，还可以包括其他组分，这些其他组分赋予所述培养基不同的特性。除此之外，本发明所述的“包括”，还可以替换为封闭式的“为”或“由……组成”。
余量为水，是指采用水补足余量至100％，即碳源、氮源、锰源、高温淀粉酶和其他组分与水的质量分数之和达到100％。
作为本发明的一种可选实施方式，碳源包括葡萄糖、水溶淀粉、玉米淀粉、玉米面粉或有机酸中的任意一种或者至少两种的组合。
优选地，碳源包括玉米淀粉和葡萄糖，进一步优选地，玉米淀粉与葡萄糖之间的质量比为(11-14):(1-4)，典型但非限制性的质量比为11:1、 11:2、11:3、11:4、12:1、12:2、12:3、12:4、13:1、13:2、13:3、 13:4、14:1、14:2、14:3或14:4。
玉米淀粉和葡萄糖同时作为碳源，在为菌种提供充足碳素物质的同时，还能降低培养基的生产成本。
作为本发明的一种可选实施方式氮源包括蛋白胨、豆粕粉或酵母膏中的任意一种或者至少两种的组合，优选包括豆粕粉。
豆粕粉可以为培养基提供慢速氮源，且原料成本较为低廉，适合于工业化生产。
作为本发明的一种可选实施方式，锰源包括氯化锰和/或硫酸锰，优选包括硫酸锰。本发明中的“和/或”是指锰源可以包括氯化锰，也可以包括硫酸锰，或者包括氯化锰和硫酸锰的组合。
作为本发明的一种可选实施方式，高温淀粉酶为耐高温a淀粉酶，所述高温淀粉酶的活力为1.5-2.5万u/mL。典型但非限制性的高温淀粉酶的活力为1.5万u/mL、1.6万u/mL、1.8万u/mL、2.0万u/mL、2.2万u/mL、2.4 万u/mL或2.5万u/mL。
作为本发明的一种可选实施方式，镁盐包括硫酸镁。
作为本发明的一种可选实施方式，钾盐包括磷酸二氢钾。
通过对碳源、氮源、锰源、镁盐、钾盐和高温淀粉酶具体种类的限定，使得该地衣芽孢杆菌的培养基的生产成本低，同时还可为地衣芽孢杆菌菌种的生长提供充足的养分。
作为本发明的一种可选实施方式，地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11-14％，豆粕粉9-12％，葡萄糖1-4％，硫酸锰0.02-0.05％，硫酸镁0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.02-0.1％，高温淀粉酶0.02-0.05％，余量为水；
优选地，地衣芽孢杆菌的培养基包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11.5-13.0％，豆粕粉9.5-11.5％，葡萄糖1.5-3.5％，硫酸锰 0.03-0.04％，硫酸镁0.08-0.10％，磷酸二氢钾0.05-0.08％，高温淀粉酶 0.03-0.04％，余量为水。
通过对地衣芽孢杆菌的培养基各组分以及用量的进一步限定，使得该培养基的各营养成分更充足，充分满足地衣芽孢杆菌的生长所需。
根据本发明的第二个方面，还提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，采用上述地衣芽孢杆菌的培养基对地衣芽孢杆菌菌种进行培养。
在地衣芽孢杆菌的生产过程中，采用上述地衣芽孢杆菌的培养基对地衣芽孢杆菌进行培养，鉴于培养基所具有的优势，使得地衣芽孢杆菌的产量大为增加，收率提升，同时产品也具有较高的活力。
作为本发明的一种可选实施方式，地衣芽孢杆菌的生产方法包括以下步骤：
(a)将经过活化的地衣芽孢杆菌菌种接入到摇瓶中培养，得到摇瓶菌种；
(b)将摇瓶菌种接入到种子罐中培养，得到一级种子；
(c)将一级种子接入到发酵罐进行培养，得到发酵成熟醪；
步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)中培养所采用的培养基各自独立的为上述的地衣芽孢杆菌的培养基。
具体的，步骤(a)中的摇瓶培养是在菌种的筛选培养阶段，其目的是确定菌种培养的最佳操作条件，以便于转移到种子罐或发酵罐进行生产。
需要说明的是，地衣芽孢杆菌菌种在进行摇瓶培养前通常要经过活化，以使得地衣芽孢杆菌菌种恢复到正常生长状态。
步骤(b)中的种子罐培养是将摇瓶中的菌种得到进一步扩培。
步骤(c)中的发酵罐培养则是将种子罐中的菌种实现工业化生产。
本公开中“各自独立的”是指步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)中培养所采用的培养基可以完全相同(培养基组分和用量完全相同)，也可不完全相同(培养基组分不同，或者组分用量不同，或者培养基组分和用量均不同)。
通过摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养的逐级繁殖培养，从而获得相当数量且较高活力的地衣芽孢杆菌。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(a)中，摇瓶培养的温度为30-40℃，摇瓶培养的时间为20-40h，摇床的转速为140-150r/min。
