CN106479939B - 一种枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及了一种保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌和其在禽畜消化方面的应用。所述枯草芽孢杆菌产生的纳豆激酶，改善禽畜的血液循环，提高禽畜的免疫力，同时产生消化酶能力强，可促进禽畜对饲料的消化。本品应用于制作微生物饲料添加剂领域，可改善食用饲料的畜禽肠道的菌群，提高畜禽的消化能力和免疫能力，增强食用饲料的畜禽对饲料的消化、转化能力，促进动物生长，显著地提高畜禽的饲料利用率，具有明显的经济价值。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物应用领域，特别涉及一种枯草芽孢杆菌及其制剂与应用。
背景技术
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌，可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
枯草芽孢杆菌是一种多功能的微生物，目前在有机肥发酵、饲料或发酵床制作中有一定的应用，但并非所有的枯草芽孢杆菌株在以上领域是有效的。
目前，微生物饲料添加剂是采用农业部认可的有益微生物经发酵制成的生物制剂，是抗生素的最佳替代品。用于提高畜、禽的健康水平的人工培养菌及其代谢产物，可调整畜、禽体内的微生态失调，保持微生态平衡，是激发动物自身有益菌种繁殖增长，同时抵制有害菌系生长的微生物制品。微生物饲料添加剂存在的主要问题是优良菌种的选择和由于菌种失活导致的微生物饲料添加剂活性降低。
发明内容
本发明人通过对枯草芽孢杆菌的研究、筛选和验证，提供了一种促进食品消化的枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌株制剂和含有其成分的组合物，可有效运用于微生物饲料添加剂的生产及用于饲料。
为本发明的第一个发明目的，本发明提供了保藏于中国微生物菌种保藏中心CCTCC，保藏编号为：CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌。保藏日期为：2016年9月1日，分类命名的拉丁名称：Bacillus Subtilis。本发明的枯草芽孢杆菌产生的纳豆激酶，改善禽畜的血液循环，提高禽畜的免疫力，促进禽畜对饲料的消化。
为本发明的第二个发明目的，本发明提供了保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌在促进禽畜消化方面的应用。
为达到本发明的第三个发明目的，本发明提供保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌在禽畜饲养方面的应用。在饲养过程中，在动物饲料或饮水中添加保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌。
保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌可改善食用饲料的畜禽肠道的菌群，提高畜禽的消化能力和免疫能力，增强食用饲料的畜禽对饲料的消化、转化能力，促进动物生长，显著地提高畜禽的日增重和饲料利用率。
为达到本发明的第四个发明目的，本发明提供一种微生物饲料添加剂，所述微生物饲料添加剂中含有保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌做为有效成分。
进一步地，所述的微生物饲料添加剂，包括1％保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌，0.1％保藏号为CCTCC M 2016440的凝结芽孢杆菌,1％酿酒酵母和97.9％的葡萄糖。其中，保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌活菌数为1.0×109CFU/g～2.0×109CFU/g，保藏号为CCTCC M 2016440的凝结芽孢杆菌活菌数为1.0×108CFU/g～1.0×109CFU/g,所述酿酒酵母活菌数为1.0×107CFU/g～2.0×108CFU/g。
保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌可改善食用饲料的畜禽肠道的菌群，提高畜禽的消化能力和免疫能力，增强食用饲料的畜禽对饲料的消化、转化能力，促进动物生长，显著地提高畜禽的日增重和饲料利用率。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例详予说明。
保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌为发明人在纳豆发酵物中分离筛选出，其能耐高温(在100℃可存活10分钟以上)、耐酸(可在pH值为2.5的环境中存活)、耐胆盐(在胆盐中存活率在90％以上)。该菌株可发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和甘露醇，形成酸，不产气，不分解乳糖，不形成吲哚、硫化氢；产酶有淀粉酶、过氧化氢、蛋白酶、解胶酶、纳豆激酶等；菌落表面粗糙、干燥，中间突起，呈圆环形；不透明，为灰白色；边缘不扩张，向上微隆，菌落形态呈片状或圆饼状；细胞杆状，有芽孢，芽孢椭圆形中生或近中生，芽孢囊不明显膨大；明胶液化测定：菌株分解明胶，呈阳性在7％氯化钠中生长，V-P测定阳性，硝酸盐还原阳性，能从D-甘露醇产酸，不利用丙酸盐。该枯草芽孢杆菌可产生纳豆激酶，改善禽畜的血液循环，提高禽畜的免疫力，同时产生消化酶能力强，可促进禽畜对饲料的消化。
