CN114921352B - 一株胶红酵母jaasry1及其发酵培养物和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一株胶红酵母JAASRY1及其发酵培养物和应用。本发明提供了一株胶红酵母JAASRY1，已进行生物保藏，保藏编号为CGMCC No.22900。本发明胶红酵母JAASRY1具有抗致病菌的作用，能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌，高产类胡萝卜素，并且经小鼠致病性和毒性试验证明，菌株无毒副作用，可用于畜禽类动物的饲料添加剂，增强免疫力，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，有效改善禽类动物产品品质，具有广泛的市场应用前景。

Description

一株胶红酵母JAASRY1及其发酵培养物和应用
技术领域
本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一株胶红酵母JAASRY1及其发酵培养物和应用。
背景技术
胶红酵母是在我国、欧盟、美国、日本等国家和地区都被允许应用于饲料中的一种有益微生物。由于胶红酵母菌体中富含蛋白质、肝糖、高级不饱和脂肪酸、虾青素、类胡萝卜素和天然生长激素、酵母多糖等众多营养物质，因此能有效地促进个体生长，提高动物的受精率，减少胚胎的病死率，增强动物免疫力，抵抗禽畜病原菌、丰富增色饲料添加剂的种类及提高禽类产品质量及风味。添加了胶红酵母菌的饲料中含有酵母及酵母生长中产生的多种消化酶类、类胡萝卜素和生长因子，可以有效地促进动物的消化吸收，提高其对饲料的消化利用率。鉴于胶红酵母的以上优势，挖掘具有经济价值的胶红酵母菌种资源，丰富胶红酵母菌种资源库显得尤为迫切。
发明内容
本发明的目的在于提供一株类胡萝卜素产量大，具有抗致病菌的作用，促进禽类动物生长，改善禽类动物产品品质的胶红酵母，丰富胶红酵母菌种资源库。
本发明提供了一株胶红酵母JAASRY1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.22900。
本发明还提供了一种胶红酵母发酵培养物，利用上述技术方案所述胶红酵母JAASRY1发酵获得。
优选的，所述发酵的方式包括液态发酵和固态发酵。
优选的，所述液态发酵的培养基包括葡萄糖2wt.％～6wt.％、蛋白胨0.4wt.％～0.9wt.％、酵母粉0.6wt.％～0.8wt.％，大豆油0.04wt.％～0.09wt.％和余量的水；所述液态发酵的温度为28～32℃，时间为30～48h。
优选的，所述固态发酵的培养基包括麸皮45wt.％～65wt.％，玉米粉15wt.％～25wt.％，豆粕15wt.％～30wt.％，葡萄糖1wt.％～5wt.％和磷酸氢二钾0.01wt.％～0.08wt.％；所述固态发酵的温度为25～32℃，时间为18～35h。
本发明还提供了上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物在下述A1-A3中任一种或多种中的应用：
A1、制备类胡萝卜素；
A2、制备细菌抑制剂；
A3、制备饲料；
优选的，所述细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌中的一种或多种。
本发明还提供了上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物在下述A4-A7中任一种或多种中的应用：
A4、促进禽类动物生长；
A5、降低禽类腹泻率、死淘率；
A6、提高禽类产蛋率；
A7、加深禽类蛋黄颜色。
本发明还提供了一种饲料添加剂，活性成分包括上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物。
本发明还提供了一种细菌抑制剂，活性成分包括上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物。
本发明提供了一株胶红酵母JAASRY1，已进行生物保藏，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22900。本发明从吉林省公主岭市吉林省农业科学院西门处被食用油污染的土壤中采集分离到1株胶红酵母JAASRY1，该菌株具有抗致病菌的作用，能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌，高产类胡萝卜素，并且经小鼠致病性和毒性试验证明，菌株无毒副作用，可用于畜禽类动物的饲料添加剂，增强免疫力，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，有效改善禽类动物产品品质，具有广泛的市场应用前景。