摇瓶培养典型但非限制性的温度为30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、 35℃、36℃、38℃或40℃；摇瓶培养典型但非限制性的时间为20h、22h、 24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h或40h；摇床典型但非限制性的转速为140r/min、142r/min、144r/min、145r/min、146r/min、148r/min或 150r/min。
通过对步骤(a)摇瓶培养中具体培养参数的限定，使得菌种处于较适宜生长和代谢的培养条件中，从而使菌种有较高的接种成功率。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(a)中，活化包括将冷冻保存的地衣芽孢杆菌菌种取出并进行培养的步骤。
由于地衣芽孢杆菌斜面菌种通常是在-40～-80℃的深冻冰箱中进行冷冻保存，此时菌种一般是处于休眠或者活跃度低的状态，故在对地衣芽孢杆菌种培养前需要进行活化以恢复正常生长状态。
作为本发明的一种可选实施方式，活化时的培养温度为30-40℃，培养时间为20-30h；活化时典型但非限制性的温度为30℃、31℃、32℃、33℃、 34℃、35℃、36℃、38℃或40℃；活化时典型但非限制性的时间为20h、 22h、24h、26h、28h或30h。
通过对活化时培养温度以及时间的限定，使得地衣芽孢杆菌可以快速恢复至正常生长状态，从而有利于后期的扩培。
需要说明的是，在将摇瓶菌种接入到种子罐之前，先将上述地衣芽孢杆菌的培养基投入至种子罐后，进行灭菌，灭菌温度121-123℃，实消 40-45min，以防止培养基中杂菌生长对摇瓶菌种产生污染。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(b)中，将摇瓶菌种接入到种子罐中的接种量为0.5-2.0％。典型但非限制性的接种量为0.5％、0.6％、0.8％、1.0％、1.2％、1.4％、1.5％、1.6％、1.8％或2.0％。选择适宜的接种量，可保证种子罐中菌种良好的生产和高质量培养物的获得。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(b)中，种子罐中培养的温度为30-40℃，培养的时间为18-24h；种子罐典型但非限制性的培养温度为 30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、38℃或40℃；种子罐典型但非限制性的培养时间为18h、19h、20h、21h、23h或24h。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(b)中，种子罐的罐压为0.3-1 MPa，通风量为30-80m3/h。为确保通风过程中不会引入细菌等污染物质，需要对通入的空气进行杀菌过滤处理。
在将一级种子接入到发酵罐之前，先将上述地衣芽孢杆菌的培养基投入至发酵罐后，进行灭菌，灭菌温度121-123℃，实消40-45min，以防止培养基中杂菌生长对发酵培养产生污染。同时，也需要对一级种子进行镜检，确保成熟无杂菌方可转入发酵罐。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(c)中，将一级种子接入到发酵罐中的接种量为3-5％；一级种子接入到发酵罐典型但非限制性的接种量为3％、3.2％、3.2％、1.0％、1.2％、1.4％、1.5％、1.6％、1.8％或2.0％。
作为本发明的一种可选实施方式，步骤(c)中，发酵罐中培养的温度为36-38℃，培养的时间为18-24h；发酵罐典型但非限制性的培养温度为 36℃、36.5℃、37℃、37.5℃或38℃；发酵罐典型但非限制性的培养时间为 18h、19h、20h、21h、23h或24h。
通过对种子罐、发酵罐培养时各参数的进一步限定，使得地衣芽孢杆菌的生产性能达到较高水平。
根据本发明的第三个方面，还提供了一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，包括以下步骤：
对上述地衣芽孢杆菌的生产方法制得的发酵成熟醪进行干燥，分离，得到衣芽孢杆菌原菌粉。
该生产方法操作简单，工艺稳定，适合于工业化规模生产；且通过该生产方法制得的地衣芽孢杆菌原菌粉具有繁殖能力快、形成芽孢多、产品活力高的特点。
作为本发明的一种可选实施方式，干燥为喷雾干燥；
