CN104522299A - 一种湿基生物活性制品的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及湿基生物活性制品的制备方法，有效解决生物活性制品在湿基条件下保存并保持其生物活性的问题，由以下步骤实现：安瓿管开封，菌种活化，一级、二级、三级微生物菌种培养，固体好氧发酵培养基配制，固体厌氧发酵培养基配制，灭菌，冷却，接种，好氧发酵，厌氧发酵，混合，包装，本发明选育了高效能的菌种，采用了保持菌种活性的微孔包装技术，使湿基生物活性制品在18-30℃、含水量35-40%的情况下，保存6个月并保持其生物活性。

Description

一种湿基生物活性制品的制备方法

技术领域

本发明涉及一种湿基生物活性制品的制备方法。

背景技术

生物活性制品为饲料工业和畜禽饲养提供了一种健康、无毒、无污染的选择，其正效应已被公认，但仍存在着许多局限性问题：(1)研发起步较晚，应用的覆盖面有限。(2)尚需筛选和培育高效能的菌种。(3)生物活性制品成分多为活菌，其在饲料加工、运输及保存过程中易失活，从而降低其生物活性作用。(4)活菌生长速度慢，难以在微生物竞争中于优势地位。

以上问题主要是菌种效能低，在干基条件下失活造成的，但湿基条件下易胀袋和污染杂菌不易保存，因此，如何在湿基条件下保存并保持生物活性制品的生物活性，是行业内迫切要解决的问题。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种湿基生物活性制品的制备方法，可有效解决生物活性制品在湿基条件下保存并保持其生物活性的问题。

本发明解决的技术方案是，由以下步骤实现：

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75％的酒精分别对装有冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度(应避免过多水蒸汽影响菌种的复苏)，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；所述的冻干菌体分别为适用于好氧发酵的冻干菌体和适用于厌氧发酵的冻干菌体；其中，适用于好氧发酵的冻干菌体分别为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌；适用于厌氧发酵的冻干菌体分别为植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母；所述的冻干菌体均为菌体冻干粉，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水(无菌水的用量以能溶解安瓿管内的冻干菌体为度)分别滴入到上述装有冻干菌体的安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入3-5℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时，DO为40％～50％；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时，DO为40％～50％；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时，DO为40％～45％；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时，DO为30％～35％；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时，DO为30％～35％；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一、培养基二、培养基三和培养基四均为现有技术，所述的培养基一为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g、琼脂15.0～20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入3-5℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五、培养基六、培养基七和培养基八均为现有技术，所述的培养基五为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.03Mpa～0.05Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕4.0g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)9.3g、葡萄糖6.0g、淀粉2.5g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)1.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙(CaCO₃)10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为玉米淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、甘薯淀粉、小麦淀粉中的任意一种；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式(所述的压力差为种子发酵罐内的压力保持0.1Mpa，发酵罐内的压力保持0.05Mpa，培养好的二级微生物菌种即可流入发酵罐内)接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.03Mpa～0.05Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是指，对水果经过压榨，以提取其汁液或油份之后，所余下的固态部份，包括有果皮、果肉、果籽和果梗，如葡萄渣、橄榄渣、苹果渣、桔子渣和梨渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌(灭菌压力为0.3Mpa～0.4Mpa，温度为130℃～150℃，时间为5分钟)，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至35℃～37℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0％；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5％；

2.6、发酵

2.6.1好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃(自动控温，当温度低于30℃时，则加热，当温度高于37℃时，则降温)，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/min；发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品1；

2.6.2厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度30-37℃，时间5-7天，发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为35％～40％；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

本发明选育了高效能的菌种，采用了保持菌种活性的微孔包装技术(即采用呼吸包装袋进行包装)，使湿基生物活性制品在18-30℃、含水量35-40％的情况下，保存6个月并保持其生物活性。

具体实施方式

以下结合实施倒对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75％的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.3ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入3℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时，DO为45％；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时，DO为45％；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时，DO为45％；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时，DO为33％；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时，DO为33％；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一、培养基二、培养基三和培养基四均为现有技术，所述的培养基一为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入3℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五、培养基六、培养基七和培养基八均为现有技术，所述的培养基五为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.04Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕4.0g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)9.3g、葡萄糖6.0g、淀粉2.5g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)1.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙(CaCO₃)10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为玉米淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式(所述的压力差为种子发酵罐内的压力保持0.1Mpa，发酵罐内的压力保持0.05Mpa，培养好的二级微生物菌种即可流入发酵罐内)接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.04Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是苹果渣；2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌(灭菌压力为0.3Mpa，温度为140℃，时间为5分钟)，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至36℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0％；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5％；