生物保藏信息
胶红酵母(Rhodotorula muciladinosa)JAASRY1，于2021年7月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号为CGMCC No.22900。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为胶红酵母JAASRY1的系统进化树；
图2～3为胶红酵母JAASRY1菌落形态。
具体实施方式
本发明提供了一株产类胡萝卜素的胶红酵母JAASRY1，所述胶红酵母JAASRY1已进行生物保藏，保藏编号为CGMCC No.22900。
本发明所述胶红酵母JAASRY1是从吉林省公主岭市吉林省农业科学院西门处被食用油污染的土壤中采集分离到，所述胶红酵母JAASRY1的26SrDNA D1/D2基因序列优选如SEQ ID NO.1所示。
本发明所述胶红酵母JAASRY1能够形成直径约为(1.9±0.1)cm的菌落(具体如图2)，菌落颜色由白色逐渐变为橙红色，表面光亮，质地软而呈黏状。培养前后培养基颜色未有明显变化，无渗出物形成。在麦芽汁培养基中30℃培养3～5d，细胞为短卵形，单个或者成对(具体图3)，细胞大小为3～6μm，能形成沉淀，菌体呈现粉红色。本发明所述胶红酵母JAASRY1能利用葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、甘露糖等16种糖，不能利用乳糖和可溶性淀粉，能利用甘油、甘露醇、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、氨基乙酸，不能利用对氨基苯甲酸、赤藓糖醇、核糖醇、肌醇、山梨醇和山梨酸，最适生长温度为28～32℃，最高耐受温度为50℃。
本发明实施例中，所述胶红酵母JAASRY1具有抗致病菌的作用，能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌，高产类胡萝卜素。经小鼠致病性和毒性试验证明，菌株无毒副作用，可用于畜禽类动物的饲料添加剂，增强免疫力，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，有效改善禽类动物产品品质，具有广泛的市场应用前景。
根据本发明所述胶红酵母JAASRY1的生理生化特性，以下内容均应在本发明保护范围之内：胶红酵母JAASRY1在制备类胡萝卜素、细菌抑制剂和或饲料中的一种或多种中的应用；胶红酵母JAASRY1促进禽类动物生长、降低禽类腹泻率、降低禽类死淘率、提高禽类产蛋率和加深禽类蛋黄颜色中的一种或多种中的应用。本发明所述细菌优选包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌中的一种或多种。
本发明还提供了一种胶红酵母发酵培养物，利用上述技术方案所述胶红酵母JAASRY1发酵获得。
在本发明中，所述发酵的方式优选包括液态发酵和固态发酵。本发明进行所述液态发酵前，优选依次对所述胶红酵母JAASRY1进行种子培养、扩大培养和中间培养。
本发明对所述胶红酵母JAASRY1进行种子培养，得到种子培养液。本发明所述种子培养的培养基优选包括葡萄糖2wt.％～6wt.％、蛋白胨0.4wt.％～0.9wt.％、酵母粉0.6wt.％～0.8wt.％和余量的水；所述葡萄糖的含量进一步优选为3wt.％～5wt.％，更优选为4wt.％；所述蛋白胨的含量进一步优选为0.5wt.％～0.8wt.％，更优选为0.6wt.％～0.7wt.％；所述酵母粉的含量进一步优选为0.7wt.％。发明所述种子培养的温度优选为26～35℃，进一步优选为28～30℃；所述种子培养的时间优选为36～48h，进一步优选为38～45h，更优选为40～42h。本发明所述种子培养的方式优选为震荡培养，所述震荡培养的转速优选为180～300r/min，进一步优选为200～280r/min，更优选为250～260r/min。本发明所述种子发酵的培养基的pH优选为5.0～6.5，进一步优选为5.2～6.0，更优选为5.5～5.8。本发明对所述种子培养的接种量没有严格要求，用接种环挑一环菌体，放入种子培养液中常规培养即可。本发明所述种子发酵的培养基使用前优选在121℃的条件下高压灭菌20min。本发明所述种子培养能够实现胶红酵母JAASRY1的活化。
得所述种子培养液后，本发明对所述种子培养液进行扩大培养，得扩大培养液。本发明优选按照3wt.％～12wt.％的接种量，将所述种子培养液接种到扩大培养的培养基中，进一步优选为5wt.％～10wt.％，更优选为6wt.％～8wt.％。本发明所述扩大培养的培养基的组成、培养条件优选与所述种子培养的培养基组成、培养条件一致，在此不作赘述。
