CN107603916A - 一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用。所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌10～20％、绿色木霉菌5～15％、里氏木霉菌5～10％、酵母菌10～20％、双歧杆菌10～15％、放线菌5～15％、黄孢原毛平革菌20～35％、植物乳杆菌5～15％、白腐真菌10～25％。此菌种组合能够快速分解腐熟废弃食用菌培养基料中的纤维素、半纤维素及木质纤维素，产生大量的葡萄糖、矿物质等营养物质，并且在发酵的同时能够产生大量的有益微生物进而消灭废弃基料中的病虫菌，为其后续利用创造有利的条件。

Description

一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用。

背景技术

食用菌的培养很多是在培养基料上进行的，多数的培养基料是由农作物秸秆、农作物副产物配以其他营养物质得到，其具有出菌率高、生产周期短的优点，但是是在食用菌收至三至四潮之后，由于培养基料中营养物质的消耗，食用菌的产量大大下降，此时，很多的食用菌养殖企业选择将培养基料废弃，从而造成了严重的环境负担与资源浪费。

发明内容

基于以上背景，本发明提供了一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用。所述微生物组合菌剂可快速分解腐熟食用菌培养后废弃的培养基料，重新将其作为食用菌培养基料的原料或者有机肥料，从而实现资源的循环利用，减轻环境负担。

本发明采取的技术方案为：

一种微生物组合菌剂，所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌10～20％、绿色木霉菌5～15％、里氏木霉菌5～10％、酵母菌10～20％、双歧杆菌10～15％、放线菌5～15％、黄孢原毛平革菌20～35％、植物乳杆菌5～15％、白腐真菌10～25％。

各菌种原料的活菌数为：枯草芽孢杆菌3～6×10⁷cfu/g、绿色木霉菌2～5×10⁸cfu/g、里氏木霉菌3～6×10⁷cfu/g、酵母菌5～7×10⁷cfu/g、双歧杆菌2～5×10⁸cfu/g、放线菌2～5×10⁶cfu/g、黄孢原毛平革菌6～10×10¹⁰cfu/g、植物乳杆菌4～8×10⁹cfu/g、白腐真菌6～10×10¹⁰cfu/g。

本发明还提供了所述的微生物组合菌剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)分别将枯草芽孢杆菌、绿色木霉菌、里氏木霉菌、酵母菌、双歧杆菌、放线菌、黄孢原毛平革菌、植物乳杆菌、白腐真菌接种于PDA斜面培养基中于30～35℃培养6～8h；

(2)将步骤(1)培养后的菌种分别接种于液态培养基中于30～35℃培养8～10h；

(3)将步骤(2)培养后的菌种按5～10％的接种量分别接种于发酵培养罐培养至目标活菌数；

(4)将步骤(3)培养后的各菌种按照配方量混合，进行交叉拮抗培养，即可得到所述微生物组合菌剂。

所述步骤(2)中，液态培养基的成分为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：蛋白胨10.0％、牛肉膏3.0％、葡萄糖7.0％、糖蜜4.0％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.2％、硫酸铵0.1％、碳酸钙0.2％，其余为蒸馏水。

所述步骤(3)中，发酵罐中的培养基为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：氨基酸4.5％％、牛肉膏2.5％、葡萄糖3.4％、糖蜜6.0％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.3％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.3％，其余为蒸馏水。

所述步骤(3)中的培养温度为28～32℃。

所述步骤(4)中，交叉拮抗培养所用的培养基为：氨基酸6.0％％、牛肉膏3.4％、琼脂6.5％、尿素1.2％、糖蜜7.5％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.2％、碳酸钙0.5％、磷酸二氢钾0.2％，其余为蒸馏水。

