CN101463335A - 一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法。首先制备枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，产朊假丝酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生产发酵剂，各生产发酵剂活菌数≥10⁹cfu/ml，然后对5株菌生产发酵剂酌量添加保护剂进行冻干，按冻干菌粉末重量，取枯草芽孢杆菌粉末2－4份，植物乳杆菌粉末3－5份，产朊假丝酵母粉末3－5份，白地霉粉末2－4份，米曲霉菌粉末3－5份，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。在猪舍发酵床中使用本发明产品5－20g/m²可以明显降低猪圈舍的臭味，减少蚊蝇滋生机会，降低猪的生病次数，使猪能够健康成长，保护环境的同时为人类提供绿色猪肉。

Description

一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法

(一)技术领域

本发明涉及一种复合微生物菌剂，特别涉及一种用于猪舍发酵床的复合微生物菌剂。本发明还涉及这种复合微生物菌剂的制备方法。

(二)背景技术

我国养殖规模和产值每年的递增速度超过10％，但与此同时，由养殖业带来的环境污染越来越严重。现阶段农村、农业以存在着以家庭分散式为主的经济组织与经营方式，虽然规模化养殖是养殖业的发展方向，但在相当长时间内，家庭或小型分散式养殖的方式不会根本改变，同时，由于小型或分散养殖方式，其污染防治的管理面广量大，由此造成的粪便污染问题比规模养殖场更为严重与突出。国家环保总局在全国23个省市进行的调查发现，全国的90％规模化畜禽养殖场未经过环境影响评价，60％的养殖场缺乏必要的污染防治措施。未经处理的畜禽粪便任意堆积，污水粪便随意排放，从而带来一系列的环境问题如占用和污染农田、水体，产生恶臭和造成生物污染。因此，如何合理处置与利用畜禽粪便，是全社会必需面对的一个重大问题。

发酵床养猪法的原理是利用发酵床中各种微生物进行自然生物发酵；通过微生物耗氧发酵分解猪的粪尿，避免臭味、异味的产生；再通过微生物厌氧发酵产生猪可食用的菌体蛋白饲料和益生菌活菌体，既给猪提供了大量的高营养饲料，促进了猪对饲料的消化吸收，又增强了猪的抗病能力。目前国内发酵床养猪使用的菌剂大多是手工作方式采集的，并通过自然培养的方式进行增值，缺乏科学有效的调控手段，产品的质量无法保证。

我国目前已有一些单位相继推出不同组合的发酵床养猪用复合微生物制剂，但普遍的问题是在复合微生物筛选培养过程中，缺乏基本的理论指导以及成熟的生产工艺，对复合培养的发酵过程及其个菌群之间的互相作用及其机理较为生疏，导致产品活菌总数不能保持一定水平，产品质量不稳定，影响了其在使用过程中的效果。本发明的复合菌剂能够较好地解决不同微生物之间的协同、共生关系，从而保证稳定的作用效果。

(三)发明内容

本发明目的在于提供一种能够快速分解猪的粪尿，避免臭味、异味的产生并能产生大量益生菌菌体蛋白的复合菌剂。本发明的目的还在于提供一种猪舍发酵床复合微生物菌剂的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的：

1.发酵菌株的选择及培养基的制备

A菌——枯草芽孢杆菌(CICC10088)，培养基为牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化钠5克，PH7.2～7.4。

B菌——植物乳杆菌(CICC 6026)，培养基为5°Bé麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。

C菌——产朊假丝酵母(CICC 31170)，培养基为5°Bé麦芽汁。

D菌——白地霉(CICC 1315)，培养基为5°Bé麦芽汁。

E菌——米曲霉(CICC 2011)，培养基为5°Bé米曲汁。

2.复合菌剂的制备过程

2.1 冻干菌粉末的活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下分别倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

2.2 扩大培养

2.2.1 母发酵剂的制备

分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在28-30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂。

2.2.2 生产发酵剂的制备

首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培养30——36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10⁹cfu/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数<10⁹cfu/ml，继续培养，直至达到10⁹cfu/ml。

2.3 粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

2.4 复合菌剂的制备

按冻干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，C菌粉末3-5份，D菌粉末2-4份，E菌粉末3-5份，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。