优选地，喷雾干燥的进风温度为150-170℃，出风温度为75-79℃，喷雾干燥塔的塔内温度为80-82℃；典型但非限制性的进风温度为150℃、 152℃、155℃、158℃、160℃、162℃、165℃、168℃或170℃，典型但非限制性的进风温度为75℃、76℃、77℃、78℃或79℃，典型但非限制性的喷雾干燥塔的塔内温度为80℃、80.5℃、81℃、81.5℃或82℃。
优选地，分离为旋风分离。
通过对地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法具体步骤的限定，使得所得到的衣芽孢杆菌原菌粉的质量更高。
根据本发明的第四个方面，还提供了一种含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品，包含上述地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法制得的地衣芽孢杆菌原菌粉。
鉴于上述地衣芽孢杆菌原菌粉所具有的优势，使得含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品也有具有同样的优势。
作为本发明的一种可选实施方式，含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品包括畜禽养殖饲料、水产养殖饲料或肥料。
例如，含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品为畜禽养殖饲料，其具有以下效果：
(1)拮抗动物病原菌并维持和调整肠胃微生态平衡：地衣芽孢杆菌进入肠道后，可代谢分泌短杆菌肽、多帖菌素、制霉菌等多种抗菌物质，可抑制葡萄球菌、白色念球菌、酵母样菌等致病菌生长繁殖，同时通过夺氧生物效应使肠道缺氧，促进肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌等有益健康的厌氧菌的生长繁殖。通过这种双重作用可以调整肠道菌群失调，维持机体肠道微生态平衡，从而对肠道疾病达到治疗和预防的目的；(2)具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解植物饲料中非淀粉多糖的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素等酶，可提高蛋白质和能量利用率，促进养殖动物的生长；(3)促进动物机体免疫器官的生长发育和成熟，增加T、B淋巴细胞的数量，提高胸腺淋巴细胞免疫球蛋白，激活免疫因子和巨噬细胞，刺激机体的免疫应答，健全全身免疫系统，提高免疫功能。
该含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品为水产养殖饲料，其具有以下效果：
(1)能有效的去除池水中90％以上的氨氮、亚硝基氮等，降低生物耗氧量和化学耗氧量；(2)有效预防水生动物肠道疾病，可以有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病；(3)分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质；(4) 具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，促进饲料中营养素降解，使畜水生类动物对饲料的吸收利用更加充分；(5)促进水生动物免疫器官的发育，增强机体免疫力。
该含有地衣芽孢杆菌原菌粉的制品为植物种植肥料，其具有以下效果：
(1)用于种植可改善土壤团粒结构，提高土壤蓄水、蓄能、和地温，缓解重茬；(2)拌种使用可提高种子的出芽率和保苗率；预防种子自身的遗传病害，提高作物成活率，促进根系生长；(3)可提高作物抗病能力；抑制土壤中病原菌的繁殖和对植物根部的侵袭，减少植物中土传病害，预防多种害虫爆发；(4)可抑制有害菌的能力强；抑制生长环境中的有害菌的滋生繁殖，降低和预防各种菌类病害的发生；(5)促进作物生长，成熟，相对降低成本、增加产量、提高收入。
为了验证本发明技术方案的技术效果，特设以下实施例和对比例。
需要说明的是，各实施例和对比例中所用到的高温淀粉酶为高温a淀粉酶，其活力为2.0万u/mL。
实施例1
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11％，豆粕粉9％，葡萄糖1.0％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
实施例2
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，其组分中高温淀粉酶的质量分数为0.05％，玉米淀粉、豆粕粉、葡萄糖、硫酸锰的用量与实施例1 相同。
实施例3