得所述扩大培养液后，本发明对所述扩大培养液进行中间培养，得中间培养液。本发明所述中间培养优选包括先后进行的第一中间培养和第二中间培养。本发明优选按照5wt.％～15wt.％的接种量，将所述扩大培养液接种到第一中间培养的培养基中，进一步优选为6wt.％～12wt.％，更优选为8wt.％～10wt.％。本发明所述第一中间培养的温度优选为28～32℃，进一步优选为30℃；所述第一中间培养的时间优选为30～48h，进一步优选为35～45h，更优选为38～40h。本发明所述第一中间培养的培养基的组成优选与所述种子培养的培养基组成一致，在此不作赘述。本发明所述第一中间培养优选在通气条件下进行，通气压力优选为0.06～0.12MPa，进一步优选为0.08～0.10MPa。
本发明优选将第一中间培养所得培养液按照5wt.％～15wt.％的接种量，将所述第一中间培养所得培养液接种到第二中间培养的培养基中，进一步优选为6wt.％～12wt.％，更优选为8wt.％～10wt.％。本发明所述第二中间培养的培养基的组成、培养条件优选与所述第一中间培养的培养基组成、培养条件一致，在此不作赘述。本发明所述第二中间培养优选在通气条件下进行，通气压力优选为0.06～0.12MPa，进一步优选为0.08～0.10MPa。
得所述中间培养液后，本发明优选按照8wt.％～12wt.％的接种量，进一步优选为9wt.％～10wt.％，将所述中间培养液接种到液态发酵的培养基中，液态发酵得液态发酵液。本发明所述液态发酵液中胶红酵母活菌量优选为≥109cfu/mL，进一步优选为109cfu/mL。本发明所述液态发酵的温度优选为28～32℃，进一步优选为29～30℃；所述液态发酵的时间优选为30～48h，进一步优选为35～45h，更优选为36～40h。本发明所述液态发酵优选在通气条件下进行，通气压力优选为0.06～0.12MPa，进一步优选为0.08～0.10MPa。本发明所述液态发酵的转速优选为350～420r/min，进一步优选为380～400r/min，更优选为390r/min。本发明所述液态发酵的培养基优选包括葡萄糖2wt.％～6wt.％、蛋白胨0.4wt.％～0.9wt.％、酵母粉0.6wt.％～0.8wt.％，大豆油0.04wt.％～0.09wt.％和余量的水；所述葡萄糖的含量优选为3wt.％～5wt.％，进一步优选为4wt.％；所述蛋白胨的含量优选为0.5wt.％～0.8wt.％，进一步优选为0.6wt.％～0.7wt.％；所述酵母粉的含量优选为0.7wt.％；所述大豆油的含量优选为0.05wt.％～0.08wt.％，进一步优选为0.06wt.％～0.07wt.％。本发明所述液态发酵的培养基使用前优选在121℃的条件下高压灭菌20min。
得液态发酵液后，本发明优选按照20wt.％～50wt.％的接种量，进一步优选为30wt.％～45wt.％，更优选为35wt.％～40wt.％，将所述液态发酵液接种到固态发酵的培养基中，固态发酵得固态发酵物。本发明所述固态发酵的温度优选为25～32℃，进一步优选为28～30℃；所述固态发酵的时间优选为18～35h，进一步优选为20～30h，更优选为25～28h。本发明所述固态发酵优选在通气条件下进行，优选保持发酵物料水分含量为52wt.％～75wt.％，进一步优选为55wt.％～70wt.％，更优选为60wt.％～55wt.％。
本发明所述固态发酵的培养基优选包括麸皮45wt.％～65wt.％，玉米粉15wt.％～25wt.％，豆粕15wt.％～30wt.％，葡萄糖1wt.％～5wt.％和磷酸氢二钾0.01wt.％～0.08wt.％；所述麸皮的含量进一步优选为50wt.％～60wt.％，更优选为55wt.％；所述玉米粉的含量进一步优选为16wt.％～20wt.％，更优选为18wt.％；所述豆粕的含量进一步优选为20wt.％～25wt.％，更优选为25wt.％；所述葡萄糖的含量进一步优选为2wt.％～4wt.％，更优选为1.96wt.％；所述磷酸氢二钾的含量进一步优选为0.03wt.％～0.06wt.％，更优选为0.04wt.％。本发明所述固态发酵的培养基使用前优选在121℃的条件下高压灭菌20min。
得固态发酵物后，本发明优选对固态发酵物进行干燥处理和粉碎处理，得所述胶红酵母发酵培养物。本发明所述干燥处理的温度优选为40～55℃，进一步优选为45～50℃。本发明对所述干燥处理的时间没有严格要求，将固态发酵物的含水量降至15wt.％～18wt.％即可。本发明对所述粉碎处理的方式没有严格要求，将固态发酵物的粒径降至40～60目即可，优选使用粉碎机粉碎。