3.使用方法

将本发明产品按发酵床的面积5-20g/m²的比例，少许温水溶解后添加到发酵床中，自然条件下成熟。

4.应用效果

下面通过具体实验来证明本发明专利的应用效果

选择断乳的仔猪50头，分成5组，每组10头，分别饲养在不同的圈舍中。将复合菌剂按5g/m²、10g/m²、15g/m²、20g/m²分别应用于四个试验组，另外一组作为对照，同时保持5组圈舍的其它条件相同，各组猪出栏时各项指标如下表：

生长情况记录表

由上表可以看出，使用复合菌剂的4组试验，猪的生病率明显降低，并且圈舍干净整洁，毛色光亮，平均体重超过对照组20斤以上；试验组随复合菌用量的增大，生病次数逐渐减少，出栏体重逐渐增加。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述：

本发明采用的5株菌名称及菌种来源如下：

枯草芽孢杆菌(CICC 10088)、植物乳杆菌(CICC 6026)、产朊假丝酵母(CICC 31170)白地霉(CICC 1315)、米曲霉(CICC 2011)五株菌种均购于中国工业微生物菌种保藏中心；本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。

实施例一：

1.发酵菌株的选择及培养基的制备

A菌——枯草芽孢杆菌(CICC 10088)，培养基为牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化钠5克，PH7.2～7.4。

B菌——植物乳杆菌(CICC 6026)，培养基为5°Bé麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。

C菌——产朊假丝酵母(CICC 31170)，培养基为5°Bé麦芽汁。

D菌——白地霉(CICC 1315)，培养基为5°Bé麦芽汁。

E菌——米曲霉(CICC 2011)，培养基为5°Bé米曲汁。

2.复合菌剂的制备过程

2.1 冻干菌粉末的活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

2.2 发酵菌扩大培养

2.2.1 母发酵剂的制备

分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂。

2.2.2 生产发酵剂的制备

首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培养30——36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10⁹cfu/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数<10⁹cfu/ml，继续培养，直至达到10⁹cfu/ml。

2.3 粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

2.4 发酵菌复配

按冻干菌粉末重量，取A菌粉末20克，B菌粉末30克，C菌粉末30克，D菌粉末20克，E菌粉末30克，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。

3.使用方法

将本发明产品按发酵床的面积5-20g/m²的比例，少许温水溶解后添加到发酵床中，自然条件下成熟。

实施例二：

1.发酵菌株的选择及培养基的制备

A菌——枯草芽孢杆菌(CICC 10088)，培养基为牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化钠5克，PH7.2～7.4。

B菌——植物乳杆菌(CICC 6026)，培养基为5°Bé麦芽汁中加入酵母膏0.5，无菌碳酸钙0.6。

C菌——产朊假丝酵母(CICC 31170)，培养基为5°Bé麦芽汁。

D菌——白地霉(CICC 1315)，培养基为5°Bé麦芽汁。

E菌——米曲霉(CICC 2011)，培养基为5°Bé米曲汁。

2.复合菌剂的制备过程

2.1 冻干菌粉末的活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于5只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将5株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

2.2 发酵菌扩大培养

2.2.1 母发酵剂的制备

分别量取5株菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃摇床培养24小时，作为母发酵剂。

2.2.2 生产发酵剂的制备

首先配置10％的脱脂奶乳浊液，向脱脂乳中加入2％的液态甘油、2％低聚木糖、2％葡萄糖，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃摇床培养30——36小时，检测5株菌生产发酵剂活菌数，各生产发酵剂活菌数≥10⁹cfu/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数<10⁹cfu/ml，继续培养，直至达到10⁹cfu/ml。

2.3 粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

2.4 发酵菌复配

按冻干菌粉末重量，取A菌粉末40克，B菌粉末50克，C菌粉末50克，D菌粉末40克，E菌粉末50克，充分混匀后真空包装即可得到复合菌剂。

3.使用方法

将本发明产品按发酵床的面积5-20g/m²的比例，少许温水溶解后添加到发酵床中，自然条件下成熟。

Claims (2)

1、一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法，其特征是：枯草芽孢杆菌，植物乳杆菌，产朊假丝酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生产发酵剂，各生产发酵剂活菌数≥10⁹cfu/ml，然后对5株菌生产发酵剂酌量添加保护剂进行冻干，按冻干菌粉末重量，取枯草芽孢杆菌粉末2-4份，植物乳杆菌粉末3-5份，产朊假丝酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混匀后真空包装即可得到微生物复合菌剂。

2、根据权利要求1所述一种猪舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法，其特征是：复合菌剂按发酵床面积5-20g/m²的比例，少许温水溶解后添加到发酵床中，自然条件下成熟。