所述步骤(4)中，混合菌种的接种量为5～10％，培养条件为：28～32℃培养6～10h。

本发明还提供了所述微生物组合菌剂在分解腐熟废弃食用菌培养基料上的应用。

所述应用包括以下步骤：

A、将所述微生物组合菌剂与25～40倍水混合活化1～2天；

B、将活化后的微生物组合菌剂均匀喷洒在废弃食用菌培养基料上，控制基料中的含水量在40～50％之间；

C、将基料进行建堆发酵，在温度到达50～60℃之间翻堆一次，反复翻堆3～4次，3～5天后即可发酵完成。

所述活化后的微生物组合菌剂的重量为废弃食用菌培养基料的重量的1.5～3.0％。

本发明公开的微生物组合菌剂的配方是经过发明人反复验证不断筛选得到的菌剂组合，此菌种组合能够快速分解腐熟废弃食用菌培养基料中的纤维素、半纤维素及木质纤维素，产生大量的葡萄糖、矿物质等营养物质，并且在发酵的同时能够产生大量的有益微生物进而消灭废弃基料中的病虫菌，为其后续利用创造有利的条件。

本发明公开的微生物组合菌剂还可用于秸秆、动物粪便、食物残渣等的腐化分解。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1.经反复实验制备得到成分合理的液体培养基，此液体培养基适用于配方中的各菌种，各菌种无需采用不同成分的培养基进行培养，简化了制备的步骤；

2.本发明公开的微生物菌剂组合的配方合理、使用方便，具有酶活高、菌数高的特点；

3.分解腐熟后的废弃食用菌培养基料可再次作为基料的原料用于食用菌的培养或者直接作为生物有机肥用做农作物的基肥；

4.实现了对废弃资源的循环利用，有效解决了环境污染的问题。

具体实施方式

实施例1

一种微生物组合菌剂，其特征在于，所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌10％、绿色木霉菌5％、里氏木霉菌10％、酵母菌20％、双歧杆菌10％、放线菌5％、黄孢原毛平革菌25％、植物乳杆菌5％、白腐真菌10％。

其制备方法包括以下步骤：

(1)分别将枯草芽孢杆菌、绿色木霉菌、里氏木霉菌、酵母菌、双歧杆菌、放线菌、黄孢原毛平革菌、植物乳杆菌、白腐真菌接种于PDA斜面培养基中于30℃培养8h；

(2)将步骤(1)培养后的菌种分别接种于液态培养基中于30℃培养8h；所述液态培养基的成分为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：蛋白胨10.0％、牛肉膏3.0％、葡萄糖7.0％、糖蜜4.0％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.2％、硫酸铵0.1％、碳酸钙0.2％，其余为蒸馏水；

(3)将步骤(2)培养后的菌种按5％的接种量分别接种于发酵培养罐于28℃培养至目标活菌数；发酵罐中的培养基为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：氨基酸4.5％％、牛肉膏2.5％、葡萄糖3.4％、糖蜜6.0％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.3％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.3％，其余为蒸馏水，各菌种的目标活菌数分别为：枯草芽孢杆菌3×10⁷cfu/g、绿色木霉菌3×10⁸cfu/g、里氏木霉菌6×10⁷cfu/g、酵母菌5×10⁷cfu/g、双歧杆菌2×10⁸cfu/g、放线菌2×10⁶cfu/g、黄孢原毛平革菌6×10¹⁰cfu/g、植物乳杆菌8×10⁹cfu/g、白腐真菌10×10¹⁰cfu/g；

(4)将步骤(3)培养后的各菌种按照配方量混合，按接种量为5％接种，进行交叉拮抗培养，即可得到所述微生物组合菌剂，交叉拮抗培养所用的培养基为：氨基酸6.0％％、牛肉膏3.4％、琼脂6.5％、尿素1.2％、糖蜜7.5％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.2％、碳酸钙0.5％、磷酸二氢钾0.2％，其余为蒸馏水。

将本实施例得到的微生物组合菌剂与25倍水混合活化2天；将活化后的微生物组合菌剂均匀喷洒在废弃食用菌培养基料上，所述活化后的微生物组合菌剂的重量为废弃食用菌培养基料的重量的1.5％，控制基料中的含水量在40％；将基料进行建堆发酵，在温度到达50～60℃之间翻堆一次，反复翻堆3～4次，3～5天后即可发酵完成。

实施例2

一种微生物组合菌剂，其特征在于，所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌15％、绿色木霉菌10％、里氏木霉菌5％、酵母菌15％、双歧杆菌15％、放线菌5％、黄孢原毛平革菌20％、植物乳杆菌5％、白腐真菌10％。