在分离筛选中，所用的样品为纳豆发酵物，所用培养基按1L蒸馏水、0.3％牛肉膏、1％蛋白胨、1.6％琼脂、0.5％NaCl、0.5％葡萄糖的配方配置，并在121℃灭菌20分钟，pH控制在7.2-7.4。用灭菌后的NaCl溶液，稀释样品，得到样品液。将样品液涂布在以上培养基后，在37℃、培养48小时后，挑选长势良好、菌落形态相似且数目最多的菌落，分离纯化直至菌落形态一致的单菌。
将分离出的单菌进行纳豆激酶检测试验，筛选出分泌纳豆激酶活性最强的单菌。在微好氧环境中，测得该枯草芽孢杆菌的纳豆激酶的酶活力为87.3U/ml。该枯草芽孢杆菌菌种保藏于CCTCC，保藏号为CCTCC M 2016442。
筛选出的菌种保存在砂土管、冷冻干燥管中，将处于休眠状态。使用时需要进行活化、培养，获得一定数量的纯种菌。
枯草芽孢杆菌的培养方法，包括如下步骤：
a、菌种活化：将处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化
b、菌种扩大培养：将菌种依次经过一级种子摇床培养、二级种子罐培养、三级种子罐培养、发酵罐进行扩大培养。
所述菌种扩大培养用培养基包括如下组分：玉米淀粉、豆粕粉、玉米浆、酵母浸粉、K2HPO4、蛋白胨、MgSO4.7H20；所述培养基的pH值为7.5。
实施例1养鸡场试验
本试验选用31周龄的海兰褐蛋鸡480只，随机分为2组，对照组和测试组各240只，试验期为21天。试验日粮：玉米61.5％，豆粕23.4％，麦麸2％，石粉8.1％，复合预混料5％，试验期间不投喂保健类抗生素。
测试组在试验期间在饲料中添加0.1‰的微生物饲料添加剂。微生物饲料添加剂由1.0％枯草芽孢杆菌(保藏号为CCTCC M2016442，活菌数为1.0×109cfu/g)和99.0％葡萄糖均匀混合制成。对照组不加菌，其他饲喂条件相同。
试验结果如下：
项目 个蛋重(g) 产蛋率(％) 破蛋率(％) 次蛋率(％) 只日耗料(g) 料蛋比
对照组 63.4±1.25 87.3±4.29 0.68±0.34 0.44±0.33 125.2±9.3 2.26
测试组 63.0±1.54 87.7±3.86 0.57±0.28 0.45±0.28 120.2±5.5 2.18
试验结果显示，测试组的单蛋重、产蛋率与对照组无明显差异。在饲料利用方面，测试组日耗料量降低4.0％，料蛋比降低3.5％。
实施例2微生物饲料添加剂
1％保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌(活菌数为1.0×109cfu/g)、0.1％的保藏号为CCTCC M 2016440的凝结芽孢杆菌(活菌数为1.0×108cfu/g)、1％的酿酒酵母(来自安琪酵母股份有限公司，活菌数为5.0×107CFU/g)，和97.9％的葡萄糖混合均匀。
实施例3育肥猪饲喂测试
在某猪场随机选取6栏育肥猪作为测试对象，每栏70头左右，第1、2、3栏为对照组，第4、5、6栏为试验组。试验期间，在每吨饲料中添加200g微生物添加剂。
测试组使用实施例2配制的微生物饲料添加剂。
对照组使用0.1％的保藏号为CCTCC M 2016440的凝结芽孢杆菌(活菌数为1.0×108cfu/g)、1％的酿酒酵母(来自安琪酵母股份有限公司，活菌数为5.0×107CFU/g)，和98.9％的葡萄糖混合制成的微生物添加剂。
试验时间共30天，试验过程中去除保健用金霉素、酸化剂和甜味剂。
由实施例3中表格可知，育肥猪经过30天饲喂，试验组平均每头增量比对照组多3.1kg，提高14.7％，；平均每天每头采食量比对照组增加0.1kg。试验组料肉比较对照组降低了0.40，有效提高了饲料利用率。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”或“包含……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外，在本文中，“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。
尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本发明说明书所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (6)

1.保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌在100℃存活10分钟以上。
2.保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌在促进禽畜消化方面的应用。
3.一种促进禽畜消化的制剂，其特征在于，所述制剂中含有权利要求1所述枯草芽孢杆菌。
4.保藏号为CCTCC M2016442的枯草芽孢杆菌在禽畜饲养方面的应用。
5.一种微生物饲料添加剂，其特征在于，所述微生物饲料添加剂中含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌作为有效成分。
6.根据权利要求5所述的微生物饲料添加剂，其特征在于，包括权利要求1所述保藏号为CCTCC M 2016442的枯草芽孢杆菌和保藏号为CCTCC M 2016440的凝结芽孢杆菌。
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