本发明在对所述胶红酵母JAASRY1进行发酵时，使用的原料均为饲用禽类动物的常用原料，利用所述胶红酵母JAASRY1对上述原料进行发酵后，可大量生产胶红酵母活体细胞，富含类胡萝卜素，实施例结果表明对所述胶红酵母JAASRY1进行发酵后，发酵产品中胶红酵母活菌数≥109cfu/g，类胡萝卜素含量873.4μg/g。本发明得到的得到的发酵培养物仍可直接喂养动物，并且具有抗致病菌，增强免疫力，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，有效改善禽类动物产品品质的作用。本发明发酵工艺便于操作，培养基成分简单，固态培养成本低廉。
根据本发明所述胶红酵母JAASRY1发酵后的特性，以下内容均应在本发明保护范围之内：胶红酵母JAASRY1发酵培养物在制备类胡萝卜素、细菌抑制剂和/或饲料中的一种或多种中的应用；胶红酵母JAASRY1发酵培养物促进禽类动物生长、降低禽类腹泻率、降低禽类死淘率、提高禽类产蛋率和加深禽类蛋黄颜色中的一种或多种中的应用。本发明所述细菌优选包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌中的一种或多种。
本发明还提供了一种饲料添加剂，活性成分包括上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物。本发明所述饲料添加剂中胶红酵母发酵培养物的质量百分含量优选为1％～3％，进一步优选为2％。本发明所述饲料添加剂富含类胡萝卜素，能够增强免疫力，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，有效改善禽类动物产品品质。
本发明还提供了一种细菌抑制剂，活性成分包括上述技术方案所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母发酵培养物。本发明所述细菌抑制剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌中均具有抑制作用。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
如无特殊说明，具体实施过程中使用的培养基和分析方法均为常规方法。
实施例1
1.1菌株分离
(1)生理生化分析
从吉林省公主岭市吉林省农业科学院西门处被食用油污染的土壤采集10g土样，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并做好纪录。不需要冲洗直接放入装有90mL无菌水三角瓶，在振荡培养箱，室温振荡10min，取上清液接种于马铃薯葡萄糖培养液管中，放入恒温培养箱，温度28～30℃，培养1～2d，可见培养液变混浊。取菌液进行梯度稀释，用移液枪吸取上述稀释后的培养液0.lmL，涂布于马铃薯葡萄糖培养基平板，置28～30℃，培养1～2d。根据菌落形态挑取典型单菌落(菌落呈圆形或卵圆形，粘稠状，颜色为粉红色，菌落大而厚，易于挑起，微光泽)，命名JAASRY1，采用碳源同化实验(参照(孔维宝,杨洋,陈冬,汪洋,达文燕,牛世全.1株类胡萝卜素产生菌的鉴定及其发酵培养基的优化[J].食品科学,2018,39(24):108-115；巴特尼A,佩恩RW,亚罗D.酵母菌的特征与鉴定手册[M」胡瑞卿,译青岛:青岛海洋大学出版社,1991.))，分析其生理生化特性，结果如表1。
表1胶红酵母JAASRY1生理生化试验
由表1可知，该菌株能利用葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、甘露糖等16种糖，不能利用乳糖和可溶性淀粉，能利用甘油、甘露醇、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、氨基乙酸，不能利用对氨基苯甲酸、赤藓糖醇、核糖醇、肌醇、山梨醇和山梨酸。
(2)26SrDNAD1/D2区域序列分析
对菌株JAASRY1的26S rDNA D1/D2区域序列进行分析，其26SrDNA D1/D2基因序列优选如SEQ ID NO.1所示，具体为5’-GGAGGAAAAGAAACTAACAAGGATTCCCCTAGTAGCGGCGAGCGAAGCGGGAAGAGCTCAAATTTATAATCTGGCACCTTCGGTGTCCGAGTTGTAATCTCTAGAAATGTTTTCCGCGTTGGACCGCACACAAGTCTGTTGGAATACAGCGGCATAGTGGTGAGACCCCCGTATATGGTGCGGACGCCCAGCGCTTTGTGATACATTTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAATTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACCGTGAGGGAAAGATGAAAAGCACTTTGGAAAGAGAGTTAACAGTACGTGAAATTGTTGGAAGGGAAACGCTTGAAGTCAGACTTGCTTGCCGAGCAATCGGTTTGCAGGCCAGCATCAGTTTTCCGGGATGGATAATGGTAGAGAGAAGGTAGCAGTTTCGGCTGTGTTATAGCTCTCTGCTGGATACATCTTGGGGGACTGAGGAACGCAGTGTGCCTTTGGCGGGGGTTTCGACCTCTTCACACTTAGGA-3’，通过使用Blast进行比对，根据GenBank提供的最高相似性序列构建如图1所示的系统发育树，发现与Rhodotorulamucilaginosa