其制备方法包括以下步骤：

(1)分别将枯草芽孢杆菌、绿色木霉菌、里氏木霉菌、酵母菌、双歧杆菌、放线菌、黄孢原毛平革菌、植物乳杆菌、白腐真菌接种于PDA斜面培养基中于35℃培养6h；

(2)将步骤(1)培养后的菌种分别接种于液态培养基中于35℃培养8h；所述液态培养基的成分为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：蛋白胨10.0％、牛肉膏3.0％、葡萄糖7.0％、糖蜜4.0％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.2％、硫酸铵0.1％、碳酸钙0.2％，其余为蒸馏水；

(3)将步骤(2)培养后的菌种按10％的接种量分别接种于发酵培养罐于32℃培养至目标活菌数；发酵罐中的培养基为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：氨基酸4.5％％、牛肉膏2.5％、葡萄糖3.4％、糖蜜6.0％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.3％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.3％，其余为蒸馏水，各菌种的目标活菌数分别为：枯草芽孢杆菌6×10⁷cfu/g、绿色木霉菌5×10⁸cfu/g、里氏木霉菌5×10⁷cfu/g、酵母菌7×10⁷cfu/g、双歧杆菌2×10⁸cfu/g、放线菌2×10⁶cfu/g、黄孢原毛平革菌6×10¹⁰cfu/g、植物乳杆菌4×10⁹cfu/g、白腐真菌6×10¹⁰cfu/g；

(4)将步骤(3)培养后的各菌种按照配方量混合，按接种量为10％接种，进行交叉拮抗培养，即可得到所述微生物组合菌剂，交叉拮抗培养所用的培养基为：氨基酸6.0％％、牛肉膏3.4％、琼脂6.5％、尿素1.2％、糖蜜7.5％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.2％、碳酸钙0.5％、磷酸二氢钾0.2％，其余为蒸馏水。

将本实施例得到的微生物组合菌剂与40倍水混合活化1天；将活化后的微生物组合菌剂均匀喷洒在废弃食用菌培养基料上，所述活化后的微生物组合菌剂的重量为废弃食用菌培养基料的重量的2.0％，控制基料中的含水量在45％；将基料进行建堆发酵，在温度到达50～60℃之间翻堆一次，反复翻堆3～4次，3～5天后即可发酵完成。

实施例3

一种微生物组合菌剂，其特征在于，所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌10％、绿色木霉菌5％、里氏木霉菌5％、酵母菌10％、双歧杆菌15％、放线菌5％、黄孢原毛平革菌20％、植物乳杆菌10％、白腐真菌20％。

其制备方法包括以下步骤：

(1)分别将枯草芽孢杆菌、绿色木霉菌、里氏木霉菌、酵母菌、双歧杆菌、放线菌、黄孢原毛平革菌、植物乳杆菌、白腐真菌接种于PDA斜面培养基中于30℃培养8h；

(2)将步骤(1)培养后的菌种分别接种于液态培养基中于35℃培养10h；所述液态培养基的成分为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：蛋白胨10.0％、牛肉膏3.0％、葡萄糖7.0％、糖蜜4.0％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.2％、硫酸铵0.1％、碳酸钙0.2％，其余为蒸馏水；

(3)将步骤(2)培养后的菌种按8％的接种量分别接种于发酵培养罐于28℃培养至目标活菌数；发酵罐中的培养基为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：氨基酸4.5％％、牛肉膏2.5％、葡萄糖3.4％、糖蜜6.0％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.3％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.3％，其余为蒸馏水，各菌种的目标活菌数分别为：枯草芽孢杆菌6×10⁷cfu/g、绿色木霉菌4×10⁸cfu/g、里氏木霉菌5×10⁷cfu/g、酵母菌6×10⁷cfu/g、双歧杆菌4×10⁸cfu/g、放线菌3×10⁶cfu/g、黄孢原毛平革菌8×10¹⁰cfu/g、植物乳杆菌6×10⁹cfu/g、白腐真菌8×10¹⁰cfu/g；