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉10％，豆粕粉9％，葡萄糖5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
实施例4
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
水溶淀粉11％，豆粕粉9％，玉米面粉1.0％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.10％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
实施例5
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉14％，豆粕粉12％，葡萄糖3％，硫酸锰0.04％，硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.10％，高温淀粉酶0.03％，余量为水。
实施例6
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉13％，蛋白胨12％，葡萄糖3％，氯化锰0.04％，硫酸镁0.08％，磷酸二氢钾0.10％，高温淀粉酶0.03％，余量为水。
对比例1
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉5％，豆粕粉4％，葡萄糖0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
对比例2
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，其组分中高温淀粉酶的质量分数为0.01％，水的用量作相应调整，玉米淀粉、豆粕粉、葡萄糖、硫酸锰、硫酸镁和磷酸二氢钾的用量与实施例1相同。
对比例3
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，其组分未添加高温淀粉酶，水的用量作相应调整，玉米淀粉、豆粕粉、葡萄糖、硫酸锰、硫酸镁和磷酸二氢钾的用量与实施例1相同。
对比例4
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
水溶性淀粉3.4％，牛骨蛋白胨4.5％，葡萄糖0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
对比例5
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
水溶性淀粉3.4％，豆粕粉3.0％，安琪酵母粉YP602 1.5％，葡萄糖0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
对比例6
本对比例提供了一种地衣芽孢杆菌的培养基，包括以下质量分数的组分：
水溶性淀粉3.4％，安琪鸡骨蛋白胨FP321 4.5％，玉米浆1.0％，葡萄糖0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.1％，磷酸二氢钾0.05％，高温淀粉酶0.02％，余量为水。
实施例7
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，包括以下步骤：
(a)从深冻冰箱中(-60℃)取出冷冻保存的地衣芽孢杆菌斜面菌种，并置于恒温培养箱中于培养温度37℃培养26hr，得到经过活化的地衣芽孢杆菌菌种；
将经过活化的地衣芽孢杆菌菌种以2％的接种量接入到摇瓶中培养，于 37℃恒温摇床(转速145r/min)培养37h，得到摇瓶菌种；
(b)将摇瓶菌种以1％的接种量接入到种子罐，保证一定罐压和风量；种子罐中培养的温度为37℃，培养的时间为20h，得到一级种子；
(c)将一级种子接入以3％的接种量接入到发酵罐，发酵罐中培养的温度为37℃培养，培养的时间为20h，得到发酵成熟醪。
步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)中培养所采用的培养基为实施例1 提供的地衣芽孢杆菌的培养基。
实施例8-11
实施例8-11提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，分别采用实施例2-5 提供的地衣芽孢杆菌的培养基进行培养，其余步骤与实施例7相同。
实施例12
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，包括以下步骤：
(a)从深冻冰箱中(-75℃)取出冷冻保存的地衣芽孢杆菌斜面菌种，并置于恒温培养箱中于培养温度35℃培养20h，得到经过活化的地衣芽孢杆菌菌种；