CBS 316的亲缘关系最近，结合平皿上菌落特征、上述生理生化特性，将本发明分离菌株JAASRY1鉴定为胶红酵母，命名为胶红酵母JAASRY1，并于2021年7月14日保藏在中国典型培养物保藏中心(CGMCC)，保藏编号CGMCC No.22900。
实施例2
胶红酵母JAASRY1抑菌能力检测
将分离得到的胶红酵母JAASRY1，恒温30℃培养36～48小时后，8000r/min离心10min，取上清液，将直径为0.8cm的滤纸片浸泡在分离得到的上清液中15min，以大肠杆菌(Escherichiacoli)CMCC44825、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC26071、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)CMCC50、志贺氏菌(Shigellaflexneri)CMCC51061、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)ATCC19115为指示菌各取50μL，分别均匀涂布于营养琼脂平板上，静置20min，放上准备好的滤纸片，恒温37℃培养16h，观察抑菌情况。用游标卡尺测抑菌圈的直径，以抑菌圈的直径表示抑菌活性。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌购于广东微生物种质资源库。单增李斯特菌购于上海鲁微科技有限公司。胶红酵母JAASRY1抑制致病菌能力如表2所示：
表2胶红酵母JAASRY1抑制致病菌能力试验
根据表2可以看出，本发明胶红酵母JAASRY1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌均有抑制作用，对鼠伤寒沙门氏菌和志贺氏菌没有抑制作用。
实施例3
胶红酵母固态发酵
(1)以胶红酵母JAASRY1为出发菌种，菌种采用斜面活化传代，在无菌操作台中，挑取一单菌落，放入种子培养液(葡萄糖2.5％(w/v)、蛋白胨0.62wt.％(w/v)、酵母粉0.74wt.％(w/v)，其余为自来水，其pH在5.0～6.0的范围内波动5)，振荡培养，转速为250r/min，培养温度为30℃，培养时间为42h。将种子培养液按8％的质量百分含量转接种于10L扩大培养液(葡萄糖2.5％、蛋白胨0.62％、酵母粉0.74％，其余为自来水，其pH为5.0～6.5)中，按相同条件进行再次培养。将摇瓶扩大培养后的培养液按10％的质量百分含量接种入50L中间扩大培养液中，调节通气比(VVm)为1：0.6，通气搅拌速度为350r/min、温度为30℃，通气培养42h，接着将培养液按10％的质量百分含量转接种于200L种子罐培养液中，按上述相同条件进行再次培养发酵。将经中间罐扩大培养的培养液按10％的质量百分含量转接于发酵培养液(葡萄糖3％(w/v)、蛋白胨0.8％(w/v)、酵母粉0.8％(w/v)，大豆油0.05％(w/v)，其余为自来水，其pH为5.0～6.5)中，调节通气压力为0.06～0.12MPa，搅拌速度为400r/min，温度为30℃，通气培养44h后终止发酵。此时，液体发酵液中胶红酵母活菌量为≥109cfu/mL，类胡萝卜含量为958μg/mL。
(2)将上述培养液按25％的质量百分含量接种入固态发酵培养基，麸皮55wt.％，玉米粉18wt.％，豆粕25wt.％，葡萄糖1.96wt.％和磷酸氢二钾0.04wt.％。放入发酵库内，温度保持为28℃，通风保持发酵物料水分为62％，培养28h后终止发酵。取出发酵完毕的物料，放入干燥室，进行通风干燥，室内温度保持在50℃，直至物料水分降至18％以下，终止干燥。将干燥好的发酵物料，经粉碎机粉碎，过55目筛子，得到胶红酵母固态发酵产物。最终测得固态发酵产品含有胶红酵母≥109cfu/g，类胡萝卜素含量873.4μg/g。
实施例4
小鼠致病性和毒性试验