(4)将步骤(3)培养后的各菌种按照配方量混合，按接种量为5％接种，进行交叉拮抗培养，即可得到所述微生物组合菌剂，交叉拮抗培养所用的培养基为：氨基酸6.0％％、牛肉膏3.4％、琼脂6.5％、尿素1.2％、糖蜜7.5％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.2％、碳酸钙0.5％、磷酸二氢钾0.2％，其余为蒸馏水。

将本实施例得到的微生物组合菌剂与35倍水混合活化2天；将活化后的微生物组合菌剂均匀喷洒在废弃食用菌培养基料上，所述活化后的微生物组合菌剂的重量为废弃食用菌培养基料的重量的3.0％，控制基料中的含水量在50％；将基料进行建堆发酵，在温度到达50～60℃之间翻堆一次，反复翻堆3～4次，3～5天后即可发酵完成。

上述参照实施例对一种微生物组合菌剂，其制备方法及应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种微生物组合菌剂，其特征在于，所述微生物组合菌剂包括以下重量百分比的原料：枯草芽孢杆菌10～20％、绿色木霉菌5～15％、里氏木霉菌5～10％、酵母菌10～20％、双歧杆菌10～15％、放线菌5～15％、黄孢原毛平革菌20～35％、植物乳杆菌5～15％、白腐真菌10～25％。

2.根据权利要求1所述的微生物组合菌剂，其特征在于，各菌种原料的活菌数为：枯草芽孢杆菌3～6×10⁷cfu/g、绿色木霉菌2～5×10⁸cfu/g、里氏木霉菌3～6×10⁷cfu/g、酵母菌5～7×10⁷cfu/g、双歧杆菌2～5×10⁸cfu/g、放线菌2～5×10⁶cfu/g、黄孢原毛平革菌6～10×10¹⁰cfu/g、植物乳杆菌4～8×10⁹cfu/g、白腐真菌6～10×10¹⁰cfu/g。

3.根据权利要求1或2所述的微生物组合菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)分别将枯草芽孢杆菌、绿色木霉菌、里氏木霉菌、酵母菌、双歧杆菌、放线菌、黄孢原毛平革菌、植物乳杆菌、白腐真菌接种于PDA斜面培养基中于30～35℃培养6～8h；

(2)将步骤(1)培养后的菌种分别接种于液态培养基中于30～35℃培养8～10h；

(3)将步骤(2)培养后的菌种按5～10％的接种量分别接种于发酵培养罐培养至目标活菌数；

(4)将步骤(3)培养后的各菌种按照配方量混合，进行交叉拮抗培养，即可得到所述微生物组合菌剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在，所述步骤(2)中，液态培养基的成分为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：蛋白胨10.0％、牛肉膏3.0％、葡萄糖7.0％、糖蜜4.0％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.2％、硫酸铵0.1％、碳酸钙0.2％，其余为蒸馏水。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在，所述步骤(3)中，发酵罐中的培养基为，每升培养基中含有以下重量百分比的物质：氨基酸4.5％％、牛肉膏2.5％、葡萄糖3.4％、糖蜜6.0％、氯化钠0.2％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.3％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.3％，其余为蒸馏水。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在，所述步骤(3)中的培养温度为28～32℃。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在，所述步骤(4)中，交叉拮抗培养所用的培养基为：氨基酸6.0％％、牛肉膏3.4％、琼脂6.5％、尿素1.2％、糖蜜7.5％、氯化钠0.3％、硫酸镁0.3％、硫酸铵0.2％、碳酸钙0.5％、磷酸二氢钾0.2％，其余为蒸馏水。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在，所述步骤(4)中，混合菌种的接种量为5～10％，培养条件为：28～32℃培养6～10h。

9.根据权利要求1所述的微生物组合菌剂在分解腐熟废弃食用菌培养基料上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

A、将所述微生物组合菌剂与25～40倍水混合活化1～2天；

B、将活化后的微生物组合菌剂均匀喷洒在废弃食用菌培养基料上，控制基料中的含水量在40～50％之间；

C、将基料进行建堆发酵，在温度到达50～60℃之间翻堆一次，反复翻堆3～4次，3～5天后即可发酵完成。