将经过活化的地衣芽孢杆菌菌种以1.5％的接种量接入到摇瓶中培养，于35℃恒温摇床(转速140r/min)培养36h，得到摇瓶菌种；
(b)将摇瓶菌种以2％的接种量接入到种子罐，保证一定罐压和风量；种子罐中培养的温度为32℃，培养的时间为24h，得到一级种子；
(c)将一级种子接入以5％的接种量接入到发酵罐，发酵罐中培养的温度为36℃培养，培养的时间为24h，得到发酵成熟醪。
步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)中培养所采用的培养基为实施例6 提供的地衣芽孢杆菌的培养基。
对比例7-12
对比例7-12提供了一种地衣芽孢杆菌的生产方法，分别采用对比例1-6 提供的地衣芽孢杆菌的培养基进行培养，其余步骤与实施例7相同。
实施例13
本实施例提供了一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，包括以下步骤：
将实施例7提供的发酵成熟醪进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为 160℃，出风温度为78℃，罐内温度为80℃，经旋风分离收集原菌粉，得到地衣芽孢杆菌原菌粉。
实施例14-18
实施例14-18提供了一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，分别采用实施例8-12提供的发酵成熟醪进行制备，具体步骤与实施例13相同。
对比例13-18
对比例13-18提供了一种地衣芽孢杆菌原菌粉的生产方法，分别采用对比例7-12提供的发酵成熟醪进行制备，其余步骤与实施例13相同。
实验例1
对实施例1-6和对比例1-6提供的地衣芽孢杆菌的培养基进行灭活，灭活前以及灭活后的活力具体结果如表1所示。
表1
实验组别 灭活前(亿cfu/ml) 灭活后(亿cfu/ml)
实施例1 173 147
实施例2 176 160
实施例3 140 150
实施例4 167 169
实施例5 173 167
实施例6 186 183
对比例1 103 107
对比例2 86 83
对比例3 106 102
对比例4 123 121
对比例5 121 119
对比例6 107 98
同时，对实施例7-12和对比例7-12制得的发酵成熟醪的平均活力进行检测，发酵成熟醪的平均活力以80℃、20min灭活后计算，具体结果如表2 所示；
另外，对实施例13-18和对比例13-18提供的地衣芽孢杆菌原菌粉的活力进行检测，具体结果如表3所示。
表2
Figure BDA0002126779620000171
Figure BDA0002126779620000181
表3
Figure BDA0002126779620000182
从表1中可以看出，本发明各实施例提供的地衣芽孢杆菌的培养基灭活前后均具有较高的活力；从表2和表3中数据可以看出，本发明各实施例提供的含有地衣芽孢杆菌的发酵成熟醪以及地衣芽孢杆菌原菌粉的整体性能要优于对比例。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (2)

1.一种地衣芽孢杆菌的生产方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌的生产方法包括以下步骤：
（a）将经过活化的地衣芽孢杆菌菌种接入到摇瓶中培养，得到摇瓶菌种；
（b）将摇瓶菌种接入到种子罐中培养，得到一级种子；
（c）将一级种子接入到发酵罐进行培养，得到发酵成熟醪；
所述步骤（a）中，摇瓶培养的温度为30-40℃，培养的时间为20-40h，摇床的转速为140-150r/min；
所述步骤（b）中，将摇瓶菌种接入到种子罐中的接种量为0.5-2%，种子罐中培养的温度为30-40℃，培养的时间为18-24h，种子罐的罐压为0.3-1MPa，通风量为30-80m3/h；
所述步骤（c）中，将一级种子接入到发酵罐中的接种量为3-5%；
所述步骤（c）中，发酵罐中培养的温度为36-38℃，培养的时间为18-24h；
步骤（a）、步骤（b）和步骤（c）中培养所采用的培养基包括以下质量分数的组分：
玉米淀粉11.5-13.0%，豆粕粉9.5-11.5%，葡萄糖1.5-3.5%，硫酸锰0.03-0.04%，硫酸镁0.08-0.10%，磷酸二氢钾0.05-0.08%，高温α淀粉酶0.03-0.04%，余量为水；
所述高温α淀粉酶的活力为1.5-2.5万u/mL。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（a）中，所述活化包括将冷冻保存的地衣芽孢杆菌菌种取出并进行培养的步骤；所述活化时的培养温度为30-40℃，培养时间为20-30h。
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