将30只体重23g左右的昆明小鼠随机分为3组，每组10只，雌雄各一半。其中第1组常规喂食普通饲料，作为空白对照，第2组每只小鼠按1×109cfu/kg菌种剂量连续7天灌服实施例3步骤(1)得到的胶红酵母液体发酵液，记为试验1组，第3组每只小鼠一次性腹腔注射0.2mL的菌悬液(1×109cfu/mL)，记为试验2组。所有小鼠饲喂试验均在干燥、清洁、通风良好的室内完成，处理7天后，记录各组小鼠的生长体重及死亡情况，结果如表3。
表3小鼠试验生长体重变化结果
分组 试验开始体重(g) 试验7天体重(g)
空白对照组 23.37±0.24 28.15±0.97
试验1组 23.12±0.13 30.21±1.07
试验2组 23.34±0.19 29.37±0.62
结果表明，试验2组注射组第一天打针小鼠进食量减少，精神不振，但第2天恢复正常。喂养7天后，3组试验小鼠均无死亡病例，说明本发明胶红酵母JAASRY1安全可靠无毒性。
实施例5
胶红胶母固态发酵饲料在蛋鸡养殖中的应用效果
在公主岭市养殖场选择体况相近、体重相近，平均体重为1.92±0.12kg的40周龄的海兰褐蛋鸡240只，试验时间为90天，前5天为预试期，后85天为正试期。各组鸡舍条件相同，随机将其分为4个处理组，采用笼养方式饲养，每个处理组6个重复，每个重复10只。即1个对照组、3个试验组。对照组饲喂基础日粮，试验组1饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为1％，记为1％试验组)，试验组2饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为2％，记为2％试验组，)，试验组3饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为3％，记为3％试验组)。
正试期开始每天记录产蛋数、蛋重，每天称一次剩余饲料重量，并记录给料量、剩料量，计算产蛋率、平均蛋重、料蛋比、每笼蛋鸡周产蛋量。试验开始前7天每天从各处理组选取6枚鸡蛋进行蛋品质分析、随后每周结束时每个处理组选取6枚进行测定，结果如下表4～5。
表4胶红酵母JAASRY1在蛋鸡养殖中的生长促进效果
表5胶红酵母JAASRY1对鸡蛋品质的影响
根椐表4～5可以看出，胶红酵母JAASRY1固态发酵产品降低蛋鸡腹泻率和死淘率，提高产蛋率，加深蛋黄颜色，提高蛋黄中类胡萝卜素含量。可降低日常喂养成本，增加养殖户经济收益。随着胶红酵母随着添加量的增加，在蛋鸡生长和鸡蛋品质中虽然有一定促进提高作用，但是考虑到投入和实际效果，2％的添加量很好的平衡了两者，故优先选择的添加使用量为2％。胶红酵母菌在蛋鸡饲料中添加有着很好的应用前景。
实施例6
胶红胶母固态发酵饲料在蛋鸭养殖中的应用效果
在公主岭市养殖场选择体况相近、体重相近，平均体重为2.73±0.43kg的50周龄的康贝尔鸭240只，试验时间为90天，前5天为预试期，后85天为正试期。各组鸭舍条件相同，随机将其分为4个处理组，采用笼养方式饲养，每个处理组6个重复，每个重复10只。即1个对照组、3个试验组。对照组饲喂基础日粮，试验组1饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为1％，记为1％试验组)，试验组2饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为2％，记为2％试验组)，试验组3饲喂基础日粮+实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物(其中实施例3得到的胶红酵母固态发酵产物的质量百分含量为3％，记为3％试验组)。
正式试验开始每天记录产蛋数、蛋重，每天称一次剩余饲料重量，并记录给料量、剩料量；计算产蛋率、平均蛋重、料蛋比、每笼鸭周产蛋量。试验开始前7天每天从各处理组选取6枚鸭蛋进行蛋品质分析、随后每周结束后每个处理组选取6枚进行测定，结果如下表6～7。
表6胶红酵母JAASRY1在蛋鸭养殖中的生长促进效果
表7胶红酵母JAASRY1对鸭蛋品质的影响
根椐表6～7可以看出，胶红酵母JAASRY1固态发酵产品降低蛋鸭腹泻率和死淘率，提高产蛋率，加深蛋黄颜色，提高蛋黄中类胡萝卜素含量。随着胶红酵母随着添加量的增加，在一定范围内蛋鸭生长和鸭蛋品质中虽然有一定促进提高作用，但是考虑到投入和实际效果，平衡两者追求最大经济利益，2％为优先选择的添加使用量，胶红酵母JAASRY1固态发酵产品作为一种安全绿色的添加剂，在蛋鸭饲料中有很好的应用前景。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
序列表
<110> 吉林省农业科学院
<120> 一株胶红酵母JAASRY1及其发酵培养物和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 555