2.6、发酵

2.6.1好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃(自动控温，当温度低于30℃时，则加热，当温度高于37℃时，则降温)，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/min；发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品1；

2.6.2厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度30℃，时间5天，发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为38％；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

实施例2

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75％的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.4ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入4℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为40％；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为40％；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为40％；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时，DO为30％；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时，DO为30％；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一、培养基二、培养基三和培养基四均为现有技术，所述的培养基一为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入4℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五、培养基六、培养基七和培养基八均为现有技术，所述的培养基五为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.03Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕4.0g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)9.3g、葡萄糖6.0g、淀粉2.5g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)1.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙(CaCO₃)10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为马铃薯淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式(所述的压力差为种子发酵罐内的压力保持0.1Mpa，发酵罐内的压力保持0.05Mpa，培养好的二级微生物菌种即可流入发酵罐内)接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.03Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是桔子渣；2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌(灭菌压力为0.4Mpa，温度为130℃，时间为5分钟)，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至35℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0％；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5％；

2.6、发酵

2.6.1好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃(自动控温，当温度低于30℃时，则加热，当温度高于37℃时，则降温)，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/min；发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品1；

2.6.2厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度34℃，时间6天，发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为35％；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

实施例3

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75％的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.5ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入5℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时，DO为50％；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时，DO为50％；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为45％；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为35％；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为35％；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一、培养基二、培养基三和培养基四均为现有技术，所述的培养基一为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g、琼脂20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g、琼脂15.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，置入5℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五、培养基六、培养基七和培养基八均为现有技术，所述的培养基五为由牛肉膏10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖10.0g、氯化钠(NaCl)5.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温801.0g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)2.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.2g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)0.05g、碳酸钙(CaCO₃)20.0g和蒸馏水1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏7.5g、葡萄糖10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨7.5g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2.0g、吐温800.5ml和蒸馏水900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.05Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕4.0g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)9.3g、葡萄糖6.0g、淀粉2.5g、一水硫酸锰(MnSO₄·H₂O)1.0g、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)1.5g、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙(CaCO₃)10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为甘薯淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式(所述的压力差为种子发酵罐内的压力保持0.1Mpa，发酵罐内的压力保持0.05Mpa，培养好的二级微生物菌种即可流入发酵罐内)接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，置显微镜下观察：菌体形态一致，且无杂菌即判定合格，保持罐压0.05Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是梨渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌(灭菌压力为0.3Mpa，温度为150℃，时间为5分钟)，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至37℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0％；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5％；

2.6、发酵

2.6.1好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃(自动控温，当温度低于30℃时，则加热，当温度高于37℃时，则降温)，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/min；发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品1；

2.6.2厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度37℃，时间7天，发酵完毕后，经检测，色泽均匀一致；具有发酵的特殊气味；无霉变；水分≤40.0％，为合格，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为40％；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

本发明提供了一种湿基生物活性制品的制备方法，有效解决了生物活性制品在湿基条件下保存并保持其生物活性的问题，且该方法制备的产物具有浓郁的诱食香味，可提高畜禽采食量；富含多种活性益生菌，调节动物体内菌群平衡；含有大量的生物活性酶，促进消化吸收，提高饲料转化率；显著降低抗生素使用量，明显提升畜产品品质，并解决了产品运输和贮藏的难题，经反复测试，取得了良好的效果，具体如下：

采用本发明方法生产的湿基生物活性制品在外观和品质等方面都处于国内领先水平(见表1)。

表1 本发明方法生产的湿基生物活性制品与国内现有同类产品技术综合比较

本发明方法生产的湿基生物活性制品的饲喂效果如下：其中，对照组直接饲喂全价料，试验组是用每1000kg全价料中添加2kg本发明湿基生物活性制品饲喂，结果见下表2、表3和表4：

表2 母猪饲喂比较

表3 断奶仔猪饲喂比较

表4 生长育肥阶段猪饲喂比较

本发明与现有技术相比，其创新点是：1、采用为农副产品下脚料豆粕、麸皮、果渣、米糠、次粉为原料，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母、产朊假丝酵母为发酵菌种，采用好氧发酵和厌氧发酵相结合多菌种混合发酵工艺生产而成的35％～40％的湿基生物活性制品，有效解决了生物活性制品在湿基条件下不易保存并保持生物活性制品的生物活性的问题，有巨大的经济和社会效益。