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggaggaaaag aaactaacaa ggattcccct agtagcggcg agcgaagcgg gaagagctca 60
aatttataat ctggcacctt cggtgtccga gttgtaatct ctagaaatgt tttccgcgtt 120
ggaccgcaca caagtctgtt ggaatacagc ggcatagtgg tgagaccccc gtatatggtg 180
cggacgccca gcgctttgtg atacattttc gaagagtcga gttgtttggg aatgcagctc 240
aaattgggtg gtaaattcca tctaaagcta aatattggcg agagaccgat agcgaacaag 300
taccgtgagg gaaagatgaa aagcactttg gaaagagagt taacagtacg tgaaattgtt 360
ggaagggaaa cgcttgaagt cagacttgct tgccgagcaa tcggtttgca ggccagcatc 420
agttttccgg gatggataat ggtagagaga aggtagcagt ttcggctgtg ttatagctct 480
ctgctggata catcttgggg gactgaggaa cgcagtgtgc ctttggcggg ggtttcgacc 540
tcttcacact tagga 555

Claims (4)

1.一株胶红酵母(Rhodotorulamuciladinosa)JAASRY1或胶红酵母JAASRY1发酵培养物在制备类胡萝卜素、饲料和/或细菌抑制剂中一种或多种中的应用，其特征在于，所述应用包括在禽类动物的基础日粮中添加所述胶红酵母JAASRY1发酵培养物，促进禽类动物生长，降低禽类腹泻率、死淘率，提高禽类产蛋率，加深禽类蛋黄颜色，提高禽类蛋黄中类胡萝卜素含量；
所述株胶红酵母JAASRY1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.22900；
所述胶红酵母JAASRY1发酵培养物利用所述胶红酵母JAASRY1发酵获得；所述发酵的方式包括液态发酵和固态发酵；
所述液态发酵的培养基包括葡萄糖2wt.％～6wt.％、蛋白胨0.4wt.％～0.9wt.％、酵母粉0.6wt.％～0.8wt.％，大豆油0.04wt.％～0.09wt.％和余量的水；所述液态发酵的温度为28～32℃，时间为30～48h；
所述固态发酵的培养基包括麸皮45wt.％～65wt.％，玉米粉15wt.％～25wt.％，豆粕15wt.％～30wt.％，葡萄糖1wt.％～5wt.％和磷酸氢二钾0.01wt.％～0.08wt.％；所述固态发酵的温度为25～32℃，时间为18～35h；
所述胶红酵母JAASRY1发酵培养物的添加量为1％～3％；
所述细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌。
2.一种饲料添加剂，其特征在于，活性成分包括权利要求1所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母JAASRY1发酵培养物；
所述胶红酵母JAASRY1发酵培养物的添加量为1％～3％。
3.一种细菌抑制剂，其特征在于，活性成分包括权利要求1所述的胶红酵母JAASRY1或胶红酵母JAASRY1发酵培养物；
所述细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌。
4.一种类胡萝卜素的制备方法，其特征在于，利用权利要求1所述胶红酵母JAASRY1发酵获得；所述发酵的方式包括液态发酵和固态发酵；
所述液态发酵的培养基包括葡萄糖2wt.％～6wt.％、蛋白胨0.4wt.％～0.9wt.％、酵母粉0.6wt.％～0.8wt.％，大豆油0.04wt.％～0.09wt.％和余量的水；所述液态发酵的温度为28～32℃，时间为30～48h；
所述固态发酵的培养基包括麸皮45wt.％～65wt.％，玉米粉15wt.％～25wt.％，豆粕15wt.％～30wt.％，葡萄糖1wt.％～5wt.％和磷酸氢二钾0.01wt.％～0.08wt.％；所述固态发酵的温度为25～32℃，时间为18～35h；
所述株胶红酵母JAASRY1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.22900。
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