Claims (4)

1.一种湿基生物活性制品的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75%的酒精分别对装有冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；所述的冻干菌体分别为适用于好氧发酵的冻干菌体和适用于厌氧发酵的冻干菌体；其中，适用于好氧发酵的冻干菌体分别为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌；适用于厌氧发酵的冻干菌体分别为植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别滴入到上述装有冻干菌体的安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入3-5℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时，DO为40%～50%；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时，DO为40%～50%；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时，DO为40%～45%；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时，DO为30%～35%；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时，DO为30%～35%；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g、琼脂 15.0～20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂 15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入3-5℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨 10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.03Mpa～0.05Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕 4.0g、磷酸二氢钾3.5g、磷酸氢二钾9.3g、葡萄糖 6.0g、淀粉 2.5g、一水硫酸锰1.0g、七水硫酸镁0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖 50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为玉米淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、甘薯淀粉、小麦淀粉中的任意一种；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.03Mpa～0.05Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃～37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃～35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28～30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是指葡萄渣、橄榄渣、苹果渣、桔子渣和梨渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至35℃～37℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0%；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5%；

2.6、发酵

2.6.1 好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/ min；发酵完毕后，即得半成品1；

2.6.2  厌氧发酵

   厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度30-37℃，时间5-7天，发酵完毕后，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

2.根据权利要求1所述的湿基生物活性制品的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75%的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.3ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入3℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时，DO为45%；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时，DO为45%；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时，DO为45%；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时，DO为33%；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时，DO为33%；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂 15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入3℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨 10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.04Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕 4.0g、磷酸二氢钾3.5g、磷酸氢二钾9.3g、葡萄糖 6.0g、淀粉 2.5g、一水硫酸锰1.0g、七水硫酸镁0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖 50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为玉米淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.04Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为36℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为33℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为29℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是苹果渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至36℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0%；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5%；

2.6、发酵

2.6.1 好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/ min；发酵完毕后，即得半成品1；

2.6.2  厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度30℃，时间5天，发酵完毕后，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为38%；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

3.根据权利要求1所述的湿基生物活性制品的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75%的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.4ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入4℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为40%；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为40%；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为40%；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时，DO为30%；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时，DO为30%；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂 15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入4℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨 10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.03Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕 4.0g、磷酸二氢钾3.5g、磷酸氢二钾9.3g、葡萄糖 6.0g、淀粉 2.5g、一水硫酸锰1.0g、七水硫酸镁0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖 50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为马铃薯淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.03Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为28℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是桔子渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至35℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0%；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5%；

2.6、发酵

2.6.1 好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/ min；发酵完毕后，即得半成品1；

2.6.2  厌氧发酵

   厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度34℃，时间6天，发酵完毕后，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为35%；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。

4.根据权利要求1所述的湿基生物活性制品的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

一、菌种培养

1.1、菌种活化

1.1.1、安瓿管开封

用质量浓度75%的酒精分别对装有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母的冻干菌体的安瓿管外表面消毒，火焰加热安瓿管顶端，滴无菌水至加热的安瓿管顶端，无菌水的加入量以能使安瓿管顶端破裂为度，用消毒后的镊子敲下已破裂的安瓿顶端；

1.1.2、菌种活化

用无菌吸管吸取无菌水分别在上述每个装有冻干菌体的安瓿管内滴入0.5ml，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状，分别吸取全部菌悬液，移植于各自的冻干菌体培养基上，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入5℃冰箱内备用，即得活化好的菌种；所述的冻干菌体为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时，DO为50%；所述的冻干菌体为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时，DO为50%；所述的冻干菌体为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时，DO为45%；所述的冻干菌体为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的冻干菌体为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为35%；所述的冻干菌体为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时，DO为35%；所述的冻干菌体培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基一、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基二、用于培养屎肠球菌的培养基三和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基四；所述的培养基一为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g、琼脂 20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基二为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g、琼脂 15.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基三为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基四为由5°Bé麦芽汁1.0L和琼脂 15.0g混合在一起组成；

1.2、菌种扩培

1.2.1、一级微生物菌种培养

分别将上述活化好的菌种在无菌条件下接入经过灭菌的且装有活化菌种培养基的三角瓶中，置恒温培养箱中，培养，培养结束后，置入5℃冰箱内备用，即得一级微生物菌种；所述的活化好的菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化好的菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的活化菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基五、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养基六、用于培养屎肠球菌的培养基七和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基八；所述的培养基五为由牛肉膏 10.0g、蛋白胨 10.0g、葡萄糖 10.0g、氯化钠5.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基六为由酪蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、酵母粉 5.0g、葡萄糖 5.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、吐温80 1.0g、磷酸氢二钾2.0g、七水硫酸镁0.2g、一水硫酸锰0.05g、碳酸钙20.0g和蒸馏水 1.0L混合在一起组成；所述的培养基七为由酵母膏 7.5g、葡萄糖 10.0g、番茄汁100ml、蛋白胨 7.5g、磷酸二氢钾2.0g、吐温80 0.5ml和蒸馏水 900ml混合在一起组成；所述的培养基八为由5°Bé麦芽汁1.0L；

1.2.2、二级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的一级微生物菌种移植于经过灭菌且装有微生物菌种培养基的种子发酵罐内，培养，培养结束后，保持罐压0.05Mpa，即得二级微生物菌种；所述的一级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的一级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一，所述的培养基九为由豆粕 4.0g、磷酸二氢钾3.5g、磷酸氢二钾9.3g、葡萄糖 6.0g、淀粉 2.5g、一水硫酸锰1.0g、七水硫酸镁0.5g和水1.0L混合在一起组成；所述的培养基十为由红糖5g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾3.0g、胡萝卜汁100ml、碳酸钙10.0g和水900ml混合在一起组成；所述的培养基十一为由5°Bé麦芽汁500ml、葡萄糖 50g和水500ml混合在一起组成；所述的淀粉为甘薯淀粉；

1.2.3、三级微生物菌种培养

在无菌条件下，分别将上述培养好的二级微生物菌种通过压力差的方式接入于经过灭菌的且装有微生物菌种培养基的发酵罐内，培养，培养结束后，保持的罐压0.05Mpa，即得三级微生物菌种；所述的二级微生物菌种为枯草芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为地衣芽孢杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为凝结芽孢杆菌时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为植物乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为嗜酸乳杆菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为屎肠球菌时，培养温度为37℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为德氏乳杆菌保加利亚亚种时，培养温度为35℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为酿酒酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的二级微生物菌种为产朊假丝酵母时，培养温度为30℃，培养时间为48小时；所述的微生物菌种培养基为用于培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的培养基九、用于培养植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、屎肠球菌的培养基十和用于培养酿酒酵母、产朊假丝酵母的培养基十一；

二、固体发酵

2.1、固体好氧发酵培养基配制：将豆粕、麸皮按照1：4的重量比例混合，得混合物，混合物与水按7：3的重量比例混合；

2.2、固体厌氧发酵培养基配制：将果渣、米糠、次粉按照6：3：1的重量比例混合，得混合物，混合物与水按3：2的重量比例混合；所述的果渣是梨渣；

2.3、灭菌：采用连续灭菌方式进行灭菌，即是：将固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基连续置入通有饱和蒸汽的绞龙内进行连续灭菌，灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基分别放入通风发酵池、厌氧发酵池内；

2.4、冷却：对灭菌后的固体好氧发酵培养基、固体厌氧发酵培养基进行冷却，待温度降至37℃时；进行接种；

2.5接种：a、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌和凝结芽孢杆菌按重量比5:2:3进行混合，得好氧发酵混合菌种，好氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体好氧发酵培养基，其中固体好氧发酵培养基中的接种量为固体好氧发酵培养基重量的3.0%；

b、在无菌条件下，将培养好的三级微生物菌种中的植物乳杆菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、酿酒酵母和产朊假丝酵母按重量比3:1:3:0.5:2:0.5混合；得厌氧发酵混合菌种，厌氧发酵混合菌种接入到上述冷却后的固体厌氧发酵培养基，固体厌氧发酵培养基中的接种量为固体厌氧发酵培养基重量的2.5%；

2.6、发酵

2.6.1 好氧发酵

通风发酵池内，发酵条件为温度30-37℃，时间3天，接种后第24小时开始翻动通风发酵池内的好氧发酵混合菌种，翻动频率为每3小时一次，接种后第49小时开始通风，通风量为1.0立方米/ min；发酵完毕后，即得半成品1；

2.6.2  厌氧发酵

厌氧发酵池内，堆积发酵，发酵条件为温度37℃，时间7天，发酵完毕后，即得半成品2；

2.7、混合

半成品1和半成品2按照4:6的重量比例混合，得到湿基生物活性制品，含水量为40%；

2.8、包装

采用呼吸包装袋进行包装。